肿瘤标志物临床实验室检查(详细)PPT课件.ppt

肿瘤标志物的临床实验室检查樊绮诗,1,第一节概述肿瘤标志物的发展概况肿瘤标志物的定义肿瘤标志物的分类肿瘤标志物的应用,2,肿瘤标志物发展概况,1845Bence-Jones本周蛋白1930ZondekHCG1959Markert同工酶1963AbelevAFP1965Gold&FreemanCEA1969Hubner&Todaro癌基因1975Kohler&Milstein单克隆抗体1978Herberman提出肿瘤标志物概念1979英国第7届肿瘤发生TM被确认并应用临床生物学和医学会议1980KoprowskiCA19-91981BastetalCA1251981ColcheretalCA72-41984KufeetalCA15-3.,3,肿瘤标志物的定义,肿瘤标志物是一类存在于组织或体液中，能用化学或免疫方法定量的、能证实癌肿存在（或在某一脏器存在）的、能监测肿瘤治疗和预后的物质。这些物质必须在正常人中不存在或者是在癌肿患者中出现的水平显著高于正常人。,4,肿瘤标志物的分类,细胞肿瘤标志物：位于细胞中的物质或抗原，如激素受体、白血病表型、分子基因等。体液肿瘤标志物：病理情况下，浓度增加时可在血液、尿液或其他体液中测得的物质，如AFP、CA19-9、CEA、CA15-3等。,5,肿瘤表型标志物：酶、胚胎性抗原、异位性蛋白、激素等,出现于癌细胞转化和临床进展阶段。肿瘤基因标志物：基因突变、基因表达异常等，出现于癌前起动阶段。,6,肿瘤标志物的分类,酶类标志物激素类标志物癌胚抗原类标志物糖类抗原标记物癌基因,7,理想的肿瘤标志物的标准,特异性100%灵敏度100%器官特异性与肿瘤大小或分期有关能进行疗效观察与预后有关可靠的预测价值,8,肿瘤标志物的临床应用,正常人群中的筛查有症状者的辅助诊断癌症的临床阶段的分期疾病进程的预后指标评估治疗方案判断癌症是否复发治疗应答的监测,9,普查,一般不适宜对无症状人群进行普查以CEA普查结肠癌为例：,10,肿瘤标志物用于普查的五项原则,应十分清楚该肿瘤的发病率应能检测早期肿瘤该肿瘤的早期治疗比晚期治疗更经济有效测定方法的灵敏度、特异性和重复性良好普查所需费用能被接受,11,定位,TM基本上不能对肿瘤定位极少数TM如PSA，甲状腺球白等具器官特异性，但不是肿瘤特异性。,12,确诊,通常不能进行确诊因为TM无足够的灵敏度，不能排除假阴性结果。但本周蛋白(多发性骨髓瘤）、AFP（肝癌）、-HCG（绒毛膜癌）和降钙素（C-细胞癌）等有助确诊。,13,分期,大多数TM与疾病分期有关，且浓度与肿瘤大小通常存在关联但并不能根据个体测得值来判断肿瘤大小，也不能以TM浓度精确指示各期肿瘤，因为各期肿瘤的TM浓度范围极广，且互相重叠。,14,TM评价治疗有效性方案（Beastall,1991),无效：TM浓度与治疗前相比下降50%有效：TM浓度与治疗前相比下降90%,15,预后,术前TM浓度增加，术后降低，表示这些TM对此肿瘤有预后价值。在病程监测中，TM的浓度增加或降低与疾病的预后密切相关。,16,预测,PPV：阳性时患肿瘤的可能性NPV：阴性时不患肿瘤的可能性PPV和NPV与灵敏度、特异性和患病率有关TM的灵敏度、特异性、PPV、NPV不是固定不变的，而是依赖于选定的临界值。,17,第二节常见的肿瘤标志物及其应用评价,18,正常参考范围的建立参考值：为了评估一个肿瘤标志物的有用性，必须建立参考值，计算期望值评价标志物的分布和决定这些值在疾病处理中的作用。,19,临界值与参考值,对TM而言，以参考值表示基本无意义，应以临界值来表示。TM在实际应用中注重的是最佳临界值，即区分“正常”的分界线。它不同与参考值的运用，因为参考值来自一组对照人群，而临界值是根据金标准确诊为病人和对照两组人群所确定的。,20,正常参考范围的建立正常人群的平均值2SD,0.5,99.5,21,临界值,临界值由三方面决定根据金标准确定病人和对照两组例数相似的人群，并测出各组的实验数据。用该实验数据的不同域值区分阳性和阴性的不同分界点，分别计算灵敏度和特异性。绘制ROC曲线，最接近左上角的点即为最佳临界值，其灵敏度最高，特异性最强。,22,ROC曲线,良好的TM特异性应为95%，并以此值来考虑灵敏度。如果几种TM对某一肿瘤具有大致相当的灵敏度，应选择特异性最高的TM。如果考虑良性疾病TM升高的因素，而特异性保持不变，应将临界值略为提高，即设置边界区（borderlinezone)，如TM在边界区内，应进一步明确诊断。,23,临界值应根据需要确定,选择临界值不能同时提高灵敏度和特异性。将临界值提高，特异性增加但灵敏度降低。将临界值降低，灵敏度提高但特异性下降。,24,一、肿瘤胚胎性抗原标志物许多只应在胚胎期才具有的蛋白质随胎儿出生而逐渐停止合成和分泌，但在肿瘤状态时，机体中一些基因被激活，使机体重新生成和分泌这些胚胎期和胎儿期的蛋白。这些蛋白尽管与肿瘤组织不一定具相关性，但与肿瘤的发生有着内在联系，是一类较常见的肿瘤标志物。,25,（一）癌胚抗原（CEA）CEA于1965年被发现，用人直肠癌组织抽提物免疫动物所获抗血清经正常人直肠组织抽提液吸收。此抗血清能与肿瘤组织反应而不与正常组织反应。由于这种抗原也能在胚胎组织中发现，故称“癌胚抗原”。,26,CEA在正常情况下由胎儿胃肠道上皮、胰和肝细胞合成，分子量为22000，编码CEA的基因位于19号染色体。CEA经胃肠道代谢，肿瘤状态时CEA进入血和淋巴循环，使血清CEA上升。,27,正常群体CEA值：60g/L：结肠癌、直肠癌、胃、肺癌癌肿浸润、转移时CEA明显升高，手术后6周CEA水平可恢复正常。持续升高：预后不良,28,不同来源的体液中检测CEA，可判断不同组织的癌肿。如：胰液、胆汁：胰腺或胆道癌浆液性渗出液：细胞学检查的辅助手段尿液：膀胱癌,29,良性肿瘤时CEA亦可升高：肝硬化（45%）肺气肿（30%）直肠腺癌（5%）良性乳房疾患（15%）溃疡性结肠炎（15%）,30,癌肿时CEA升高：直肠癌70%胰腺癌55%肺癌45%卵巢癌25%胃肠癌50%膀胱癌40%乳腺癌40%,31,临床中的应用不宜作筛查：假阳性和假阴性临床分期：与发展和转移有关治疗评估：监测作用乳腺癌患者：判断是否肺部或骨转移肺癌患者：辅助区分小细胞肺癌,32,（二）甲胎蛋白（AFP）甲胎蛋白是一种肝细胞和生殖细胞（非精原细胞）恶性肿瘤的标志物，分子量为70000的糖蛋白。AFP在胚胎发育期由卵黄囊和肝脏大量合成，是胎儿循环中的主要蛋白之一。婴儿出生后水平下降，至18月降至正常人水平。,33,正常成人：血清500g/L：多见于原发性肝癌，与肿瘤组织大小相关。,34,AFP在临床中的应用可用于筛查判断预后调整治疗,35,二、糖类抗原标志物糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是肿瘤细胞表面的抗原。针对这些抗原的单克隆抗体已成为临床上较为有用的肿瘤标志物，比天然分泌的标志物（如酶和激素）更敏感。,36,2019/12/13,37,（一）糖类抗原12-5（CA125）是卵巢癌和子宫内膜癌的肿瘤标志物分子量为20万的糖蛋白可被单克隆抗体OC125所识别在卵巢肿瘤上皮和Mullerian副肾管来源的病理和正常组织中表达，其生物学功能不明。,38,糖类抗原12-5（CA125）,正常人血清中CA125的临界值为35U/mlCA125的半衰期仅4.8天，在血中很快代谢，所测即时结果能反映肿瘤近期的变化状态,39,CA125在卵巢癌，尤其是上皮性卵巢癌、子宫内膜癌可出现升高，还可在肺癌、宫颈癌等肿瘤状态时升高。CA125在子宫内膜异位症、1%的健康妇女、3%的患良性卵巢疾病妇女及其他非肿瘤患者也可见到升高。,40,CA125的临床应用,卵巢癌的辅助诊断观察病情及预测预后-血清CA125升高（或降低）2倍的患者中大于80%的病例为病情进展（或消退）-CA12535U/ml的病人中有95%在第二次手术时仍有肿瘤存在,41,早期复发的监测75%的患者在肿瘤复发前一年左右时间CA125的水平就已升高,42,CA125的临床应用,CA125升高：90%的卵巢癌和期50%的期和90%的期CA125升高水平与肿瘤大小和分期有关CA125可以区别可触及的良性或恶性实体瘤,43,CA125的临床应用,卵巢癌和良性卵巢疾病的鉴别诊断连续测定CA125联合检测CA199可提高准确性，敏感性可从83.3%提高到91.6%卵巢上皮性癌患者CA125明显高于对照组，敏感性可达82%到93.5%8%的良性患者CA125大于65U/ml，而恶性患者占75%,44,CA125的临床意义,术后CA125的升高是癌肿复发的重要标志，当CA125大于65U/ml时则不需作第二次手术探查,45,CA125的临床应用,46,小结,CA125，尤其是与其他方法联合应用可以用于：-卵巢肿瘤的鉴别诊断-监测疗效-跟踪复发-预测预后,47,（二）糖类抗原19-9（CA199）CA19-9是胰腺、胃和肠癌的标记物。正常人群血清CA19-9阳性的临界值为37U/ml,48,癌组织中的浓度要高于正常组织或炎性组织；是胰腺癌诊断较好的指标，还可用于胃肠癌的检测和筛选。伴有黄疸的良性疾病患者也可出现CA19-9升高，但一般不120/ml，经临床处理后可恢复到正常值范围。,49,CA19-9的临床应用,诊断-可以作为胰腺和胆管癌较好的标志物用于临床，胰腺癌的阳性率可达70%92%，胆管癌为66.7%-对胃癌、肝癌和结直肠癌的阳性率分别可达25%60%、56%60%，18%58%,50,疗效监测治疗中及术后含量下降乃至正常表示治疗方案正确复发跟踪升高可作为肿瘤复发转移的亚临床诊断或重要的辅助诊断指标,51,CA19-9水平在胰腺癌诊断中反应参数的比较,52,三、酶类标志物,根据来源可分为两类：组织特异性酶：因组织损伤或变化使储存在细胞中的酶释放（如前列腺特异性抗原）非组织特异性酶：主要是肿瘤细胞代谢加强，特别是无氧酶酵解增强，大量释放入血液中（如已糖激酶）,53,（一）前列腺特异性抗原（PSA）,PSA是前列腺的特异性标记物属于器官特异性抗原，不具备肿瘤特异性PSA属于酶类肿瘤标记物，具有糜蛋白酶样和胰蛋白酶的活性PSA在正常男性含量小于4g/L,54,游离PSA在正常男性含量小于1g/L前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎和前列腺损伤都会导致血清PSA升高血清PSA在男性其他正常组织中和患其他癌肿时血清PSA都不会升高,55,前列腺癌的诊断,56,PSA的检测,PSA66MAb,PSA10MAb,57,PSA的临床应用,50岁以上男性每年普查1次治疗前治疗中治疗后第一年每年4次第二年每年2次第3-5年每年1次,58,小结,绝大多数的前列腺癌患者血中PSA上升PSA被广泛用来诊断前列腺癌F-PSA+PSA：提高特异性F-PSA/PSA比值：鉴别诊断,59,（二）神经原特异性烯醇化酶（NSE）,同功酶类肿瘤标志物，正常仅存于神经组织和红细胞中正常人血清值为13g/L小细胞肺癌、神经母细胞瘤和神经内分泌肿瘤及脑损伤时升高待测标本绝对禁止溶血，溶血可出现NSE血清水平升高,60,NSE的临床意义,NSE在小细胞肺癌中的阳性率明显高于对照组，NSE可作为小细胞肺癌的高特异、高灵敏的肿瘤标志物,61,跟踪监测癌肿病情进展和疗效判断-肺癌NSE高于11.8g/L预示肺癌患者生存期较短化疗24小时后NSE下降是治疗效果良好的标志,62,其他癌症癌症复发的早期标志，尤其是存在胸腔、肝、骨骼、脑、脊髓转移NSE升高的癌症患者5年存活率仅为5%12%,63,NSE的临床应用,64,肿瘤标志物对分型的比较,阳性率,Ebert,W.,etal.AnticancerResearch,1996,16:2161-2168,65,四、激素类肿瘤标志物,激素类肿瘤标志物根据分泌激素的部位不同而分为正位性激素和异位性激素两类。不同类型的恶性肿瘤可分泌不同种类的异生性激素或分泌出同一种的激素，而同一种肿瘤细胞可分泌一种或多种不同的异生性激素。,66,人绒毛膜促性腺激素（HCG）,糖蛋白类激素，由蛋白核心与位于羧基端的以唾液酸为终止的侧链组成两个亚基组成:&:与-LH,TSH和FSH相同:与-LH有交叉由合胞体滋养层细胞产生被证实是一种原始物质(可作为一种有用的肿瘤标志物),67,hCGEpitopes,IntacthCG,Free,Free,68,Free-hCGAssay,CatchingAntibo