肿瘤标志物进展PPT课件.ppt

肿瘤标志物的研究进展及临床应用,医学检验中心：杨广民,1,.,中国肿瘤流行现状,不论城市还是农村，肿瘤都是中国居民的主要死亡原因。,2,.,中国肿瘤流行现状,中国肺癌男性发病率中居首位，女性发病率中居第二位。,3,.,中国肿瘤流行现状,中国肺癌男性及女性死亡率均居首位,4,.,中国肿瘤流行现状,中国目前肿瘤发病居前五位的肿瘤依次为：肺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结直肠癌,5,.,中国肿瘤流行现状,随着年龄的增长，中国男女发病率及死亡率均逐渐上升。,6,.,中国肿瘤流行现状,7,.,中国肿瘤流行现状,由于中国癌谱与美国不同，以及就诊普遍偏晚，导致中国癌症死亡率高于全球平均水平。,8,.,中国肿瘤流行现状,9,.,中国肿瘤流行现状,中国目前肿瘤发病居前五位的肿瘤依次为：肺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结直肠癌,10,.,中国肿瘤流行现状趋势,上世纪七十年代、九十年代及本世纪初先后三次中国居民死亡原因调查，不论男性还是女性，恶性肿瘤死亡率均逐渐升高。,11,.,中国肿瘤流行现状趋势,肺癌发病率逐渐升高，消化道肿瘤发病率亦逐渐攀升。,12,.,中国肿瘤流行现状趋势,肺癌及乳腺癌分别居我国男性及女性的肿瘤发病首位，消化道肿瘤总体发病率逐年攀升，近期控制人群死亡率是我国近期工作的目标。,13,.,肿瘤防控研究重点及趋势,国家已有相关政策及财政支持肿瘤的预防和治疗工作，但我们还有很长的路要走，需要提高及早检查、及早治疗的意识，争取早日将肿瘤变为慢性疾病。,14,.,肿瘤防控研究重点及趋势,降低发病率、提高早诊率、提高生存率、促进均质化是我国肿瘤防控的突破点。,15,.,我国内地癌症分布,16,.,病理检查细胞学检查活体组织学检查.影像学检查X线，CTECTPET-CT,MRI.实验室检查肿瘤标志物基因检测等,肿瘤早期诊断手段,17,.,第一阶段:1963年肝细胞癌中发现甲胎蛋白(,AFP)和结肠癌组织中发现癌胚抗原(CEA)第二阶段:1975年以后由于单克隆抗体的应用,特别是一些与瘤有关的糖链抗原,出现了一批可用于临床诊断的标志,如CA系列的单抗第三阶段:1980发现癌基因,这将肿瘤标志的研究提高到基因水平现阶段：1990基因组学，蛋白组学，图谱，基因测序,肿瘤标志发展概况,18,.,在恶性肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的，或是机体对肿瘤反应而异常产生和（或）升高的,反映肿瘤存在和生长的一类物质。,肿瘤标志物的概念,19,.,1)灵敏度高,能早期发现和早期诊断肿瘤;(2)特异性好,仅肿瘤患者阳性,能对良恶性肿瘤进行鉴别诊断;(3)能对肿瘤进行定位,具有器官特异性;(4)与病情严重程度、肿瘤大小或分期有关;(5)能监测肿瘤治疗效果和肿瘤的复发;(6)能预测肿瘤的预后;(7)检测方法简便、经济,理想的肿瘤标志物,20,.,1.肿瘤组织产生，包括：胚胎抗原(AFP,CEA)；同工酶(NSE)；激素(HCG)组织特异性抗原(PSA,freePSA)；粘蛋白、糖蛋白、糖脂(CA125)，癌基因及其产物；多胺类等2.肿瘤与宿主相互作用后产生，包括：血清铁蛋白；免疫复合物；急性时相蛋白同工酶；白细胞介素受体；肿瘤坏死因子等,肿瘤标志物的分类,21,.,癌胚蛋白：在个体发育中，一些蛋白质只在胎儿期表达，但成年人（动物）细胞发生癌变时，出现去分化现象，一些关闭的基因被激活，重新分泌胚胎时期特有的蛋白。甲胎蛋白（AFP）：由卵黄囊及胚胎肝脏产生，在妊娠5个月时达高峰，出生时下降。胎儿出生后1年，血清AFP应降至正常成人水平。AFP是原发性肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志；癌胚抗原（CEA）：为存在于结肠癌及胚胎结肠粘膜上皮细胞的一种糖蛋白。由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常在妊娠前6个月内CEA含量增高，出生后血清中含量已很低下。胃肠道肿瘤时因极性消失，CEA反流入淋巴或血液而而使血清CEA升高；,肿瘤标志物的分类之癌胚蛋白,22,.,肿瘤抗原（CA）：是肿瘤细胞膜的结构成分，各不相同，为糖蛋白或糖脂，也叫糖类抗原（CA）。这类抗原是用单克隆抗体技术从肿瘤细胞系（株）中鉴定出来的，所以在特定肿瘤的诊断方面具有较大的临床意义。,肿瘤标志物的分类之肿瘤抗原,23,.,糖类抗原125（CA125）,CA1251983年卵巢浆液性囊腺癌细胞免疫小鼠，+骨髓瘤杂交=单克隆抗体OC125OC125识别的抗原为CA125主演相关肿瘤：卵巢癌。其他非卵巢恶性肿瘤也有一定的阳性率。宫颈癌、宫体癌、子宫内膜癌43%胰腺癌50%肺癌41%胃癌47%结/直肠癌34%乳腺癌40%；其他非恶性肿瘤，也有不同程度的升高，但阳性率较低；如子宫内膜异位症、盆腔炎、卵巢囊肿、胰腺炎、肝炎、肝硬化等；在许多良性和恶性胸、腹水中发现CA125升高早期妊娠，也有CA125升高,24,.,糖类抗原19-9（CA19-9）,1979年胚胎期间的胎儿的胰腺、胆囊、肝脏、肠等组织也存在这种抗原，但正常人组织中含量甚微。检测患者血清CA19-9可作为胰腺癌、胆囊癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标，对监测病情变化和复发有很大意义。（1）胰腺癌、胆囊癌、胆管壶腹癌，CA19-9明显升高，尤其胰腺癌晚期的阳性率可达75%，是重要的辅助诊断指标，但早期诊断价值不大。（2）胃癌的阳性率50%结/直肠癌的阳性率60%肝癌的阳性率65%,25,.,糖类抗原50（CA50）,1983年广谱肿瘤标志物（1）肝、肺、胃、结/直肠、胰腺、胆囊、肾、子宫、卵巢、乳腺、膀胱、前列腺癌、淋巴、黑色素瘤等（2）肺炎、肾炎、胰腺炎、结肠炎等某些感染性疾病血清CA50升高（3）某些溃疡性疾病、自身免疫性疾病也有CA50升高的现象。,26,.,糖类抗原242（CA242）,主要相关肿瘤：胰腺癌、胃、结肠癌。血清中的CA242在非鳞状组织中比鳞癌水平高胆管癌、肺腺癌、直肠腺癌、食管和乳腺癌、小细胞肺癌等也高表达。,27,.,糖类抗原15-3（CA15-3）,1980s，对乳腺癌的诊断和治疗随访有一定价值，但在乳腺癌的早期敏感性较低是其不足临床意义：（1）乳腺癌患者CA15-3升高，乳腺癌初期的敏感性60%乳腺癌晚期的敏感性80%CA15-3对乳腺癌的疗效观察、预后判断，复发和转移的诊断有重要价值（2）其他恶性肿瘤也有一定的阳性率如：肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、原发性肝癌等（3）肝脏、胃肠道、肺、乳腺、卵巢等非恶性肿瘤性疾病，阳性率一般25%,前列腺癌概率极小(80%),确诊必须前列腺活检。,38,.,肿瘤标志物的检测方法进展,39,.,放射免疫分析是一种传统的检测肿瘤标志物的方法，是将放射性核素检测技术与抗原抗体结合特异性的特点相结合，以定量微量物质,放射免疫分析,40,.,A免疫化学发光分析B化学发光酶免疫分析技术C电化学发光免疫分析技术,化学发光免疫分析,41,.,酶联免疫吸附试验是一项临床上已普及的检测技术，这一技术将抗原或抗体包被于固相支持物上，将酶标抗原或抗体加入抗原抗体复合物中，通过底物使酶显色来达到检测目的。,酶联免疫吸附试验,42,.,免疫传感器一直备受肿瘤研究者关注和青睐。将特异性免疫反应与生物传感技术相结合形成的生物传感器，其生物识别部分来自抗原与抗体的特异性识别和结合作用，通过理化换能器和信号放大装置将生物信号转变为电信号用于检测。,免疫传感器,43,.,双向电泳：双向电泳是蛋白组学的经典技术，是利用蛋白质的等电点和不同相对分子质量来分离蛋白质的一门技术。双向电泳是蛋白组学的核心技术之一，能够通过染色强度得到蛋白质翻译后修饰的信息，能够同时分离数千种蛋白质。质谱技术：质谱技术是将物质离子化，根据不同质荷比进行时间和空间的分离，进而获得样品的相对分子质量、分子结构等多种信息的分析方法。蛋白质芯片：蛋白质芯片是近十年来新兴的分析技术，即在支持物表面排列蛋白质探针以捕获目标蛋白，再通过检测器进行定性或定量分析。表面增强激光解析及电离飞行时间质谱：表面增强激光解析及电离飞行时间质谱是将质谱与蛋白质分离技术相结合的技术，能够检测到其他传统方法检测不到的蛋白质，只需少量样品，检测时间短且重复性高，可分析复杂样品。,蛋白组学,44,.,分子生物学方法：聚合酶链反应（PCR）荧光原位杂交技术（FISH）逆转录PCR单链构象多态性（SSCP）多种测序技术等。,分子生物学方法,45,.,液体活检是一种从血液等非实性样本中取样，用于诊断和检测肿瘤的方法。液体活检技术主要包括循环肿瘤细胞（circulatingtumorcell，CTC）检测、循环肿瘤DNA（circulatingtumorDNActDNA）检测、外泌体(exosomes)检测等。与组织活检相比，液体活检能够早期筛查、检测肿瘤标志物，克服了肿瘤的时空异质性，具有无创、易反复取样、操作简便、可实时监控等优点，,液体活检,46,.,放射免疫分析法2酶标记免疫分析技术3化学发光免疫分析技术A免疫化学发光分析B化学发光酶免疫分析技术C电化学发光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术蛋白芯片（生物芯片）质谱技术,肿瘤标志物的检测方法,47,.,检测设备,48,.,检测设备,49,.,检测设备,50,.,检测设备,51,.,检测设备,52,.,1.中国肿瘤现状肺癌男性及女性死亡率均居首位；目前肿瘤发病居前五位的肿瘤依次为：肺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结直肠癌；随着年龄的增长，中国男女发病率及死亡率均逐渐上升。2.中国肿瘤趋势肺癌及乳腺癌分别居我国男性及女性的肿瘤发病首位，消化道肿瘤总体发病率逐年攀升，近期控制人群死亡率是我国近期工作的目标。3.肿瘤标志物分类1.肿瘤组织产生，胚胎抗原；糖类抗原；激素(HCG)等2.肿瘤与宿主相互作用后产生，血清铁蛋白；免疫复合物等,小结,53,.,肿瘤标志物的临床应用,54,.,1肿瘤普查、筛选项目的应用；2肿瘤诊断与鉴别诊断；3疗效与预后判断；4生物特点和疾病阶段的判定；5手术、化疗、放疗的监测；6确定不知来源的转移肿瘤的原发肿瘤；,肿瘤标志物应用,55,.,肿瘤标志物的联合应用,一种肿瘤或不同类型的肿瘤可有一种或几种肿瘤标志物异常;同一种肿瘤标志物可在不同的肿瘤中出现。,56,.,肺癌:癌胚抗原（CEA）神经元特异性烯醇化酶（NSE）组织多肽抗原（TPA）鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)糖链抗原125（CA125）细胞角蛋白片段19,肿瘤标志物检测临床应用,57,.,食管癌:癌胚抗原（CEA）糖链抗原19-9（CA19-9）细胞角蛋白片段19,肿瘤标志物检测临床应用,58,.,胃癌:糖链抗原19-9（CA19-9）癌胚抗原（CEA）糖链抗原72-4（CA72-4）,肿瘤标志物检测临床应用,59,.,肝癌:甲胎蛋白（AFP）甲胎蛋白异质体,肿瘤标志物检测临床应用,60,.,结直肠癌:癌胚抗原（CEA）糖链抗原19-9（CA19-9）糖链抗原242（CA242）细胞角蛋白19,肿瘤标志物检测临床应用,61,.,胰腺癌:糖链抗原19-9（CA19-9）糖链抗原50（CA50）糖链抗原242（CA242）,肿瘤标志物检测临床应用,62,.,胆管癌:癌胚抗原（CEA）糖链抗原19-9糖链抗原50,肿瘤标志物检测临床应用,63,.,乳腺癌:癌胚抗原（CEA）(预测及鉴别乳腺癌肝转移)糖链抗原15-3（CA15-3）(复发情况、疗效观察)糖链抗原125（CA125）(乳腺癌筛查有一定的判断和预防价值)铁蛋白（Ferritin）(乳腺癌的诊断中具有一定的使用价值)人类表皮生长因子受体-2(huamanepidermalgrowthfacter-2,HEB-2)(乳腺侵润性导管癌的标志物之一,癌症治疗的靶点,),肿瘤标志物检测临床应用,64,.,宫颈癌:高危型人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag):是宫颈癌中经典的肿瘤标志物，虽然对早期诊断意义不大，但对评估肿瘤扩散程度和预测预后有一定价值。CA125，CEA组织多肽抗原（TPA）,肿瘤标志物检测临床应用,65,.,卵巢癌:附睾分泌蛋白4(HE4)糖链抗原125（CA125）糖链抗原19-9（CA19-9）铁蛋白（Ferritin）专家建议检测组合：(HE4、CA125、CEA),肿瘤标志物检测临床应用,66,.,鼻咽癌:EBVDNAEBV核抗原(EBVnuclearantigen1，EBNAl)EB病毒衣壳抗原(F,BVcapsuidantigen，vcA)铁蛋白、细胞角蛋白片段19,肿瘤标志物检测临床应用,67,.,膀胱癌:膀胱肿瘤抗原（bladdertumorantigen，BTA)核基质蛋白22(nuclearmatrixprotein22，NMP22)BC特异性核基质蛋白4（bladdercancerspecificnuclearmatrixprotein4，BLCA-4),肿瘤标志物检测临床应用,68,.,前列腺癌肿瘤标志物前列腺特异抗原(PSA)游离前列腺特异抗原(Free-PSA),肿瘤标志物检测临床应用,69,.,良恶性腹水的鉴别诊断甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)唾液酸(N-乙酰基神经氨酸)SA1L一岩藻糖苷酶(AFU),肿瘤标志物检测临床应用,70,.,良恶性胸腔积液诊断CA50、CA125、CA242CA119、SCC-Ag、NSE等乳酸脱氢酶（LDH）腺苷脱氢酶（ADA）,肿瘤标志物检测临床应用,71,.,液体活检技术,(1)低创无创，最大程度减少患者痛苦；(2)灵敏特异，检测准确率高；(3)取样容易，多次采集实时监控；(4)全面广泛，适合肿瘤转移扩散的患者。因此，在临床医学上有多方面应用。,外泌体、游离循环肿瘤细胞（CTCs）、循环肿瘤DNA（ctDNA）检测、及循环RNA（CirculatingRNA）检测等。,72,.,外泌体(exosomes)是一种所有细胞都释放的胞外囊泡，其直径为30150nm,1.外泌体的组成、分泌、分离及功能2.外泌体在肿瘤诊断中的应用3.外泌体在肿瘤发展和治疗中的作用,外泌体在肿瘤诊疗中的研究进展,73,.,外泌体由脂质双分子层组成，外泌体包含多种蛋白质、DNA、mRNA、miRNA，长链非编码RNA（longnoncodingRNA，lncRNA），甚至病毒和朊病毒等遗传物质。外泌体的分泌主要受保守的细胞质蛋白家族控制，如Rab家族GTP酶。超速离心能够得到较高纯度的外泌体。主要功能是通过自身膜蛋白与靶细胞识别并融合，进而参与细胞间信息和物质的传递，可以调节受体细胞的转录及表型。,外泌体的组成、分泌、分离及功能,74,.,肿瘤细胞来源的外泌体中含有大量特异性miRNA，且生化性能稳定易于保存，可以作为肿瘤早期诊断的标志物。多数肿瘤患者的外泌体表达水平明显上调；有效的治疗表达水平下调。,外泌体在肿瘤诊断中的应用,75,.,促进肿瘤细胞发展，侵袭和转移促进肿瘤的血管新生肿瘤免疫调节肿瘤化疗的增敏作用,外泌体在肿瘤发展和治疗中的作用,76,.,循环肿瘤细胞(circulaingumorcells，T)是指由实体恶性肿瘤原发灶或者转移灶释放入血液循环系统的细胞，是导致肿瘤转移及复发的重要因素。1.T对分期的补充2.T在疗效评估方面的价值3.T对预后及复发风险判断的价值4.T个体化治疗的指导,循环肿瘤细胞研究进展,77,.,人体循环血中存在的游离于细胞外的内源性DNA片段称为血浆游离DNA（cfDNA），肿瘤患者循环血中存在的来源于肿瘤细胞的cfDNA即为ctDNA。早期诊断术后判评估手术效果动态监测用药指导通异质评估,循环肿瘤DNA研究进展,78,.,质谱技术,79,.,质谱技术的临床应用,80,.,肿瘤标志物非常多单个标志物灵敏性、特异性低目前没有统一标准理论和实践都提倡多种标记物联合检测，提高灵敏性、特异性。,肿瘤标志物应用现状,81,.,肿瘤标志物既存在于肿瘤患者，也存在于非肿瘤患者和正常人群的血液和体液中，诊断癌症时其灵敏度、特异性不够高；目前多数肿瘤标志物主要用于癌症的辅助诊断，不能仅凭肿瘤标志来筛查和诊断。（CA199）36924人+548癌122.2%,血清肿瘤标志物检测阳性就是癌吗,82,.,AFP上海东方肝胆医院统计1013例经病理证实的肝癌患者AFP阳性率68.8%;32.2为阴性。临床上常常会将AFP联合彩超进行检查。,血清肿瘤标志物检测阴性就不是癌吗,83,.,目前多数专家相对一致的建议，AFP和PSA可以用于高危人群筛查AFP高危人群：乙肝、丙肝、嗜酒者和有家族史，筛查要结合肝脏超声（35）PSA高危人群：中老年男性、有前列腺癌家族史，筛查要结合直肠指诊（50）其次，CA125、HE4结合阴道超声用于有遗传综合征的妇女筛查卵巢癌。,血清肿瘤标志物可用于肿瘤筛查吗,84,.,1.癌症2.其他疾病慢性肝、肾病，内分泌系统、生殖系统、胃肠道、甲状腺等疾病3.药物引起，如肿瘤靶向治疗中使用的单抗4.生物制剂，如破伤风抗血清，疫苗，胸腺肽等5.生理周期和妊娠（CA125、AFP）6.生活习惯，如吸烟（CEA）7.实验室分析前、分析中、分析后。,血清肿