病生实验设计 肝性脑病.doc

实验设计：小鼠肝性脑病模型的制作与观察【实验目的】1.复制小鼠肝性脑病的模型;2.观察氯化铵药物对小鼠脑电波及血氨浓度的影响，并分析血氨浓度的变化与脑电波变化之间的关系。【实验原理】正常情况下，机体内氨的生成和清除保持动态平衡，所以血氨浓度保持在正常范围。肝脏鸟氨酸循环是氨的主要代谢途径，当肝功能严重障碍时，由于氨的浓度增高而清除不足，就会引起血氨增高。这时，一方面增多的血氨可通过血脑屏障进入脑内星形胶质细胞，并与谷氨酸合成谷氨酰胺。谷氨酰胺具有渗透分子作用，细胞内谷氨酰胺增多，可激发细胞内水分积聚，引起星形胶质细胞水肿，此为脑水肿发生的主要机制之一；另一方面，血氨增高引起脑能量代谢障碍，同时，也引起脑内谷氨酸、乙酰胆碱等兴奋性神经递质减少，而谷氨酰胺、GABA等抑制性神经递质增多，从而造成中枢神经系统功能障碍；而且，血氨增高对神经膜有抑制作用，铵根离子干扰神经细胞膜上的Na+-K+- ATP酶活性，使K+内流减少，导致神经冲动的传导形成受抑制。这样就复制了小鼠肝性脑病的模型。紫外分光光度法检测血液中的氨浓度，可以为肝性脑病、重型肝病、尿毒症等代谢障碍的诊断提供参考。此方法可用加入钨酸钠及硫酸溶液再用酚-次氯酸钠显色。【实验仪器及药品】手术器械1套，鼠板，头皮静脉针，1ml注射器3个，6.7mg/ml 戊巴比妥钠，3%氯化铵，试管，试管架，枸橼酸钠，钨酸钠-硫酸溶液，酚-次氯酸钠，肝素生理盐水，分光光度计，生物信号采集器，电脑，打印机。【实验动物】小鼠(20-25克)【实验步骤】1.取小鼠称重，以 6.7mg/ml 戊巴比妥钠（生理盐水配制）腹腔注射， 0.01ml/g 小鼠体重，小鼠一般数分钟后即入睡，即可行手术。注：此法麻醉可维持 0.5-1 小时，小鼠安静，适用于较长时间手术，术后小鼠应放在白炽灯下，以维持体温。严格掌握剂量，一般不会引起麻醉死亡；剂量过大时小鼠会死亡。2. 将小鼠背位固定于鼠板，打开腹腔，切除小鼠肝脏的2/3。3.在小鼠右侧后腿腹面剪开皮肤，暴露股静脉，向心方向插入头皮静脉针，（内充满生理盐水），用胶布固定，以备给药。4.连接脑电波测定装置。5.标记试管：取6支试管分别标记0、1、2、3、4、5，标记好的试管内加入等量的钨酸钠及硫酸溶液和枸橼酸钠。6. .尾静脉取血，给药前用注射器取血0.1ml加入到0号试管内，迅速震荡摇匀。7. 股静脉给药：通过股静脉给药，每次给百分之三氯化铵0.1ml，计时，每隔5min给药一次，并在下一次给药前进行尾静脉取血，取血后依次加入1到5号编号试管，并迅速震荡摇匀。8.观察抽搐发生的时间以及脑电波的变化。9.将0-5号试管中混合液过滤取上清液，再以酚-次氯酸钠显色后于波长630 nm处测定光密度OD值（以空白校正），查标准曲线，读出各试管对应的血氨浓度。10.打印脑电图，并填写下表。A脑电波情况记录：B 表1 小鼠血氨浓度实验记录试管编号012345取血时间OD值OD差值血氨浓度抽出情况【注意事项】1.肝脏切