丹参药材质量标准草案.doc

丹参药材质量标准草案丹参拼音：Danshen拉丁文：Radix Salviae Miltiorrhizae本品为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。春、秋季采挖，以秋季采挖质量较好。栽培品于种植第二、三年秋季采挖，除去地上部分及须根，将根摊开曝晒，晒至五、六成干时，集中堆放23天，经发热出汗、内变紫红色后，再摊晒干透为止。【性状】根1至数条，圆柱形或圆锥形，常稍弯曲，并有分枝，长1020cm，直径02lcm。表面砖红色或棕红色，粗糙，有不规则纵沟或纵皱纹及须根痕；老根栓皮灰褐色或棕褐色，多呈鳞片状剥落，露出棕红色新栓皮，有时皮部开裂，露出白色木部；根头部粗大，有时残留茎基。质硬脆，易折断，折断面角质样或纤维性，皮部暗红棕色，木部导管束黄白色，放射状排列。气微香，味淡、微苦涩。饮片；呈不规则圆形的横切片，直径410mm，厚12mm，边缘呈波状凸凹，切断面皮部暗红棕色，木部的导管束呈黄白色，呈放射状排列，有多数裂隙。【显微鉴别】根横切面：木栓层为数列木栓细胞，大多含橙色或淡紫棕色物；有时可见落皮层。皮层窄。韧皮部宽广，筛管群明显，颓废筛管群呈横条状。形成层成环。木质部射线甚宽；导管束作23歧状径向排列，近中心导管较少，向外渐多，常单个或212个径向或切向相接，后者与木薄壁组织间隔排成层状；木纤维发达，多分布于导管周围。少数根的皮层及韧皮部有厚壁组织（纤维或石细胞）；栽培品（四川）皮层和韧皮部一般无纤维或石细胞，导管束多，导管稀疏，木纤维少。丹参粉末1. 石细胞类圆形、类长方形、类梭形或不规则形，边缘不平整，壁较厚，有的胞腔含棕色物。2. 韧皮纤维梭形，壁略厚，孔沟明显，有的可见纹孔。3. 网纹导管分子长梭形，末端斜尖，壁增厚不均匀，网孔狭细，穿孔多位于侧壁。【理化鉴别】（1）取本品粉末5g，加水50ml，煎煮1520分钟，放冷，滤过，滤液置水浴上浓缩至黏稠状，放冷后，加乙醇35ml使溶解，滤过，取滤液数滴，点于滤纸条上，干后，置紫外光灯（365nm）下观察，显亮蓝灰色荧光。将滤纸条悬挂在浓氨溶液瓶中（不接触液面），20分钟后取出，置紫外光灯（365nm）下观察，显淡亮蓝绿色荧光。（2）取上述滤液0.5ml，加三氯化铁试液12滴，显污绿色。（3）样品加浓硫酸2滴，丹参醌显绿色，隐丹参醌显棕色，丹参醌显蓝色。（4）薄层层析：样 品 液： 取粉末1 g，加乙醚5ml置具塞试管，振摇放置1小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解。对照品液： 取丹参酮A、隐丹参酮加醋酸乙酯制成2mg/ml的溶液。展开： 硅胶预制板，点样5ml。以苯醋酸乙酯(19：1)为展开剂。显色： 在日光下检视，可见丹参酮A紫红色与隐丹参酮橙红色斑点。【含量测定】照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（15：5）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按丹参酮A峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备：精密称取丹参酮A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2mL，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含丹参酮A16mg）。供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人中醇 50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ml，注人液相色谱仪，测定，即得。本品含丹参酮A（C19H18O3）不得少于0.20。【性味、归经】苦，微寒。归心、肝经。【功能主治】活血调经，凉血消痈，安神。【用法用量】内服：煎汤，515g，大剂量可用至30g。【使用注意】妇女月经过多及无瘀血者禁服；孕妇慎服；反藜芦。1.本草经集注：“畏碱水，反藜芦。”2.本草经疏：“妊娠无故，勿服。”3.药品辨义：“忌醋。”4.本经逢原：“大便不实者忌之。”5.药性切用：“血虚无瘀者勿用。”6.重庆堂随笔：“行血宜全用，入心宜去梢用。”丹参药材质量标准起草说明【名称】别名紫丹参、赤参、赤丹参、血参根、红根、山参、木羊乳。郄蝉草神农本草经，赤参、木羊乳吴普本草，逐马本草经集注，奔马革四声本草，山参日华子本草，紫丹参现代实用中药，红根中国药用植物志，山红萝卜浙江中药手册，活血根、靠山红、红参江苏植物药材志，烧酒壶根、野苏子根、山苏子根东北药用植物志，大红袍河北药材，蜜罐头、血参根、朵朵花根山东中药，蜂糖罐陕西中药志，红丹参（湖北）。【来源】丹参始载于神农本草经，列为上品。以后历代本草均有收载，吴普本草载：“茎华小，方如茬（即白苏），有毛，根赤，四月华紫，三月五月采根，阴干。”本草图经称：“二月生苗，高一尺许，茎干方棱，青色。叶生相对，如薄荷而有毛，三月开花，红紫色，似苏花。根赤，大如指，长亦尺余，一苗数根。”本草纲目曰：“处处山中有之，一枝五叶，叶如野苏而尖，青色，皱皮。小花成穗如蛾形，中有细子，其根皮丹而肉紫。”综合诸家本草所述，主要形态特征均与现在所用唇形科丹参Salvia miltiorrhiza Bge.完全相同。【原植物形态】多年生草本，全株密被柔毛及腺毛。根圆柱形，朱红色。茎四棱形。羽状复叶对生，小叶35(7)，卵形至椭圆状卵形，边缘有锯齿，两面被白色柔毛。轮伞花序组成顶生或腋生的假总状花序；花萼钟状，紫色；花冠蓝紫色，上唇直立，略成镰状，先端微裂，下唇较短，先端3裂，中央裂片较长大，并作2浅裂；雄蕊2，花丝短；子房四深裂，花柱着子房底。小坚果椭圆状倒卵形。花期48月，果期79月。分布于华东、华北及湖北、江西、贵州、广东、辽宁、陕西、甘肃。生于山坡、沟旁向阳草地。【产地】主产于四川、安徽、江苏、山西、河北等地；湖北、辽宁、陕西、甘肃、山东、浙江、河南、江西也产。销全国。【采收加工】春、秋季采挖，以秋季采挖质量较好。栽培品于种植第二、三年秋季采挖，除去地上部分及须根，将根摊开曝晒，晒至五、六成干时，集中堆放23天，经发热出汗、内变紫红色后，再摊晒干透为止。【性状】根1至数条，圆柱形或圆锥形，常稍弯曲，并有分枝，长1020cm，直径02lcm。表面砖红色或棕红色，粗糙，有不规则纵沟或纵皱纹及须根痕；老根栓皮灰褐色或棕褐色，多呈鳞片状剥落，露出棕红色新栓皮，有时皮部开裂，露出白色木部；根头部粗大，有时残留茎基。质硬脆，易折断，折断面角质样或纤维性，皮部暗红棕色，木部导管束黄白色，放射状排列。气微香，味淡、微苦涩。饮片；呈不规则圆形的横切片，直径410mm，厚12mm，边缘呈波状凸凹，切断面皮部暗红棕色，木部的导管束呈黄白色，呈放射状排列，有多数裂隙。【鉴别】化学成分根主含二萜醌类色素，丹参酮(tanshinone)，A, B，隐丹参酮(cryptotanshinone），异丹参酮(isotanshinones)，异隐丹参酮(1socryptotanshinone)，丹参新酮（miltirone）, 丹参酸甲酯（methyl tanshinonate）, 羟基丹参酮A（hydroxytanshinone）, 二氢丹参酮（dihydrotanshinone I），丹参新醌甲、乙、丙，次甲丹参醌（methylenetanshinquinone）和鼠尾草酚（salviol）。另报道合铁锈醇（ferruginol）、l-丹参新酮（l-dehydromiltirone）、l-丹参酮A（l-dehydrotanshinone IIA）、丹参新醌丁（danshenxinkun D）和1，二氢丹参醌等。除二萜醌类化合物外，尚合原儿茶醛（protocatechuic aldehyde）、-谷甾醇和D（）-（3，4一二羟基苯基）乳酸（即丹参素，丹参酸甲），以及缩羧酸化合物（salvianolic acids）A，E等。水溶性总酚的测定 1.1比色法 1.1.1生药的测定 样品加0.01mol/L盐酸超声提取，暗处放置过夜，滤过，取续滤液加0.01mol/L HCl及饱和氯化钠溶液后，用无水乙醚萃取，回收乙醚后，用无水乙醇溶解制成样品液，加入0.3%十二烷基硫酸钠及显色剂，暗处放置5分钟，加0.01mol/L HCl，暗处放20分钟后，在730nm处测定吸收度，原儿茶醛的线性范围为52511。 2.3纸色谱-可见分光光度法 样品液点于色谱纸上，放入已盛有10%氯化钠-醋酸（955）展开剂的层析缸中先饱和半小时，展开，取出，吹干，立即喷碱性异烟肼溶液，显红色斑点，将此斑点剪下，用5%乙醇洗脱，离心，上清液于495nm处测定吸收度，其线性范围为0.42.0g/ml。 2.4纸色谱-紫外分光光度法 样品液点于色谱纸上，置贮有展开剂（以氯化钠饱和的1%醋酸）的层析缸中（先饱和半小时）。 展开，取出，吹干，即喷碱性异烟肼溶液，显猩红色斑点，将此斑点剪下，用5%乙醇洗脱，离心，上清液于281nm处测定吸收度，其线性范围为110-5610-5g/ml。 3、原儿茶醛的测定 3.2薄层色谱-比色法 样品加水浸透后，沸水浴加热1.5小时，冷后放入饱和氯化钠溶液、乙醚、猛力振摇3分钟，静置，取醚层挥去乙醚，加入甲醇-氯仿（11）混合液，振摇使残渣全溶，点于薄层上，用氯仿-甲醇-甲酸（9082）展开，取出，放置至显出原儿茶醛的斑点，刮下斑点，加2%间苯三酚乙醇溶液和浓硫酸的11冷混合液，猛力振摇，50水浴加热5分钟，并振摇数次，取出，流水冷至室温，离心，取上清液（以显色剂为空白）于496nm处测定2。 3.3薄层-紫外分光光度法 仪器 751型分光光度法。 标准曲线 精密称取原儿茶醛对照品约10mg，置于10ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶解并稀释至刻度。用微量进样器精密吸取20、30、40、50、60、70与80l，分别置于10ml量瓶中，加1mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀。以1mol/L盐酸作空白，在281nm波长处测定吸收度值（A）。作图，表明浓度在2.010-68.010-6g/ml范围内与吸收度值呈良好线性关系。回归方程为： C=0.01338A-0.000161，r=0.99988。 色谱条件 薄层板：硅胶H板，105活化30分钟；展开剂：氯仿-丙酮-甲醇-醋酸（721.50.5）。 样品测定 取丹参粉末，70烘2小时，精密称取约10g，置于250ml烧瓶中，加80%乙醇100ml回流1小时，倾取上清液，再加80乙醇50ml，回流30分钟，重复一次，合并三次提取液，滤过，回收乙醇至无醇味，加1mol/L盐酸（约3ml）调pH值至2，用乙醚提取（20ml6），合并醚液，回收至干，残渣加无水乙醇溶液，转至10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，即为供试品溶液。准确吸取供试品溶液一定量，呈条状点在薄层板上，置层析缸中，使饱和20分钟，展开，在紫外光灯（254nm）下，划出原儿茶醛暗紫色荧光条斑范围（Rf=0.68）。将原儿茶醛条斑与相应Rf值的空白硅胶分别刮至10ml具塞试管中，加1mol/L盐酸5ml，密塞后在旋涡混合器上振摇2分钟，然后离心1分钟。吸取上清液，以空白硅胶的洗脱液作校正，在281nm波长处测定吸收度。另取50l（40l或25l）对照品溶液于10ml具塞试管中，冷风吹干，加1mol/L盐酸5ml，以1mol/L盐酸作空白，同法测定吸收度。计算含量。 3.5高效液相色谱法 样品液进样，以原儿茶醛水溶液对照，色谱柱（250mm4mm），固定相为十八烷基化学键合相，粒度为102m；柱温320.5；流动相为水-乙腈-醋酸（81163），0.8ml/min；检测波长为281nm。 7、薄层扫描法测定水溶性酚酸类成分 仪器 岛津CS-930型双波长薄层扫描仪，岛津DR-2数据处理机，微量定量毛细管（Drummond）。 色谱条件 薄层板：高效硅胶GF254（10cm10cm）。展开剂A：氯仿-醋酸乙酯-苯-甲酸（2.4210.6），有于分离原儿茶酸（），Rf值为0.5；展开剂B：氯仿-醋酸乙酯-苯-甲酸-甲醇（1.52110.1），用于分离咖啡酸（）、Rf0.60，迷失香酸甲酯（）、Rf0.56，丹酚酸A（）、Rf0.45，迷迭香酸（）、Rf0.40，丹酚酸C（）、Rf0.35，丹酚酸B（）、Rf0.15。 扫描条件 反射式线性扫描；S=300nm，R=240nm；SX=3，扫描速度和纸速均为20mm/min。 标准曲线 精密称取原儿茶醛对照品0.2362mg，置于2ml量瓶中，甲醇定容，作为贮备液A；精密称取对照品咖啡酸1.150mg、迷迭香酸及其甲酯分别为3.020mg和1.290mg，丹酚酸A、B、C分别为1.296mg、1.840mg和1.408mg，同置于2ml量瓶中，甲醇定容，稀释1倍，作为贮备液B。精密吸取贮备液A0.5、2、3、4、5l，贮备液B0.5、2、4、5、6l，分别点在不同薄层板上，每个量重复点样两次，展开后，测定各斑点峰面积值，以点样量（g）对峰面积（A103）作图，得到7条直线。样品测定 精密称取样品（40目）0.5g，加水30ml，浸泡过夜后热提0.5小时（测原儿茶醛时热提2小时），静置滤过，滤液用10%盐酸调pH值至2，酸化液用醋酸乙酯萃取（10ml3次），合并萃取液，浓缩后定量转移到2ml量瓶中，甲醇定容，作为供试品溶液，点样，测定16。 11.比色法测定总丹参酮 样品的乙醚提取液浓缩至干，用无醛甲醇溶解，加2，4-二硝基苯肼试液吸浓盐酸，60加热20分钟，冷后加无醛甲醇稀释定容，于420nm处测吸收度。 12.紫外分光光度法测定生药中总酯 样品乙醚浸泡过夜，取上清液蒸干，残渣用氯仿溶解，将此氯仿液加入预先放有0.5%碳酸钾溶液的分液漏斗中，振摇，静置，取氯仿层离心，其上清液加氯仿稀释定容，于263nm处测定，按隐丹参醌的标准曲线计算含量。 14.薄层色谱-比色法测定生药中隐丹参醌 样品装入小色谱柱中用氯仿洗脱流出液近无色，洗脱液挥去氯仿，残渣加乙醇溶解并定容，点于硅胶G-CMCNa板上，用苯-醋酸乙酯（91）展开，刮下隐丹参醌色带，加氯仿溶解，于448nm处测定。 16、丹参属植物中丹参酮A及隐丹参酮的测定 16.1薄层扫描法 16.1.1丹参中丹参酮A及隐丹参酮的测定 仪器 岛津CS-910型双波长薄层扫描仪，岛津Chromatopac数据处理机。 色谱条件 高效硅胶薄层板（15cm5cm，5cm15cm，5cm15cm），于120烘15分钟；展开剂：二氯甲烷-乙烷-甲醇（50.10.1，V/V）。展开前薄层板饱和15分钟。 扫描条件 波长：S=270nm，R=370nm；反射式直线扫描；狭缝：5mm0.5mm；灵敏度1；扫描速度：20mm/min；纸速：20mm/min。 标准曲线 精密称取丹参酮A、隐丹参酮各1.0mg，分别置于5ml量瓶中，加二氯甲烷，分别配成1mg/5ml的对照品溶液。于1ml具塞样品管中配制成1、2、3及4l/100l的对照品系列溶液。各取5l点样，展开，扫描。以对照量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘图，为过原点的两条直线。线性范围：丹参酮A：0.050.27g，隐丹参酮：0.050.21g。 样品测定 精密称取30mg生药样品，加入氯仿-甲醇（51）3.0ml，超声提取10分钟，滤过，得供试品溶液。于高效薄层板上点样对照品溶液4l，供试品溶液点样量视丹参酮A 、隐丹参酮含量而定，一般为110l。展开，扫描7。 19.高效液相色谱法测定丹参中丹参酮、丹参酮IIA和丹参酮I 仪器 高效液相色谱仪Consta Metric IIG泵（LDC.美），Rheodyne 7125进样器，Spectromonitor UV III分光检测器LDC。 色谱条件 色谱柱：Nucleosl C18(4.6mm25cm, 5m)；流动相：77.5%甲醇溶液；流速：1ml/min；检测小长：254nm，纸速：4mm/min。 标准曲线 精密称取隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA各1mg于25ml量瓶中，用三氯甲溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。用微量注射器吸取对照品溶液1、2、3、5、6l进样测定，数据处理机测定峰面积，绘制标准曲线图。丹参酮00.24g内呈线性关系。 样品测定 精密称取丹参粉末（过40目）75mg,于10ml磨口具塞比色管中，加甲醇2ml，二氯甲烷8ml，搅匀，放置1小时，并不断振摇。然后用离心机以1000r/min离心10分钟，吸取上清液，取5ml进样测定，根据峰面积计算生药含量1。 20.高效液相色谱法测定丹参中丹参酮类化合物 仪器 Tosoh CCPD泵（两台），Tosoh CCP梯度洗脱程控系统，Tosoh UV-8000紫外可见分光光度计。 色谱条件 系统A：色谱osoh TSK gel 硅胶150（4.6mm25cm, 5m）；流动相：二口恶烷-正已烷（8：92）；流速：1.0ml/min；检测小长：260nm。系统B：色谱柱同上；流动相：二口恶烷-正已烷（2.4:97.6）；流速：1.0ml/min；检测小长：285nm。以上两系统的柱色谱结束后，以二口恶烷-正已烷（15：85）洗脱过夜。系统C：色谱柱：Tosoh TSK gel ODS-120T(4.6mm15cm, 5m)；流动相：溶剂系统A：乙腈-0.01mol/L醋酸盐缓冲液（pH5.2）(20:80)，溶剂系统B：乙腈，梯度洗脱程序如下：03分钟，86%B；320分钟，线性改变至75%B；2030分钟，75%B；流速：1.0ml/min；检测波长：275nm，为防止丹参酮V和丹参酮VI的色谱峰变宽，临进样之前，应以0.5%三氟乙酸的乙腈溶液洗柱。系统D：色谱柱同系统C；流动相：溶剂系统A，B均同系统C，梯度洗脱程序为：029分钟14%B线性改变至33%B；2930分钟，线性变换至90%B；3050人钟，90%B；检测波长：290nm，其余条件均同系【检查】应符合（中国药典2005年版）的规定。【含量测定】.薄层扫描法测定丹参制剂中丹参酮A 样品的氯仿提取液浓缩定容后，点样于硅胶GF254板上用环乙烷-醋酸乙酯（61）上行展开，晾干，日光下观察斑点位置，反射法锯齿扫描，S=268nm.高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（75：5）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按凡碜 酮IIA峰计算应不低于2000。对照品溶液 精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mg中含丹参酮IIA16g。供试品溶液 取