（环境科学专业论文）温度、铜离子对鲤鱼血清hsp70合成的影响.pdf

a b s t r a c t t od e t e m l i n et i l ee 圩b c t so ft e m p 盯a t i l f ca n dc o p p e ro nc 唧6 s h s ( 劬加淞唧如) s e m mh s p 7 0 ，w cd e s i 驴f b l l rd i 髓r e mp l 锄s h s p 7 0e x p r c s s i o nr e l a t i v et ot h ec o n 仃d l s 、v 船 锄a l y z e db ys a l l d w i s he l i s a( e n z y m e - l i n k e dh 吲u n o s o r b n e n ta s s a ye l i s a ) ；c o p p 盱 c o n c e m 枷o n si nf i s hs e r u m 、v e r em e 鹪u r e db ya t o m i ca b s o r p d o ns p 咖s c o p y ( a a s ) i n 恤 d e s i g no fi n c r e a s 访gt e m p e r a m r es t e pb ys t 印，l er e s m t ss h o 、v e dt h a t ，w i t ht l l et e m p e 珀t i l r e i n c r e a s i n g ，s e 九l r nh s p 7 0i n c r e 髂eg 碍d u a l l y ；m 世屺d e s i 弘o fi n c r e a s i n gt e m p e r a t l l r e s u d d e n l y ，t h er e s u l t ss h o w e dd o s e _ r e s p o n s ee 脏c t so f h s p 7 0e 坤陀s s i o ni nc a r ps e n l i nu n d e r 1 0 ；t l 他h s p 7 0e x p r e s s i o ni nc a r ps e m mu n d e r2 0 ，2 4 a r eb o t l l 叫c hh i 曲e rm a nm a t u i l d e r l o ( p o 0 1 ) w bo b s e 九，e dn oc o m b i n c de 彘c t so f t e m p e r a t u r ea n dc o p p e ro nh s p 7 0 e x p r e s s i o nu n d e r2 0 ；w i t l lt l l ei n c r c a s eo fc o p p 盯d o s e ，m ee x p r e s s i o no fh s p 7 0d i dn o t c l l a n g em u c hc o m p a r e dt o t h a to fc o n t r o lg r o u p h o w e v e r ，m e r e 、v a ss 仃o n gc o m b i n e d e 雎c t so ft e m p e r a t u r ea 1 1 dc o p p e ro nh s p 7 0e x p r e s s i o nu n d e r2 4 t h eh s p 7 0i i lc 唧 s e r u n lu n d e r1 0 0 u gc 一十1w a sm u c hl l i 曲e rt h a nt h a to fc o n 咖lg r o u po 9 9 ( 北京化工厂生产) 。 方案三( 2 0 0 6 年1 1 月) 试验鲤鱼( 3 6 尾) 1 0 l 条件下驯养，小心捞取放入铜离子浓度为0 ，l o ，5 0 ， 1 0 0 ，3 0 0 ，5 0 0 u g l 的水族箱中，驯温l o 下暴露2 4 h 。每个浓度组6 尾。 2 2 3 温度和铜离子对鲤鱼血清h s p 7 0 合成联合影响试验 方案四( 2 0 0 6 年1 1 月) 试验鲤鱼( 7 2 尾) 1 0 1 条件下驯养，小心捞取放入2 0 和不同铜离子浓度及2 4 和不同铜离子的驯养箱中。同时设有2 0 空白组和2 4 空白组，每个组6 尾。 2 3 动物的处理 小心捞取一尾鱼，冲洗后擦干，猛击头部至昏，断尾取血，在1 5 0 0 r m i n 下离心1 0 m i n ，取上清液，放置在4 冰箱中待检。 2 4 夹心e l i s a 检测鲤鱼血清h s p 7 0 水平 2 4 1 试剂 ( 1 ) 包被缓冲液( p h 9 6o 0 5 m 碳酸盐缓冲液) ：n a 。c 0 31 5 9 克，n a h c 0 32 9 3 克，加蒸馏 水至1 0 0 0 l ( 2 ) 洗涤缓冲液( p h 7 4p b s0 1 5 m ) ：i ( i 。p 0 4o 2 克，n a 。h p 0 4 2 9 克，n a c l8 0 克，k c l o 2 克，t w e e n 一2 0 ( s i g i l l a 公司) o 0 5 o 5 m 1 ，加蒸馏水至1 0 0 0 m l ( 3 ) 稀释液：牛血清白蛋白( b s a ，p r o m e g a 公司) 0 1 克，加洗涤缓冲液至1 0 0 m 1 ( 4 ) 终止液( 2 mh 。s 0 4 ) ：蒸馏水1 7 8 3 m l ，逐滴加入浓硫酸( 9 8 ) 2 1 7 m 1 ( 5 ) 底物液：0 5 m g m 1 邻苯二胺( a m r e s o 公司) ( 6 ) 抗原、抗体和酶标记抗体：鼠抗h s p 7 0 单克隆抗体( m o u c ea n t i h s p 7 0m o n o c l o n a l a n t i b o d y ) ；兔抗h s p 7 0 多克隆抗体( r a b b i ta n t i h s p 7 0p o l y c l o n a la n t i b o d y ， s t r e s s g e n 公司) ；辣根过氧化酶标记的羊抗兔i g g 抗体1 0 0 u 1 ( 北京鼎国生物技术 公司) 2 4 2 仪器 9 6 孔酶标板条( 江苏海门塑料仪器厂) ；酶标仪( l a b s y s t e md r a g o nm k 。型号) ； 加样器( g 儿s o n ，法国) ；可调式移液器( l a b s y s t e m ，芬兰) ；3 7 水浴箱( s h h w 2 l _ 4 2 0 型) 2 4 3 检测鲤鱼血清样本h s p 7 0 水平步骤 用包被缓冲液( p h9 o 碳酸盐缓冲液) 稀释单克隆抗体至2 o u g m l ，每个孔加1 0 0 u l ， 置4 过夜，弃液，用洗液洗三次；每孔加2 0 0 u l 封闭液( 2 牛血清白蛋白，p b s 液) ， 置3 7 2 h ，弃封闭液；加待测鲤鱼血清原液血清1 0 0ul 孔，并加入样品稀释液作空白， 同时设有第二抗体对照和酶标抗体对照。每份样品设两个平行孔，3 7 2 h ，弃液，洗三 次；用2 牛血清白蛋白的p b s 液稀释第二抗体( 1 ：5 0 0 稀释) ，每孔加1 0 0 u l ，置3 7 2 h ， 弃液，洗三次：每孔加1 0 0 u 1 辣根过氧化物标记的羊抗兔i g g 抗体( 1 ：5 0 0 稀释) ，置 3 7 l h ，洗三次；每孔加1 0 0 u l 的底物液( o 5 m g m l 邻苯二胺0 p d ) ，放置室温暗处1 0 m i n ； 每孔加5 0 u l 的硫酸( 2 o o l 1 ) 终止反应；酶标仪4 9 2 n m 处读取光密度值。取两孔的 平均值减去对照孔的值为结果值。 2 5 原子吸收( 从s ) 检测鲤鱼血清铜离子的残留量 2 5 1 主要仪器 原子吸收分光光度计( 型号s p e c t r a a a 一2 2 0 f s ，美国v a r i a n 公司) ； 铜空心阴极灯 2 5 2 原子吸收仪器的工作条件 s p e c t r a 从一2 2 0 f s 型原子吸收分光光度计工作条件见表1 。 表1 仪器的工作条件 2 5 3 检测血清铜离子残留量 准确称取血清样品，加入l m h n o 。消解，定容到1 5 m 1 ，待检。 2 6 数据处理 血清中h s p 7 0 表达水平采用o n ew a ya n o v a 分析，在方差齐性下，采用d u n n e t t 检验来比较试验组和对照组差异水平；当方差不齐时，采用d u n n e t t c 检验。所有数 据采用s p s s l l 5 软件包分析，p o 0 5 ( ) 代表试验组与对照组具有显著性差异，p o 0 5 ) 。可能因为，温度增加程度不 大，1 5 2 1 2 这个温度区间比较适合鲤鱼的生存，温度对鱼体内环境的干扰不大。 试验过程中，我们发现，所有受试鲤鱼行为无异常反应( 受试鲤鱼在逐步增温过程中， 主要的行为表现见表4 ) 。当增温到2 6 1 和2 9 1 时，h s p 7 0 光密度均值分别为o 3 8 7 和0 3 8 8 ，与驯养温度组相比，具有显著性差异( p o 0 5 ) ，这说明，当温度达到鱼体最 适温度上限时，不适温度可能打破了鱼体正常的新陈代谢，体内生理生化平衡受到破坏。 试验中，受试鲤鱼呼吸频率明显升高。根据我们的观察，驯养温度下，受试鲤鱼的呼吸 频率为2 0 3 0 次m i n ，而在2 8 2 时，受试鲤鱼的呼吸频率增加了约一倍，达到5 0 6 0 次m i n 。增温至2 6 1 ，h s p 7 0 大量合成，可以保护机体进一步受到热损伤。当增温到 回避温度3 0 6 和3 3 9 时，h s p 7 0 的光密度均值分别为0 4 2 8 和o 4 5 7 ，与驯养温度组相 比，差异极其显著( p o 0 5 ) 。 3 4 铜离子对血清h s p 7 0 合成的影响 铜是水生生物必需的微量元素，至少存在于3 0 多种酶中作为氧化还原催化剂或氢载 体。但是当铜离子浓度超过生物的生态幅度时则会引起水生生物新陈代谢紊乱。已经证 实，不仅是高温，处于其他应激因素如重金属离子、细菌或病毒感染以及中毒、缺氧等 条件下，有机体也会被诱导合成h s p 7 0 。h s p 7 0 作为重要的分子伴侣，已经被认为是评 价有机体受环境胁迫和自身生理胁迫的主要指标”5 “。 试验方案三所设置的一系列铜离子浓度，主要目的在于确定鲤鱼h s p 7 0 是否可以在 低于2 4 hl c 5 0 ( 1 6 7 0 u g 1 ) 短期暴露合成，合成水平与铜浓度的关系怎样。试验证实，在 所试验的最低二个铜浓度下( 1 0 u g l ，5 0 u g 1 ) ，h s p 7 0 的表达与空白组没有显著性差 异( p o 0 5 ) ，但合成量也略高于对照组；h s p 7 0 合成量与铜离子浓度有一定的剂量效应 关系( 图5 a ) 。h s p 7 0 高表达的阈值在1 4 9 7 u gc u 2 y g ( 或1 0 0 u gc u ”1 ) ( 表8 ，图5 a ) ， 超过这个阈值h s p 7 0 的表达明显提高，于对照组相比，差异显著( p o 0 5 ) 。在3 0 0 u g l ， 5 0 0 u g 1 铜浓度，h s p 7 0 表达量一直保持较高水平，与空白对照组有极其显著性差异 ( p 0 0 5 ) ，2 0 热应激与铜 离子对h s p 7 0 合成联合效应不明显，温度为影响h s p 7 0 的主要因子；而2 4 5 0 u g 1 和 昀嬲盯弱弱矾鼹驼n巧蛐骢 o 0 0 o o o o 0 0 0 0 1 0 0 u g 1 铜浓度组，h s p 7 0 合成量高于2 4 空白组，其中1 0 0 u g 1 铜浓度组与2 4 空白组 差异极其显著( p o 0 1 ) ，2 4 热应激与铜对h s p 7 0 的联合作用明显增强，h s p 7 0 合成显 著提高，联合作用明显；相反，2 4 3 0 0 u g 1 与5 0 0 u g l 铜浓度组，h s p 7 0 合成量有不同 程度的下降。 前人对h s p 7 0 合成的研究，应激因素都比较单一，而联合毒性是毒理学研究的重要 领域之一。本研究中，高温组( 2 0 ，2 4 ) h s p 7 0 诱导表达量明显高于低温( 1 0 ) 组，但2 0 各染铜组与2 0 空白组h s p 7 0 表达水平无差异，2 0 与铜离子对h s p 7 0 合成无 联合效应，可以说明温度是诱导合成h s p 7 0 的主要因素。 表8 不同温度。不同铜浓度暴露下，鲤鱼血清h s p 7 0 表达水平 温度水旅箱中初始血清中h s p 7 0 n c u 浓度( u 酣) 表达水平( 光密度) 1 0 0 0 4 8 8 0 0 1 5 6 l o0 5 0 4 0 0 1 46 5 0o s 0 4 0 0 1 54 1 0 00 5 2 6 0 0 0 6 +6 3 0 0o 5 6 6 0 1 2 8 + +6 5 0 0 o 5 8 0 o 0 1 3 + 4 2 0 o o 5 9 0 0 0 2 36 l o o 5 9 8 0 0 4 96 5 0 o 5 9 9 0 0 2 24 1 0 0o 5 8 8 0 0 4 36 3 0 0o 6 1 7 o 1 1 96 5 0 00 5 9 2 o 0 0 64 2 4 0o 6 6 3 0 0 4 26 1 0o 6 5 7 0 0 3 74 5 0 0 7 0 1 o 0 1 44 1 0 0 0 8 2 7 o 0 7 5 +4 3 0 0 o 6 3 2 0 0 3 44 5 0 0 o 5 6 s o 0 3 6 44 注：h s p 7 0 含量均用平均值标准差来表示 1 9 温度 图6 不同温度和不同铜浓度( u g 1 ) 条件下h s p 7 0 的表达水平 这与h a l l a r e 等研究结果相一致。h a l l a r e 等“”( 2 0 0 5 ) 发现，3 3 高温应激条件下， 斑马鱼卵h s p 7 0 表达量与2 6 空白组相比，有显著性差异，但是3 3 条件下，不同镉浓 度组h s p 7 0 合成量与3 3 空白组无剂量依赖性效应。从图5 中可以看出，2 4 温度与 1 0 0 u g 1 染毒组对h s p 7 0 合成的联合效应非常明显，与2 4 空白具有显著性差异。h s p 7 0 的合成在1 0 0 u g 1 染铜浓度出现峰值后，在3 0 0 u g 1 和5 0 0 u g 1 处出现不同程度的降低。 可以用一条剂量效应曲线来解释2 4 和铜离子对鲤鱼血清h s p 7 0 表达联合影响( 图 7 ) 。把图7 曲线分为三个部分：第一部分，h s p 7 0 只有少量增加，这可能是细胞处于高温 内稳定区，温度和铜离子联合效应不显著，与温度空自组相比，诱导h s p 7 0 合成量较少； 第二部分，温度和铜离子的联合毒性效应显著，h s p 7 0 大量合成，作为分子伴侣，起到 非特异性保护功能；第三部分，铜浓度的升高，加以2 4 热冲击，二者联合破坏了机体 细胞的新称代谢，某些机制抑制h s p 7 0 的合成。可以认为，h s p 7 0 对胁迫损害的保护作用 有一定的限度，当胁迫强度较大时，h s p 7 0 的表达会受到抑制，其保护作用及对有害因素 的标志作用表现不出来。但我们认为实际的机制可能要复杂得多。 2 0 血 营 骂 曩 达 水 平 晃 密 喜 2 4 下鲤鱼血清铜残留浓度( u g g ) 图72 4 热冲击和铜离子对鲤鱼血清h s p 7 0 表达的联合影响 注：中间点代表该组样本h s p 7 0 的均值 到目前为止，对于铜诱导h s p 7 0 合成的毒性机制，主要认为铜离子与巯基结合并产 生自由基，改变蛋白构象，具有蛋白毒性( p r o t o x i c i t y ) ，进而引发应激蛋白的合成“。 蛋白毒性是蛋白结构和功能的破坏，导致凝聚的蛋白在细胞内积累“。到目前为止，人 们研究的具有蛋白毒性因子有重金属( c u ，c d ，c r ，p b ，和z n ) ，三丁基锡，有机磷农药， 有机氯农药，以及硝基苯等其他有机污染物“。在高温与毒物应激对h s p 7 0 合成的联合 效应研究中，s n y d e r 等“4 1 观察到贻贝( 修f j “昭a ，i m 订厅c j a ，曲和鲍鱼 ( 胁如f 拈r “角卵印曲暴露于高热和化学药品超标的水体中时，其体内的h s p 7 0 含量与对 照组相比高5 1 5 倍。涂白杰等“”( 1 9 9 6 ) 报道，昆瞻种小鼠脑组织h s p 7 0 在高温单独作 用，低剂量b a p 单独作用，高温与低剂量b a p 联合作用下表达明显升高，而高温与高剂量 b a p 联合作用下，h s p 7 0 表达量降低。对于热应激与重金属离子对h s p 7 0 合成的联合效应 研究还很少见。h a l l a r e 等”1 ( 2 0 0 5 ) 发现，3 3 应激与镉离子对斑马鱼卵h s p 7 0 合成有 明显增强作用。在所查的文献中，尚未见到高温与铜离子应激对鱼体h s p 7 0 合成影响报 道。本研究发现，2 4 温度与l o o u g 1 染毒组对h s p 7 0 合成的联合效应非常明显，与2 4 空白组具有极其显著性差异。h s p 7 0 表达水平在2 4 l o o u g l 染毒组出现均值最大值，为 0 8 2 7 ，在2 4 5 0 0 u g 1 组出现均值最小值，为0 5 6 8 。二极值处体现了温度和铜离子对 鲤鱼血清h s p 7 0 合成不同程度的联合影响。 可以看出，不同的受试物种和不同的研究组织，不同的应激因素，h s p 7 0 的合成规 律有不同程度差异。通常认为，h s p 7 0 主要起着维持细胞内稳功能。毒物引发的蛋白毒 性是促使h s p 7 0 合成的主要因素，但是对h s p 7 0 在应激反应中的调节和合成机制还不是很 2 l 清楚，这主要是因为，到目前为止，对h s p 7 0 合成机制研究数据有限，同时，在有限的 研究中，受试物种不同，所研究的h s p s 类型不同，试验方案的设计以及h s p 7 0 的检测手 段不同，因此数据之间缺乏可比性。比如，前人对鱼体h s p 7 0 的研究还主要集中在脑， 肝脏，肾脏，性腺和鳃“”，而对血清中h s p 7 0 的研究报道还很少见。而我们认为，血 清是生物体免疫防御的重要组织，h s p 7 0 作为一种灵敏应激蛋白，在血清中的变化能够 反应环境变化对机体内环境的影响。因此，尚需试验来进一步证实h s p 7 0 诱导因素和生 物适应机制以及合成表达。 3 6h s p 7 0 作为毒理学标记的探讨 h s p s 能够作为毒理学标记是因为具有以下特征； 1 、h s p s 是细胞胁追反应的一部分 2 、多种化学污染物都可以诱导h s p s 的表达 3 、h s p s 具有高度的保守性，尤其是h s p 7 0 一直以来，h s p s 就被看成是反映环境污染物引发的不利生态效应最合适的因子。已 经证实米诺鱼( 厅咄p sp r 伽a 曲在暴露于亚硝酸盐、铬酸盐、林丹等污染物的环 境中，不同形式的h s p s 在鱼体脑、纹状肌和鳃部都有明显表达4 “；c a n d i d o 等”建立了 一种方法，利用土壤线虫诱导表达的h s p 7 0 作为生物标志物，运用转基因技术和分子生 物学手段来实现对土壤生态系统污染的检测。试验证明镉浓度达到1 1 0 m g 1 时会诱导 土壤线虫体内h s p 7 0 的表达，而同样条件下l c 5 0 值却为1 2 0 m g 1 。k a m m e n g a 等”3 1 发现c u ” 对土壤线虫( 爿e c f “占爿c 咖j 册 坩jh s p 6 0 的诱导表达要比繁殖指标e c 2 0 高三个数量级； 大肠杆菌( 曲出盯，拍妇c d j ，) 暴露于c d ”，n i 2 ，c r 。q ”等试验表明，h s p 7 0 的对这些污染 物的敏感性远远高于生长抑制等毒性指标。”。 本试验结果表明，驯养温度条件下，铜离子浓度为1 0 0 u g l 时h s p 7 0 表达量与空白组 相比，具有显著性差异，随着铜离子浓度的升高，h s p 7 0 表达量与铜浓度呈现一定的剂 量效应关系。因此，可以把h s p 7 0 作为水体急性毒性污染的生物标记物，用于水生态系 统污染评价，h s p 7 0 的敏感性要远高于传统毒性指标l c 5 0 。但是高温与铜的联合作用组， h s p 7 0 则没有表现出标志作用。本研究表明，高温是诱导合成h s p 7 0 的主要因素，化学物 质污染物对h s p 7 0 的影响很容易被环境温度对h s p 7 0 合成所掩盖。因此，在应用h s p 7 0 作 为生物标记物时，一定要综合多种环境因子，尤其是温度因子。同时e c k w e r t 等“”提出， 对于那些1 0 9 角w 小于3 5 的污染物，h s p 7 0 的预警作用较强，可以作为暴露效应的生物标 记物，而对于那些亲脂性强的化合物，h s p 7 0 只适合急性亚致死毒性研究。 h s p 7 0 升高对机体具有保护作用，同时也表明机体正经受损害而通过某种机制诱导 h s p 7 0 合成，即h s p 7 0 具有标志作用。报道h s p 7 0 作为胁迫生物标记物的研究日益增多“。 但试验方案四结果提示我们，用h s p 7 0 作为胁迫的生物标记物一定要慎重，对h s p 7 0 的初 步研究已经说明了h s p 7 0 的积累在环境监测和毒理学监测方面的潜力，但是h s p 7 0 的表达 水平并不总是与有害因素的作用强度平行，其机制较为复杂。同时，监测水质不能孤立 考虑单项因素，单因子指标符合目前水质标准，并不能认定该水质对鱼类生存安全。因 此，本文作者建议应强调环境胁迫因子间相互作用在监测水质方面的重要性，更好地为 水域环境保护服务。 h s p 7 0 作为污染生物标记物潜力成为近些年来生命科学的研究热点。鉴于h s p s 的高 度保守性，从细菌到人类都可合成h s p s ，将其作为生态生物标记物可以避免传统的环境 监测指标因物种差异而带来的不一致因素，可以把实验室低等生物实验结果应用于高等 动物甚至人类。不同的环境影响因子对不同种类h s p s 的影响机制尚需大量试验研究，同 时，我们还应进一步探讨胁迫诱导反应在个体和生态系统水平上的异同，这样我们才能 够把h s p s 作为真正的第一生物标记物，对环境胁迫作出预警。 第4 章、结论 本研究在分别探讨温度和铜离子对h s p 7 0 合成的基础上，又对温度和铜离子对h s p 7 0 合成联合影响做了进一步分析。h s p 7 0 的合成作为重要的抗胁迫机制之一，能够提高生 物体耐受性，使细胞处于应激状态，抑制一些正常蛋白质的合成并快速激活与抗毒有关 的蛋白质基因，从而起到保护细胞和生物体的作用。通过本试验研究，得出以下结论： 1 、本试验研究确定双抗体夹心e l i s a 法，测定鲤鱼血清h s p 7 0 表达水平，将抗原、 抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来，抗原、抗体的反应在一种固 相载体聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去 多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。该方法快速，简便，重复性 较好，可以进一步推广。 2 、温度对鲤鱼血清h s p 7 0 合成的影响试验研究表明，逐步增温方式下，h s p 7 0 合成 水平随温度的升高而升高，在失衡温度3 3 9 h s p 7 0 合成量最高；陡然热冲击下，2 0 组、2 4 组h s p 7 0 水平与1 0 组h s p 7 0 水平差异极其显著( p 0 0 5 ) 。 3 、驯养温度1 0 下，h s p 7 0 合成与铜离子浓度呈现明显的剂量效应关系，回归方 程为：y = o 1 3 4 4 x o 4 7 4 6 ，r 2 = o 9 1 9 6 ，n = 3 2 ；而热冲击温度2 0 ，2 4 条件下，h s p 7 0 合成水平与铜离子浓度无剂量效应关系。 4 、2 0 与铜离子对h s p 7 0 合成联合效应不明显，温度为影响h s p 7 0 合成的主要因子 2 4 热应激与1 0 0 u g l 铜浓度对h s p 7 0 的联合作用明显增强。相反，2 4 与3 0 0 u g l 与 5 0 0 u g l 铜离子应激下，h s p 7 0 合成有不同程度的下降。 5 、胁迫条件下，有机体各种生理生化反应并非孤立，研究h s p 7 0 合成应与机体内其 他生理生化指标( 血清酶类，血细胞，组织器官病理学指标等) 联系起来，并进一步探 讨各种指标对胁迫反应的敏感性。同时，本研究表明，h s p 7 0 对热应激、铜应激有一定 的标志作用，相对于t l 5 0 ，l c 5 0 值，h s p 7 0 表现的更为敏感，但本研究受试鲤鱼暴露于 胁迫的时间较短( 2 4 h ) ，属急性试验，其模拟结果是否可以外推于野外低剂量长效应胁 迫，还需大量试验研究，因此，尚需进一步探讨h s p 7 0 作为生态毒理学标记的敏感性和 应用范围。 参考文献 1 j a y n e a 工l n e rb o n d h e a ts h o c kr e d u c et h et o x i c i t yo fm 8 1 a t h i ni n 脚砌，2 磁g g 憎目 j m a r i n ee n v i r o m e n t a lr e a s e r c h3 9( 1 9 9 5 ) ：2 0 9 2 1 2 2 金岚水域热影响概论 m 高教出版社 3 乇利汪开毓铜离子对鲤鱼的急性毒性研究 j 淡水渔业2 0 0 4 年第3 4 卷第1 期 4 瞿建国锌对金鱼的急性毒性及在体内的积累和分布 j 】上海环境学 1 9 9 61 5 ( 6 ) ：4 2 4 3 5 黄玉瑶，陈锦萍铜离子对鳗鲡幼鱼的急性毒性 j 中国环境科学，1 9 9 2 ，1 2 ( 4 ) ：2 5 5 2 6 0 6 陈锡涛镉对花鲢幼鱼，鱼苗和鱼种的急性毒性及其安全浓度的评价 j 环境科学与技术，1 9 9 1 ，( 4 ) ：5 8 7 t 0 1 l yc r 0 1 eo ft h eh e a ts h o c kr e s p o n s ea n dm 0 1 e c u l a rc h a p e r o n e si no n c o g e n e s i sa n d c e l ld e a t h j j n a tc a n c e ri n s t ，2 0 0 0 ，9 2 ( 1 9 ) ：1 5 6 4 一1 5 7 2 8 j o h a l lb i e r k e n s d o s ed e p e n d e n ti n d u c t i o no fh s p 7 0s y n t h e s i si nf o l l o w i n 肋 f 出c p 拈删印，招妇d i f f e r e n tk i n do fe n v i r o 姗e n t a lp o l l u t i o n j e n v i r o 咖e n t a lp 0 1 l u t i o n1 0 l ( 1 9 9 8 ) ：9 卜9 7 9 陈德权陈胜邬堂春高温与不同浓度一氧化碳联合作用对大鼠脑及内脏器官热应蛋白白含量 的影响 j c h i njpr e vm e d ，s e p t e m b e r1 9 9 6 ，v 0 1 3 0 5 1 0 王书奎邬堂春高温中暑者热应激蛋白7 0 测定的临床意义 j 临床检验杂志 1 9 9 91 7 ：3 3 5 3 3 6 1 1 邬堂春张建民高温，c o 及其联合作用对大鼠船p 7 0 m r n a ，h s p 7 0 合成影响研究 j 中国工业医学杂志1 9 9 5 年第8 卷第6 期 1 2 涂自杰邬堂春贺涵贞苯并 a 芘对小鼠的神经毒性及脑组织热应激蛋白水平的影响 j 卫生研究第3 3 卷第l 期2 0 0 4 年1 月 1 3 高雅娟陈胜肖成峰等苯并( a ) 芘、预热及其联合作用对人胚肺细胞h s p 7 0 合成 的影响 j 同济医科大学学报第3 0 卷第4 期第3 1 6 页 1 4 张国高，贺涵贞，邬堂春热应激蛋白及其在职业医学研究中的展望 j 中华劳动卫职业病杂志，1 9 9 8 ，1 6 ( 2 ) ：6 7 6 8 1 5 沈骅王- 晓蓉等c u ”和c u ”一e d t a 对鲫鱼脑组织应激蛋白h s p 7 0 诱导的影响 j 环境科学2 0 0 4 ，2 5 ( 3 ) ：9 4 9 7 1 6 沈骅王晓蓉张景飞应用应激蛋白hsp7 0 作为生物标志物研究锌、铜及其联合毒性 对鲫鱼肝脏的影响 j 环境科学学报2 0 0 4 ，2 4 ( 9 ) 1 7 v i j a y a n ，m ，p e r e i r a ，c ，g r a u ， e g 1 9 9 7 h a n d l i n gs t r e s sd o e sn o ta f f e c t t h ee x p r e s s i o no fh e p a t i ch e a t s h o c kp r o t e i n7 0a n dc o n j u g a t i o ne n z y m e si nr a i n b o w 2 5 t r o u tt r e a t e dw i t bn a p h t h o f l a v o n e j l i f es c i 6 l ， 1 1 7 一1 2 7 1 8 w i l l i a m s ，j h ，f a r a g ，a m ，s t a n s b u r y ，m a ，1 9 9 6 a c c u u l a t i o no fh s p 7 0i n j u v e n i l ea n da d u l tr a i n b o wt r o u tg i l le x p o s e dt om e t a l 一c o n t 硼i n a t e d w a t e ra n d ：o r d i e t j e n v t 0 x i c 0 1 c h e m 1 5 ，1 3 2 4 1 3 2 & 1 9 b m s a n d e r sj ，n g u y e nl s m a r t i o n i n d u c t i o n ga n ds u b c e l l u l a rl o c a l i z a t i o no f t w om a j o rs t r e s s ”o t e i n si nr e s p o n s et oc o p p e ri n 曲ef a t h e a dm i n n 0 w 倒阳咖船 p m 日日日s j c o m p b i o c h e m p h y s i 0 1 v 0 1 ：1 1 2 c ，n o 3 ，p p ，3 3 5 3 4 3 ，1 9 9 5 2 0 n ib a s u a ，a e t o d g h 绷 h e a ts h o c kp r o t e i ng e n e sa n dt h e i rf u n c t i o n a l s i9 1 1 i f i c a n c ei nf i s h j g e n e2 9 5 ( 2 0 0 2 ) ：1 7 3 1 8 3 2 1 s a n d e r s ，b m s t r e s s p r o t e i n si na q u a t i co r g a n i s 击s ：a ne n v i i o 姗e n t a l p e r s p e c t i v e j c r i t r e v t o x i c 0 1 2 3 ( 1 9 9 3 ) ：4 9 7 5 2 2 何骁生潘秋萍邬堂春等s t e r n 斑点印迹法检测主要热应激蛋白 j 监测与检验术c hi nji n dh y g0 c c u pdi s ，d e c e m b e r1 9 9 6 ，v 0 11 4 ，6 2 3 郭玫张顺利热休克反应中小鼠心脏hsp 7 0 表达的免疫组织化学研究 j 动物学杂志2 0 0 1 ，3 6 ( 2 ) 2 4 曲凌云温度刺激下栉孔扇贝不同组织热休克蛋白hsp 7 0 的表达研究 j 高技术通讯2 0 0 5 ，1 5 ( 5 ) ：9 6 1 0 0 2 5 曲凌云孙修勤相建海栉孔扇贝血淋巴细胞 i s p 7 0 表达变化的f c m 法检测 j 高技术通讯2 0 0 44 2 6 何启强杨进波双抗夹心e l i s a 法检测血浆h s p 7 0 的建立及初步应用 j 环境与职业医学2 0 0 4 ，2 1 ( 1 ) ：2 7 3 0 2 7 c l a y t o n ， r o l a n ds t e i n m a n nd i f f 盱e n te x p r e s 8 i o nd a t t e r n so fh e a ts h o c k p r o t e i n sh s p6 0a n dh s p7 0i nz e b r a 叫s s e l s( 血j s s 8 ，招印旬珊叫删e x p o s e dt oc o p p e r a n dt r i b u t y l t i n j a q u a t i ct o x i c 0 1 0 9 y4 7 ( 2 0 0 0 ) ：2 1 3 2 2 6 2 8 a v h a l l a r e ，m s c h i r li n g c o m b i n e de f f e c t so ft e m p e r a t u r ea n dc a d i n iu i l lo n d e v e l o p m e n t a lp a r a m e t e r sa n db i o 眦r k e rr e s p o n s e si nz e b r a f i s h( 皿如j d 删f d )e m b r y o s j j o u r n a lo ft h e r m a lb i o l o g y3 0( 2 0 0 5 )7 1 7 2 9 l i n d q u i s t ，s t h eh e a ts h o c kr e s p o n s e j a n n u r e v b i o c h e m 5 5 ( 1 9 8 6 ) 1 1 5 1 一1 1 5 9 3 0 l u d e r s ，j ，d e m a n d ，j ，s c h o n f e l d e r ， s e ta 1 c o f a c t o r i n d u c e dm o d u i a t i o no f h s p 7 0i sm o d i f i e dd i f f e r e n t i a l l yb yt h eh s p 4 0c o c h a p e r o n e ss l s la n dy d j l j b i 0 1 c h e m 2 4 3 ( 1 9 9 8 ) 2 7 8 2 4 2 7 8 3 0 3 1 f e d e r ，m e ，c a r t a n o ，n v ，m i l o s ， l e ta 1 ，1 9 9 6 e f f e c to fe n g i n e e r i n gh s p 7 0 c o p yn u m b e ro nh s p 7 0e x p r e s s i o na n dt o l e r a n c eo fe c o l o g i c a l l yr e l e v a n t h e a ts h o c k i nl a r v a ea n dp u p a eo f