（有机化学专业论文）雷贝拉唑和赖诺普利的生物等效性研究.pdf

中国科学投术大学硕士论文 摘要 本论文包括两部分工作：( 1 ) 雷贝拉唑制剂的生物等效性研究：( 2 ) 赖诺普 利制剂的生物等效陆研究。 第一部分雷贝拉唑的的生物等效性研究 雷贝拉唑( r a b e p r a z o l e ) 为新一代苯并咪唑类质子泵抑制剂，通过抑制胃壁 细胞h + 一k 十一a t p 酶而抑制胃酸分泌。临床用于胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性 食管炎、卓一艾( z o l l i n g e r e l l i s o n ) 综合征的治疗。本实验建立了一种有效、 快捷的雷贝拉唑血药浓度液质联用( h p l c m s m s ) 检测方法。实验以奥美拉唑 为内标，采用电喷雾离子源( e s i ) 和选择反应监测( s r m ) 模式；血样用三倍量 的甲醇沉淀处理，而且空白血浆中无内源性物质的干扰；以甲醇0 1 甲酸水溶 液( 1 ：1 ，v v ) 为流动相，通过t h e r m oh y p e r s i lg o l d 色谱拄( 1 5 0 2 1 m mi d ，5 u m ) 分离药物。标准曲线的浓度范围从o 2 n g m l 一2 0 0 0 n g m l ，线性相关系数r 2 为 o 9 9 8 8 0 9 9 9 4 ，根据质控样品算得的日内和日间标准偏差都 9 9 ，批号：0 1 1 1 0 2 ；浙江省药品检验所标准； 2 4 试剂 甲醇( m e r c k 公司) ，色谱纯； 甲酸( t e d i a 公司) ，色谱纯； 水：三重蒸馏水，自制。 9 中国科学技术大学顾士论文 3 质谱条件 离子源：e s i 源； 离子极性：正离子： 检测模式：选择反应监测( s r m ) ： 电喷雾电压：4 ，5 k v ： 毛细管温度：3 5 0 ： 源内碰撞电压( s o u r c ec i d ) ：1 0 v ： 碰撞气压力：1 6 m t o r r ； 检测离子：雷贝拉哗3 6 0 2 4 2 ，碰撞能2 5 v 奥美拉唑3 4 6 1 9 8 ，碰撞1 琵2 8 v 鞘气压力：2 1 a r b ； 辅助气压力：1 2 a r b ； 扫描时间：0 5 s 。 4 色谱条件 。， 色谱柱：h y p e r s i lg o l dc 1 8 柱，1 5 0 r a m 2 1 m mi d 5 9 i n ( 美m t h e m a o 公司) 柱温：2 0 ： 流动相：甲醇：水( 含0 1 甲酸) 为5 0 ：5 0 ； 流速：o 2 0 m i m i n 。 5 校准用标准与质控样品的配制 5 1 雷贝拉唑溶液的配制： 精密量取2 0 m g 雷贝拉唑对照品，置于5 m l 容量瓶中，于其中加入甲醇溶解 并稀释至刻度，涡旋混匀，得到o 4 m g m l 的雷贝拉唑溶液；从中精密量取1 0 0 u l 置于1 0 m l 容量瓶中，于其中加入甲醇溶解并稀释至刻度，涡旋混匀，得到 4 0 0 0 n g m l 的雷贝拉唑标准储备液。 用空a 血浆依次稀释储备液得到浓度为0 2 ，1 0 ，2 0 ，5 0 ，1 0 o ，2 00 ，5 0 0 ， 1 0 0 o 和2 0 0 0n g m l 的校准用标准样品，每个浓度都是三样本的；再用空白血浆 o 中国科学技术大学颁七论文 稀释储备液得到浓度为1 0 ，2 0 0 和2 0 0 0n g m l 的质控样品，分别代表低、中、 高三个浓度。校准用标准与质控样品都放在冰箱中一2 0 下保存。 5 _ 2 奥美拉唑溶液的配制： 精密量取2 o m g 奥美拉唑对照品，置于5 m l 容量瓶中，于其中加入甲醇溶解 并稀释至刻度，涡旋混匀，得到0 4 m g m l 的奥美拉唑溶液；从中精密量取1 0 u l 置于1 0 n a l 容量瓶中，于其中加入甲醇溶解并稀释至刻度，涡旋混匀，得到 4 0 0 n g m l 的奥美拉唑标准储备液。 6 血浆样品处理 精密移取血浆o 0 5 m l 置于2 m l 离心管中，精密加入奥美拉唑内标溶液 ( 4 0 0 n g m 1 ) l o l a l ，涡旋混匀0 5 r a i n 后加入o 15 m l 甲醇沉淀蛋白，涡旋混匀3 m i n ， 在转速1 2 0 0 0 r p m 下离心l o m i n ，取上浆液2 p l 进样。 7 方法学确认川 7 ，1 特异性 分别取6 名受试者的空白血浆0 0 5m 0 按。r 血浆样品盘压童，项下操作( 不 加内标溶液) ，进样2 此；将1 o n g m l 的雷贝拉唑标准样品依同法操作：取某受 试者口服2 0 m g 雷贝拉唑15 h 后的血浆样品，依同法操作。考察空白血浆中的 内源性物质是否对检测对象产生干扰。 7 2 标准曲线 将雷贝拉唑血浆浓度为0 2 ，1 0 ，2 0 ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 ，5 0 0 ，1 0 0 0 乘i2 0 0 0 n g m l 的样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行三样本分析， 进样2 儿i ，记录色谱图，以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值 为纵坐标，用加权法( w = l x ) 进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线。 7 1 精密度实验 将雷贝拉唑低、中、高三个浓度( 1 0 ，2 0 0 ；f 1 2 0 0 0n g m 1 ) 的质量控制( q c ) 样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行5 样本分析，根据当日 的标准曲线，计算q c 样品的测得浓度。根据q c 样品结果计算本法的精密度，包 中国科学技术大学顷士论文 括日问精密度和日内精密度。 7 4 介质效应 用三倍量的甲醇沉淀空白血浆，以得到的上清夜为溶剂稀释雷贝拉唑储备液 得到浓度为1 0 ，2 00 和2 0 0 0 n g m l 的溶液，每一浓度都是三样本的，而且和质控 样品处理后药物的实际浓度是相同的；另外，用7 5 的甲醇水溶液为溶剂稀释得 到上面浓度的溶液。按“血浆样品处理”项下依法操作，然后比较两种溶剂稀释 的积分面积的差别，观察介质效应的大小。 7 5 回收率的测定 用空白血浆将雷贝拉唑储备液稀释为低、中、高三个浓度( 1 0 ，2 0 0 和2 0 0 0 n g m 1 ) 的质量控制( q c ) 样品，每一浓度也都是三样本的；另外用三倍量的甲 醇沉淀空白血浆，以得到的上清夜为溶剂稀释雷贝拉唑储备液得到浓度为1 0 ， 2 0 0 和2 0 0 0n g m l 的溶液，每一浓度也都是三样本的。按“血浆样品处理”项 下依法操作，进样分析，获得相应峰面积( 三次测定的平均值) ，以每一浓度两 种处理方法的峰面积比值训算提取回收率，考察该方法回收率的大小。 一一 7 6 稳定性实验 用空白血浆将雷贝拉唑储各液稀释为低、中、高三个浓度( 1 0 ，2 0 0 和 2 0 0 0n g m 1 ) 的质量控制( q c ) 样品，每一浓度也都是三样本的，按“血浆样 品处理”项下依法操作，进样检测；在室温放置4h 后，进样检测；在室温放簧 1 2h 后再次测定其在血浆中的浓度。考察雷贝拉唑血样在室温下的稳定性。 8 检测人体血样中雷贝拉唑的浓度 将雷贝拉唑血浆浓度为0 f 2 ，1 0 ，2 0 ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 ，5 0 0 ，1 0 0 o 和2 0 0 0 n g m l 的样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行单样本分析， 进样2n l ，记录色谱图，以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值 为纵坐标，用加权法( w = 1 x ) 进行回归运算，求得的直线回归方程即随行标准曲 线。在人体血样测定过程中，每天都要配制一条随行标准曲线。 将雷贝拉唑低、中、高三个浓度( 10 ，2 0 0 和2 0 0 0n g m 1 ) 的质量控制( q c ) 一 ! 里! ! 兰垫查奎堂堕圭堡塞 样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每隔三小时左右迸一次，根据当日 的标准曲线，计算q c 样品的测得浓度，根据q c 样品结果计算每天的精密度。 取人体血浆样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，进样2 “i ，根据当日 的标准趋线，计算样品的测得浓度。 第二节结果和讨论 1 质谱条件的选择 & ” 图】雷贝拉唑的结构式 雷贝拉唑的n 分子n n 3 5 9 ，结构式如图( 1 ) 所示。由于分子中含有三个n 原 子，在e s i 离子化方式下容易得到一个质子，形成 m + h + ，用正离子检测模式【2 1 。 血样中的内源性物质很复杂，为避免对分析的于扰，采用了选择反应检测 ( s r m ) 模式，选用雷贝拉唑的碎片离子为检测对象。采用选择反应监测( s r m l 时， 质谱仅对一个或几个特征质荷比的离子对进行检测，这样扫描时间仅在一个或几 个特征离子对间分配，大大提高了灵敏度。软件可以将不同质荷比的离子对分开 显示，使得在色潜柱上没有完全分离的药物也能在质谱上区别开来，大大缩短了 分析时间，同时也能降低噪音，进一步提高灵敏度t 1 1 。 从图( 2 ) 中，可看出碎片离子2 4 2 的强度比其它碎片高。为提高灵敏度就要选 择合适的碰撞能，通过比较不同碰撞能条件下碎片的强度，最后确定为2 5 e v 。 q 中国科学技术大学顶士论文 ；# 2 7f r t m ：0 s 2 2 4 3 6 0 a v o o ： 1 2 n 5 l ：0 2 0 【7 1 1 7 e 0 7 0 。4 0 0o q 圈2 雷贝拉唑的m s 2 全扫描图 3 6 0 0 8 7 2 竿# 半4 鲁罂! h 翠掣s 3 4 03 6 03 8 04 0 0 奥美拉唑作为内标，分子量, ；, j 3 4 5 ，结构式见图( 3 ) ，其碎片的选择见图( 4 ) 碰撞能确定为2 8 e v 。 。腹h c h 3 图3 奥美拉唑的结构式 中固科学技术人学硕= e 论文 图4 奥美拉唑的m s 2 全扫描图 2 色谱条件的选择 在e s i 技术中，样品离子的得到首先取决于在喷雾中先形成离子，低的p h 值利于药物分子的质子化，高的p h 值会导致j e 离子灵敏度降低，所以在流动相 中加入0 1 的甲酸陋，6 j ，g i n d y 和钟大放在文献中都提到酸性条件下雷贝拉唑是 不稳定的【2 a ，而本实验在流动相中加入甲酸雷贝拉唑的稳定性较好。可能是因 为前者是用流动相作为复溶溶剂的，若流动相中含甲酸，则与雷贝拉唑作用的时 间较长，其中的醚键会断裂；本实验是用纯甲醇沉淀处理的，流动相中的甲酸直 到进样刁与药物有很短暂的接触，不足以导致醚键的断裂。 液质分析中常用的流动相为甲醇、乙腈、水以及它们不同比例的混合物，所 以尝试了甲醇水和乙腈水的混合溶液，结果表明都能满足实验要求，但甲醇成本 低、毒性小，所以选用甲醇水的混合液作为流动相。然后对不同的流动相比例进 行考察，有机比例太高，药物与干绕分不开；有 j t l l f f l l 太低，分析时间太长，而 中国科学技术大学硕= l 论文 且响应降低。实验结果表明比例为l ：1 比较合适，内源物不干扰药物的检测：如 图( 5 ) 所示，2 0 2 m i n f 拘6 为内源物的峰。 r to 0 0 50 0s m ：is g 图5j 号受试者第七点的色谱图 3 样品处理方法的选择 血浆样品常用的处理有固相萃取法、液液萃取法和沉淀法 56 1 。但固相萃取 成本太高，不适合大批量做样：通过实验对比后两种方法，灵敏度者日能达到要求， 但液液萃取步骤较为繁琐，血浆样品用量大，最后确定用沉淀法。 沉淀试剂一般用甲醇、乙腈、异丙醇等，但甲醇相比较成本低，毒性小，与 流动相相近，而且回收率也高，所以选甲醇为沉淀剂。 4 内标的选择 供选作内标的药物，其色谱行为必须与待测药物相近。一般选择原则如下 6 1 ( 1 ) 只相差一个元素，如同位素内标物； ( 2 ) 互为同系物： 中国科学技术大学硕二l 论文 ( 3 ) 结构相似； ( 4 ) 结构不相似。 最理想的内标应该是雷贝拉唑的氘代物，但其成本太高，而且很难得到。文 献中有关于雷贝拉唑内标的报道是结构相似的奥美拉唑，所以选用奥美拉唑做内 标，实验结果表明奥美拉唑响应很好，色谱行为也很相近，是较理想的内标。 5 ，特异性研究 图( 6 ) 表明，雷贝拉唑和内标奥美拉唑的保留时间分别为3 0 7 和4 o o m i n 左 右，2 0 2 m i n 的峰为内源物的峰，空白f l 浆中的内源性物质不干扰雷贝拉唑和内 标奥美拉唑的测定。 6 a 空白血浆 n l ：27 2 e 1 b p k ，z = 1978 6 0 0 - 1 9 80 b o of s d1o0 0s r mm s 2 3 4 6 1 z 一2 8o o 【 1979 1 19 80 1 1m sb l a n k n l 70 2 e 2 b p e a k m ，z = 2418 9 0 02420 9 0 df s - d = 一10o os r mm s 2 36012 一2 50 0f 2 4 19 4 2 4 20 4 1m sb l a n k 中国科学技术大学硕士论文 6b 1 o n g m l 的雷贝拉唑标准样品 3 4 6 1 2 - 2 80 0 【 3 6 0 12 一2 50 0 【 6c 某受试者口) 报2 0 m g 雷贝拉唑1 5 h 后血浆样品 中国科学技术大学砸二t 论文 图6雷贝拉唑方法学特异性图谱 6 雷贝拉唑血样的测定结果 三天方法确证的标准曲线结果见图( 7 ) ，根据标准曲线，雷贝拉唑的线性范 围为o 2 2 0 0n g m l ，定量下限为o 2n g m l ( s n 1 0 ) ，质控结果见表( 2 ) ，线性系数 o 9 9 ，日内和日间精密度均 0 9 9 曰内和日间精密度均 0 9 9 ，r s d 1 0 ，回收率稳定在8 0 左右，检测时间只有5 m i n ，满足生物样品 检测和高通量的要求。 参考文献 i 化学药物翻翻人体生物翻甬瘦帮生物等效褴研究技术指导踉黜2 0 0 5 2 z h a n gy ，c h e nx yg uq ，z h o n gd f a n a lc h i m a c t a 2 0 0 4 ，5 2 3 ，1 7 1 3 懿歆愚中国药季亭大学硕士论文，2 0 0 3 4 e l g i n d ya ，e l y a z b yf ，m a h e rm m j p h a r mb i o m e da n a l 2 0 0 3 ，3 1 ，2 2 9 5 姚彤炜，缮力笏物分移只浙江大学出版社，2 0 0 1 6 张君仁、藏恒昌，鲈力药笏分方冗化学工业出版社，2 0 0 2 中国科学技术大学硕_ 上论文 第三章赖诺普利制剂的生物等效性研究 第一节实验部分 1 仪器 美h f i n n i g a n 公司t s qq u a n t u mu 1 t r aa m 型h p l c m s m s 联用仪，e s i 离子源 x c a l i b u r l 4 数据处理系统： w i 卜2 型微型旋涡混合仪( 上海沪西分析仪器厂) ； 高速离心机( 德国e p p e n d o r f 公司) ； 安科d i 。一6 0 0 0 b 高速离心机； s z 一3 自动三重纯水蒸馏器( 上海沪西分析仪器厂) ； a c l 3 5 电子天平( 瑞士梅特勒公司) 2 1 供试制剂 赖诺普利片， 2 2 参l k ：, $ t j 齐u 赖诺普利片 生产： 批号：0 3 1 0 0 4 ；规格f1o m g ；，汕头金石制药总厂生产 ( 捷赐瑞) ，批号：c e 5 6 4 ；规格：l o m g ：a s t r a z e n e c au kl t d 2 3 标准品 赖诺普利标准品( 浙江华海药业股份有限公司，含量：9 0 3 ) ； 盐酸伪麻黄碱对照品( 内标，中国药品生物制品检定所提供，批号 1 2 3 7 2 0 0 0 0 2 ，含量：1 0 0 ) ： 2 4 试剂 甲醇( m e r c k 公司) ，色谱纯； 甲酸( t e d i a 公司) ，色谱纯； 水：三重蒸馏水，自制。 中国科学技术大学硕士论文 3 质谱条件 离子源：e s i 源； 离子极性：正离子； 检测模式：选择反应监钡q ( s r m ) 电喷雾电压：4 8 k v ： 毛细管温度：3 4 0 。c ； 源内碰撞电压( s o u r c ec i d ) ：1 0 v 碰撞气压力：1 6 m t o r r ； 检测离子：赖诺普利4 0 6 2 4 6 ，碰撞能2 5 v ， 伪麻黄碱1 6 6 1 4 8 ，碰撞能1 5 v ； 鞘气压力：2 l a r b ； 辅助气压力：1 2 a r b ； 扫描时间：0 5 s 。 4 色谱条件 色谱柱：l i c h r o s p h e r c n 柱1 5 0 m m x 2 1 m m i d 5 9 m ( d i k m a i n ) 柱温：2 0 。 流动相：甲醇：水( 含0 1 甲酸) j , 9 5 0 ：5 0 流速：o 2 m l m i n ； 5 校准用标准与质控样品的配制 5 1 赖诺普利的配制： 精密量取1 0 9 m g 赖诺普利对照品( 其分子中含两分子结晶水，换算成赖诺 普利的质量为1 0 m g ) ，置于1 0 m l 容量瓶中，于其中加入甲醇溶解并稀释至刻度， 涡旋混匀，得到0 1 m g m l 的赖诺普利储备溶液： 用空白血浆依次稀释赖诺普利储备液得到浓度为o 7 8 ，1 5 6 ，3 1 2 ，6 2 5 ， 1 2 5 ，2 5 0 ，5 0 0 和1 0 0 0n g m l 的校准用标准样品，每个浓度都是三样本的：再 用空白血浆稀释储备液得到浓度为1 5 6 ，1 2 5 和5 0 0n g m l 的质控样品，分别代 表低、中、高三个浓度。校准用标准与质控样品都放在冰箱中一2 0 。c 下保存。 中国科学技术大学硕士论文 5 2 伪麻黄碱标准溶液的配制： 精密量取3 6 6 m g 伪麻黄碱对照品( 分子中含一分子h c i ，换算成伪麻黄碱 质量为y 0 m g ) ，置于l o m l 容量瓶中，于其中加入甲醇溶解并稀释至刻度，涡旋 混匀，得到0 3 m g m l 的伪麻黄碱储备溶液；然后用甲醇多次稀释得到3 0 n g m l 的伪麻黄碱标准溶液。 6 血浆样品处理 精确量取o4 m l i i ) l 样，加入2 0 u i 盐酸伪麻黄碱标准溶液( 3 0 n g m 1 ) ，涡旋混 匀；加入l o o p l 盐酸( 0 ，1 r e e l l ) ，混匀；再加入4 m l 提取液( 异丙醇：乙酸乙酪 = l ：2 ，v v ) ，涡旋振荡3 m i n ；1 3 4 0 0 r p m 离，t ：, 1 0 m i n ，提取有机层3 m l ，n 2 下吹 干：用1 5 0 p l 流动相复溶，然后取2 0 p l 进样。 7 方法学确认【1 1 7 1 特异性研究 分别取6 名受试者的空白血浆0 4m l ，按“血浆样品处理”项下操作( 不加内 标溶液) ，进样2 0 皿；将1 2 5 n 衫m l 的赖诺普利溶液依同法操作；取某受试者 口服1 0 m g 赖诺普利8 h 后的血浆样品，依同法操作。考察空白血浆中的内源性 物质是否对检测对象产生干扰。 7 2 标准曲线 将赖诺普利浓度为0 7 8 ，1 5 6 ，3 1 2 ，6 2 5 1 2 ，5 ，2 5 ，0 ，5 0 o 和1 0 0 0n g m l 的样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行三样本分析，进样2 0 p l ， 记录色谱图，以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标， 用加权法( w = l 2 ) 进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线。 7 3 精密度实验 将赖诺普利低、中、高三个浓度( 1 5 6 ，1 2 5 i n 5 0 0n g m 1 ) 的质量控制( q c ) 样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行5 样本分析，连续测定 三天，根据当日的标准曲线，计算q c 样品的测得浓度。根据e c 样品结果计算本 法的精密度，包括日问精密度和日内精密度。 中国科学技术火学硕士论文 7 4 介质效应 用三倍量的甲醇沉淀空白血浆，以得到的上清夜为溶剂稀释赖诺普利储备液 得到浓度为1 5 6 ，1 2 5 和5 0 on g m l 的溶液，每一浓度都是三样本的，而且和质控 血样处理后药物的实际浓度是相同的；另外，用7 5 的甲醇水溶液为溶剂稀释得 到上面浓度的溶液。按“血浆样品处理”项下依法操作，比较两种溶剂稀释的积 分面积的差别，观察介质效应的大小。 7 5 回收率的测定 用空白血浆将赖诺普利储备液稀释为低、中、高三个浓度( 1 5 6 ，1 2 5 和 5 0 0n g m 1 ) 的样品，每一浓度进行3 样本分析。另外用三倍量的甲醇沉淀空白 血浆，以得到的上清夜为溶剂稀释赖诺普利储备液稀释为低、中、高三个浓度 ( 1 5 6 ，1 25 和5 0 0n g m 1 ) 的样品，每一浓度也进行3 样本分析。按“血浆样 品处理”项下依法操作，进样分析，获得相应峰面积( 三次测定的平均值) ，以 每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率，考察该方法回收率的大 小。 7 6 稳定性实验 用空白血浆将赖诺普利储备液稀释为低、中、高三个浓度( 1 5 6 ，1 2 ，5 和 5 0 0n g m 1 ) 的样品，每一浓度都是3 样本的，按“血浆样品处理”项。f 依法操 作，进样检测；在室温放置4h 后，进样检测；在室温放置1 2h 后再次测定其 在血浆中的浓度。考察赖诺普利_ f l 样在室温下的稳定性。 8 检测人体血样中雷贝拉唑的浓度 将赖诺普利血浆浓度为o 7 8 ，1 5 6 ，3 1 2 ，6 2 5 ，1 2 5 ，2 5 0 ，5 0 0 和1 0 0 0n g m l 的样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行单样本分析，进样 2 0 p 1 ，记录色谱图，以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵 坐标，用加权法( w = l ) ( ) 进行回归运算，求得的直线回归方程即随行标准曲线。 在人体血样测定过程中，每天都要配制一条随行标准曲线。 将赖诺普利低、中、高三个浓度( 15 6 ，1 2 5 和5 0 0n g m 1 ) 的质量控制( q c ) 中国科学技术大学碗上论文 样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，每隔三小时左右进一次，根据当日 的标准曲线，计算q c 样品的测得浓度，根据q c 样品结果计算每天的精密度。 取人体血浆样品，按“血浆样品处理”项下依法操作，进样2 0h l ，根据当 日的标准曲线，计算样品的测得浓度。 第三节结果和讨论 1 质谱条件的选择 o n 图1 1 赖诺普利的结构式 o h 赖诺普利的的分子量为4 0 5 ，结构式如图( 1 1 ) 所示。由于分子中含有多个n 、 o 杂原子，在e s i 离子化方式下容易得到一个质子，形成 m + h 】+ ，用正离子检测 模式。在实验中，直接进样一定浓度的赖诺普利甲醇溶液，分别用正、负离子模 式扫描，如图( 1 2 ) 所示，结果表明，正离子强度要比负离子强得多。 中国科学技术大学硕士论文 ：键：攀，鼢1 。18 然；。浅：衙8 m k ( a ) 图1 2 赖诺普利的全扫描图( a ：正离子，b ：负离子) 4 中国科学技术大学颇士论文 血样中的内源性物质很复杂，为避免对分析的干扰，采用了选择反应检测 ( s r m ) 模式，选用赖诺普利的碎片离子为检测对象。从图( 1 3 ) 中，可看出碎片离 子2 4 6 的强度比其它碎片高。为提高灵敏度就要选择合适的碰撞能，通过比较不 同碰撞能条件下碎片的强度， i # 3 d _ 5 3 r t ：3 m 2 7 a 2 v ：1n o l ：1 1 2 3 5 3 e 。m 4 】 最后确定为2 5 e v 。 删z 图1 3 赖诺普利的m s 2 全扫描图 伪麻黄碱作为内标，分子量为1 6 5 ，结构式见图( t 4 ) ；碎片的选择见图( 1 5 ) 最后确定以1 4 8 为检测对象，碰撞能为1 5 v 。 图1 4 伪麻黄碱的结构式 4 2 k v 忙 q 一卅 h f r 阱勺h l ? 。o 卜 1；，。 y 、 叫毽 p 飞 中国科学技术大学砸二 论文 2 色谱柱的选择 图1 5 伪麻黄碱酊m s 2 全扫描图 实验开始时，考察了实验室所有类型的柱子，而且换用不同的样品处理方 法、不同的流动相，但结果都不理想，保留时问都在死时间附近，无法与干扰分 开。所用过的柱子如下所示： i y a t e r sc o s m o s i 】5 c j 8 一m s i i ，1 5 0x2 0 m m t h e r m ob e t a b a s i c 一1 8 ，1 5 0 x2 1 m m t h e r m oh y p e r s i lg o l dc 1 8 ，1 5 0x2 i m m p h e n o m e n e xl u n a5 uc 1 81 0 0 a1 5 0 4 6 m m 通过查阅相关的书籍2 1 认识到，色谱柱中的填料除在正相色谱中可以直接用 硅胶外，其它的都需将硅胶改性与修饰。通常利用基质材料硅胶上硅羟基的反应， 可将特定的官能团或配基以共价键结合，因此便形成了不同极性固定相的色谱 柱，如c 1 8 柱、c 8 柱、c n 柱、n h 2 柱等。赖诺普利分子中有多个羧基和氨基，极 ij|r_1l r _ 中国科学挫术大学硕士论文 性较大，很难与c 1 8 柱的十八烷基结合，容易和c n 柱的腈基结合而在柱子上有所 保留。 可能因为赖诺普利结构中有氨基和羧基，极性比较大，所以在c l8 柱上没有 保留：后来定购了腈基柱：l i c h r o s p h e r c n 柱( 1 5 0 r a m 2 1 m m i d 5 z m ，d i k m a 公司，北京) 。实验汪明，这根腈基柱适于赖诺普利这种较大极性药物的分离。 3 样品处理方法的选择 考察了以下几种处理方法，但回收率都很低， o 9 9 ，日内和日问精密度均 o 9 9 ，曰内和日间精密度均 o 9 9 ，r s d ( 1 0 ，回收率稳定在4 0 左右，检测时间只有5 m i n ，满足生物样品 检测和高通量的要求。 6 0 中国科学技术火学硕士论文 参考文献 化学药物翩裁人体生物翻融瘦和生物等效缝磺究技术强导露戴，2 0 0 5 。 2 刘国诠、余兆楼等著，唐学拉技希，化学工业出版社，2 0 0 1 3t a s h t o u s hb m ，a l a t if q ，n a j i bn mp h a r m a z i e2 0 0 4 ，5 9 2l 4l e i sh j ，f a u l e rg ，r a s p o t n i gg ，w i n d i s c h h o f e rw r a p mc o m m u n m a s s 勋e c t r o m 19 9 9 1 3 ，6 5 0 5 h j l e i s ，g f a u l e r ，g r a s p o t n i ga n dw w i n d i s c h h o f e r r a p i dc o r n l m m m a s ss p e c t r o m 19 9 8 ，1 2 ，15 91 6c o n s t a n t i n o sk ，g e o r g i at ，y a t m i sd y a n n i sl a n a t w ac h i m i c aa c t a2 0 0 5 5 5 1 1 7 7 7j j it a m i m i a i i s a l e m a ，s m a h m o o da l a m b ，q z a m a n b b i o p h a l ，7 i d r u gd i s p o s2 0 0 5 ，2 6 3 3 5 8 张君仁、藏恒昌，彩力药物分移元化学工业出版社，2 0 0 2 童望至! 兰堡查查兰丝主堡壅 一 硕士期间论文 1 j i n c h a n gh u a n g ，y ux u + ，s h ug a o ，l e ir u i a n dq i n g x i a n gg u o ，d e v e l o p m e n to f a l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r ya s s a yf o rt h eq u