（农药学专业论文）阿维菌素和高温胁迫对朱砂叶螨γ氨基丁酸及其受体表达的影响.pdf

摘要 阿维菌素和高温胁迫对朱砂叶螨丫氨基丁酸 及其受体表达的影响 农药学专业硕士研究生卢文才 指导教师何林教授 ( 摘要) 朱砂叶螨( t e t r a n y c h u sc i n n a b a r i n u s ) 在我国分布广泛，是严重为害棉花、蔬菜等多种作 物而又难于防治的种害螨。该螨繁殖能力强，产卵力高，世代周期短，在短时间里能够迅 速形成一定数量的种群，并且容易产生抗药性。 本文通过比较朱砂叶螨敏感品系( s s ) 、阿维菌素抗性品系( a b r ) 和高温饲养品系( h r ) 丫_ 氨基丁酸“- a n a i n o b u t y r i ca c i d ，g a b a ) 及丫- 氨基丁酸受体( 7 - a m i n o b u t y r i ea c i dr e c e p t o r ， g a b a r ) 含量差异，从生物化学和分子水平研究朱砂叶螨适应阿维菌素、高温逆境胁迫与其体 内g a b a 和g a b a r 的相关关系，旨在阐明对阿维菌素产生抗性的朱砂叶螨在高温下具有适 合度优势的机理，为延长阿维菌素的使用寿命，有效治理朱砂叶螨对阿维菌素的抗性提供理 论依据。本研究得到了国家自然科学基金( 3 0 6 0 0 0 5 9 ) 的资助，获得以下主要研究结果。 一、建立了朱砂叶螨g a b a 含量检测的高效液相色谱( h p l c ) 法，以异硫氰酸苯酯( p i t c ) 为衍生剂，进行柱前衍生反应，采用c 。进行分离，紫外检测器测定衍生物的吸光量。g a b a 标准液和样品液得到了良好的洗脱和分离，g a b a 在柱上的保留时间是4 2 9 m i n ，添加回收率 在9 8 5 3 与1 0 0 6 0 之间。 二、采用h p l c 检测朱砂叶螨体内g a b a 含量，朱砂叶螨a b r 品系体内g a b a 含量显 著高于s s 品系( 1 3 9 倍，p 0 0 5 ) ；用s s 品系l c 9 5 剂量的阿维菌素( 0 0 5 5m g c l ) 汰选s s 获得 耐药性个体( s s a ) ，其g a b a 含量明显高于s s 品系( 为s s 的1 4 1 倍) ，耐药性个体繁殖的 下一代( s s a f l ) ，在未接触任何药剂情况下体内g a b a 含量高于s s 品系( 1 5 2 倍) ；用s s 品 系l c 5 0 剂量的阿维菌素( o 0 1 8m g l ) 分别处理朱砂叶螨s s 和a r 品系，s s 品系药后8 hg a b a 含量迅速提高( 提高了5 2 ) ，而a b r 品系变化不大；h r 品系体内g a b a 含量仅为s s 品系 的7 3 ，1 ，差异显著( p 0 0 5 ) ；4 0 c 热激l h 后，h r 和s s 品系个体g a b a 含量均显著提高( 分 别升高了2 7 2 和2 0 6 ) 。我们初步推测朱砂叶螨通过调节g a b a 含量来适应阿维菌素和高 温的胁迫。 三、通过对朱砂叶螨行为学观察，发现凡是体内g 俎a 含量较高的朱砂叶螨品系或个体 i 西南大学硕士学位论文 其爬行速度都比较缓慢：a b r 、从s s 品系汰选的抗性个体s s a 及其下一代s s a f l 个体相对 于s s 品系均表现为行动迟缓( 平均爬行速度分别为s s 品系个体的6 2 3 、7 0 8 和7 6 4 ) ； 经药剂诱导8 h 后，s s 品系个体活动速度明显变慢( 为诱导前7 l ) ，而抗性个体活动速度变化 不显著：h r 品系和s s 品系活动速度相当，无显著差异；热应激后，s s 和h r 品系活动速度 均变得缓慢( 爬行速度分别为热激前的7 4 2 和7 0 1 ) 。体内g a b a 含量较高的朱砂叶螨的 活动都受到不同程度抑制，从而间接验证g a b a 是无脊椎动物的抑制性神经递质。 四、分子克隆获得一条g a b a 受体a 亚基全长序列，g e n b a n k 登录号为e u 3 6 2 1 1 1 ，命名尺川亿。 开放阅读框( o r f ) 为1 1 2 7 b p ，编码3 7 6 个氨基酸残基，其中包括了由2 1 个氨基酸组成的信号 肽。该基因编码的氨基酸序列理论分子量为4 1 1 k d a ，等电点( p i ) 为9 2 5 ；57 端有2 7 b p 的非 编码区，3 端有5 5 5 b p 的非编码区和p o l y a 尾，第1 6 8 1 处有a a t a a a 加尾信号：与其他昆虫、螨 同源性搜索比较，发现与二班叶螨t e t r a n y c h u su r t i c a e 、黑腹果粕r o s o p h i l a m e l a n o g a s t e rg a b a 受体0 【亚基同源性分别高达7 2 和7 1 。生物信息学分析表明，推导的r 讲n 结构也包含典型的 g a b a 受体亚基的四个跨膜结构域，且第三结构域至第四结构域之间有一个明显的亲水区； 尺。氨基酸序列中存在高度保守的糖基化位点僻。氨基酸序列9 2 n 和1 3 3 n ) 与磷酸化位点 饵。氨基酸序列1 8 7 y ，3 4 1 s ，3 4 6 y ，3 6 2 y ) ，另外还含有可能在螨类中是特有的糖基化点( 6 0 n i nr 。) 与磷酸化点( 4 8 sa n d3 3 9 si nr d l r 。) ；构建分子进化树结果显示，朱砂叶螨和二斑叶螨 g a b a r 基因在g a b a r 类群中最为原始，在进化树里独立于其他物种的g a b a r 。 采用同样的方法得到了室内选育的朱砂叶螨a b r 品系g a b a r 的基因序列对s s 品系 和a b r 品系核苷酸及推导的氨基酸序列进行对位排列分析，结果显示，两品系核苷酸与氨基 酸序列没有差异。 五、建立了基于s y b rg r e e ni 染料技术的r e a l t i m ep c r 方法，以1 3 - a c t i n 基因作为内参 基因进行校正，运用实时定量p c r 检测s s 品系、a b r 品系g a b a 受体m r n a 表达量。检测 结果为a b r 品系的相对表达量显著低于s s 品系的表达量( 仅为s s 品系的1 4 ，p 0 ，( 1 5 ) ， 用s s 品系l c s o 剂量的阿维菌素对朱砂叶螨a b r 品系、s s 品系诱导8 h 后，a b r 品系g a b a 受体的表达量基本没有变化，而s s 品系表达量显著降低( 降为2 4 ) ，h r 品系g a b a r 表达 量显著低于s s 品系( 前者是后者的5 4 7 ) ；热激后，s s 品系表达量显著下降( 降低了5 6 ，6 ) ， 而h r 品系表达量有所降低，但无显著差异。朱砂叶螨g a b a 受体m r n a 表达下调介导了其 对阿维菌素和高温胁迫的适应性。 关键词：朱砂叶螨，阿维菌素，高温，丫- 氨基丁酸( q 姬a ) ，丫氨基丁酸受体( g a b a r ) a b s l r a c t a b s t r a c t t h ec a r m i n es p i d e rm i t e ，t e t r a n y c h u sc i n n a b a r i n u s ( b o i s d u v a l ) ，o n eo ft h em o s ti m p o r t a n t p e s t so nc o t t o n , v e g e t a b l e sa n do t h e rc r o p s ，i sw i d e l yd i s t r i b u t e di nc h i n a b e c a u s eo fi t sh i g h f e c u n d i t ya n ds h o r tg e n e r a t i o nt i m e ，t h em i t ec a l lf o r mr a p i d l yp o p u l a t i o no fac e r t a i nn u m b e ro f s t o c k si nas h o r tp e r i o do ft i m e ，d e v e l o pr e s i s t a n c ee a s i l ya n dt h u si ti sd i f f i c u l tt op r e v e n ta n d c o n t r o lt h i sm i t e t h et h e s i sw a sd e s i g n e dt od e t e c ta n dc o m p a r et h ed i f f e r e n c e so fg a b aa n dg a b a rc o n t e n t a m o n gs u s c e p t i b l es t r a i n ( s s ) ，a b m e c t i n - r e s i s t a n c e ( a b r ) a n dh i g ht e m p e r a t u r e r e s i s t a n c e s t r a i u s ( h r ) o fzc i n n a b a r i n u s ，a n dd i s c u s s e dt h eb i o c h e m i s t r ya n dm o l e c u l a rr e s i s t a n c em e c h a n i s m 0 fzc i n n a b a r i n u st oa b a m e c t i na n dh e a ts t r e s s e s ，i no r d e rt or e v e a lt h et h o r o u g hm e c h a n i s mo f s u p e r i o rf i t n e s so fa b a m e c t i n r e s i s t a n ts t r a i n su n d e rh i g ht e m p e r a t u r ec o n d i t i o n ，a n dt op r o v i d ea t h e o r e t i c a lb a s i sf o ri n t e g r a t e dr e s i s t a n c em a n a g e m e n t ( i r m ) t h i sw o r kw a ss u p p o r t e db yg r a n t s f r o mt h en a t i o n a ln a t u r a ls c i e n c ef o u n d a t i o no fc h i n a ( n o 3 0 6 0 0 0 5 9 ) ，a n dt h em a i nr e s u l t sw e r e a st h ef o l l o w i n g 1 t h em e t h o df o rm e a s u r i n gt h ec o n t e n to fg a b a ，u s i n gp h e n y l i s o t h i o c y a n a t e ( p i t c ) a s p r e c o l u m n d e r i v a t i z a t i o nr e a g e n tw i t hh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h i c ( h p l c ) u v d e t e c t i o n ，w a se s t a b l i s h e d t h em e t h o de x h i b i t e dg o o dr e t e n t i o nt i m e ( 4 2 9 m i n ) a n dp e a ka r e a r e p r o d u c i b i l i t yf o r g a b a p i t c t h er e c o v e r i e so fg a b aw e r ea m o n gt h e t h e r a n g e o f 9 8 5 3 1 0 0 6 0 2 t h eg a b ac o n t e n ti nzc m n a b a r i n u sw a sm e a s u r e db yh p l c ，t h ec o n t e n ti na b rs t r a i no fz c i n n a b a r i n u sw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti ns ss t r a i no fzc i n n a b a r i n u s ( 1 3 9f o l d ，p 0 0 5 ) ， a n dt h eg a b ac o n t e n ti na b a m e e t i n r e s i s t a n c ei n d i v i d u a l ss e l e c t e df r o ms sw i t ha b a m e c t i nl c 9 5 o fs s ( s s - a ) a n ds s a f l ( t h ef 1g e n e r a t i o no fs s a ) s t r a i n sw e r ea l s os i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a t i l ls s ( 1 41 一a n d1 5 2 一f o l d ，r e s p e c t i v e l y ) t h es i g n i f i c a n t l yh i g h e re x p r e s s i o nl e v e lw a so b s e r v e di n t h es ss t r a i n8h o u r sl a t e ro f b e i n gt r e a t e dw i t ha b a m e e t i n ( 0 0 1 8m g l ) w h e nc o m p a r e dt h a tw i t hn o t r e a t m e n t ( t h ec o n t e n to fg a b ai n c r e a s e d5 2 ) ，w h e r e a st h ee x p r e s s i o nl e v e li na b rs t r a i nd i dn o t c h a n g es i g n i f i c a n t l ya f t e rb e i n gt r e a t e d 、n t ha b a m e c t i n t h eg a b ac o n t e n to fh rs t r a i nw a s s i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h a to fs s ( a b o u t7 3 o ft h a ti ns s ) a n dt h ec o n t e n to fg a b ai ns sa n dh r w e r es i g n i f i c a n t l yr i s e na nh o u rl a t e ro f4 0 h e a t - s h o c k ( i n c r e a s e d2 7 ，2 a n d2 0 6 r e s p e c t i v e l y ) w es p e c u l a t et h ec h a n g e so fg a b a c o n t e n ti si n v o l v e di nt h er e s i s t a n c et oa b a m e c t i n a n dh i g ht e m p e r a t u r ei nzc i n n a b a r i n u s 3 ac o m p a r a t i v es t u d yo nc r a w l i n gs p e e do fzc i n n a b a r i n u sw i t l lt h eh i g ha n dn o r m a lg a b a c o n t e n tw a sc a r r i e do nt ov e r i f yt h ei n h i b i t o r yf u n c t i o no fg a b a w ef o u n dt h a tt h ec r a w l i n gs p e e d s i l l 西南大学硕士学位论文 o fa r 、s s - aa n ds s - a f lw e r es i g n i f i c a n t l ys l o w e rt h a nt h a to fs s ( a b o u t6 2 3 ，7 0 8 a n d7 6 4 o ft h es p e e do fs s , r e s p e c t i v e l y ) t h es i g n i f i c a n t l ys l o w e rs p e e dw a sa l s oo b s e r v e di nt h es s8h o u r s l a t e ro fb e i n gt r e a t e dw i t ha b a m e c t i nw h e nc o m p a r e dt h a tw i t hn ot r e a t m e n t ，h o w e v e rt h es p e e di n a b rs t r a i nd i dn o tc h a n g es i g n i f i c a n t l ya f t e rb e i n gt r e a t e dw i t ha b a m e c t i n t h e r ew a sn o s i g n i f i c a n c ed i f f e r e n c eb e t w e e nt h es p e e d so fs sa n dh rs t r a i n s ，w h e r e a st h e i rm o v e m e n ts l o w e d d o w no b v i o u s l ya f t e rb e i n gt r e a t e dw i t hh i g ht e m p e r a t u r e ( 4 0 ) 4 w ec l o n e dan o v e lm e m b e ro ft h ei n v e r t e b r a t eg a b a - g a t e dc h l o r i d ec h a n n e lg e n ef a m i l y f r o mzc i n n a b a r i n u s ，t h r o u g hr a p i da m p l i f i c a t i o no fe d n ae n d s ( r a c e ) a n dp o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o nu s i n gp r i m e r sb a s e do nt h e5 a n d3 e n d so ft h em r n a ( g e n b a n ke u 36 211 1n a m e da s r d f t h ec o m p l e t ea m i n oa c i ds e q u e n c eo fr d l r cd e d u c e df r o mt h ee d n ai s17 30r e s i d u e sw i t h t h ep u t a t i v es i g n a lp e p t i d ec o n s i s t e do f 21r e s i d u e sw i t hat h e o r e t i c a lm o l e c u l a rw e i g h t41 1k d aa n d a ni s o e l e c t r i cp o i n t ( p i ) o f9 2 5 ，t h e5 a n d3 u n t r a n s l a t e dr e g i o n sc o t r ) c o n s i s to f2 8a n d5 5 5b p ， a n dt h e r ei sa16b pp o l yat a i li n3 u n t r a n s l a t e dr e g i o n t h ep r e d i c t e dg a b ar e c e p t o rp r o t e i n s h a r e d7 2a n d7 1 i d e n t i t yw i t ho t h e rg a b ar e c e p t o r sp r o t e i n si s o l a t e df r o mt e 驴a n y c h u su r t i c a e a n dd r o s o p h i l a m e l a n o g a s t e r , a ta m i n oa c i dl e v e l ，r e s p e c t i v e l y a n a l y s i so ft h ea m i n oa c i ds e q u e n c e o fr d l r ei n d i c a t e di tc o n t a i n sap u t a t i v ep o l y d e n y l a t i o ns i g n a la a t a a a ，h i g h l yc o n s e r v e d d i c y s t e i n e l o o p ( c y s - l o o p ) a n df o u rt r a n s m e m b r a n ed o m a i n s ( t m l ，t m 2 ，t m 3 ，a n dt m 4 ) o n l i n e s o f t w a r e ( h t t p ：w w w c b s d t u d k s e r v i c e s n e t n g l y c ，h t t p ：w w w c b s d t u d l d s e r v i c e s n e t p h o s ) w a s u s e dt o a n a l y s i s t h en - g l y c o s y l a t i o ns i t e sa n dp h o s p h o r y l a t i o ns i t e s t h eh i g h l yc o n s e r v e d n g l y c o s y l a t i o ns t i e s ( n 9 2a n dn 1 3 3i nr d l r 。) a n dh i g h l yc o n s e r v e dp h o s p h r y l a t i o ns i t e s ( 18 7 y ， 3 41s ，3 4 6 ya n d3 6 2 yi nr d f ) a r ea l lo c c u r r e di no t h e ri n s e c ta n dm i t es p e c i e s ，w h i l e n - g l y c o s y l a t i o ns t i e s ( 6 0 ni nr d l r 。) a n dp h o s p h r y l a t i o ns i t e s ( 4 8 sa n d3 3 9 si nr d l r 。) a r em a i n l y c o n f i n e di nm i t e s ，w h i c hs u g g e s t i n gt h e s em o t i f sa r es p e c i e s - s p e c i f i c t h ep h y l o g e n e t i ct r e es h o w s t h a ta c a i l l si sw e l ls e p a r a t e df r o mi n s e c t a m o n ga c a r u s ，t h et e t r a n y c h i d a ea n di x o d i d a ea r ew e l t s e p a r a t e d a m o n gi n s e c t ，d i p t e r a ，h y m e n o p t e r a ，h o m o p t e r aa n dl e p i d o p t e r aa r ew e l ls e p a r a t e d f r o me a c ho t h e r , b u tu n d e ro r d e rl e v e l ，f a m i l yc a n tb ew e l ls e p a r a t e d ，s u c h 雒1 1 v i r e s c e n s ，b ，m o r i ， p x y l o s t e l l a ，a n ds e x i g u ai nl e p i d o p t e r a ，t h e r e f o r e ，o u rr e s u l t ss u g g e s t e dt h a tt h es e q u e n c e so f g a b a ra g ew e l ls e p a r a t e do no r d e rl e v e la n dm i g h tb eu s e dt oc o n s t r u c tp h y l o g e n e t i ct r e eo nt h i s l e v e l w ea l s oc o m p a r e dm ec d n as e q u e n c e so ft h e 尺胡7 。b e t w e e ns sa n da b rs t r a i no fz c i n n a b a r i n u sa n df o u n dt h a tt h e r ew a sn om u t a t i i n 月。i l la b a m e c t i n r e s i s t a n ts t r a i ns e l e t e di n l a b o r a t o r y 5 t h em r n a e x p r e s s i o nl e v e l0 f 尺刃nw a sd e t e c t e db yt h em e t h o do fs y b rg r e e nid y e b a s e d t e c h n o l o g yw i t ht h e1 3 - a c d na sr e f e r e n c eg e n e t h ee x p r e s s i o nl e v e lo ft h eg a b ar e c e p t o rg e n ei n i v a b s t r a c t a b rs t r a i nw a ss i g n i f i c a n tl o w e rt h a nt h a ti nt h es ss t r a i n t h es i g n i f i c a n tl o w e re x p r e s s i o nl e v e l w a so b s e r v e di ns ss t r a i n8h o u r sl a t e ra f t e rb e i n gt r e a t e dw i t ha b a m e c t i nw h e nc o m p a r e dt h a tw i t h n ot r e a t m e n t ，w h e r e a st h ee x p r e s s i o nl e v e li na b rs t r a i nd i dn o tc h a n g es i g n i f i c a n t l ya f t e rb e i n g t r e a t e dw i t ha b a m e e t i n t h ee x p r e s s i o nl e v e lo f t h eg a b a ri nh rw a ss i g n i f i c a n tl o w e rt h a nt h a ti n s s t h es i g n i f i c a n tl o w e re x p r e s s i o nl e v e lw a sa l s oo b s e r v e di ns sa f t e rh e a ts h o c k ，h o w e v e rt h e r e w a sa l m o s tn oc h a n g ea f t e rb e i n gt r e a t e dw i t hh i g ht e m p e r a t u r ei nh r t h el o we x p r e s s i o nl e v e lo f g a b a r e c e p t o ri si n v o l v e di nt h er e s i n s t a n c et oa b a m e c t i na n dh i g ht e m p e r a t u r ei nzc i n n a b a r i n u s k e yw o r d s ：t e t r a n y c h u sc i n n a b a r i n u s , a b a m e c t i n ，h i g h t e m p e r a t u r e ，g a b 丸 g a b a r e c e p t o r v 独创性声明 学位论文题目匦维菌塞塑直渔丛迫盘塞壁吐蝤i 二氢基工堕 区基矍签盔达鲍受煎 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 标注。 学位论文作者： 蔷i 彳 i辨嘲：1 引肌日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生部可以将学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名：予i 签字日期：砂7 刈日 导师签名：啾 签字日期：2 形7 年莎月 文献综述 文献综述 l 朱砂叶螨的研究现状 朱砂叶螨( t e t r a n y c h u s c i n n a b a r i n u s ) ( b o i s d u v a l ) 属蛛形纲( a r a c h n i d a ) ，蜱螨亚纲( a c a r i ) ， 螨目( a c a r i f o r m e s ) ，叶螨科( t e t r a n y c h i d a e ) 。别名：棉红蜘蛛、棉叶螨、红叶螨，在全国各 地都有分布，主要分布于东北、华北、长江流域地区，是棉花、蔬菜、林木、经济植物和许 多观赏植物上的重要害螨。螨类繁殖能力强，有很高的产卵力，而且世代周期短，在短时间 里能够迅速形成一定数量的种群，对植物造成不可忽视的危害，严重时甚至会使叶子完全萎 蔫，脱落，造成巨大的经济损失。 朱砂叶螨主要营两性生殖，也能进行孤雌生殖。卵多产于叶背叶脉两侧。每头雌螨平均产 卵期1 4 天，平均寿命为3 0 天，越冬时可活5 7 个月。高温干燥利于其发生。发育的最适温度 为2 5 3l ，最适相对湿度为3 5 5 5 。1 年发生2 0 代左右。其危害方式是在叶背面以刺吸 式口器吸食汁液，并结成丝网，受害叶片褪绿，出现白色小点，然后叶片干枯，一般先危害 下部叶片，继而自下而上蔓延。 1 1 防池i 口池i i = l 理 目前在害螨防治上主要集中在以下几方面： 化学防治是目前有效控制朱砂叶螨重要措施之一。普通的合成杀虫剂对其防治效果差， 生产上常用的是专用合成杀螨剂( 何林等，2 0 0 3 ；张永强等，2 0 0 8 ) 。合成杀螨剂在防治害螨 中暴露出两点不足：一是对环境不利；二是害螨本身容易产生抗药性。研究植物源农药来替 代与减少合成化学农药的使用是克服上述不足的重要努力措施之一。生物源农药在替代和减 少化学合成农药的使用方面显示了巨大的潜力，国内也进行了大量的研究。己有试验表明， 姜黄( k o c h i as c o p a r i a ) ( 张永强等，2 0 0 4 ) 、地肤( c u r c u n ml o n g a ) ( 侯辉等，2 0 0 4 ) 和青篙 ( s y r i n g av u l g a n s ) ( 周宇杰等，2 0 0 6 ) 等的活性成分对该螨有较好的防效，有的甚至具有杀 卵活性；川黄柏( p h y l l o d e n d r o n ) ，狼毒( s t e l l e r ac h a m a e j a s m e ) 、骆驼蓬( p e g a n u mh a r m a l al ) 、 臭椿( a i l a n t h u sa l t i s s m a ) 和当归( a n g e l i c a s i n e n s i s ) 的抽提物对该螨也有一定的防治活性( 顾 雅静等，2 0 0 7 ：周刚等，2 0 0 7 ) ；一些植物油对该螨还具有良好的熏杀毒力，部分混用还有增 效作用( 方才君等，2 0 0 7 ) 。 尽管化学合成农药的施用带来了一系列的问题，如抗药性的产生、环境污染等，但是由 于其施用方便、见效快等优点，化学防治仍然是目前害虫( 螨) 防治的主要措施。由于螨类 危害的日益加重，生产上出现了大量的专用杀螨剂，如三氯杀螨醇、哒螨灭、杀螨可达、克 螨特、霸螨灵等，还有一些杀虫杀螨剂，如乐果、甲氰菊酯等。针对不同药剂对朱砂叶螨进 行的药效试验结果表明，7 3 炔螨特、爱比菌素和新药1 0 哒螨灵烟剂对朱砂叶螨具有较好防 效( 吴福安等，2 0 0 6 ；武予清等，1 9 9 7 ；刘敏艳等，2 0 0 6 ) ，1 0 甲氰菊酯和阿维乳油复配具 1 两南大学硕十学位论文 有显著的增效作用( 张伟等，2 0 0 4 ) 。王新祥等( 2 0 0 4 ) 研究了溴甲烷配合二氧化碳对朱砂叶 螨的熏蒸作用，结果表明，在一定浓度范围内，二氧化碳对溴甲烷熏蒸处理朱砂叶螨的效果 有增效作用；但是，在熏蒸时间短于l h 或者二氧化碳浓度大于3 0 时，反而使溴甲烷的熏蒸 效果下降。 在生物防治方面，最活跃的领域为捕食螨天敌的应用。天敌是控制朱砂叶螨自然种群演 变的关键因子之一，而且天敌种类丰富( 忻介六，1 9 8 8 ；黄尔田等，1 9 8 9 ) 。常见的有捕食l 生 螨、细菌和真菌等( v a nd e rg e e s te ta 1 2 0 0 0 ；施卫兵等，2 0 0 3 ) ，其中以捕食螨中的智利捕植 螨( p h y t o s e i u l u sp e r s i m i l i s ) ，也称智利小钝绥螨的作用最为明显。该螨捕食量大，行动迅速， 年发生多代，全虫期皆能捕食各龄期之叶螨，尤喜捕食卵，每天平均可捕食叶螨1 8 头，一生 可捕食叶螨卵2 0 0 - 3 0 0 粒，可以迅速控制害螨种群( 江西大学，1 9 8 4 ；忻介六，1 9 8 8 ；b a k e re t a 1 ，1 9 9 4 ) 。全世界己发现植绥螨1 0 0 0 多种( 李隆术等，1 9 8 8 ；匡海源，1 9 8 6 ) ，我国有1 0 0 多种( 李隆术等，1 9 8 8 ) 。我国科研工作者对捕食螨和害螨的关系研究主要有2 个方向：( 1 ) 朱砂叶螨利他素对捕食螨的定位反应( 董慧琴等，1 9 9 5 ；杨琰云等，1 9 9 5 ) ；( 2 ) 捕食螨对朱 砂叶螨的捕食作用( 吴千红等，1 9 8 8 ；秦素研等，2 0 0 6 ) 。此外，瓢虫、南方小花蝽和蜘蛛也 是农田控制叶螨种群增长的重要因子。如拟小食螨瓢虫和草间小黑蛛等对朱砂时螨均有较好 的捕食效果( 程立生等，1 9 8 9 ；何洪俊等，1 9 9 1 ) 。微生物中，白僵菌、绿僵菌和b t 己经为大 家所熟知，但专门针对朱砂叶螨的报道较少。利用细菌和真菌加工为商品制剂将有很好的发 展前景( v a nd e rg e e s te ta 1 ，2 0 0 0 ；t i a ne ta 2 0 0 6 ) 。 巴秀成等( 2 0 0 7 ) 研究了利用冀林牌无公害粘虫胶防治冬枣红蜘蛛的效果。在2 0 0 4 年抽 样调查中发现，3 0 株涂胶树上最多发现4 头红蜘蛛，而胶环上粘住1 30 0 0 余头；不涂胶对照 中，正常管理( 喷杀螨剂4 次) 与粗放管理( 喷杀螨剂2 次) 树上红蜘蛛均很多，最多达到 2 9 9 2 头。他们认为，该胶无毒、无腐蚀、无刺激气味、抗氧化、抗风吹日晒、耐雨淋、无污 染，质量稳定，粘力强而持久，值得大面积推广。 农业防治是基础的和较为经济的防治手段，合理深耕和灌溉即可杀死大量螨源。另外， 合理的耕作制度也是非常重要的。生产实践表明，丝瓜和茄子间作，可使茄子免遭红蜘蛛的 危害( 刘波等，2 0 0 7 ) 。真正能有效控制朱砂叶螨的可持续策略，是结合作物品种选育和栽培 等农业措施等在内的综合防治措施( b a k e re ta 1 ，2 0 0 0 ；陶士强等，2 0 0 5 a ；陶士强等，2 0 0 5 b ： 田立道等，1 9 9 5 ) 。 1 2 日益突出的抗性问题 世界卫生组织( w h o ) 1 9 5 7 年对昆虫抗药性下的定义是：“昆虫具有忍受杀死正常种群 大多数个体的药量的能力在其种群中发展起来的现象”。害螨是多种粮食作物、经济作物及储 藏物上危害较为严重的一类有害生物。螨类因其繁殖力强，世代周期短，活动范围小，近亲 交配率高，受药机会多，其抗药性问题甚至比其他农作物害虫更见突出。全世界5 0 4 种抗药 2 文献综述 性虫、螨中，蜱螨目的种类占1 4 ( t h o m a sv a nl e e u w e n , 2 0 0 7 ) ，超过4 0 个国家报道温室或 田间的二斑叶螨对有机磷农药产生了抗性( t s a g k a r a k o ue ta 1 ，2 0 0 2 ；a n a z a w ae ta 1 ，2 0 0 3 ) 。 自1 9 0 8 年m e l a n d e r 首次发现美国的梨园蚧( d i a s p i d i v t u s p e r n i c i v s u s ) 对石硫合剂产生抗 性以来，害虫抗药性的研究已有近1 0 0 年的历史。叶螨的抗药性最早见于1 9 4 9 年美国纽约州 棉田使用对硫磷防治棉叶螨失效的事例( 吴孔明，1 9 9 0 ) ，此后又发现对内吸磷等药剂产生抗 性。据d e n n e h y 等( 1 9 8 7 ；1 9 8 4 ) 和k c c n a ( 1 9 9 7 ) 研究报道，美国加州棉叶螨已对三氯杀螨 醇、克螨特、环己锡等农药产生抗性。在国内，六十年代初发现湖北荆州棉区朱砂叶螨对有 机磷农药产生抗性，对内吸磷的抗性高达6 0 倍。吴孔明等( 1 9 9 0 ) 研究发现在河南省1 2 个 棉区，朱砂叶螨己形成对硫磷高抗品系，抗性倍数达4 6 6 8 倍，以及彭丽年等( 2 0 0 1 ) 发现四 川地区棉花上的朱砂叶螨对甲氰菊酯、敌敌畏、氧化乐果和三氯杀螨醇产生了中等水平的抗 性，对克螨蚧的抗性呈上升趋势。棉叶螨、山楂叶螨和朱砂叶螨对有机磷、有机氯、有机氮 类的多种农药已达到中抗至极高抗水平( 郭凤英等，1 9 9 9 ；吴孔明等，1 9 9 4 a ，1 9 9 4 b ；何林等， 2 0 0 3 ) 。 1 3 阿维菌素抗性害虫、害螨适合度研究 大多数抗药性昆虫与敏感性昆虫相比都具有较低的生态适合度。但在害虫及害螨对阿维 菌素抗药性研究中却发现，害虫、害螨对阿维菌素产生抗药性后，并不总是表现适合度劣势。 李腾武等的研究表明，小菜蛾阿维菌素抗性品系相对于s s 品系有0 8 4 的适合度，存在一定适合 度劣势( 李腾武等，2 0 0 0 ) 。但吴青君等( 2 0 0 0 ) 报道，阿维菌素汰选的小菜蛾抗性种群与相 对敏感种群相比不表现繁殖不利性，阿维菌素抗性种群的交配率，有效产卵数和孵化率均显 著大于敏感种群，阿维菌素抗性种群的内禀增长率为0 1 3 9 ，是敏感种群的1 1 9 倍，相对适合 度为敏感种群的1 4 9 倍。室内汰选的抗阿维菌素拉美斑潜蝇品系与相对s s 品系相比也不存在适 合度上的缺陷( 黄华章等，1 9 9 8 ) 。 有关害螨对阿维菌素抗性的研究也有类似的结果。何林等在抗性选育的基础上组建了朱 砂