呼吸道病检测在儿科临床中的应用PPT课件.ppt

呼吸道病毒抗原检测在儿科临床中的应用,孝感市中心医院李正,主要内容,儿童社区获得性肺炎CAP基础知识儿童CAP病毒病原学常见诊断方法七项呼吸道病毒抗原检测的回顾性分析临床微生物标本的选择和采集病例分析,社区获得性肺炎（CAP）概述,流行病学：美国感染性疾病中居首位，年发病400万，住院100万，平均病死率12%，重症CAP病死率达20%-50%，美国第三大死因；WHO统计每年2,000,000五岁以下的儿童死于肺炎，第二大死因，仅次于心血管疾病；中国第五大死因，5岁以下婴幼儿死亡的首因，每年的死亡率占总人口死亡率的7%1-2,1Williams,B.G.,E.Gouws,etal.LancetInfectiousDiseases.20022中国医师协会急诊分会2015年中国急诊社区获得性肺炎临床实践指南3Ruuskanen,O;Lahti,E,Jennings,etal.Lancet.20114中华医学会儿科分会儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订),病原学：常见病原包括病毒、细菌、支原体、衣原体等，幼儿超过50%CAP由病毒引起，儿童有45%的病毒与细菌的混合感染，而成人中为15%3-4。,社区获得性肺炎CAP病原学,病毒病原：通常引起急性呼吸道感染，感染率儿童随年龄增长而下降，常见包括呼吸道合胞病毒（首位）、副流感病毒、流感病毒、腺病毒、鼻病毒，其他还包括EB病毒、人偏肺病毒、巨细胞病毒等。,细菌病原：肺炎链球菌（首位）、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、军团菌属、结核分枝杆菌等,非典型病原：肺炎支原体（常见于学龄期），肺炎衣原体（学龄期和青少年），嗜肺军团菌（重症CAP）,不同年龄儿童CAP病原特征,不同年龄儿童CAP病原特征,不同年龄儿童CAP病原特征,病原学检查的主要任务,研究感染性疾病的病原体特征提供快速、准确的病原学诊断指导临床合理使用抗生素，提出合理用药建议对医院感染及疾病的大规模传染进行监控,如何诊断？,常见呼吸道病毒的实验室诊断,流感诊疗指南指出：病毒的抗原和核酸检测可以用于早期诊断1；抗体检测可以用于回顾性调查，但对病例的早期诊断意义不大1单一血清标本的流感血清学试验数据不可信2。配对的急性和恢复期血清标本用于测定抗体滴度，适用于回顾性诊断和科研目的2。,1中国卫生部颁布的流行性感冒诊断与治疗指南（2011年版）2HarperSA,BradleyJS,EnglundJA,etal.ClinInfectDis.2009Apr15;48(8):1003-32.,我国指南推荐的病毒抗原检测方法,参考文献：中华医学会儿科分会儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订),抗原检测与血清学检测的本质区别,抗原检出时间最早！,抗原检测优势,1、早期诊断,病毒治疗针对性强：不同的病毒用药不同病毒治疗有时效性：越早用药效果越佳避免抗生素的不合理使用（细菌耐药性问题）,2、抗原检测可极大程度避免漏诊及误诊,漏诊,误诊,阳性：呈现果绿色,阴性：无绿色，只呈现背景色,七项呼吸道病毒抗原检测试剂（D3UltraDFA）实验原理：直接免疫荧光法DFA检测项目：甲、乙型流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒和副流感病毒1、2和3型样本类型：鼻咽拭子、鼻腔灌洗液等一步法染色，快速、灵敏，整个操作2小时内完成,CAP常见呼吸道病毒抗原检测,呼吸道病毒抗原检测原理,甲型流感病毒,乙型流感病毒,甲型流感病毒,乙型流感病毒,甲型流感病毒,呼吸道合胞病毒,腺病毒,副流感病毒1型,副流感病毒2型,副流感病毒3型,检验的特异性:用D3UltraDFA呼吸道病毒筛查和鉴定试剂对多种细胞和微生物进行交叉反应测试。对64种病毒、18种细胞、19种细菌均没有交叉反应。检验的灵敏度也被评估过用以确定检测的最低限。荧光单抗平均能检测出病毒的最低浓度约为1.0PFU。,灵敏度49(6):e66-8.,在这篇报道中，作者的结论是：通过采集高质量的标本（单孔样本中的柱状上皮细胞数达60个以上），从而使检测的灵敏度和特异性均接近PCR，因此DFA试剂能非常有效地对甲型流感病毒进行排查检测。,TheDFAwascalculatedtohaveasensitivityof93%(95%confidenceintervalCI,8%),specificityof97%(95%CI,4%),negativepredictivevalue96%(95%CI,5%),andpositivepredictivevalueof95%(95%CI,7%)relativetoPCR.,临床验证1：与PCR相比,DFA、ELISA和IFA检测结果的阳性率分别为67.6、57.5和39.6。ELISA和IFA与DFA检测结果符合率分别为21.7和31.4。ELISA和IFA与DFA检出病毒相符的患儿采血时发病天数平均值从高到低依次分别为ADV(12.0d)、PIV2(9.6d)、IFV(9.5d)、RSV(5.3d)和PIV3(15.0d)、ADV(9.2d)、RSV(7.4d)。,临床验证2：与血清学检测相比,呼吸道病毒抗原检测的回顾性分析,2017年我院儿童呼吸道病毒感染流行病趋势,DFA用于对不同呼吸道感染的早期诊断,南平市一七项呼吸道病毒抗原检测的回顾性分析,南平市一七项呼吸道病毒抗原检测的回顾性分析,正确的取样对实验成功至关重要！,临床微生物标本的选择和采集,参考文献：中华医学会儿科分会儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订),中国某三甲医院数据：使用抗菌药物治疗的病人中，病原学标本送检率为49.25，送检率最高的是儿科97.00，最低是五官科6.67；病原学送检时机不合理占27.26；采样操作合格率34.78；临床医护人员对微生物标本采集和运送存在不同程度的认知缺陷，对病原学检查结果满意度为68.18。,送检率低,结果阳性率低,取材有缺陷,过早经验用药,吴晓英,宋敏,郭满书等.临床病原学送检现况调查及管理对策J.中华医院感染学杂志,2012,22(20):4586-4588.,临床微生物标本的选择和采集,合格标本：单孔样本中的柱状上皮细胞数达20个以上采样部位：鼻咽部耗材：鼻咽拭子（专利进口呢绒植绒拭子）,正确拭子采样手法：无创！安全！,有关取样Q&A,Q：取样是否会给婴幼儿带来伤害？A：不会，鼻咽拭子取样刷取的是鼻咽部柱状上皮细胞，无创，无交叉感染；另外采用的拭子为特制，绒毛十分柔软，绝不会伤害孩子的鼻腔上皮。Q：可否采用咽拭子？A：咽部主要是鳞状上皮细胞，咽拭子样本的阳性率约为鼻咽拭子的一半*，为了更好的检测，建议使用鼻咽拭子。EvaluationoftheQuidelQuickVueTestforDetectionInfluenzaAandBVirusesinthePediatricEmergencyMedicineSettingbyUseofThreeSpecimenCollectionMethods，JournalofClinicalMicrobiology,July2006,病例分析,女，1岁10月咳嗽1周，发热4天查体：T40.6，HR124次/分，RR32次/分W：13.55Kg，SpO293%神志清，反应可，两侧颊部皮肤可见散在红色皮疹，压之褪色。皮肤弹性好，口唇红润。咽红，未见发绀或吸凹，双肺呼吸音粗，未及干湿罗音，颜面、口唇紫绀，右肺呼吸音略低；心音有力。2017-01-02（我院）血常规WBC5.33109/L，RBC4.721012/L，N48.7，L40.4，HB119g/L，Plt232109/L。2017-01-04（我院）血常规WBC5.28109/L，RBC4.561012/L，N41.3，L51.5，HB117g/L，Plt245109/L，CRP7.1mg/L血气分析乳酸：1.16(mmol/L)，氧饱和度：91.0(%)，二氧化碳分压：32.00(mmHg)，pH：7.35，氧分压：65.00(mmHg)。,病例分析1,胸部X线检测,2017-01-10肺部CT：右侧胸腔积液伴右肺下叶部分肺不张，右肺下叶炎症，双侧支气管炎症改变,实验室检查,2017-01-04，血细胞分析(五分类)(样本:血液)：白细胞数3.82X109/L，中性粒细胞#1.83X109/L，中性粒细胞%.48.20%，淋巴细胞%.44.20%，红细胞.4.14X1012/L，血红蛋白.106.0g/L，血小板总数212X109/L；异常白细胞形态检查(样本:血液)：淋巴细胞%.44.2.00%，单核细胞%.7.80%，中性粒细胞%.48.2.00%；C-反应蛋白6.5mg/L；降钙素原检测(化学发光法)0.509ng/ml；2017-01-04，小儿生化常规(样本:血液)：间接胆红素4.10umol/L，尿素4.20mmol/L，血糖6.42mmol/L，白蛋白35.40g/L，总蛋白54.10g/L，总胆红素5.60umol/L，直接胆红素1.5umol/L，肌酐28.80umol/L，天冬氨酸氨基转移酶63.6U/L，丙氨酸氨基转移酶19.5U/L，肌酸激酶113.0U/L，乳酸脱氢酶524.00U/L2017-01-04，免疫球蛋白组套(样本:血液)：免疫球蛋白A1.15g/L，免疫球蛋白E35.85IU/mL，免疫球蛋白G3.71g/L，免疫球蛋白M0.78g/L；2017-01-04，电解质(样本:血液)：钾3.39mmol/L，钠134.00mmol/L，氯99.00mmol/L；2017-01-04，红细胞沉降率测定(ESR)(样本:血液)：血沉（魏氏法）33.0MM/H；2017-01-04，2017-01-05，血清铁蛋白测定(样本:血液)：铁蛋白186.00ug/L；2017-01-04，呼吸道七联：抗原直接免疫荧光法(DIF)：腺病毒（+）2017-01-05，肺炎支原体血清学试验(样本:血液)：肺炎支原体抗体检测阴性；,诊断,支气管肺炎（重症）（腺病毒肺炎）患儿咳嗽1周，发热4天入院入院查体咽红，双肺呼吸音粗，右肺呼吸音低实验室检查:腺病毒（+）胸片示右下肺可见斑片状密度影,腺病毒肺炎,多见于2岁以下婴幼儿发病有一定季节性，表现为持续高热，肺炎链球菌性肺炎等严重细菌感染不同的是，多伴有喘鸣，以精神萎靡、面色不佳、肺部密集湿哕音为突出表现典型的胸部影像学表现为大片肺实变。,CAP严重度评估,治疗,单纯病毒性肺炎无使用抗菌药物指征B但必须注意细菌、病毒、MP、衣原体等混合感染的可能性c病毒性CAP的支持疗法、对症疗法和加强护理等仍居重要地位,参考文献：中华医学会儿科分会儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订),病例分析2,男，10月咳嗽2天，呼吸困难半天T39，P180bpm，R70-80bpm，Bp90/65mmHg，SpO270%烦躁不安，颜面、口唇紫绀，左肺呼吸音低；心音有力。,病原及针对性治疗,感染指标：WBC、CRP、PCT正常咽拭子呼吸道病原：InF-A(+)诊断：流感塑形性支气管炎治疗及结局：奥司他韦口服、干扰素雾化