（材料物理与化学专业论文）蛋白质、核酸新型荧光探针的应用基础研究.pdf

ad i s s e r t a t i o ns u b m i t t e dt os o u t hc h i n au n i v e r s i t yo ft e c h n o l o g yf o r c o l l e g eo fm a t e r i a ls c i e n c ea n de n g i n e e r i n g s t u d y o na p p l i c a t i o nf o u n d a t i o no fn e wf l u o r e s c e n t p r o b e st op r o t e i na n dn u c l e i ca c i d 一 一l- p h d c a n d i d a t e ：y uy i n g m a j o r ：m a t e r i a l sp h y s i c sa n dc h e m i s t r y d a t eo f o r a le x a m i n a t i o n ：n o v3 0 ，2 0 0 5 d a t eo fs u b m i s s i o n ：s e p t e m b e r2 0 0 5 s o u t h c h i n a u n i v e r s i t yo ft e c h n o l o g y g u a n g z h o u 5 1 0 0 0 6 ，g u a n g d o n g ，e r c h i n a n o v e r b e r2 0 0 5 华南理工大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研 究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文 不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研 究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：俞冢 日期：2 0 0 5 年1 1 月2 3 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权华南理工大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密曰，在j l 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密口。 ( 请在以上相应方框内打“4 ”) 作者签名：赁张 翩硌孵 日期：2 0 0 5 年1 1 月2 3 日 日期：2 0 0 5 年1 1 月2 5 日 摘要 摘要 蛋白质具有各种重要的生理功能，核酸则决定着遗传信息的传递， 对它们进行深入的研究很有必要，探针试剂正是研究生物大分子的有力 工具之一。由于生物体系的多样性和复杂性，决定了对它进行分析及表 征的探针也应是一个丰富多彩的世界，不同的探针有不同的特点和功能， 适合于不同生物体系的分析和表征。利用适当的探针与蛋白质、核酸进 行各种选择性反应，可以对蛋白质、核酸等进行定量检测和结构识别， 从而对于了解蛋白质、核酸的结构和功能均有重要的理论意义和应用价 值。 本论文研究了五个迄今未见文献报导的新荧光探针体系。五个探针 中三个为有机小分子型探针，二个为纳米晶探针。本研究一方面拓宽了 已有金属离子光学试剂的功能、探讨了药物与蛋白质、核酸的相互作用 模式，另一方面合成了新型单核、核壳型纳米晶发光探针，对其与蛋白 质相互作用作了一些基础性研究。 将传统的金属离子光学试剂铝试剂作为核酸探针进行了研究。研究 发现与通常的核酸探针在溶液中带正电荷不同，溶液中带负电荷的核酸 能使带部分负电荷的铝试剂的荧光强度增强。对影响核酸一一铝试剂探 针体系荧光强度的一些因素进行了详细的实验，通过荧光光谱实验，离 子强度实验，表面活性剂实验，探讨了核酸使铝试剂探针的荧光增强产 生的原因，证明d n a 与铝试剂的结合不是通过静电引力结合，可能是通 过体系伺的兀一兀相互作用及疏水作用力结合的。不同种类的核酸对铝试剂 探针荧光增强的灵敏度由大到小的顺序依次为：d n a 小牛胸腺d n a 酵母 r n a 鱼精子d n a 。利用铝试剂探针荧光强度的增加与核酸的加入量成正比 关系，建立了用铝试剂探针定量测定核酸的新方法并应用于实际样品的 分析，结果符合分析方法的要求。该分析方法的优点是有较大的斯托克 位移和安全无毒，检测限低，线性范围宽。进一步挖掘和拓展已有试剂 的功能。 本文首次对核酸猝灭中药葛根素的荧光强度这一现象进行了系统研 究，对影响葛根素探针荧光猝灭的一些因素进行了详细的实验，利用荧 光光谱实验，k 。 f e ( c n ) 。 荧光猝灭实验，粘度实验等证明d n a 与葛根素 探针的结合是非共价结合方式中的非插入结合形式，两者之间的结合较 弱。不同种类的核酸对葛根素荧光猝灭的灵敏度由大到小的顺序依次为： 华南理工大学博士学位论文 变性d n a 酵母r n a 鱼精子d n a 小牛胸腺d n a 。建立了定量测定核酸的新 方法并应用于实际样品的分析。该分析方法的优点是检测的线性范围宽 和斯托克位移大，实验方法简单易行，葛根素探针安全无毒等。药物探 针与生物大分子的相互作用的研究对指导科学用药和药理研究有一定的 意义。 对牛血清白蛋白能猝灭药物甘草酸单铵盐的荧光强度这一现象进行 了研究。对影响体系荧光猝灭的一些因素进行了详细的实验，证明了甘 草酸单铵盐探针对牛血清白蛋白的荧光猝灭是静态猝灭，是由于两者之 间通过静电作用力生成了不发荧光的超分子复合物。通过实验求得超分 子复合物间的形成常数k 为5 6x 105 ( l m o l ，2 5 ) ，表明两者之间有较 强的结合力，药物探针在生物体内能被蛋白质所储存、转运。采用同步 荧光技术研究了甘草酸单铵盐对牛血清白蛋白构象的影响，证明了甘草 酸单铵盐优先和牛血清白蛋白中的色氨酸结合，但不影响色氨酸微区的 构象，随着甘草酸单铵盐浓度的增大，甘草酸单铵盐才开始结合到牛血 清白蛋白中的酪氨酸微区，并引起该微区构象的改变。定量研究了金属 离子对超分子间形成常数的影响，金属离子的存在使形成常数降低了大 约5 5 0 ，从而使药物与蛋白质的结合减弱，其结果是缩短了药物在血 浆中储留时间，有利于药物的释放，为甘草酸单铵盐的药效学和药物动 力学提供理论基础。依据f o r s t e r 非辐射能量转移机制，确定了甘草酸单 铵盐与牛血清白蛋白第212 位色氨酸之间的结合距离为1 9n m 。 本文在水相中合成了“一巯基烷酸包覆的水溶性c d s e 纳米晶探针， 透射电镜图显示该纳米晶为近似球形颗粒，粒径约为6 n m 。考察了c d s e 纳米晶探针的紫外光谱和荧光光谱，其荧光发射光谱窄而对称，荧光激发 光谱宽而连续。用3 6 5 n m 的光激发时，c d s e 纳米晶探针的最大荧光峰位 于5 5 0 r i m 处。考察了c d s e 纳米晶的荧光强度随时间的变化情况，发现荧 光强度在前期随放置时间的增长逐渐增大，后期随放置时间的变化不大。 对溶菌酶使c d s e 纳米晶探针的荧光增强这一现象进行了研究，对影响溶 菌酶一一c d s e 探针体系荧光强度的一些因素进行了详细的实验，利用 c d s e 探针的荧光强度增大与溶菌酶的浓度成正比关系，建立了一种非传 统的荧光检测蛋白质的新方法，并应用于实际样品的分析。该研究丰富和 发展了性能优良的纳米晶发光探针及其简便易行的合成方法。 在水相中合成了以3 一巯基丙酸为修饰剂的水溶性的单核c d s 探针， 核壳c d se2 c d s 纳米晶探针，透射电镜图显示两者均为球形颗粒，粒径分 别约为5 n m ，4n m 。用3 6 5 n m 的光激发时，c d s 纳米晶探针的最大荧光光 谱峰位于5 4 2 n m 处，c d s e 2 c d s 纳米晶探针的最大荧光峰位于6 4 0 r i m 处。 华南理工大学博士学位论文 s t u d yo na p p l i c a t i o nf o u n d a t i o no fn e wf l u o r e s c e n tp r o b e st o p r o t e i na n dn u c l e i ca c i d a b s t r a c t p r o t e i nh a sv a r i o u sk i n d so fi m p o r t a n tp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n sa n dn u c l e i ca c i d c o n t r o l st r a n s f e r r i n go fi n h e r i t a n t i n f o r m a t i o n ，s oi ti sn e c e s s a r yt os t u d yt h e m d e e p l ya n dr e a g e n tp r o b e sa r eg o o dt o o l sw h i c hc a nb eu s e dt os t u d yb i o m o l e c u l e s b e c a u s eo fd i v e r s i t ya n dc o m p l e x i t yo f b i o l o g i c a ls y s t e m ，d i f f e r e n tp r o b e sh a v e d i f f e r e n tc h a r a c t e r i s t i c sw h i c hc a nb es t u d i e di nd i f f e r e n tf i e l d s e l e c t i v er e a c t i o n w h i c hc o u l db eu s e di nq u a n t i t a t i v ea s s a ya n ds t r u c t u r a li d e n t i f yc a no c c u rb e t w e e n s o m ep r o b e sa n db i o m o l e c u l e s ，a n da l lt h e s ea r ev e r yi m p o r t a n tf o ru st ok n o wt h e i r s t r u c t u r ea n df u n c t i o n sw e l l f i v ed i f f e r e n tt y p e so fn e wf l u o r e s c e n tp r o b e sh a v eb e e ns t u d i e di nt h i sp a p e r o n eh a n dw ee n l a r g e dt h ef u n c t i o n so fm e t a li o n so p t i c sr e a g e n t sa n dd i s c u s s e dt h e i n t e r a c t i o np a t t e r n sb e t w e e nm e d i c a m e n t sa n dp r o t e i no rn u c l e i ca c i d ；o nt h eo t h e r h a n d ，w es y n t h e s i z e dan e wt y p eo ff l u o r e s c e n tp r o b eq u a n t u md o t ，a n dc o n d u c t e da l i t t l eb a s i cr e s e a r c h a u r i n t r i c a r b o x y l i ca c i d ( a t a ) w a sp r o p o s e da sp r o b eo fn u c l e i ca c i dt os t u d y i t sf u n c t i o n t h er e s u l t sr e v e a l e dn u c l e i ca c i dc o u l de n h a n c et h ef l u o r e s c e n c e i n t e n s i t yo fa t a s o m ei n f l u e n c ef a c t o r so nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yh a v eb e e nt e s t e d t h r o u g ht h ef l u o r e s c e n t ，i o n i cs t r e n g t ha n ds u r f a c t a n t se x p e r i m e n t s ，t h er e a s o n m i g h tb et h e 一i n t e r a c t i o na n dt h eh y d r o p h o b i cf o r c eb e t w e e nd n aa n da t a ， b u tn o tt h ee l e c t r o s t a t i ca t t r a c t i o n t h es e q u e n c eo ft h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e d s e n s i t i v i t yo fd i f f e r e n tk i n d so fn u c l e i ca c i dt oa t ai s ：d e n a t u r e dd n a c a l f t h y m u sd n a y e a s tr n a f i s hs p e r md n a t h ei n c r e a s eo ft h ef l u o r e s c e n c e i n t e n s i t yi sl i n e a rr e l a t i o n s h i pw i t ha m o u n to fn u c l e i ca c i d ，s on u c l e i ca c i dc a nb e d e t e c t e dq u a n t i t i v e l ya n dt h en a t u r a ls a m p l e sc a nb ea s s a y e ds a t i s f a c t o r i l yb yt h i s n e wm e t h o d t h em e r i t so f t h i sa n a l y t i c a lm e t h o da r e i n n o e u i t y ，s a f e t ya n dl a r g e s t r o k es h i f t ，s h o r ti n o c u l a t et i m ea n db r o a dl i n e a rr a n g e t h ei n t e r a c t i o np a t t e r nb e t w e e nm e d i c a m e n ta n db i o m o l e c u l a ri st h ef o u n d a t i o n o f p h a r m a c o l o g i c a l r e s e a r c h t h i s p a p e r f i r s t r e p o r t s t h ep h e n o m e n o na b o u t f l u o r e s c e n ti n t e n s i t yo fn u c l e i ca c i dq u e n c h i n gh e r b a lm e d i c i n ep u e r a r i n s o m e i n f l u e n c ef a c t o r so nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yh a v eb e e nt e s t e d t h r o u g hm a n yk i n d so f e x p e r i m e n t s ，i n c l u d i n gf l u o r e s c e n ts p e c t r a ，k 4 f e ( c n ) 6 】q u e n c h i n g ，v i s c o s i t yo f d n a ，t h ew e a kc o m b i n a t i o no fd n aa n dp u e r a r i nw a sp r o v e dt ob en o n i n t e r c a l a t i o n 摘要 m o d e l t h es e q u e n c eo ft h ef l u o r e s c e n c eq u e n c h i n gs e n s i t i v i t yo fd i f f e r e n tk i n d so f n u c l e i ca c i dt op u e r a r i ni s ：d e n a t u r e dd n a y e a s tr n a f i s hs p e r mdna c a l ft h y m u sd n a n u c l e i ca c i dc a nb ed e t e c t e dq u a n t i t i c a t i o n a l s a m p l e sc a nb ea s s a y e ds a t i s f a c t o r i l yb yt h i sn e wm e t h o d t h e l y a d a n dt h en a t u r a l v a n t a g e so ft h i s a n a l y t i c a lm e t h o da r es i m p l e ，i n n o c u i t ya n ds t r o k es h i f ta n db r o a dl i n e a rr a n g e t h ep h e n o m e n o na b o u tf l u o r e s c e n ti n t e n s i t yo fb o v i n es e r u ma l b u m i n ( b s a ) q u e n c h i n gh e r b a lg l y c y ”h i z i n i ca m m o n i a t e dh a sb e e ns t u d i e d t h r o u g he x p e r i m e n t s ， t h ef l u o r e s c e n tq u e n c h i n go fg l y c y ”h i z i n i ca m m o n i a t e db yb s aw a sp r o v e dt ob e s t a t i cq u e n c h i n g t h e ya r ec o m b i n e dt os u p r a m o l e c u l a rc o m p o u n db ye l e c t r o s t a t i c f o r c ea n dt h e i rf o r m a t i o nc o n s t a n t ( k ) w a s5 6 1 0 5 ( l t o o l ，2 5 ) i ti n d i c a t e dt h e r e w a sar e l a t i v es t r o n gf o r m a t i o nf o r eb e t w e e nt h e m ，s ot h em e d i c a m e n tp r o b e si nv i v o c a nb es t o r e do rt r a n s f e r r e d t h ei n f l u e n c eo fg l y c y r r h i z i n i ca m m o n i a t e dt ot h e c o n f o r m a t i o no fb s ah a sb e e nd i s c u s s e db ys y n c h r o n o u sf l u o r i m e t r y t h er e s u l t s h o w e dt h a tt h eg l y c y r r h i z i n i ca m m o n i a t e dc o m b i n e dw i t ht h et r y p t o p h a ni nb s a f i r s ta n du n c h a n g e dt h et h ec o n f o r m a t i o no fb s a ，t h e nt h et y r o s i n em i c r o z o n e c h a n g e d t h ec o n f o r m a t i o no fb s aa st h e i n c r e a s i n g o fc o n c e n t r a t i o no f g l y c y r r h i z i n i ca m m o n i a t e d t h ef o r m a t i o nc o n s t a n to fm e t a li o n st os u p r a m o l e c u l e s h a sa l s ob e e ns t u d i e d t h em e t a li o n sc a nr e d u c e5 5 0 o ff o r m a t i o nc o n s t a n t 。 a n dw e a k e nt h e i rc o m b i n e df o r c e a l lt h e s ew o u l ds h o r t e nt h ed e p o s i t e dt i m eo f m e d i c a m e n ti np l a s m a ，b ei nf a v o ro ft h er e l e a s eo fm e d i c a m e n t s ，a n da l s oo f f e r t h e o r yf o u n d a t i o no np h a r m a c o d y n a m i c so fg l y c y r f h i z i n i ca m m o n i a t e d a c c o r d i n gt o f o r s t e rn o n r a d i a n te n e r g yt r a n s f e rm e c h a n i s m ，t h ec o m b i n e dd i s t a n c ei s 1 9u m b e t w e e ng l y c y r r h i z i n i ca m m o n i a t e da n d2 1 2 他t r y p t o p h a ni nb s a i no r d e rt og a i nm o r eo u t s t a n d i n gq u a n t u md o t sa sf l u o r e s c e n tp r o b e sa n ds t u d y s i m p l es y n t h e t i cm e t h o d ，w es y n t h e s i z e dw a t e r - s o l u b l ec d s en a n o c r y t a l sm o d i f i e d w i t h 1 1 一m e r c a j p t o u n d e c a n o i c a c i d t h er e s u l t so ft r a n s m i s s i o ne l e c t r o n i c m i c r o s c o p e ( t e m ) s h o wt h a t t h ep r o d u c ti sc l o s et os p h e r e ，u n i f o r mi nd i a m e t e r w h i c hi sa b o u t6n m t h ef l u o r e s c e n c es p e c t r u m ，u l t r a v i o l e ts p e c t r u ms h o wt h a tt h e y h a v eab r o a da b s o r p t i o nc h a r a c t e r i s t i c t h ee m i s s i o nh a san a r r o ws y m m e t r i c a l s p e c t r a lw i d t h t h em a x i u mf l u o r e s c e n c ep e a ko fc d s eq d si s a t5 5 0n mw i t h e x c i t a t i o na t3 6 5n m e f f e c t so ft i m eo nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fc d s eq d sh a v e b e e ns t u d i e d i te n h a n c e dg r a d u a l l yf i r s t ，t h e nc h a n g e dal i t t l e s o m ei n f l u e n c e f a c t o r so nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yh a v eb e e nt e s t e d 。t h ea p p l i c a b i l i t yo ft h e s eq d st o t h ed e t e r m i n a t i o no fl y s o z y m ei ss t u d i e ds u c c e s s f u l l y u n d e ro p t i m a lc o n d i t i o n s ， l i n e a rr e l a t i o n s h i pi sf o u n db e t w e e nt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t ya n dt h ec o n c e n t r a t i o n v 华南理工大学博+ 学位论文 o fl y s o z y m e t h i sn e wn o n t r a d i t i o n a lm e t h o dc a na l s o a s s a yt h en a t u r a ls a m p l e s s u c c e s s f u l l y c d sa n dc d s e z c d sc o r e s h e l lq d sh a v eb e e ns y n t h e s i z e di n a q u e o u ss o l u t i o n b yu s i n gm e r c a p t o p r o p i o n i ca c i d ( m p a ) a ss t a b i l i z e r t h e yb o t ha r es p h e r ep a r t i c l e s a n dd i a m e t e ri s4n m ，5n m ，r e s p e c t i v e l y t h em a x i u mf l u o r e s c e n c ep e a k so ft h e s e q d sa r ea t5 4 2n ma n d 6 4 0n mr e s p e c t i v e l yw i t he x c i t a t i o n a t3 6 5n m t h e f l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fc d s e 2 c d sq d si ss t r o n g e rt h a nc d s ，a n dm o r es t a b l et h a n c d s ；s oc d s e 2 c d sq d sw a sc h o s e nt od e t e r m i n el y s o z y m ea n da s s a yn a t u r a l s a m p l e s t h i sm e t h o di ss i m p l e ，f a s ta n ds e l e c t i v e l yg o o d t h er e a s o nt h a t f l u o r e s c e n c ei n t e n s i t ye n h a n c e sw h i l ea d d i n gl y s o z y m et oq d ss y s t e mm a yb et h a t t h eq d sa r ec a p p e db yl y s o z y m e ，w h i c hr e d u c e st h e i rn o n r a d i a n t i na d d i t i o n ，t h e m e c h a n i s mo ft h eb i n d i n gr e a c t i o ni sa l s oe x p l o r e d i ti sc o n s i d e r e dt h a tt h eb i n d i n g r e a c t i o ni sm a i n l yd u et oe l e c t r o s t a t i cf o r c e p e o p l ec a nc h o o s ea p p r o p r i a t ef l u o r e s c e n tp r o b e sb e c a u s em a n yk i n d so fp r o b e s h a v eb e e nf o u n da n ds t u d i e d a st h er e s e a r c hg o e sb y ，l o o k i n gf o rp r o b e sw i t hh i g h e r s e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t yi sap o t e n t i a lf i e l d k e y w o r d s ：a u r i n t r i c a r b o x y l i ca c i d ；p u e r a r i n ；g l y c y r r h i z i n i ca m m o n i a t e d ；c d s e ； c d s e 2 c d s v i 摘要 a b s tr a 第一章 1 1 前 1 2 蛋 1 2 1 1 2 2 1 2 3 1 2 4 1 2 5 1 2 6 1 3 核 1 3 1 1 3 2 1 3 3 1 3 4 1 3 5 1 4 本 1 4 1 1 4 2 参考文 第二章 2 1 引 2 2 实 2 2 1 2 2 2 2 2 3 2 2 4 2 3 结 2 3 1 2 3 2 2 3 3 2 3 4 2 3 5 表面活性剂对铝试剂- d n a 体系荧光强度的影响4 1 不同核酸对铝试剂荧光强度的影响4 2 华南理工大学博士学位论文 2 3 6 其它物质对体系荧光强度的影响4 2 2 3 7 样品测定的结果分析4 4 2 4 本章小结4 6 参考文献4 6 第三章探针葛根素一核酸体系的荧光光谱研究与应用4 9 3 1 引言4 9 3 2 实验部分5 0 3 2 1 仪器和试剂5 0 3 2 2 核酸溶液的配制5 0 3 2 3 热变性核酸溶液的配制51 3 2 4 荧光光谱扫描及荧光强度测定实验51 3 2 5d n a 样品的提取实验5 1 3 3 结果与讨论5 1 3 3 1 葛根素及葛根素一核酸体系的荧光光谱51 3 3 2 缓冲溶液对葛根素一核酸体系荧光强度的影响5 2 3 3 3 葛根素用量对体系荧光强度的影响5 3 3 3 4 核酸对葛根素荧光的猝灭与时间的关系5 4 3 3 5 不同种类及浓度的核酸对葛根素荧光强度的影响5 5 3 3 6 其它物质对体系荧光强度的影响5 5 3 3 7 样品测定的结果分析5 6 3 3 8 核酸对葛根素荧光猝灭的原因分析5 8 3 4 本章小结6 0 参考文献61 第四章探针甘草酸单铵盐与牛血清白蛋白超分子体系的荧光光谱研究 4 1 引言6 4 4 2 实验部分6 4 4 2 1 仪器和试剂6 4 4 2 2 牛血清白蛋白溶液的配制6 4 4 2 3 荧光光谱扫描及荧光强度测定实验6 4 4 2 4 同步荧光光谱扫描实验6 4 4 2 5 紫外一可见光谱扫描实验6 4 4 3 结果与讨论6 6 4 3 1b s a 及甘草酸单铵盐一b s a 体系荧光光谱6 6 4 3 2 影响甘草酸单铵盐一b s a 体系荧光强度的因素6 7 4 3 3 甘草酸单铵盐对b s a 构象的影响6 9 目录 4 3 4 甘草酸单铵盐对b s a 的荧光猝灭方式研究7 0 4 3 5 甘草酸单铵盐一b s a 超分子复合物形成常数的确定72 4 3 6 甘草酸单铵盐一b s a 超分子体系中分子间的相互作用力的确定7 4 4 3 7 常见金属离子对药物与蛋白质结合常数的影响7 6 4 3 8 甘草酸单铵盐与b s a 结合距离的求取7 8 4 4 本章小结8 0 参考文献81 第五章1 1 一巯基烷酸修饰的c d s e 纳米晶探针的合成及其应用研究 5 1 引言8 3 5 2 实验部分8 4 5 2 1 仪器和试剂8 4 5 2 2c d s e 纳米晶探针的制备- 8 5 5 2 3 合成产物的透射电镜观察实验8 6 5 2 4 溶菌酶溶液的配制8 6 5 2 5 荧光光谱扫描及荧光强度测定实验8 6 5 2 6 紫外一可见光谱扫描实验8 6 5 2 7 溶菌酶的提取实验8 6 5 3 结果与讨论8 7 5 3 1 纳米晶的表观形貌8 7 5 3 2c d s e 纳米晶的紫外吸收光谱分析8 7 5 3 3c d s e 和c d s e 一溶菌酶体系的荧光光谱8 8 5 3 4c d s e 纳米晶的荧光强度随时间变化的关系8 9 5 3 5 缓冲溶液对体系荧光强度的影响9 0 5 3 6c d se 纳米晶浓度对体系荧光强度的影响9 2 5 3 7 溶液离子强度对体系荧光强度的影响9 2 5 3 8 试剂加入先后顺序、温度、反应时间对体系荧光强度的影响9 3 5 3 9 其它物质对体系的荧光强度的影响9 4 5 3 10 溶菌酶浓度对体系荧光强度的影响9 6 5 3 1 l 样品测定结果分析9 6 5 4 本章小结9 7 参考文献9 8 第六章3 一巯基丙酸修饰的纳米晶探针的合成及应用研究l0 0 6 1 引言1 0 0 6 2 实验部分1 0 0 6 2 1 仪器和试剂1 0 0 m 华南理工大学博士学位论文 6 2 2c d s 纳米晶探针溶液的制备101 6 2 3c d s e 。c d s 核壳纳米晶探针的制备1 0 1 6 2 4 合成产物的透射电镜观察实验10 2 6 2 5 蛋白质溶液的配制10 2 6 2 6 紫外一可见光谱扫描实验10 2 6 2 7 荧光光谱扫描及荧光强度测定实验10 3 6 2 8 溶菌酶的提取实验1 0 3 6 3 结果与讨论1 0 3 6 3 1 纳米晶的表观形貌1 0 3 6 3 2 纳米晶的吸收光谱分析l0 5 6 3 3 纳米晶和纳米晶一蛋白质体系的荧光光谱10 5 6 3 4 纳米晶荧光强度随时间变化的关系10 7 6 3 5 酸度及缓冲溶液对体系荧光强度的影响10 8 6 3 6 溶液离子强度对体系荧光强度的影响10 9 6 3 7 试剂加入顺序、温度、反应时间对体系荧光强度的影响11o 6 3 8 其它物质对体系荧光强度的影响110 6 3