（食品科学专业论文）蜂王浆新鲜度指标筛选与缓解体力疲劳功能研究.pdf

摘婴蜂王浆新鲜度指标筛选与缓解体力疲劳功能研究食品科学专业硕士研究生罗雪雅指导教师周才琼教授摘要蜂王浆( r o y a lj e l l y ) 为5 1 5 同龄工蜂舌腺和上颚腺所分泌的乳白色或淡黄色略带香甜味，并有较强酸涩辛辣气味的乳状液体。它是蜂王一生和雄蜂幼虫前期的唯一食物，类似于哺乳动物的乳汁，又称蜂皇浆、王浆、蜂乳，被科学家指定为世界唯一的、可供人类服用的纯天然胎儿级食品，有极强的营养保健功能和医疗作用。蜂王浆是极不稳定的天然产物，在常温下贮藏会很快失去生理活性，而丧失利用价值。因此一般都要求在一1 8 下贮存，但在蜂王浆的生产及运输过程很难达到这样的条件。就需要建立科学的评判指标判断蜂王浆的新鲜度及常温下短期贮存的方法。本实验通过检测不同贮藏温度及时间下蜂王浆不稳定成份变化趋势，选择其中变化有规律、测定方法相对容易的成分，同时联系蜂王浆主要功能作用，以寻求客观评判蜂王浆新鲜度指标。经实验得出：1 在蜂王浆贮藏试验中，选择可滴定酸度、维生素b 6 、维生素c 、泛酸、超氧化物歧化酶、色泽( 总色差、明度、黄度、变黄度及正偏黄) 指标进行分析。得出：无论在高温还是低温条件下贮存蜂王浆，其泛酸含量均呈逐渐下降趋势，与时间的相关系数也最高( 1 0 和3 7 下r 2 分别为o 8 9 9 1 和o 7 2 2 4 ) ，变化波动小；且检测方法简单、精确度高、仪器( 为高效液相色谱) 较常规便于普及，这也克服了前人研究中的不足。因此选择泛酸进行后续功能试验。3 7 下蜂王浆黄度、变黄度和正偏黄都呈逐渐上升趋势，在前5 天内上升速度最快，第5 天时达到最大值( 分别为：。一7 5 5 8 5 、4 2 2 0 6 和1 0 8 6 5 ) ，从第六天丌始变化幅度减小；组内数据差异达到极显著( p 0 0 1 ) 。因此选择黄度变化率、变黄度变化率及正偏黄变化率( 最大变化率分别为8 0 、1 7 7 和3 1 4 ) 进行后续功能试验。2 将三份同质蜂王浆于3 7 下分别贮存3 d 、5 d 和8 d ，泛酸保存率分别为8 5 1 0 和7 7 2 4 ( 黄度变化率s 8 0 、变黄度变化率s 1 7 7 和正偏黄变化率s 3 1 4 ) 和7 1 。2 5 i西南大学硕士学位论文( 黄度变化率8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率31 4 ) ，进行缓解体力疲劳和耐缺氧功能试验。结果如下：i 当蜂王浆中泛酸保存率为8 5 1 0 和7 7 2 4 ( 黄度变化率8 0 、变黄度变化率s 1 7 7 和正偏黄变化率s 3 1 4 ) 时，小鼠体重与对照相比，前者增加1 0 1 9 ，后者降低4 2 3 9 ；小鼠游泳时间分别高于对照组3 3 1 s 和2 2 3 s ，而小鼠爬竿实验时间分别高于对照9 6 3 4 s 和7 0 。2 5 s ，表明这样的蜂王浆仍具有一定营养价值。i i 当蜂王浆保存率为7 1 2 5 ( 黄度变化率8 0 、变黄度变化率2 1 7 7 和正偏黄变化率2 3 1 4 ) 时，与对照组相比，小鼠体重增加1 5 1 9 、游泳时间及爬杆时间分别比对照组高5 5 s 和1 0 5 s ，说明此时的蜂王浆营养价值已很低基本消失。以泛酸保存率为7 1 2 5 ( 黄度变化率为8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率为3 1 4 ) 作为蜂王浆是否具有营养价值的临界值；3 以蜂王浆泛酸保存率、黄度变化率、变黄度变化率和正偏黄变化率作为判断指标，采用均匀实验设计，探索不同条件下蜂王浆的贮存时间。结果：i 蜂王浆泛酸保存率变化与贮存温度及贮存时间呈负相关( 相关系数分别为一0 3 7 和一o 6 1 ) ，与湿度及与蜜的配比呈正相关( 相关系数分别为o 6 9 和o 1 1 ) ；其中影响最大的为湿度i i 均匀实验设计中，贮存条件1 、3 、4 和7 ，泛酸保存率分别为7 5 5 、7 8 8 、8 0 1 和7 2 9 ，高于蜂王浆具有功能作用的临界值( 7 1 2 5 ) ；此时蜂王浆的黄度变化率、变黄度变化率及正偏黄变化率分别小于8 0 、1 7 7 和3 1 4 。4 、结论：采用泛酸保存率7 1 2 5 、黄度变化率8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率3 1 4 可作为蜂王浆是否具有营养价值及新鲜的临界值。短期贮存蜂王浆：在蜂王浆中加入一定的蜂蜜( 蜜量蜂王浆= 1 ) 、保持温度不高于2 时，可以保存2 1 天左右。i i关键词：蜂王浆营养价值新鲜度色泽泛酸a b s t r a c ts t u d yo nf r e s h n e s si n d e xs c r e e n i n ga n dr e l i e v i n gp h y s i c a lf a t i g u ef u n c t i o no fr o y a lj e l l yc a n d i d a t e ：1 u ox u e y at h t o r ：p r o fz h o uc a i q i o n ga bs t r a c tr o y a lj e l l yi si v o d ，w h i t eo rp a l l l i d e f l a v e n sw i t hs o m e 行a g r e n ta n ds t r o n ga c e r b i t y - p u n g e n te m u l s i o ns e c r e t e db yt o n g u eg l a n da n dm a n d i b u l a r9 1 a n do f5 15d a y sw o r k b e e s i ti so n l ys t u f ro fq u e e nb e e sa 1 11 i f ea n da m l e n 6 l a r v a ep r o p h a s e ，b ea p o i n t e dt ob et h eo n l yn a t u r a lf e t u sf o o df o rm a n k i n d sa n ds i m i l a rt om a m 锄1 i 柚m i l k a l s ob en a m e dr o y a lje l l y 、g e l a t i n ar o y a l i so rb e em i l k ，r i c hi nn o u r i s h m e n t 、h e a l t hm a i n t e n a n c ea n dm e d i c a l t r e a t m e n t t h er o y a lje l l yi st h ee x t r e m e l yu n s t a b l en a t u r a lp r o d u c t ，i tt om i s sp h y s i o l o g i c a la c t i v i t ys t o r a g e da to r d i n a r yt e m p e r a t u r ea n dp o o ri nd i e t a r yp r o p e n y ，s os h o u l db es t o 唱e da t 一18 ，b u ti ti sd i 伍c u l tt oa c h i e v ei tw h e np r o d u c ea n dt r a n s p o r ti t t 1 1 i sd e m a n de s t a b l i s hs c i e n t i f i cj u 姑i n gi n d e xa n ds h o r t t e m ls t o r g em e t h o df o rr o y a lj e l l ya to r d i n a r yt e m p e r a t u r e t h i sa r t i c l ei st od e t e c tt h ec h a n g i n gt e n d e n c yo fu n s t a b l ei n g r e d i e n ti nr o y a lje l l ya td i f 佗r e n ts t o r a g i n gt i m ea n dt e m p e r a t u r e ，t oe l e c tt h ei n d e xw i t hr e g u l a rc h a n g i n gt oj u d g em e 矗e s l l i l e s so fr o y a lje l l ya n dt o 丘n ds h o r t t e m ls t o r g em e t h o da to r d i n a r yt e m p e r a t u r e t h er e s u l t sa r ea sf 0 1 1 0 w s ：1 i ns t o r a g i n ge x p e r i m e n t ，d e t e n l l i n e dt i 矗a t a b l ea c i d i t y 、v i t 锄i n b 6 、v i t a m i n c 、p a n t o t h e n i ca c i d 、s u p e r o x i d ed i s m u t a s e 、c o l o ra i l d1 u s t e r ( e + 、l 。、y i 、d y ia n db + ) ，t h er e s u l t sa sf 0 1 1 0 w s ：s t o r a g e dr o y a lje l l ya tn o to n l yl o wa n da l s oh i 曲t e m p e r a t u r e ，i t sp a n t o t h e n i ca c i dc o n t e n ta l l t a p e r e d ，t h ec o e 伍c i e n tc o r r e l a t i o ni st h eh i g h e s t ( r 2 = o 8 9 9 la t1 0 ，r 2 = 0 7 2 2 4a t3 7 ) ，t h en u c t u a t i o ni ss m a l l ；a 1 1 dd e t e c t i n gm e t h o di se a s y 、d e 黟e eo fa c c u r a c yi sh i g h ，t h ee q u i p m e n t ( h p l c ) i sc o m p 盯a t i v e l yc o m m o n ，a 1 1o ft h e s ea r et oo v e r c o m ed e f i c i e n to fp r e d e c e s s o r ss t u d y s oe l e c t e dp a n t o t h e n i ca c i df o rf u n c t i o nt e s t a t3 7 t h ey i 、d y ia n d b + o f r o y a lj e l l yg r a d u a l l yr i s e d ，b e f o r et h e5d a y st h es p e e dj st h ef a s t e s t ，i ta c h i e v e dt h em a x i m a 】v a l u e ( 一7 5 5 8 5 、4 2 2 0 6a n dl0 8 。6 5 ) ，丘o mt h e6 d a yc h a n g i n g 锄p l i t u d ei sd i m i m s h e d ，i n t e r c l a s sd i s p a r a t i o ni se x t r e m e l yn o t a b l ei i i西南大学硕士学位论文伊 0 0 1 ) s oe l e c t e dy i 、d y ia n d b + c h a n g i n gr a t e ( t h em a x i m a lc h a n g i n gr a t ea r e8 0 、1 7 7 a 1 1 d31 4 ) f o r 如n c t i o nt e s t 。2 s t o r a g e dt h e3s i m i l a rr o y a lj e l l yf o r3 d 、5 da n d8 da t3 7 ，p a n t o t h e n i ca c i dp r e s e r v a t i o nr a t ea r e8 5 1 0 a l l d7 7 2 4 ( y i 、d y ia n d b + c h a n g i n gr a t ew e r e o 0 5 ) b oo2g赵镪馊壤窟3 01 50一r 2 = 0 0 0 4 2零一一。以、鼍一一81 62 43 2贮存天数d图71 0 贮存的蜂王浆的可滴定酸度变化趋势f i g 71 kc h a n g i l l gt e n d e n c yo fd e t e n n i n a t i o no ft i t r a b l ea c i d i t ) ，i n 尺9 膨z 如砂s t o r a g e di i l lo 2 l西南大学硕士学位论文o48贮存天数d图83 7 贮存的蜂王浆的可滴定酸度变化趋势f i g 8t h ec h a n g i n gt e n d e n c yo fd e t e 珊i n a t i 6 no ft i 仃a b l ea c i d i t yi nr 9 妒，屁砂s t o r a g e di n 3 7 3 3 2 2 维生素c由图9 、图1 0 看出：不同贮存温度下，蜂王浆中维生素c 含量均随贮存时间延长呈波动变化趋势。在1 0 和3 7 贮藏一定时间，其维生素c 分别降低了2 4 和2 2 。相关系数r 2 分别为0 2 5 8 8 和o 2 4 2 6 。4 5oo吕栅3 0钿gu1 50o51 01 52 02 53 03 54 0贮存天数d图91 0 贮存的蜂王浆的维生素c 变化趋势f i g 9t h ec h a n g i n gt e n d e n c yo f v ci nr 9 少以，如 少s t o r a g e dj j l1 0 们加o咎。【1m越豁议溪审第3 章蜂王浆储藏试验中不稳定成分变化研究6 0o呈4 5mg蛔|惩3 0gh髫1 50024681 01 23 7 蜂王浆的贮存天数d图1 03 7 贮存的蜂王浆v c 变化趋势f i g 1 0t 1 1 ec h a n g i n gt e n d e n c yo f v ci nr 缈口，七砂s t o m g e di i l 3 7 3 3 2 3 维生素b 6由图1 1 、图1 2 看出：在贮藏过程中，蜂王浆维生素b 6 含量均呈上升趋势，在1 0 和3 7 下贮藏，维生素b 6 含量分别增加了5 8 和1 9 8 。经统计分析，在1 0 和3 7 贮藏，相关系数r 2 分别为o 4 4 6 8 和0 6 8 3 3 ，3 7 下v b 6 含量组内数据差异达到极显著( p g藻h髫4 02 00081 62 43 2贮存天数d图1 11 0 贮存的蜂王浆的v b 6 变化趋势f i g ，1lt h ec h a n g i n gt e n d e n c yo fv b 6i nr c ! ) 榴z ，i l 矽s t o r a g e di n1o 西南大学硕士学位论文0691 21 51 8贮存天数d图1 23 7 贮存的蜂王浆的v b 6 变化趋势f i g 12t h ec h a n g i n gt e n d e n c yo fv b 6i nr 缈口，如砂s t o m g e di n3 7 3 3 2 4泛酸由图1 3 、图1 4 可知，在1 0 和3 7 下，泛酸含量都随着贮藏时间的延长逐渐减少，温度越高减少的速度越快，1 0 下贮存的蜂王浆在第2 9 天时高效液相检测已没有峰值，断定此时含量为0 m 1 0 0 9 。相关系数r 2 分别为o 8 9 9 1 和o 7 2 2 4 ，1 0 下蜂王浆泛酸含量差异达到极显著( p o 0 1 ) ，3 7 下的组内数据差异显著( pg煤h鹫第3 章蜂王浆储藏试验中不稳定成分变化研究qo2鲁、蛔|缸甾燃3 0 0 02 0 0 01 0 0 00 0 0 00j 一、。，上1 02 03 0贮存时间( 天)图1 43 7 贮存的蜂王浆的泛酸含量变化趋势f i g 1 4t h ec h a n g i n gt e n d e n c yo fp a n t o t h e ni n 尺伽，虎砂s t o r a g e di 1 13 7 3 3 2 5s o d 活j l 生如图1 5 、图1 6 所示，蜂王浆中s o d 活性随贮存时间延长波动变化，略有下降；新鲜蜂王浆的s o d 活性4 5 6 3 5 u 僧；1 0 下贮存3 3 d 的s o d 活性为3 0 9 8 4u g ，残留活性约为初始活性的6 7 8 9 ；在3 7 下的蜂王浆经过2 3 d 贮存，其残留活性约为6 4 6 6 ，相关系数r 2 分别o 1 3 1 3 和o 5 2 4 。6 0 0趔蜒吕3 0 000贮存天数d3 0图1 5 蜂王浆s o d 活性变化趋势f i g 1 5t h ec h a n g i n gt e n d e n c yo f s 三口i n 尺c ! y 口，比理yi n1 0 西南大学硕士学位论文o贮存时问d1 21 6图1 6 蜂王浆s o d 活性变化趋势f i g 。1 6t h ec h a n g i n gt e n d e n c yo f - s 匕 di n 只9 胆，虎砂i n3 7 3 3 2 6 小结在所选指标中：可滴定酸度、维生素c 、泛酸、维生素b 6 和超氧化物歧化酶( s o d ) 含量都随贮存温度升高和贮存时间延长而变化。其规律为：i 较低温度( 1 0 ) 下贮存的蜂王浆其可滴定酸度基本稳定，与贮存时间的相关系数仅为o 0 0 4 2 ；在较高温度( 3 7 ) 下贮存，其可滴定酸度略有上升但变化的幅度小，与贮存时间间相关系数为0 8 1 2 3 ；因其在低温下稳定而在高温下不稳定不适合选用此成分继续后续实验。i i 蜂王浆中v c 很不稳定，变化的幅度很大随着贮存时间的延长呈波动变化，没有明显的规律；1 0 和3 7 下与贮存时间的相关系数r 2 分别为0 2 5 8 8 和0 2 4 2 6 。因此不选用此成分继续后面的实验。i i i 无论是1 0 还是3 7 下贮存蜂王浆，其v b 6 含量都随着贮存时间延长而波动变化，最后略有升高，温度越快其变化得也越快。也不选用此成分继续后续实验。i v 蜂王浆中泛酸无论是高温还是低温下贮存均呈现逐渐下降趋势，与时间的相关系数最高( 1 0 和3 7 贮藏r 2 分别为o 8 9 9 1 和0 7 2 2 4 ) ，变化波动小；从泛酸的检测方法及仪器可以看出，其方法简单、精确度高、仪器( 为高效液相色谱)较常规便于普及，这就克服了前入研究中的不足。通过以上分析决定在后续的试验中采用泛酸保存率继续后面的实验。v 无论在较低温度( 1 0 ) 或较高温度( 3 7 ) 下贮存蜂王浆，其s o d 活性0ooo0砌加掣烬8 第3 章蜂王浆储藏试验中不稳定成分变化研究都呈波动变化，贮存温度及时间对其活性影响小，因此不选用此成分进行后续实验。3 3 3 不同贮存温度下蜂王浆色泽变化3 3 3 1 明度差从图1 7 、图1 8 看出：贮存温度不一样，蜂王浆的明度差变化也不一样，在1 0 贮存时蜂王浆明度差呈波动变化，最后略有升高，组内数据差异达到极显著( p 0 0 5 ) 与贮存时间相关系数r 2 = o 6 6 0 8 ，明度逐渐下降。j l | l j赵蜜一4 0贮存时间图1 71 0 下贮存的蜂王浆明度差变化趋势f i g 1 7t m ec h a n g i n g 行e q u e n c yo f l u i i l i n o s i t yi n 尺缈n ，比咖s t o r a g e di n1 0 j l j j魁嚣贮存时间d图1 83 7 下贮存的蜂王浆明度差变化趋势图f i g 18t h ec h a n g i n gf r e q u e n c yo f1 u i l l i n o s i t yi n 尺9 粥f 如砂s t o r a g e di n 3 7 1 5 01 2 0板9 0堡目6 03 0o舻= o 2 0 7 1一再、。t ，r 摹、一。，一a工y vv 一7l1 6 01 2 0极堡8 0借4 0o。咖们：? 黑慧慧慧戆蠢搿的孵a i n 。f i g 1 9t t l ec h 锄g i n g 伽q u e n c yo t 廿1 1 叫“v 一。贮存时间d翼豫絮忑瓣慧慧怒燃强一a i n 3 7 f i 2 2 01 i l ec h a n 西n gf r e q u e n c yo t bl i 掣“一一。第3 章蜂王浆储藏试验中不稳定成分变化研究变黄度如图2 1 、图2 2 ：i o 下贮存的蜂王浆其变黄度呈现波动变化，幅度较大，最后略有降低，与贮存时间相关系数r 2 = o 2 8 6 4 ，组内数据差异达到极显著( p o 0 1 ) ；在3 7 下其正偏黄变化呈现一定的规律性，在前5 天内变化的速度最快，第5 天时达到最大值，其后基本稳定，变化幅度减小，与贮存时间相关系数r 2 = o 2 5 5 ，组内数据差异达到极显著( p 0 0 1 ) 。4 0 0瑙极2 0 0制05 0 04 0 0恻3 0 0牧锹2 0 01 0 00黄度i 4，- 、零每举蝌l3l o1 52 12 5贮存时间d图2 l 1 0 下贮存的蜂王浆变黄度变化率趋势图f i g 21t h ec h a n g i n gf r e q u e n c yo fd y ii n 足够艘，。，砂s t o r a g e di n10 58贮存时问d王6图2 23 7 下贮存的蜂王浆变黄度变化率趋势图f i g 2 21 l l ec h a i l g i n gf r e q u e n c yo fd y ii nr 缈n ，以砂s t o m g e di n 3 7 西南大学硕士学位论文如图2 3 、图2 4 可知：1 0 下贮存的蜂王浆其正偏黄，每一次测定的标准偏差较大，呈现波动变化，最后略有增大，与时间相关系数r 2 = 0 2 3 2 7 ，组内数据差异显著( p o 0 5 ) ；在3 7 下其黄度变化呈现一定的规律性，在前5 天内变化的速度最快，到5 天时达到最大值( 一7 5 5 8 5 ，黄度变化率为8 0 ) ，其后基本稳定，变化幅度减小，与贮存时间相关系数r 2 = o 2 3 3 7 ，组内数据差异达到极显著( p o 0 1 ) 。瑙辍贮存时间d图2 31 0 下贮存的蜂王浆黄度变化率趋势图f i g 2 3t h ec h a j l 西n g 舶q u e n c yo f y ii nr 缈口，以砂s t o r a g e di n1 0 o一3 0 0蓑删。一9 0 0贮存时间d图2 43 7 下贮存的蜂王浆黄度变化率趋势图f 培2 4t 1 1 ec h a n g i l l gh q u e n c yo f y ii n 尺q 妒，比砂s t o r a 喀e dm 3 7 3 3 3 3 总色差由图2 5 、图2 6 可知：而1 0 下贮存的蜂王浆其总色差呈现波动变化，最后略3 0o4o嵋吨确第3 章蜂王浆储藏试验中不稳定成分变化研究有下降变化幅度很小，与贮存时间相关性系数r 2 = o 1 6 4 7 ，组内数据差异达到极显著( p o 0 1 ) ；3 7 下贮存的蜂王浆其总色差变化率逐渐增大，在前5 天内变化的速度最快，到5 天时达到最大值，其后基本稳定，变化幅度减小，与时间相关系数r 2 = o 8 2 3 2 ，组内数据差异达到极显著( p o 0 1 ) 。1 5 0r1 2 0卜蜊9 0f 印蹈6 0l一3 001 01 52 l2 5贮存时间d图2 51 0 下贮存的蜂王浆总色差变化率趋势图f i g 2 5t l l ec h a i l g i n gf r e q u e n c yo f ei nr 缈口，如砂s t o m g e di n1o 1 5 01 2 0j ；l j9 0面增6 03 0058l o1 6贮存时间d图2 63 7 下贮存的蜂王浆总色差变化率趋势图f i g 2 6t h ec h a n g i n g 氐q u e n c yo f ei nr 9 膨，屁砂s t o r a g e di n3 7 3 3 3 4小结i 在1 0 和3 7 下其明度差分别呈波动变化和逐渐降低，变化趋势不同，与时间相关系数r 2 分别为o 0 3 5 4 和o 6 6 0 8 ，因此不选择此指标继续后面的实验；西南大学硕士学位论文i i1 0 下蜂王浆的变黄度和正偏黄都呈波动变化，测定结束时有减小的趋势，黄度呈波动变化，测定结束时略有上升，变化幅度小与时间相关系数分别为o 2 8 6 4 、o 2 0 7 1 和o 2 3 3 7 ；3 7 下其黄度、变黄度和正偏黄都呈逐渐上升趋势，在前5 天内变化的速度最快，到5 天时达到最大值( 变化率分别为：8 0 、1 7 7 和3 1 4 ) ，其后基本稳定，变化幅度减小，组内数据达到极显著( p 0 0 1 ) ，因此选择变黄度变化率8 0 、变黄度变化率1 7 7 及正偏黄变化率3 1 4 进行后续实验，以看其是否能作为蜂王浆新鲜度及营养价值的评定指标。i i i l 0 和3 7 下蜂王浆的总色差分别呈波动变化最后略有减小和逐渐增大，幅度都不大，相关系数分别为o 1 6 4 7 和0 8 2 3 2 ，组内数据间差异均达到极显著( p o 0 1 ) 不适合选用也进行后续实验。3 3 4 不同贮存温度下蜂王浆的感官结果新鲜蜂王浆在1 0 和3 7 分别贮存3 3 d 和1 6 d 的感官评定结果如表4 ，在较低温度1 0 下贮存3 3 d 的蜂王浆颜色变白、黏度略增，有极淡的馊味和异味，但仍具有蜂王浆特有的酸、涩、辛、辣味；但在较高温度下贮存1 6 d 后，蜂王浆在外观上已完全不能接受。表4不同贮存温度下蜂王浆感官签评t a b l e4t h es e n s o 巧a s s e s s m e mo f r q ，口，庞砂i nd i f r e r e n tt e m p e r a t u r e3 4 讨论与结论3 4 1s o d 活性变化前人的研究指出：蜂王浆中的s o d 对温度及其敏感，在5 下保存5 天后活性就全部丧失【2 4 1 。而本实验中在1 0 和3 7 连续测定了一段时间的蜂王浆s o d 活性，结果如图1 5 、图1 6 所示，蜂王浆中s o d 活性随贮存时间延长波动变化，新鲜蜂王浆的s o d 活性4 5 6 3 5 u g ；1 0 下贮存3 3 天的s o d 活性为3 0 9 8 4u g ，残留活性约为初始活性的6 7 8 9 ；在3 7 下的蜂王浆经过2 3 d 贮存，其残留活性约为6 4 6 6 ，相关系数r 2 分别为o 1 3 1 3 和o 5 2 4 ，由实验得出，其s o d 活性较稳定，这与前人的研究结果相异，s o d 的活性是否稳定，还有待于进一步研究；目前s o d 活性的检测3 2第3 章蜂王浆储藏试验中不稳定成分变化研究方法较多，不同的方法得出的结果差异较大，因此探索正确测定s o d 活性的方法也显得尤为重要。3 4 2 维生素c 的变化维生素c 在干燥条件或酸性溶液中稳定，当受潮、遇热或光照下则不稳定，蜂王浆为p h 3 5 4 5 的酸性乳状液，蜂王浆中维生素c 含量的变化如图9 、图1 0 ：在1 0 和3 7 下贮存，蜂王浆中维生素c 含量均随贮存时间延长呈波动变化，总体有下降趋势。数据间差异很大，蜂王浆的成分相当复杂，得出这样的实验结果，可能是取样不准确、或在检测时v c 对外环境太敏感，难于准确检测其含量。因此蜂王浆维生素c 不适合选用来继续后面的实验。3 4 3 结论i 无论高温还是低温条件下贮存，蜂王浆中泛酸含量都呈逐渐下降趋势，与时间相关系数最高( 1 0 和3 7 贮藏r 2 分别为o 8 9 9 1 和o 7 2 2 4 ) ，从泛酸的检测方法及仪器可以看出，其方法简单、精确度高、仪器( 为高效液相色谱) 较常规便于普及，这就克服了前人研究中的不足。通过以上分析决定在后续的试验中采用泛酸含量继续后面的实验。i i 在3 7 下贮存其黄度和正偏黄都在前5 天内迅速升高，在贮存的5 天内变化的速度达到最大( 黄度变化率8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率3 1 4 ) ，从第6 天开始逐渐趋于稳定；因此选用这三个指标来继续后面的动物实验，用以检验在五天前后蜂王浆营养价值及新鲜度，从而判断这三个指标是否可以作为蜂王浆营养价值高低及新鲜程度的评价指标。；用三个指标联合起来判定蜂王浆的营养价值及新鲜度比用一个指标更准确，并且所用的检测设备( 高效液相和色差仪) 较常规，便于普及，同时测得的结果较准确，能克服前人研究中存在的不足。第4 章蜂王浆新鲜度与缓解体力疲劳及耐缺氧功能研究第4 章蜂王浆新鲜度与缓解体力疲劳及耐缺氧功能研究4 1前言强制性国家标准g b l 6 7 4 旺1 9 9 7 保健( 功能) 食品通用标准规定，保健食品一般应含有与功能相应的功效成分，包括：肽与蛋白质类、功能性油脂、功能性甜昧剂、自由基清除剂、维生素类、微量元素类、多糖类、黄酮类化合物等。蜂王浆中含有丰富的功效成分，特别是在肽和蛋白质、功能性油脂、维生素方面有独到之处；蜂王浆是一种特殊的天然生物产品，具有天然活性营养成分；已报道的保健功能：最典型的功能有缓解体力疲劳，同时还具免疫增强作用、抗衰老作用i 促进婴幼儿生长发育和健康作用、健脑益智作用、返老还童作用、美容作用、抗辐射作用、抗氧化作用、降血脂作用、降血糖作用、对心血管系统的作用组织再生促进作用强化性功能作用、增强抵抗力作用、提高运动员成绩的作用、催眠作用等。本实验选用蜂王浆具有的缓解体力疲劳功能及耐缺氧功能，来探索蜂王浆中泛酸保存率、正偏黄变化率、变黄度变化率及黄度变化率与其营养价值高低及新鲜程度间的相关性研究。4 2 材料与方法4 2 1实验材料受试物的制备重庆北碚蜂场购买的刚采收的新鲜蜂王浆和新鲜无色蜂蜜于一1 8 贮存；称取蜂王浆：1 0 0 9 、1 0 0 9 、1 0 0 9 、1 0 0 9 ；一份于一1 8 贮存；另外三份于3 7 中分别贮存3 天、5 天和8 天：然后测定其泛酸含量、黄度、变黄度及正变黄，新鲜蜂王浆其泛酸保存率记为1 0 0 、黄度变化率、变黄度变化率及正偏黄变化率1 ：另外三种蜂王浆泛酸含量与新鲜蜂王浆泛酸含量的比值作为该类蜂王浆的泛酸保存率，黄度、变黄度和正偏黄值与新鲜蜂王浆的比值分别为黄度变化率变黄度变化率和正偏黄变化率，称量蜂王浆加器皿总重以补上失去的水分( 使处理后的蜂王浆不因水分的减少而浓度增加) 。4 2 2主要设备小鼠爬杆架小鼠玻璃游泳缸小鼠专用灌喂针头小鼠群养笼具( 套)紫外光栅分光光度计定制7 0 7 0 x 6 0 c m定制1 2 撑杭州冯氏实验动物器材厂m 5杭州冯氏实验动物器材厂7 5 2上海精密科学仪器有限公司西南大学硕士学位论文手术剪、镊子、1 m l 注射器由重庆北碚医药公司购得数显恒温水浴锅( 3 台)h p l c等等。唧2金坛市富华仪器有限公司日本岛津4 2 3 实验动物及饲养条件实验动物：清洁级健康昆明种小鼠，从第三军医大学实验动物中心购得。饲养条件：饲养温度为2 0 士2 ，湿度：6 5 8 0 ；垫料每周换2 次；每6 天测一次体重：一共喂3 6 天；动物房：用1 0 h 2 0 2 或1 0 瞄m n 0 4 消毒，垫料用1 0 0 的烘箱消毒基础饲料：从第三军医大学实验动物中心购得。基础饲料配方：玉米2 4 5 小麦2 3 ，麦麸1 0 ，脱脂乳粉5 ，鱼粉1 0 ，豆饼( 大豆) 1 2 ，玉米蛋白粉3 ，啤酒酵母2 ，大豆油2 5 ，食盐o 5 ，磷酸二氢钙1 2 5 ，碳酸钙o ，5 ，预混料0 2 5 。4 2 4 实验方法4 2 4 1 实验动物标记与分组啪1选用单一雄性昆明种小鼠6 0 只，体重1 9 士2 9 ，小鼠在购入后饲养观察，3 天后按随机方式将小鼠分成5 组，设空白对照组和4 个剂量组，剩1 0 只作为备用组。为确保各组小鼠间体重无显著差异，对分组后小鼠的体重进行方差分析。每组中的每只小鼠用5 的品红溶液以涂抹法进行标记，记号顺序为左前腿1 ，左腰部2 ，左后腿3 ，头4 ，背腰部5 ，尾基部6 ，右前腿7 ，右腰部8 ，右后腿9 ，不标1 0 。4 2 4 2 给药剂量的确定及给药管理按成人推荐剂量1 9 g d 为基本依据设计剂量：在小鼠( 4 8 c m 2 。计取游泳开始到小鼠游泳疲劳而沉入水中8 秒钟不能浮起为止的时间为游泳时间。尽量避免小鼠的死亡，必要时做人工呼吸将危急小鼠救活。游泳结束后的小鼠用电吹风将毛吹干，待休整一天后第二天继续按原来的方法灌胃给药。4 3 结果与分析4 3 。1 喂养期间小鼠体重变化情况以新鲜蜂王浆泛酸含量1 6 7 m l o o g ( 泛酸保存率为1 0 0 、黄度变化率、变黄度变化率及正偏黄变化率 1 ) 、3 7 下贮存3 d 的蜂王浆泛酸含量1 4 2m 1 0 0 9( 泛酸保存率8 5 1 0 、黄度变化率墨8 0 、变黄度变化率墨1 7 7 和正偏黄变化率s 3 1 4 ) 、贮存了5 d 的蜂王浆泛酸含量1 2 9m 1 0 0 9 ( 泛酸保存率7 7 2 4 、黄度变化率s 8 0 、变黄度变化率s 1 7 7 和正偏黄变化率s 3 1 4 ) 和3 贮存了8 d 的蜂王浆泛酸含量1 1 9m l o o g ( 泛酸保存率7 1 2 5 、黄度变化率三8 0 、变黄度变化率兰1 7 7 和j 下偏黄变化率2 3 1 4 ) 分别饲喂实验小鼠，3 2 d 内其体重变化如表5 ：新鲜蜂王浆组小鼠体重增加最快；新鲜蜂王浆、泛酸保存率为8 5 1 和7 1 2 5 的蜂王浆饲喂的小鼠增重与对照相比分别增加了2 o o g 、1 o l g 和1 5 1 9 ，而7 7 2 4 降低了4 2 3 9 。西南大学硕士学位论文表5 小鼠体重变化t a b l e5t l l ec h a n g eo fw e i g h to ni i l i c e一1 7 61 4 21 2 91 1 9对照组( 泛酸保存率( 泛酸保存率( 泛酸保存率( 泛酸保存率l o o )8 5 1 )7 7 2 4 )7 1 2 5 )称重时间d 、弋初始重2 0 6 1 士o 8 92 0 6 9 士1 2 52 0 6 4 士1 0 42 0 0 4 士1 0 4l8 4 l 土2 0 8第3 天2 8 1 士1 2 42 7 2 6 士1 8 32 7 8 7 士3 2 l2 5 8 5 士1 3 92 4 2 l 士3 2 l第6 天2 8 6 9 士2 0 62 9 9 1 士2 2 52 8 9 8 士2 0 32 7 7 8 士1 4 32 6 9 9 士3 5 2第9 天3 1 8 9 士2 8 33 3 9 5 士2 9 53 2 2 6 士1 6 53 1 6 6 士1 5 43 0 8 4 士3 6 5第1 2 天3 2 0 3 士2 5 23 3 7 8 士3 1 33 3 0 5 士3 0 93 2 4 4 士1 6 63 1 8 3 士3 4 5第1 6 天3 0 6 1 “4 23 2 1 5 士4 3 03 1 2 6 士4 1 22 8 0 4 士4 4 72 8 9 7 士3 3 3第2 0 天2 8 7 1 士3 6 03 0 2 5 士3 4 52 9 5 6 士3 6 l2 8 4 士3 8 22 9 4 士2 9 1第2 4 灭2 9 8 7 士3 9 03 0 1 8 士5 0 32 9 9 士4 o l2 7 8 7 士4 3 42 9 1 7 士3 3 9第2 8 天3 2 0 4 士3 0 83 3 1 5 士3 7 93 2 5 4 士3 0 92 8 1 “9 l2 9 9 士3 4 2第3 2 天31 2 4 士3 3 23 3 0 5 士3 2 331 5 3 士5 9 62 8 3 0 士5 4 l3 0 2 士3 8 6第3 6 灭3 3 6 l 士2 4 83 5 2 士2 7 63 4 6 5 士3 6 52 8 9 1 士6 1 83 0 9 2 士4 8 l饲喂天数( d )：一对照纽一+ 一泛酸含量1 6 7 m g l o o g一- 泛酸含量i 4 2 _ g 1 0 0 9 泛酸古量1 2 9 m g 1 0 0 9一泛酸含量1 1 9 m g t 0 0 9a 蜂王浆中泛酸保存率与小鼠体重增加实验关系b 泛酸保存率与小鼠体重增加相关性曲线图2 7体重增加与泛酸含量相关图f 培2 71 1 1 ef i g u r eb e 似e e nw e i 卧ti n c r e a s ea n dp a m o m e n4 3 2 泛酸保存率与小鼠缓解体力疲劳功能4 3 2 1 爬竿实验结果用经4 3 1 不同处理的蜂王浆来饲喂小鼠，以探索其泛酸保存率与小鼠缓解体力疲劳指标间的实验关系。结果如图2 8 、图2 9 ，小鼠爬杆实验和游泳实验中：新鲜蜂王浆泛酸含量1 6 7 m 1 0 0 9 ( 泛酸保存率为1 0 0 ，黄度变化率、变黄度变化率及正偏黄变化率 1 ) 饲喂的小鼠爬杆时间与对照组均有显著性差异( p 0 0 5 ) ，第4 章蜂王浆新鲜度与缓解体力疲劳及耐缺氧功能研究但趋势明显；新鲜蜂王浆灌喂的小鼠其爬杆时间、游泳时间都要明显高于另外三组；泛酸保存率在7 7 2 4 以上的蜂王浆饲喂的小鼠其爬杆时间、游泳时间都要高于对照组，泛酸保存率越大爬杆时间和游泳时间越长；当泛酸保存率低到7 1 2 5 时其对应时间与对照组差异己很小。对泛酸保存率与小鼠缓解体力疲劳指标进行相关性分析得出：小鼠爬杆时间和游泳时间与泛酸保存率相关系数r 2 分别为0 9 8 1 4 和o 9 8 8 8 ，说明蜂王浆的缓解体力疲劳效与泛酸保存率密切相关。初步判断：当蜂王浆泛酸保存率低到7 1 2 5 时其营养价值基本消失新鲜度很低，高于7 1 2 5 时泛酸保存率越高其营养价值越高越新鲜。4 0 03 2 0逗2 4 0萎1 6 0型8 0o1 11 31 51 7蜂王浆巾的泛酸( m g i o o g )a 蜂王浆中泛酸保存率与爬杆实验关系b 蜂王浆中泛酸含量与爬杆时间相关性曲线图2 8爬杆实验f i g 2 8t h er e s u l to fr a ts t i c k - c l i m b i n g4 3 2 2 游泳实验01 1 9泛酸(m g 1 0 0 9 )2 4 0 0善1 6 0 0蘩装8 0 011 21 41 61 8泛酸( m g l o o g )a 蜂王浆中泛酸含量与小鼠游泳实验关系b 蜂王浆泛酸含量与游泳时间相关性曲线图2 9小鼠游泳实验f i g 2 9t h er e s u l to fr a ts w i m m i n gt e s t4 3 2 3 小结i 蜂王浆中泛酸保存率与小鼠爬杆时间、游泳时间有密切相关( r 2 分别为：3 9搦嬲豳灿囫幽呲圈蚍匝一圜眦孔牝雕觚0一一重苔嬖掣团菡历鬣o00oodo468一一厦譬器蟾西南大学硕士学位论文0 9 8 1 4 和o 9 8 8 8 ) ；i i3 7 下贮存5 天以内( 泛酸保存率7 7 2 4 、黄度变化率s 8 0 、变黄度变化率5 1 7 7 和正偏黄变化率5 3 1 4 ) 的蜂王浆饲喂的小鼠其体重增加、游泳时间及爬杆时间都要高于对照组( 8 5 1 0 的分别高于对照组1 0 lg 、3 31 s 和9 6 3 4 s 、7 7 2 4 的分别高于对照组一4 2 3 9 、2 2 3 s 和7 0 2 5 s ) ，说明泛酸保存率之7 7 2 4 的蜂王浆还具有一定的营养价值；贮存了8 天( 泛酸保存率s 7 1 。2 5 、黄度变化率芝8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率3 1 4 ) 的蜂王浆喂养小鼠其各个指标与对照组比差异性很小( 分别高1 5 1g 、5 5 s 和1 0 5 s ) ，可以得出其基本丧失营养价值；最后采用泛酸保存率为7 1 2 5 、黄度变化率8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率3 1 4 作为蜂王浆是否具有营养价值及新鲜的临界值。4 3 3 耐缺氧实验结果在实验过程中观察到灌喂泛酸保存率不同蜂王浆的小鼠其活跃度完全不同，灌喂鲜王浆泛酸含量1 6 7 m l o o g ( 泛酸保存率1 0 0 ) 的小鼠放入封闭的敞口瓶后非常活跃，坚持的时间最短；饲喂了泛酸含量分别为1 4 2 m 1 0 0 9 、1 2 9m 1 0 0 9和1 1 9m 1 0 0 9 ( 泛酸保存率分别为8 5 1 0 和7 7 2 4 ( 黄度变化率s 8 0 、变黄度变化率1 7 7 和正偏黄变化率s 3 1 4 ) 、7 1 2 5 ( 黄度变化率8 0 、变黄度变化率芝1 7 7 和正偏黄变化率芝31 4 ) ) 的蜂王浆的小鼠进入后则相对较安静，坚持时间也随着泛酸保存率的减小、黄度和变黄度及正偏黄变化率的增大而延长，泛酸保存率与小鼠耐缺氧时间相关系数r 2 = o 8 7 0 6 。泛酸 5 i 存率( )a 蜂王浆泛酸保存率与耐缺氧实验关系1 5 0 0 霸渤。 篙，运9 0 0lr ko 8 7 0 6鐾s o o 筐3 0 0poo 一。o _ l j 一一o1 1 9】2 91 4 2i 6 7泛酸( m g 1 0 0 9 )b 蜂王浆泛酸含量与小鼠耐缺氧相关性曲线图3 0小鼠耐缺氧实验f i g 3 0t h er e s u l to fr a ta n t i - h y p o x i ct e s t4 4 讨论与结论4 。4 1 蜂王浆耐缺