新生儿溶血病最新PPT课件.ppt

新生儿溶血病(HaemolyticDiseaseofTheNewborn,HDN),1,学习目标,了解什么是新生儿溶血病、发病机制和临床症状。了解影响HDN严重程度的因素。学习HDN产前和产后的血型血清学检测：对送检化验单和标本的要求、检测项目、检测方法、结果解释。了解HDN的预防、治疗，换血治疗对血液的选择。,2,新生儿溶血病,新生儿溶血病是指母婴血型不合而引起胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病。,3,新生儿溶血病发病机制,新生儿溶血病是由于母体内存在与胎儿红细胞不配合的IgG性质血型抗体，IgG类抗体通过胎盘作用于胎儿、新生儿红细胞，使之破坏产生不同程度的溶血而引起的同种被动免疫疾病。,4,新生儿溶血病发病机制,1、胎儿红细胞进入母体循环系统。2、胎儿红细胞被母体免疫系统识别。3、母体被免疫并产生抗体。4、抗体通过胎盘引起新生儿溶血病。,5,引起HDN的抗体：IgG,6,出生前胆红素的代谢,7,出生后胆红素的代谢,8,HDN的临床症状,水肿：主要见于Rh系统HDN。引起早产、胸腔积液、腹水、心包积液等症状。黄疸：致敏IgG抗体的红细胞被破坏后产生游离胆红素导致。贫血肝脾肿大核黄疸,9,引起HDN的血型系统,ABO系统（最常见）Rh系统（较常见）MNS系统Kell系统Duffy系统Kidd系统等其它：母体自身抗体,10,影响HDN严重程度的因素,胎盘通透性：即胎盘绒毛膜上IgG受体数量越多，则IgG进入胎儿体内的越多。母体抗体效价IgG抗体亚类（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）胎儿、新生儿抗原的强弱（ABO系统）型物质含量（ABO系统）其它,11,ABO系统HDN,ABO系统HDN是由于母婴ABO血型不合，母体的IgG抗A（B）经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿、新生儿红细胞所引起。此病多见于O型母亲所生的A型或B型婴儿，A（B）型母亲所生的B、A、（AB）型婴儿仅少数发生溶血病。原因：O型人的抗-A、B多为IgG抗体（抗-AB）A、B型人的抗-B、A多为IgM抗体,12,ABO血型系统抗体的产生,ABO血型属于组织血型（抗原表位为多糖，分布于人体内除中枢神经细胞外的各种组织细胞、体液和分泌液中）。与组织血型抗原结构类似的多糖物质广泛存在于自然界各种细菌、真菌、植物和动物细胞中。人与这些物质接触可免疫产生ABO血型抗体（IgG、IgM）ABO不相容的妊娠和输血会产生免疫抗体ABO系统新生儿溶血病在第一胎就可以发病,13,影响ABO系统HDN发病的因素,影响ABO系统新生儿溶血程度的因素母体IgG抗-A（B）抗体效价（IgG抗体效价高于64，就有可能引起HDN.）新生儿A、B抗原的强弱型物质的含量胎盘通透性IgG亚类,14,Rh系统HDN,Rh系统HDN是由于母婴Rh血型不合，母体的IgG抗体经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿、新生儿的红细胞。Rh系统抗体的产生：妊娠、输血。没有免疫史的个体第一胎一般不会发生Rh系统HDN，但从第二胎开始以后的胎儿，可能发生Rh系统HDN。因输血已产生抗体的个体，第一胎也可发生HDN。无免疫史而发生的HDN，外祖母学说。Rh系统的HDN的病情严重程度普遍要比ABO系统的严重，常需要换血治疗。,15,Rh系统HDN,16,Rh系统HDN的预防：抗-D免疫球蛋白,17,引起Rh系统HDN的抗体,18,ABO血型不合对Rh血型系统免疫作用的影响,当胎儿ABO血型与母体不合时，可以减少Rh新生儿溶血病的发生，这是由于胎儿红细胞进入母体血循环后，因为ABO血型不合，先遭到孕妇体内抗A、抗B的破坏，从而减少了Rh抗原的免疫作用。ABO同型的RhHDN比ABO不同型的RhHDN要严重。,19,ABO血型相合与不相合,相合是指女（母）血清中ABO系统的抗体与男（子）红细胞上的ABO系统抗原不产生阳性反应。不相合是指女（母）血清中ABO系统的抗体与男（子）红细胞上的ABO系统抗原产生阳性反应。,20,其它血型系统的HDN,只要母体有针对胎儿红细胞抗原的IgG抗体，原则上就会引起HDN。抗体产生的原因：输血、妊娠。一般都比ABO系统的HDN严重。,21,HDN的产前检查,目的：证实哪些孕妇的胎儿会有HDN危险。对这些孕妇妊娠期间定期检测，估计发病的程度，并做适当的预防和治疗。确定最适分娩时间和分娩方式。对新生儿密切观察、进行血液检测和及时治疗。,22,HDN的产前检查,孕妇产前血型血清学检测羊水检测（羊水OD450检测胆红素，有一定风险）超声检测（水肿）检测母体中胎儿的红细胞（检测胎儿血红蛋白的酸洗脱试验、检测胎儿红细胞：流式细胞仪、玫瑰花环试验、微柱凝胶试验等）对胎儿红细胞血型抗原基因检测（PCR检测胎儿遗传物质血型抗原的相关基因）,23,产前血型血清学检查,母体中针对来自于父体抗原的抗体检查：母体血清灭活IgM抗体后，用父体的红细胞进行检测，只有在反应为阳性时才可能引发新生儿溶血病。用O型筛选红细胞来检测母体血清，来确认是否存在ABO系统以外的其它系统抗体。如果存在ABO系统以外的抗体，则要检查抗体的特异性。为孕期治疗新生儿溶血病提供依据。,24,产前血型血清学检查,夫妇ABO、Rh（D）血型夫妇ABO不同型，检测孕妇IgG抗-A（B）抗体效价。孕妇抗体筛查抗体筛查阳性者进行抗体鉴定（抗体特异性）和抗体效价检测。,25,IgM与IgG抗体的区分,巯基试剂中和法：破坏IgM分子亚基间二硫键DTT（二硫苏糖醇）2-Me（2-巯基乙醇）,5个亚基及J链通过亚基间二硫健连接,26,产前检查化验单要求,患者姓名、年龄患者孕周患者的输血史及妊娠史以往的产前检测结果，如ABO血型、Rh血型、抗体筛查结果、抗体效价等对于RhD阴性孕妇近期是否注射抗D免疫球蛋白化验（检查）目的：新生儿溶血病产前检查,27,产前检查样本要求,夫妇双方的样本，其中女方样本5ml，男方样本为1ml。女方血样必须明确标注女患者姓名，男方标注“女姓名之夫”字样。样本需采用EDTA抗凝。建议不要使用血清分离管：因为管中有凝胶，很难获得不被凝胶污染的红细胞，如果红细胞悬液中的凝胶在血型定性试验中被误认为是凝集，则会产生假阳性反应，导致定型错误。,28,HDN产前检查报告,29,HDN产前检测报告的解释,30,HDN产后检测,母和子的ABO血型、Rh(D)血型子红细胞直接抗人球蛋白试验子血清中游离抗体检测子红细胞放散抗体检测母血清灭活IgM抗体后，针对子红细胞上抗原的IgG抗体（ABO、Rh和其它血型系统）效价,31,HDN产后检测化验单要求,母姓名，年龄子性别、出生日期、初检血型，胆红素值母输血史及妊娠史（第几胎，第几产）以往的产前检测结果，如母ABO血型、Rh血型、抗体筛查结果、抗体效价等。化验（检查）目的：新生儿溶血病产后检查,32,HDN产后检测样本要求,母子双方的样本，其中母方样本5ml，子方样本为3ml。母方血样必须明确标注母患者姓名，子方标注“母姓名之子”字样。样本需采用EDTA抗凝。建议不要使用血清分离管：因为管中有凝胶，很难获得不被凝胶污染的红细胞，如果红细胞悬液中的凝胶在血型定性试验中被误认为是凝集，则会产生假阳性反应，导致定型错误。,33,子血样检测,子红细胞直接抗人球蛋白试验子血清中游离抗体检测子红细胞放散抗体检测,34,直接抗人球蛋白试验,35,1、子红细胞直接抗人球蛋白试验（直接Coombs试验，DAT）,如果新生儿红细胞被IgG抗体所致敏，直接抗球蛋白试验结果：阳性。ABO血型系统HDN：DAT一般较弱，常呈弱阳性、可疑阳性或阴性（新生儿A、B抗原比成年少）。Rh血型系统HDN：DAT常呈强阳性。,36,2、子血清中游离抗体检测（间接Coombs试验，IAT）,新生儿血清中的IgG抗体来自母亲，将子血清与A、B试剂红细胞和O型筛选红细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。如果患儿血清中发现有与其红细胞不配合的IgG抗体时，可证实HDN。ABO血型系统HDN：IAT一般较弱，常呈弱阳性或阴性。Rh血型系统HDN：IAT常呈阳性。,37,子血清中游离抗体检测,38,3、子红细胞放散抗体检测,用热放散或其它放散法放散包被在子红细胞上的抗体。将放散液与A、B试剂红细胞和O型筛选红细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。如果患儿红细胞放散液中发现有与其红细胞不配合的IgG抗体时，可证实HDN。,39,子红细胞放散抗体检测,40,母血样的检测,母血清中IgG抗-A（B）抗体效价（ABO系统的HDN有时子血样三项检测均为阴性，母血清中IgG抗-A（B）抗体效价可作判断是否HDN的参考。）母血清ABO系统以外IgG抗体检测和效价测定。（子血清游离抗体阴性时，可用母血清作抗体鉴定，并可用于患儿换血时交叉配血。）,41,HDN检测试验报告,母姓名血型:母:ABORh(D)子:ABORh(D)母血清中免疫抗-A（B）效价：母血清抗体筛选：母血清中抗体鉴定：效价：子红细胞直接抗人球蛋白试验：子血清中游离抗体检测:与A细胞B细胞O细胞子红细胞释放液检测:与A细胞B细胞O细胞,42,HDN的预防和治疗,产前检查：检测是否存在高效价的ABO系统IgG抗体，以及其它系统如Rh系统的抗体。妊娠期内对孕妇的治疗：药物治疗定期检测IgG抗体效价血浆治疗性单采、血浆置换宫内输血新生儿治疗：有药物治疗（如白蛋白、血浆、丙球、激素等）；光照疗法（蓝光）；换血疗法等。,43,新生儿换血治疗的目的,降低血清胆红素浓度，防止核黄疸的发生。用携氧能力强的配合红细胞代替处于加速破坏阶段已被致敏的红细胞，纠正贫血，防止严重缺氧以及心力衰竭。去除新生儿已致敏的红细胞，因为当这些红细胞破坏时会增加胆红素的量。减少在新生儿体内不相容抗体的量。,44,新生儿换血治疗血液的选择,ABO系统HDN：O型洗涤红细胞、AB型血浆Rh系统HDN：抗-D抗体：ABO血型同新生儿的Rh（D）阴性红细胞。其它抗体：ABO血型同新生儿的无抗体对应抗原的红细胞。Rh合并ABO系统的HDN抗-D抗体：O型洗涤Rh（D）阴性红细胞。其它抗体：O型洗涤无抗体对应抗原的红细胞。其它系统HDN：ABO血型同新生儿的无抗体对应抗原的红细胞。其它系统合并ABO系统的HDN：O型洗涤无抗体对应抗原的红细胞。,45,抗-D免疫球蛋白,丈夫为Rh（D）阳性的、无免疫产生的抗-D抗体的Rh（D）阴性孕妇。孕282W、产后72小时内（越早越好）。流产、早产和羊水穿刺后。已免疫产生抗-D抗体的孕、产妇不用。,46,RhD免疫球蛋白治疗,在孕期及分娩时进行注射抗D免疫球蛋白治疗，适用于所有RhD阴性尚未自己产生抗D抗体的孕妇。注射用抗D免疫球蛋白：两个剂量，50微克和300微克。50微克剂量只适用于怀孕3个月内妊娠终止的RhD阴性女性。孕期达到282周的RhD阴性女性，注射300微克抗D免疫球蛋白。在RhD阴性女性分娩后的72小时内，注射300微克抗D免疫球蛋白。,47,试验方法,直接抗人球蛋白试验（DAT）间接抗人球蛋白试验（IAT）中和试验（破坏IgM抗体）放散试验抗体效价测定,48,直接抗人球蛋白试验,试管法在试管中加入1滴2-5%的红细胞悬液（EDTA抗凝血样）。用生理盐水洗涤3遍，末次洗涤后控干上清液（1000g离心1分钟）。加入2滴抗人球蛋白试剂（抗-IgG），混匀。离心（1000g离心15秒）。轻摇试管，用肉眼和显微镜观察、判读结果。,49,直接抗人球蛋白试验,凝胶卡（按厂家使用说明书操作）取10l红细胞加入到1ml稀释液或生理盐水中，配成1%的红细胞悬液（EDTA抗凝血样）。取50l红细胞悬液加到卡中（抗-IgG卡）。离心、判读结果。,50,间接抗人球蛋白试验,LISS-IAT（试管法）在试管中加入2滴血清、1滴2-4%红细胞悬液，混匀。再加入2-4滴LISS液，混匀。37孵育15分钟。用生理盐水洗涤3遍，末次洗涤控干上清液。加入2滴抗人球蛋白试剂，混匀。离心，肉眼和显微镜观察、判读结果。,51,间接抗人球蛋白试验,凝胶卡（按厂家使用说明书操作）在卡中加入1%红细胞悬液50l（用厂家提供的红细胞稀释液），再加入25l血清。37孵育15分钟。离心，判读结果。,52,中和试验,巯基试剂：1、0.01M的二硫苏糖醇2、0.01M的巯基乙醇0.01MDTT与血清1：1混匀。37孵育30分钟。,53,热放散试验（ABO系统抗体）,用生理盐水洗涤红细胞3-4遍。将压积红细胞与生理盐水1:1混合。56放置10分钟，期间要摇动试管。取出试管后立即离心，吸出上清液。检测放散液，用IA