（材料物理与化学专业论文）咪喹莫特脂质纳米粒的研究.pdf

东南大学碗七学位论文 摘要 本文进行咪喹奠特纳米结构脂质载体的处方组成及制备工艺的研究，并将该给药系统与咪喹莫 犄乳青进行体外透皮扩散行为及对细胞冈子m r n a 的表达方面的对比研究，预期得剑该给药系统使 约物能够住皮肤局部形成贮库，增加约物在局部的积累，从而起剑持续秆放约物、延欧药物与局部 病灶接触时间的仵h j ，以增进对皮肤局部疚病的治疗效果，减少其毒副作用 根据咪喹英特理化性质，选用生理相容的固崮脂质材料癸酸及单硬脂酸甘油酯作为脂质材料， 采川高乐均质法制备咪喹萸特纳米结构脂质载体，采用单冈素优化试验从脂质材料、表面活性剂、 高压均质处理条件等方砸确定咪喹英特纳米结构脂质载体的优化制备_ 艺条件为d a g m s ( i ：3 ) ， s - 4 0 s p a n 2 0 ( 1 ：1 ) ，高压均质压力为6 0m p a , 循环次数为1 0 次优化条件下制备的 i m q d d a g m s - n l c 的平均粒径和p i 值分别为1 3 3 n m 和o 3 4 8 ，其平均包封率为9 4 6 8 选_ l ；j 生理相容的液崮脂质材料油酸及单硬脂酸甘油酯作为脂质材料采用高压均质法制备咪喹莫 特纳米结构脂质载体，采用单因素优化试验从脂质材料、表面活性剂、高压均质处理条件等方面确 定优化咪喹奠特纳米结构脂质载体的制备工艺条件为脂质材料o a 为4 0 ，复配表面活性剂为 s - 4 0 s p a n 一2 0 ，s 一4 0 含带为5 0 ，高厣均质压力为6 0 m p a ，循环次数为1 2 次。较仕条件下制备的 1 m g m l i m q d o a g m s - n l c 水分散液，其平均粒径为1 8 1 n m ，p 1 值为o 4 7 6 ，平均包封率为8 8 3 利用自制透皮扩散仪对i m q d - d a - g m s - n l c 、i m q d - o a - g m s o n l c 、i m q d ，c r e a m 进行体 外透皮扩散实验，并对其进行比较，结果表明渗透速率分别为7 5 4 、1 3 8 8 和7 8 4i a g c m 2 h - 1 ，1 2 h 后药物在皮肤层中的含量i m q d - o a - g m s - n l c i m q d - d a - - g m s - n l c i m q d - - c r e a m 在研究咪 喹奠特对细胞因子m r n a 的表达时发现涂药2 d 和7 d 后，i m q d - n l c 和i m q d c r e a m 对小鼠皮肤 中细胞因子t n f a 、i l 一1 b 及i l - 6 的m r n a 表达毒均较对照组增高。而且i m q d - n l c 的相对增鼍 比i m q d - c r e a m 的大 关键词：咪喹莫特、纳米结构脂质载体、体外透皮 东南大学硕士学位论文 a b s t r a c t t oe x p l o i tt h en e wd m g d e l i v e r ys y s t e mf o ri m q u i m e d ，t h ec o m p o s i t i o na n dp r e p a r a t i o nt e c h n o l o g y o fi m i q u i m o d - l o a d e dn a n o s t r a c t u r e dl i p i dc a r r i e r s ( i m q d - n l c ) w e r ei n v e s t i g a t e da n dt h ei nv i t r os k i n p e n e t r a t i o na n dt h em r n ae x p r e s s i o n so ft n f o ，i l - lba n di l - 6i nt h es k i no fb a l b cm o u s e i nv i v oo fi m i q u i m o di n c o r p o r a t e di nc r e a m ，n a n u s t r u c t u r e dl i p i dc a r r i e r sc o m p a r e d an o v e ls u i t a b l e t o p i c a ld r u gd e l i v e r ys y s t e mf o ri m i q u i m o d ，w h i c hc a ni m p r o v et h el o c a le f e c to fi m i q u i m o d ，i n c r e a s et h e c o n t e n to fd r u gi nt h es k i n ，d e c r e a s et h en e g a t i v ee f f e c ta n di m p r o v et h et r e a m a n tf o rt o p i c a ld i s e a s e s ，i s e x p e c t e dt ob ea c h i e v e d a c c o r d i n gt ot h ep h y s i c a la n dc h e m i c a lp r o p e r t i e s o fi m q u i m o d ，i m q d d a - g m s - n l cw a s p r o d u c e db yh i g hp r e s s u r eh o m o g e n i z a t i o nu s i n gd e c a n o i ca c i d ( d a ) a n dg l y c e r o lm o n o s t e a r a t e ( g m s ) a s n a t u r a lb i o d e g r a d a b l em a t e r i a l s s i n g l ef a c t o rm e t h o dw a sa d o p t e dt oo p t i m i z et h ep r e p a r a t i o np a r a m e t e r s o f i m q d - d a - g m s - n l c t h eo p t i m i z a t i o np a r a m e w mo f t h ep r e p a r a t i o no f i m q d - d a - g m s - n i c ：t h e m a s sr a t i oo fd a g m sa n ds - 4 0 ，s p a n - 2 0w e r e1 ：3a n di ：1r e s p e c t i v e l y ；t h eh i g hp r e s s u r ew a s6 0 m p a a n dt h ec y c l et i m e sw a s1 0 t h em e a nd i a m e t e ro fo p t i m i z e dn l cw a sa b o u t1 3 3 n ma n dp o l y d i s p e r s i t y i n d e x ( p ow a sa b o u t0 3 4 8r e s p e c t i v e l y t h ee n t r a p m e n tc a p a c i t yw a s9 4 6 8 i tc o n f i r m e du sab u r s t r e l e a s e f o l l o w i n gb y as u s t a i n i n gr e l e a s e 砒p h ia n das u s t a i n i n gr e l e a s ea t p h 5 8i nv i t r o f o r l m q d d a g m s - n l c a d d i t i o n a l l y ，a n o t h e ri m q d - o a g m s - n l cw a sp r e p a r e du s i n go l e i ca c i d ( o a ) a n dg m s a sn a t u r a l b i o d e g r a d a b l em a t e r i a l s t h ei n f l u e n c eo fs u r f a c t a n t , h i g hp r e s s u r eh o m o g e n i z a t i o np a r a m e t e ra n dc a p a c i t y l o a d i n go nt h ep r e p a r a t i o no fi m q d o a g m s - n l cw e r ee x p l o r e d 1 1 ”o p t i m i z a t i o np a r a m e t e r so ft h e p r e p a r a t i o no fi m q d - n l cw i t ht h ec o n t e n tlm g 。m r ：t h em a 鲳r a t i oo fo a ，g m sa n ds - 4 0 ，s p a n - 2 0 w e r e2 ：3a n d1 ：1r e s p e c t i v e l y ；t h eh i g hp r e s s u r ew a s6 0 m p aa n dt h ec y c l et i m e sw a s1 2 t h em e a n d i a m e t e ro f o p t i m i z e dn l cw a sa b o u t1 8 1m a n dp o l y d i s p e r s i t yi n d e x 口i ) w a sa b o u t0 4 7 6r e s p e c t i v e l y t h ee n t r a p m e n tc a p a c i t yw a s8 8 3 t r a u s d e r m a ld i f f u s i o nt e s te q u i p m e n tw a su s e dt oe x a m i n ea n dc o m p a r et h ei nv i t r ot r a n s d e r m a l d i f f u s i o no f i m q d d a - g m s - n l c 、i m q d - o a - g m s - n l ca n d | m q d c r e a m 。t h cp e r m e a t i o nr a t eo f i m q u i m o di ni m q d - d a - g m s - n l c 、i m q d - o a - g m s - n l ca n di m q d - c r e a m w a s7 5 4 、1 3 8 8a n d 7 8 4 p - g + c m - 2 h r e s p e c t i v e t y , a n dt h ec o n t e n t so fi m q u i m o di ns k i nw a si m q d - o a - g m s - n i i m q d - d a - g m s - n l c i m q d - c r e a m i nt h es k i no f b a l b cm o u s e ，t h ee x p r e s s i o nl e v e l so f t n f - a , i l pa n di l - 6m r n aw e r es t a t i s t i c a l l yh i g h e rt h a nt h ec o n t r a l a t e r a le a ro f t h em o o s e k e yw o r d s ：i m i q u i m o d ；n a n o s t r u c t u r e dl i p i dc a r r i e r s ；t r a n s d e r m a lp e r m e a t i o n i i 东南大学学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示了谢意。 研究生签名：髀r 期：芝型奠至一 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文 的复印件和电予文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的 内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅， 可以公布( 包括刊登) 论文的全部或部分内容。论文的公布( 包括刊登) 授权东南大学 研究生院办理。 研究生签名：哗导师签名：二二】! 翼妇珏日期： 东南犬学顾士学位论文 图1 1 咪喹莫特结构式 肿瘤坏死因子( tnf ) 、白细胞介素( il ) 等细胞因子而发挥免疫调节作用【i 】，咪喹莫特的药理活性 最初是在筛选抗单纯疱疹病毒( h s v ) 药物时发现的此后在体内、外的人与动物试验中均显示出较 强的抗病毒、抗肿瘤效应。1 9 9 7 年始，美国3 m 公司公司开始生产5 咪喹莫特乳膏作为外用制剂 并应用于临床，现已被用来治疗尖锐湿疣、传染性软疣、生殖器疱疹等病毒感染性皮肤病，以及日光 性角化、b o w e n 病、基底细胞癌、黑素瘤等癌前病变与皮肤肿瘤【2 。l ，并取得了较好的疗效其他， 目前已报道试用咪喹莫特治疗的疾病还有：b o w e n 样丘疹病、灰泥角化病、皮肤利什曼病，皮肤t 细 胞淋巴瘤、新生几血管瘤、增殖性红斑、斑秃、环状肉芽肿等另外可能的适应症还包括：胞内病原 体感染( 麻风、鸟分枝杆菌感染) 及一些免疫异常性疾病如特应性皮炎、红斑狼疮等，应用及其广泛 然而咪喹莫特临床应用研究发现以下不良症状：局部毒副作用：涂药部位及其周围非常容易引起 皮肤反应比较常见的皮肤反应使痒、烧伤、疼痛、皮疹有些病人还经历周围皮肤反应包括：红 斑、溃疡，浮肿、腐蚀、红斑浮肿等全身毒副作用：疲劳、发热、类似流行感冒症状、头痛、 腹泻、肌痛l o 。另外咪喹莫特不溶于水及一般的有机溶剂，制备理想制剂较困难四川大学华西 药学院的王欢【”将i m i q u i m o d 制成脂质体、纳米粒，但是该制备工艺不宜大规模生产而且制备过程 中需要有机溶剂，给产品质量带来影响。因此开发一种合适的给药系统，对咪喹莫特的广泛应用具 有非常重要的意义 纳米技术( n a n o t c c h n o l o g y ) 是在0 1 1 0 0 n m 空间尺度内操纵原子和分子，对材料进行加工改造 使其具有特定功能的产品，或对某物质进行研究，掌握其原子和分子的运动规律和特性的- - f 崭新 的高科技学科纳米技术涉及面十分广泛，已辐射多个学科物理、化学和生物学在内的所有与材 料有关的工程领域，都已经并将与纳米技术产生“碰撞”概念中的、正在开发的和已经商业化的纳 米技术正在不断发展，对许多高科技领域乃至整个社会都产生了巨大影响纳米技术的发展，使得 化学和物理学之间已无明确界限它对药物研究领域的不断渗透和影响，引发了药物领域一场深远 的革命尤其在药物研究领域，由于纳米材料性质的奇特性和优越性，将增加药物吸收度、建立新 的药物控释系统、改善药物的输送、替代病毒载体、催化药物化学反应和辅助设计药物等研究引入 了微型、微观领域。为寻找和开发医药材料，合成理想药物提供了强有力的技术保证l i ”运用纳 米技术的药物可克服传统药物许多缺陷以及无法解决的问题 东南大学硕士学位论文 在纳米级药物的研究中，最受瞩目的是药物纳米载体系统着重提高约物的靶向性，并控制药 物的秆放速度，使约物在患病的部位或组织缓慢或以恒定速度释放一段稍长的时间药物与载体的 结合，使得药物的体内过程不再仅仅依赖药物本身的性质，而是在很大程度上取决于载体系统载 体系统的适当选择使活性药物可以按照药物治疗的特殊需要可控或局域性地释放载体按大小可以 分为纳米载体，微米级的微粒以及几个毫米大小的植入型载体植入物和微粒对于靶向给药和静脉 注射来说尺寸太大因此，近年来纳米载体的麻用越来越引起人们的雨视1 1 2 - 1 5 i 1 2 药物纳米载体的概述一” 近年米出现的一个越米越明显的事实就是新约本身的发展升不足以保证约物治疗的进步体外 实验中得剑的令人兴奋的结果在体内实验中却经常令人人失所望治疗火败的主要原因包括： 1 由丁吸收很筹、快速的新陈代谢及排山( 如肽，蛋白质尊) 而引起的约物浓度不足约物在 其他组织中的分布及其高毒性( 如癌症药物) 2 由丁约物溶解性著而使静脉内( i n t r a v e n o u s ，i v ) 注射_ h j 药物水溶液很难应用； 3 ，由于口服给药后难以预测的生物兼容性问题而引起的血浆水平波动很大，以及食品对血浆) 水平的影响( 如环孢霉素) 克服以上问题的一个令人鼓舞的途径就是发展合适当约物载体系统。药物的体内过程不再主要 依赖约物本身的性质，而是取决丁载体系统载体系统的适当选择使得活性药物可以按照药物治疗 的特殊需要可控地及局域性地释放载体尺寸取决于给药途径，范围从几个纳米( 胶体载体) ，到几 个微米( 微粒) ，甚至几个毫米( 植入物) 。对于肠道外给药，生物降解材料的应用是非常需要的。 这样可以避免在药物完全释放后再动手术去除植入物，从而使得微米和纳米微粒给药方式更加可行 上述思路已经在几个商业产品中得到了应用基于可生物降解的聚酯材料的植入物和微粒在s c 或i m 植入脏射后可以在几个星期至儿个月时间内控制约物释放可行的商业系统已经发展起来用于治疗 前列腺癌及其他促性腺激素相关的疾病。局部药物释放的一个例子是发展了一种生物降解植入物治 疗神经胶质瘤，这使得药物在脑中的浓度非常高而在包括骨髓在内的其他组织中浓度最小植入物 和微粒对丁二靶向给约和静脉注射来说尺寸太大了因此，近年来胶体载体的应用越来越引起人们的 重视 1 2 1 药物纳米载体的特点 药物纳米载体就是将活性药物成分通过溶解、包裹作用置于具有纳米尺度的载体粒子内部，或 者通过吸附、附着作用置于载体粒子表面。其优势主要在以下三个方面 1 4 - 1 8 1 1 、提高药物的生物利用度 药物的吸收度常常受药物在吸收部位的溶出速度支配一般的，当粒子小于某一尺度( 约1 啪) 时，较小颗粒的溶解度大于较大颗粒的溶解度纳米粒子具有很大的表面积和很高的能量状态这 使约物的分散皮极显并地增人，这是任何超细粉碎技术难以达到的分散度的增人是导致难溶性药 物溶出度增大的主要因素因此，药物颗粒纳米化可以提高其溶出速率，进丽提高药物的生物利用 度 2 、改善约物性质 具有生物相容性的载体材料对药物的包裹和吸附，可以在一定程度上提高药物的靶向性，纳米 2 东南大学硕士学位论文 尺寸的粒子进入人体后易被网状皮内系统细胞作为外来异物所吞噬进入溶酶体融合并被溶酶消 化，裂解释放药物而肝、脾、肺，骨髓和淋巴等是网状内皮细胞丰富的组织；控制载体材料在体 内的降解速度及改变载体材料与药物的结合方式，就可以控制药物的释放速率无论是吸附在纳米粒 子载体表面还是包封在纳米粒子内部的约物。其释放过瞿都是可控的；减少药物毒副作用，几乎所 有相关文献都指出，纳米化的药物比游离态显著降低药物毒副作用纳米载体系统的超微小体积使 得其可以进入毛细血管及穿过细胞，消除特殊生物屏障对药物作用的限制，制成静脉注射及靶向给 约系统。闪此，纳米载体系统人大改善了药物性质，提高了药物的生物利_ 1 1 j 度 3 、替代病毒载体 从理论上讲，利用基因治疗的方法是可以通过修复那些异常的基因而治疗某种疾病的但在实 际的治疗过程中。基因治疗还存在着许多的困难，现在使用的方法还很原始其中一个问题就是如 何避开人体自身免疫系统而把外源基因导入体内细胞目前，应用最多的是以自然界中存在的病毒 竹为基因治疗载体，但免疫学研究认为，用病毒作为基冈治疗载体不可避免地会遇仝严重的免疫反 应问题，甚至致人死亡，此种病症在国外已有报道。因此。在进行基因治疗时就需要一个安全的载 体来代替传统的病毒载体 总之，纳米药物载体可提高药物的生物利用度、生物可降解，靶向输运可控释放及降低毒性等， 具有广阔的应用发展前景 1 2 2 纳米载药系统的类型 目前研究中的纳米载药系统有很多种体系，包括纳米颗粒( n a n o p a r t i c l e s ) ，聚合物药物结合体 ( p o l y m e r - d r u gc o n j u g a t e ) ，纳米乳液( n a n o e m u l s i o n s ) ，纳米粒悬浮液( n a n o s u s p e n s i o n s ) ，脂质体 ( 1 i p o s o m e s ) ，固体脂质纳米粒( s o l i dl i p i dn a n o p a r t i c l e s ，s l n ) ，以及纳米结构脂质载体( n a n o s t r u c t u r e d l i p i dc a r r i e r s ，n l c ) 下面着重介绍一下与本论文有关的纳米级脂质药物载体 1 2 2 1 脂质体 脂质体( 1 i p o s o m e ) 是1 9 6 5 年英国学者b a n g h a m 1 9 | 等将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。 磷脂分散在水中形成多层囊泡，每一层均为脂质双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分 子层厚度约为4 n m 这种具有类似生物膜结构的双分子结构小囊称为脂质体。最初脂质体主要作为 人工生物膜用于研究生物膜的结构和功能的关系，1 9 7 2 年，g r e g o r i a d i s 和r y m a n 将脂质体用于药 物载体口。构成脂质双分子层( 载体) 的物质主要由磷脂( 卵磷脂、脑磷脂、豆磷脂) 和胆固醇等， 其中每层均可包封约物，且由于其分子结构中既有亲水基团又有疏水基团，水溶性药物包封于囊泡 亲水基团夹层中，而脂溶性药物则分散于囊泡的疏水基团的夹层中 脂质体按结构类型按大小及双层数目，脂质体可分为单层脂质体( u n i l a m e l l a rv e s i c l e s ) 、多层脂 质体( m u l t i l a m e l l a rv e s i c l e s ，m l v ) 、多囊脂质体( m u l t i v e s c u l a rl i p o s o m e s 。m v l ) 其中单层脂质 体又可分为大单层脂质体( 1 a r g e u n i l a m e l l a r v e s i c l e s ，l u v ) 、小单层脂质体( s m a l lu n i l a m e l l a r v e s i c l e s ， s u v ) 。 脂质体在经皮给药系统应用中有如下优点i ”- 2 3 1 ：( 1 ) 脂质体固有的性质能够包裹并携带亲水或 亲油性麴物进入体内；( 2 ) 脂质体可以包封难以透皮的药物及易受胃肠道破坏的生化高分子药物及疫 苗，促进其透皮吸收，产生全身治疗作用及免疫预防效果；( 3 ) 脂质体特别是与皮脂相似的类脂形状 3 东南大学硕士学位论文 的脂质体与皮肤角质层脂质有高度的相容性，能增加药物在皮肤局部的积累，从而起剑持续的药物 释放作用；( 4 ) 角质层具有药物全身吸收的限速膜屏障作用，由于以脂质体为载体的药物易被角质层 吸收，在表皮和真皮内形成药物储库，药物可持续地对病变细胞起到治疗作用，极大地提高治疗指数， 减少全身副作_ h j ，因此脂质体应用丁经皮给药系统和化妆品具有广阔的发展前景 1 2 2 2 周体脂质纳米粒( * s o l i dl i p i dn a n o p a r t i c l e s ，s l n ) 州体脂质纳米粒是上个世纪九十年代发展起来的一种新l ! 微粒给约系统s l n 以天然或合成的 同态类脂为载体，将药物包裹丁：类脂核中，制成粒径为5 0 1 0 0 0n m 的固体胶粒给药系统与纳米乳 液、脂质体相似，s l n 采用生理相容性好的类脂材料为载体( 如硬脂酸) ，这些材料在室温下呈固 态，既具有聚合物纳米粒的优点，如长期物理化学稳定性，防止药物降解和泄漏、可控药物释放和 靶向定付秆放筲，又只有脂质体、乳剂毒性低的优点。可采用高压乳匀法和微乳法进行人规模一l ：业 化生产。s l n 的水分散体系可以进行高压灭菌或y 辐射灭菌，也可通过冻干或喷雾干燥制成固体粉 末。s l n 主要用于静脉给药，达到靶向或控释作用，也用于口服给药，以控制药物在胃肠道内的释 放，亦可用于局部或跟部给药等 2 4 - 2 1 1 i i 、制得方法 1 ) 高剪切均化和超卢 高剪切均化和超声是最初用于制备s l n 的分散技术1 2 9 - 3 0 1 这两种方法简便易行从而得到了广泛 使用。但是分散质量不好，常伴有微米颗粒的存在此外，超声过程中的金属污染也是一个问题 2 ) 高压均质 高压均质( h i g hp r e s s u r eh o m o g e n i z a t i o n ，h p h ) 已经成为制备s l n 的可靠而有力的技术高 压均质机的原理是利用高压( 1 0 0 2 0 0 0 b a r ) 推动液态通过一个很窄的间隙( 几个微米) 在高压作 _ l j jr ，流体在很短的距离内迅速被加速剑一个很高的速度( 超过1 0 0 0k m h ) 极高的剪切力和空化 力将( 微米级的) 粒子分裂成弧微米的颗粒均质步骤有两个主要途径可以用于制备s l n ：热均化 和冷均化技术种途径，都需要一个预处理步骤将药物加入体相脂质材料中，这种加入可能是一个溶 解过程，也可能是一个药物在脂质熔融物中的分散过程 3 1 - 3 2 】 热均化法是在脂质材料的熔点温度以上进行的可以认为是一个乳液的均化过程。首先，通过 高剪切混合设备( 高剪切均质机如u l t r a - - t u r r a x ) 制得载有药物的脂质熔融物和相同温度的含有乳化 剂的水相的预乳液预乳液的质量在很大程度上将影响到最终产品的质量，而得到毫米尺度上的分 散相液滴也是可以实现的预乳液的h p h 处理在高于脂质材料熔点的温度上进行一般说来，温度 越高，得到的分散相粒径就越小，因为这降低了分散相的粘度。但是，温度的升高同样将提高药物 和载体材料的降解速度热均化的最初产品是一个纳米乳液，因为脂质是液相的均质后将样品冷 却到室温或低于室温将会得到固体粒子。由于粒子尺寸很小以及乳化剂的存在，脂质的结晶过程将 受到极大的阻碍，所得的样品可以在几个月里维持一种过冷熔融物的状态1 与热均质法相比，冷均化法是对固体脂质进行处理，即对固体悬浮体系进行高压碾磨由于在 均质过稃中会引起温度升高，所以温度的有效控制和调节对于保证脂质的朱熔融态是1 f 常需要的 发展冷均化法主要希望克服热均化法的如下缺点： a ) 温度引起的药物降解； b ) 均质过程中药物分散到水相中； 4 东南大学硕士学位论文 c ) 纳米乳液结晶过程的复杂性导致脂质材料的几种变体，或过冷熔融物 冷均质处理的第一个步骤与热均化法相同。即将药物溶解或分散到脂质材料的熔融液相中但 随后的处理就人不相同了含有药物的熔融物被迅速冷却，如使用干冰或液氮较高的冷却速率有 利丁j 药物在脂质材料中的均有分布含有药物的刚体脂质随j 斤被碾磨成微粒此硎体脂质微粒被分 散在一个冷冻的乳化剂溶液里然后将所得剑的预悬浮液在不高丁窒温卜进行高压均质处理。一般 情况f ，采刚冷均化法处理得剑的颗粒尺寸要人丁热均化法处理的产品，而且粒径分布也要宽得多。 冷均化法最大稃度上减小了药物暴露在高温从而引起降解的可能性，但仍无法完全避免，因为在处 理的初始阶段需要将约物加入剑高温熔融的脂质液相中 3 ) 溶剂乳化蒸发 s j o s u o m 和b e r g e n s t a h l 描述了一种从水包油型乳液中沉淀制备纳米粒子分散体的方法f l s 】先将 亲油材料溶解在一个水不溶性的有机溶剂中( 如环己烷) ，再在水相中乳化。然后将有机溶剂蒸发并 使脂质在水相中沉淀就可制得纳米粒子分散体平均粒行取决于有机相中的脂质浓度。非常小的粒 子只有在脂质浓度为5w ( 相对丁有机溶剂) 时才能得到。提高脂质含量将降低均质的有效性， 用为分散相的粘度提高了与冷均化法相比，本方法的优点在于杜绝了高温对药物和载体降解的影 响一个明显的缺点就是有机溶剂的使用 4 ) 微乳液法 陆杨燕及其合作者采用微乳法成功制各了维甲酸固体脂质纳米粒，并对其高温相行为进行深入 研究l “1 g a s c o 及其合t r 者发展了一种基丁微乳液稀释制备s l n 的技术1 3 4 1 o a s e o 及其他科学家认 为微乳液是一个由内相和外相组成的两相系统它是在6 5 7 0 ( 2 搅拌一个光学透明的混合溶液制得 的，该混合溶液包括一个低熔点的脂肪酸如硬脂酸，乳化剂如吐温2 0 、吐温6 0 、大豆卵磷脂、脱氧 牛黄胆酸钠，助乳化剂如丁醇，单辛基磷酸钠，以及水。随后将热的微乳液在搅拌下分散到2 - 3 c 的 冷水中热微乳液与冷水的典型体积比为l ：2 5 到l ：5 0 。微乳液的稀释过程进行严格的成分测定。按 照文献所述1 3 5 4 7 i ，液滴的结构已经包含在微乳液中，因此无需额外能量即可得到亚微米的粒子f e s s i 通过聚合物溶液在水中的稀释来制备聚合物纳米粒子按照他的方法，粒径严格取决于分散过程的 速率只有在分散溶剂可以非常迅速地分散到水相中去时( 如丙酮) 才能制得纳米粒子而当溶剂 更疏水时制得的粒径就比较大微乳液的亲水共溶剂在脂质纳米粒子的形成过程中也可以发挥相 似的作用，就像丙酮在聚合物纳米粒子制各过程中发挥的作用一样对于微乳液体系，温度梯度、 p h 值及微乳液组成成分决定了产品质晕较高的温度梯度有利于脂质的迅速结晶防止聚集由于稀 释步骤的原因，产品的脂质含量明显比采用h p h 方法制得的产品要低得多 2 应用 1 ) 口服给药l 硐 s l n 的口服给约形式包括水分散体系或以s l n 载约的传统荆弛如片剂丸荆，胶囊荆胃部的 微环境早酸性，离子强度也较高，这些均有利于粒子聚集可以预计，食物对s l n 性能也有很大影 响，但是就我们所知，目前还没有这方面的实验数据发表关于胃和胰腺脂肪酶对s l n 降解的体 内影响目前还有待研究近期的主要发现和应用有：载有喜树碱( c a ) 的s l n ，成分为硬脂酸( 2 ) ， 卵磷脂( 1 5 ) ，p o l o x a m e r1 8 8 ( 0 5 ) 。所测得的c a 包封率为9 9 6 ；含有环孢素的脂质纳米分散 体系经动物口服后发现提高了生物相容性，延长了血浆水平；b a r g o n i 研究发现在十二指肠给药后， 东南人学颀i 学位论文 淋巴对s l n 的摄取提高了 2 ) i r 肠道给约” s l n 已经在动物身上进行过静脉给药。载入到s l n 中的阿霉素药代动力学研究表明相对于商用 约物溶液在小鼠身上1 v 硅射给约而言，具有更高的血约浓度。至丁| 体内分布，s l n 在肺部、脾脏 和脑部中的药物浓度更高，而对溶液体系而言，肝部和肾脏会分布更多的药物。 3 ) 透皮庶_ j 【4 0 “l 最小的s l n 粒径出现在脂质含量较小的情况下( 最高5 ) 。分散脂质的低浓度和低粘度均不利 丁二皮肤给药。多数情况下为了实现皮肤给药需要将s l n 载入到软膏或凝胶中。s l n 固体脂质含量 的增加形成半阁态，类凝胶体系，可以直接应用于皮肤给药 s l n 为化妆品领域也提供了有意义的应用体外研究发现s l n 可以反射紫外线。紫外反射性能 与脂质的蒯态结构有关，而对相近成分的纳米乳液来说并不明显这些为研制基丁：s l n 的紫外防护 系统提供了可能性 研究发现s l n 可以调节透过皮肤的药物释放，改善药物对皮肤特定部位的输送应用于皮肤上 以后水分的损失可能改变脂质变体和s l n 结构电镜结果表明，与以前所认为的球形结构形成对比， s l n 分散体系( 3 2 ) 干燥后形成了一层致密的膜致密结构的形成有利于形成皮肤上的闭塞效应 注意到这一现象是很有意思的体相脂质材料熔融物形成的膜并不致密，而干燥的s l n 分散体系就 可以。表面活性剂在防j l 形成孔洞上起到了重要作用。 s l n 被认为结合了其他儿种胶体载体的优点而规避了其缺点”。其优点包括： 1 、易丁制备成可控约物释放和靶向释放的载体； 2 、载体材料本身没有生物毒性，制各过程中可以不使用有机溶剂，毒副作用小： 3 、提高了药物稳定性； 4 、亲油和亲水药物均可方便载入； 5 、可以进行大规模的生产和消毒处理 当然s l n 也还存在有一些问题，例如在m a d e r 和m e h n e r t 的综述1 4 2 】中就总结过：( i ) 脂质材料 的结晶性( 1 1 ) 较低的载药景；( 1 1 i ) 贮存期间的药物泄漏； ( i v ) s l n 水分散体系过大的含水量 这些缺点导致了新一代改进的类脂纳米粒纳米结构脂质载体的出现。 1 2 2 3 纳米结构脂质载体( n a n o s t r u c t u r e dl i p i dc a r r i e r s ，n l c ) 1 4 j - “l n l c 是s l n 的基础上发展起来的新一代药物载体，是采用两种或两种以上的固一液( 或同同) 脂质材料经过高温加热后冷却而制得它主要有三种类型( 图1 - 2 ) ：( i ) 缺陷结构型；( i i ) 无定形 结构型；( 1 1 1 ) 多重结构型。它具有的特殊结构可以改善药物在相容性和释放方面的性质，避免或尽 可能减少上节所述s l n 问题的出现。 n l ci 6 东南大学硕士学位论文 n i 。c i 图i - 2 n l c 的三种类型 众所周知，药物在贮存过程中会发生泄漏，而且在s l n 中脂质亦有可能结晶而转变为更为规整 的p 晶型。对于药物载体来说t 载体的晶型越是完美，其内部可以容纳药物分子的空间就越小，药 物分子就很容易被“挤出”载体从而使载体失去载药功能。这种现象在制备s l n 时有可能会发生， 特别是对于那些本身结晶性非常好的载体材料，这种现象则表现得非常严重。在贮存过程中( 几天 或几小时内) ，s l n 水分散体系里会有很多的近乎完美的b 晶型形成从而导致药物从其中快速释放。 另外，脂质晶型的高度有序也会限制其载药量。而用单- - 质作为载体的往往就会形成这种完美晶 型，例如三硬脂酸甘油脂。 对n l c 而言，其特殊结构可以尽量减少上述问题的出现。n l c 用混合的固体脂质和化学性质 完全不同的液体脂质( 油类) 的混合物而不用单一固体脂质作为载体，使得晶体不再高度有序，而 是存在一定的“缺陷”，而且脂肪酸烃链间的间距会随着混合脂质中液态混甘油脂的使用而增加，这 样，脂肪酸链间较长的间距和晶体具有的缺陷性使得药物能存于其中而不被“挤出”，我们因此可以 获得具有较高载药量而又不易结晶的理想的载体。结晶过程( 如图1 3 ) 本身会导致药物泄漏，这 一现象促使了非晶态的n l c 的产生。用特殊的固固或者固液混合脂质就可以在冷冻时制得固态粒子 而非晶体。 s l n n l c i 图1 - 3 n l c l 与s l n 存储期间的结晶 7 东南大学硕士学位论文 和s l n 一样，n l c 的一个基本的优点是可以做成为大家所熟知的胶囊。n l c 具各s l n 的所有 有点外，本身还具有一些特殊的优点：l 、提高了载药量、避免了药物的泄漏；2 、能够制备出高浓 度的n l c ，m ul l e r 等人通过多步法( 如图1 - 4 ) 制备脂质浓度高达8 0 4 5 j ：3 、具有长期的稳定性， m ui l e r 等人研究表明，高浓度的n l c 具有一定的空间网状结构，防止了粒径的聚集，而低浓度的 s l n 可以自由扩散，导致粒子易丁i 聚集( 如图1 5 ) 图l - 4 多步法制各高浓度n l c 图1 - 5n l c 贮存稳定性原理简易示意图 1 3 主要研究内容 本论文分别以固固、固液这两种体系脂质材料作为载体制备了眯喹莫特纳米结构脂质载体，并 进行理化性质表征在体外透皮渗透行为研究方面，将本品与市售咪喹莫特乳膏进行对比研究。最 后将本品与市售咪喹莫特乳膏进行对小鼠皮肤细胞因子m r n a 表达水平的对比 论文主要内容： 第二章土要研究癸酸( d e c a n o i ca c i d ，d a ) ，单硬脂酸甘油酯( g l y c e r o lm o n o s t e a r a t e ，g m s ) 体 系咪瞳莫特纳米结构脂质载体，从脂质材料、表面活性荆、高压均质处理条件二个人的方面进行制 备条件的探索与优化，并对其进行粒径、z e t a 电位、包封率、稳定性体外释放等方面表征，最后对 结果进行分析与讨论 第三章主要研究油酸( o l e i ca c i d ，o a ) g m s 体系眯喹莫特纳米结构脂质载体，分别考察脂质材 料、表面活性剂、高压均质处理条件对制备咪喹莫特纳米结构脂质载体的影响，对其结果进行分析 8 东南丈学硕士学位论文 得山较住制备条什，升对其进行粒径、形貌、稳定性、透皮渗透行为等方面的表征 第四章土要是将本品与市售咪喹莫特乳膏进行对小鼠皮肤细胞冈子m r n a 表达水平的对比 第五章对全文作总结与展望。 参考文献 【1 】g u p t aa k ，b r o w n em ，b l u h mr i m i q u i m o d ：ar e v i e w 【j 】j c u t a nm e d s u r g ，2 0 0 2 ，5 5 4 【2 m u l l e rr l ，g e r s t e rj f , o w e n sm l ，e ta 1 1 m i q u i m o da p p l i e dt o p i c a l l y ：an o v e li m m u n er e s p o n s e m o d i f i e r a n dn e wc l a s so f d r u g 【j 】n t j l m m u n o p h a r m a e o l l 9 9 9 ，2 1 ：l 【3 v i l a mj j ，b a d i ax e f f e c f i v e n e s s ，s a t i s f a c t i o na n dc o m p l i a n c ew i t hi m i q u i m o di nt h et r e a t m e n to f e x t e r n a la n o g e n i t a lw a r t s i n t e r n a t i o n a lj o u r n a lo f s t d & a i d s ，2 0 0 3 ，1 4 ( 1 ) ：11 1 7 【4 b a y e r lc ，f e l l e rg ，g o e r d ts e x p e r i e n c ei nt r e a t i n gm o l l u s c u me o n t a g i o s u mi nc h i l d r e nw i t h i m i q u i m o d5 c r e a m b r i t i s hj o u r n a lo f d e r m a t o i o g y 。2 0 0 3 。1 4 9 ( s 6 6 ) ：2 5 - 2 8 【5 c h r i s t e n s e nb ，h e n g g eu r r e c u r r e n tu r o g e n i t a lh e r p e ss i m p l e x - s u c c e s s f u lt r e a t m e n tw i t h i m i q u i m o d s e x u a l l yt r a n s m i t t e di n f e c t i o n s ，1 9 9 9 ，7 5 ( 2 ) ，1 3 2 1 3 3 ( 6 e k l i n dj ，t a t t l e ru m a s c h k ej ，e ta 1 1 m i q u i m o dt ot r e a td i f f e r e n tc a n c e r so ft h ee p i d e r m i s d e r m a t o l o g i es u r g e r y ，2 0 0 3 ，2 9 ( 8 ) ：8 9 0 8 9 6 【7 s t o e k f l e t he ，m e y e rt ，b e n n i n g h o 仃b ，e ta