（食品科学专业论文）鸡脑生理活性物质的制备.pdf

摘要 摘要 鸡脑主要由蛋白质和脂肪构成。鸡脑脂肪富禽二十二碳六烯酸( d h a ) 、二十碳四 烯酸( a a ) 等功能性不饱和脂肪酸，是人体大脑高度不饱和脂肪酸的主要组成成分， 是很优质的功能悭不饱和精肪酸资源；丽以脑蛋翻为原料、以脑活素为技术背景，生产 氨基酸和生物活性肽的混合体，具有特殊的生理功能，具有很高的开发价傻。 本研究采用丙酮和石油醚提取鸡脑脂肪，使鸡脑脂肪与鸡脑蛋白得到分离，再用丙 酮萃取鸡脑日譬肪中的目籍肪酸，然赢甭低温冷却与尿素包合褶结合的方法对不饱和脂肪酸 进行浓缩。实验结果表明先用丙酮和石油醚混合溶剂在体积比1 ：2 、温度7 0 ( 2 、时间2 h 的条件下提取鸡脑脂肪，再用3 倍丙酮于常温下萃取其中的脂肪酸3 次，每次1 0 m i n ，脂 肪酸得率可达2 2 。然后用低温冷却与尿素包合相结合的方法浓缩不饱和脂肪酸，其最 佳工艺条件为：先9 0 皂化7 5 m i n ，然羼- - 2 0 冷却1 8 h ，孬以尿素与目旨肪羧之比l ：2 ， 包合温度8 0 c ，时间2 h 的条件下进行反应，最后在一1 0 。c 条件下静置过夜，不饱和脂肪 酸产率为0 0 9 ，脂肪酸的碘值由3 0 2 4 提高到11 8 1 2 。经过气相色谱测定：发现很多功 能性不镶和月旨肪酸含量褥到了明显敕提高，英中二十二碳六烯酸( d 珏a ) 从1 5 提高到 5 5 ，二十碳四烯酸( a a ) 从7 5 提高n 1 0 0 。 将得到的鸡脑蛋白选用胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰强自酶水解。采用单酶、双酶水 解工艺，队承解度、氮溶指数、游离氨荃酸、低分子肽为指标，通过正交试验褥至最佳 水解条件：先用中性蛋白酶于5 0 。c ，p h 8 5 ，加酶景0 8 u m g ，底物浓度为0 5 ，水解 4 h ，后用胃蛋白酶于4 0 ，p h i 0 ，加酶量8 u m g ，水解3 h 。在该条件下，肽得率为7 0 3 8 ， 永解产物的氨基酸含量为2 0 1 ，1 0 k d 分子最以下的肽含量为4 7 ，7 2 ，3 k d 分子堂以下 的肽含量为4 0 1 4 ，l k d 分子量以下的肽含量为2 9 0 3 。对中性蛋皂酶和胃蛋白酶的双 酶水解产物以及经超滤得到的l k d 分子薰以下的水解产物进行肽谱检测，其主峰保留时 闻与脑活素标准品一致。 本文的鸡脑月警肪酸盼铡备方法，使不饱和脂媵酸的提取和浓缝稷好圭| 壁结合起来，从 而提供了种高效的不饱和脂肪酸的提取、分离、纯化技术，为动物脑脂肪的利用开辟 了新途径：采用本方法制备的鸡脑蛋白水解物，肽含量高，从而改变了传统动物脑蛋白 承解物类产晶均以氨基羧为主要成分的现实。 关键词：脑活素，龌白酶，脂肪酸，二十二碳六烯酸，二十碳四烯酸 a b s t r a c t a b s t r a c t c h i c k e n sb r a i nc o n t a i n sp h y s i o l o g i c a la n da c t i v ei n g r e d i e n tw h i c hi sc o m p o s e dm a i n l y o fp r o t e i na n df a t t y t h em a s s i v ef a ti nt h ec h i c k e n sb r a i nw h i c hi n c l u d e st h ef u n c t i o n a l u n s a t u r a t e df a t t ya c i dr i c h l ys u c ha sa r a c h i d o n i ca c i d ( a a ) a n dd o c o s a h e x a e n o i ca c i d ( d h a ) a aa n dd h aa r et h eh u m a nb o d yc e r e b r t u - nh i 曲l yu n s a t u r a t e df a t t ya c i d sm a i nc o m p o n e n t a n dt h e v e r yh i 出q u a l i t yf u n c t i o n a lu n s a t u r a t e df a t t y a c i dr e s o u r c e s 。w h i l ec h i c k e n s c e r e b r o p r o t e i nh y d r o l y s a t ew h i c hi sp r o d u c e db yc e r e b r o l y s i nf o rt e c h n o l o g i c a lb a c k g r o u n d a n dc h i c k e n sb r a i na sr a wm a t e r i a l sh a s 鑫g o o dd e v e l o p m e n ta n db e 蠡v o m b t ef o rh u m a n b o d ya b s o r b a n c ew i t hs p e c i a lp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o na m i n oa c i da n dl i v i n gb e i n g sa c t i v e p e p t i d e t h ee x p e r i m e md r a w sc h i c k e n sb r a i nf a tb yt h ec o n d i t i o no fm i x e ds o l v e n t sw i t h a c e t o n ea n dp e t r o l e u mt os e p a r a t ef a ta n dp r o t e i n t h i sr e s e a r c he x t r a c t sf a t t ya c i df r o m c h i c k e n sb r a i nf a tw i 呶a c e t o n ea n dt h e n a d o p t sl o wt e m p e r a t u r ec o o l m e t h o da n du r e a w r a p p i n gu pm e t h o dt oc o m b i n et o g e t h e rf o rc o n c e n t r a t i n gu n s a t u r a t e df a t t ya c i d t h e e x p e r i m e n te a r lw o r ko u tt h a tt h ef a td r a w e db yt h ec o n d i t i o no fm i x e ds o l v e n t sw i t ha c e t o n e a n d p e t r o l e u m i n t h e v o l u m er a t i ol ：2a n d t e m p e r a t u r e o f 7 0 i n t i m e o f 2 h a n d t h e n t h e f a t t y a c i de x t r a c t e df r o mc h i c k e n sb r a i nf a tb ya c e t o n ei nt h ev o l u m e1 ：3a n dn o r m a lt e m p e r a t u r e i nt i m eo f2 ht h r e et i m e sr e a c h e st h eh i 痨e s ta m o u n t2 ，2 。t h i sr e s e a r c ha d o p t sl o w t e m p e r a t u r e c o o lm e t h o dw i t hu r e a w r a p p i n gu pm e t h o d t oc o m b i n e t o g e t h e r f o r c o n c e n t r a t i n gu n s a t u r a t e da c i d ，t h eb e s tp r o c e s s i n gc o n d i t i o n sg o ta r e ：s o a p e da t9 0 ，7 5 m i n 。 越一2 0 c o o li n1 8ha n dt h e ni nar a t i oo fl ：2w i 搬u r e aa n df a t t ya c i d ，a tt e m p e r a t u r e8 0 ， r e a c t i n gt i m ef o r2 h ，t h e np u tu n d e r 一1 0 tq u i e t l ya l lt h en i g h t b yd o i n gt h a t ，w ec a nm a k e t h ed r a w i n gr a t i oo 0 9 ，t h ei o d i n ev a l u eo f f a t t ya c i do fc h i c k e nb r a i nr i s e df r o m3 0 2 4t o 1 1 8 1 2 w e f i n d t h ec o n t e n t o f f u n c t i o n a l u n s a t u r a t e d a c i dd e t e r m i n e db y g a sc h r o m a t o g r a p h y h a sb e e ni m p r o v e do b v i o 璐觋d h aa m o n gt h e mr i s e df r o m5 。5 t oi 5 ，a ab r i n g e df r o m 7 5 t o1 0 o ： c h i c k e n sc e r e b r o p m t e i nw a se n z y m a t i c a l l yh y d r o l y s e du s i n gp e p s i n ，n e u t r a lp r o t e a s e ， t r y p s i na st h eh y d r o t y t i c a g e n tb ys i n g l ee n z y m e ，d o u b l ee n z y m e t h eb e s tc o n d i t i o n so ft h e 珏 h y d r o l y m so fc h i c k e n sc e r e b r o p r o t e i nh a v eb e e nf o u n db ym a k i n go r t h o g o n a lt e s tb a s e do n h y d r o l y s i sd e g r e e ，n i 【r o g e nd i s s o l v i n gi n d e x ，d i s s o c i a t i n ga m i n oa c i d ，l o wm e m b e rm e a s u r i n g o fp e p f i d e t h ec e r t a i n e do p t i m u mc o n d i t i o nw h i c hi sh y d r o l y s a t e db yd o u b l ee n z y m ei s n e u t r a lp r o t e a s eh y d r o l y s i sf o r4h o u r sa t5 0 。c ，p h 7 0 ，e n z y m ea m o u n to 8 u m g ，t h e s u b s t r a t e sc o n c e n t r a t i o n w a so 5 a n d t h e n t h ep e p s i n h y d r o l y s i s f o r3 h o u r sa t 4 06 c ，p h l 0 ， e n z y m ea m o u n t8 u m g t h ep e p t i d e 、a m i n oa c i d 、p e p f i d eo f m o l e c u l a r - w e i g h tu n d e r1 0 k d 、 3 k d 、l k da r e7 0 3 8 ，2 0 1 ，4 7 7 2 ，4 0 1 4 ，2 9 。0 3 r e s p e c t i v e l gf r o mt h e c h r o m a t o g r a mo ft h ep e p t i d eo fh y d r o l y s a t ea n dt h ep e p t i d eo fm o l e c u l a r - w e i g h tu n d e rl k d o fh y d r o l y s a t ew h i c hw a ss e p a r a t e da n dp u r i f i e db yu l t r a f i l t r a t i o nm e m b r a n ew i t hd o u b l e e n z y m eo fn e u t r a lp r o t e a s ea n dp e p s i n ，w ec a nd e t e r m i n et h a ti t sp r o m i n e n tp e a kr e t e n t i o n t i m ei sc o n s i s t e n tw i t ht h ep e p t i d eo fs t a n d a r dr e f e r e n c e ss a m p l eo f c e r e b r o l y s i n t h em e t h o do fu n s a t u r a t e df a t t ya c i d sw i t h d r a w i n ga n dc o n c e n t r a t i n gm a k e st h e w i t h d r a w i n ga n dc o n c e n t r a t i n go ft h eu n s a t u r a t e df a t t ya c i du n i f yv e r yw e l la n db e c o m e o n e m e t h o do fh i g h l ye f f e c t i v ew i t h d r a w i n g ，s e p a r a t i n ga n dp u r l f y i n go fu n s a t u r a t e df a t t ya c i d b yt h er e s e a r c ho ft h ec h i c k e nb r a i n sf u n c t i o n a lf a t t ya c i d ，w ed e v e l o p e dt h ea n i m a lb r a i n s f a ti nt h ef i r s tt i m e t h em e t h o do fp r e p a r a t i o no fc h i c k e np r o t e i n sh y d r o l y s a t ec a nm a k et h e i n g r e d i e n to fp e p t i d eh i g h e rt h a nc e r e b r o l y s i nm a d eb e f o r ew h i c hi sm a i n l ym a d eu po fa m i n o a c i d k e y w o r d ：e e r e b r o l y s i n ，p r o t e i ne n z y m e ，f a t t ya c i d s ，d o c o s a h e x a e n o i ea c i d ( d h a ) ， a r a c h i d o n i ca c i d ( a a ) i l l 关于硕士学位论文使用授权的说明 论文题磊：三丝壁垒理渔：逵塑鱼垫竺盗 本学位论文作者完全了解大连轻工业学院有关保留、使用学位论 文的规定，大连轻工业学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论 文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文 的内容相一致。 保密的学位论文在勰密蜃也遵守此裁定。 是否保密( 罨) ，保密期至 年月曰为止。 学生签名：垂3 宝连导师签名：墨塑塑! 协b 年q 月。日 第一章文献综述 第一章文献综述 鸡驻缝织墨含鸯缀多对久俸链袋蠢蔻夔生理活我纺震，鬟圭要凄谯覆蛋巍震穆饯震 脂肪构成，鬣白质含薰为5 2 6 9 ，脂肪含量为3 6 8 0 ，具有很高的汗发价值。 高伶不镪和脂肪羧( p o l y u n s a t u r a t e df a t t ya c i d s ，p u f a ) 黠人类摄多痰瘸兵毒骥聂 的预防和治疗作用，临床上商延缓动脉粥样硬化、降赢脂、降胆固醇及降低实验性动物 肿瘤螅发生攀秘降低其生长遮度的嚣用【l 刃。2 0 世纪3 0 6 0 每代，秘学家已经要渍必震 脂肪酸是保证人体生长发育、细胞新陈代谢以及维持皮肤完整性不可缺乏的物质。2 0 世纪瓣年代，科学家发现7 驻麻酸、二十碳赢烯酸( e p a ) 、二卡：碳六爝羧( d h a ) 等功能性不饱和脂肪酸，在预防动脉硬化的心脏病方面十分突出，所以称其为降血脂明 星。以富含大量高价不饱和月鬟肪酸的惫类为主的膳食习惯能够保持人 j 的心赢管健康， 但是日常生涵中大多数人不能天天咤深海鱼，同时由于生产和加工方面的技术原因，使 人们对一些食品中含有的不饱和脂肪艘吸收利用率很低，因此导致体内多不饱和脂肪黢 严重缺乏，而饱和脂肪酸却大量积累；所以寻求新的不饱和脂肪酸资源以及对其进行开 发研究便成为急需要解决的事情。 长期以米人们一盥研究搬动物脑组织中的蛋白成水解成氨基酸和低分子肽，用栗治 疗脑赢管代偿不足所致的功能失调、中风、脑记忆障碍和脑外伤引起的功能紊乱、胺振 荡螽逡症等痰病i 3 j 。貔物藏蛋自承解物类产懿作为这类疾病的特效药，近年来得到了广 泛关注，它的化学成分、药理作用、临床应用等都已得到不同程度的研究，发现了甲硫 氨酸精鹰 获、自氨酸脑蹲获、斑管投缩素l 、 l 均燕入体内鼹有生理活性的小分子款， 为多种心脑觚管疾病治疗和保健品的商效成份。是脑鬣白水解物的重蒙成份。但是这些 动物簸蛋自承解耪类产品帮帮黻氨基黢为主簧或分，所瑷急弼需要开发出富含低分子救 的脑胬白水解物。 1 1 鸡脑多价脂肪酸的制备 1 1 1 脂肪酸组成 脂肪是黧物体的能量来源及能量贮存物质，也是体组织的重要组成成分f 4 】。脂肪酸 第一章文献综述 是缎或鹰黪豹基本戏分，瑟翳酸是塞碳、鬣、戴三耪元素维戏麴一类纯会彩。鬏摆艨蕊 酸分子结构中碳链的长度分为短链脂肪酸( 碳链中碳原子少于6 个) ，中链脂肪酸( 碳链 孛碳原子6 1 2 个) 耱长链滕茨酸( 碳链中碳原子怒避1 2 个) 三类。一般食狻所含黪脂 肪酸大多是长链脂肪酸，碳链的长度分为。碳键上存在有两个或以上双键的脂肪酸称为 多不饱和滕肪酸，从碳分子阙双键出现的位器看，分必- 3 、c e - 6 多不饱和脂肪酸暇。 r o - 6 多不饱和脂肪酸是指从脂肪酸的甲繁端( 端) 开始，第一个不饱和双键出现在 第6 期第7 个碳原子之间，这一类型的多不饱和脂肪羧主要包括；亚演酸、争驻麻酸及芘 生西烯酸，也们具有降低疆蔺醇的作用 6 1 。 洳3 多不饱和脂肪酸是攒从脂肪黢的甲熬端( 端) 开始，第一个不饱和双键出现在 第3 和第4 个碳原子乞阊，这一类型的多不饱和脂肪酸主要趣括：静驻麻酸、二十碳赢烯 酸( e p a ) 和二十二碳六烯酸( d h a ) 【刀。两心3 型多不饱和脂肪酸特别弓1 人关注，不仅 毽为它们是生物细臌膜的重嚣组分，而且在擞物体内有着十分重要的生理功能和保健作 剧舯。 。 1 1 2 脂肪黻来源 由于伊3 和6 p a 在人体内不能合成，必须由食物供给。目前开发功能性不饱和 骀糖羧熬原料主要罴援物鄹深海鱼，铡奶# 惫淫积海狻油枣塞会二+ 碳五爝羧( 毯a ) 和= 十二碳六烯酸( d 姒) ；e - 6 p u f a 含量较高的油脂有：甄花油、棉籽油、玉米油等； 争亚窳酸属予t e - 3 p u f a ，在月见莘浦、黑加会籽油孛鸯量较舞。 ：十二碳六烯酸( d h a ) 的主簧来源是从鱼类尤其是海洋鱼类中摄取，如秋刀惫、 沙了惫、鱿熊、鲑鱼、鳕鱼、鲣鱼等酆含有较丰富泌d h a 。惫油中的e 弘和d h a 会慧霆 鱼种、产她、季节、鱼龄、太小及缎织器官的不同而异，淡水鱼油中含量很少，海产鱼 油中的含量糍强3 2 2 、d h a 5 2 8 ，含爨变化缀大。鱼池资源受到这些囊然条锉的 限制，鱼油产品十分昂贵。所以，现在入们藏在努力歼辟e p a 和d h a 的新资源，生产e p a 和d h a ，从褥大大地降低生产成本，保证良好的品质唧。 我国是馓界上第一产肉大国，禽畜产品加工业中产生7 大量的下脚料，其中动物脑 富含蛋白质和脂肪，丽脑脂肪仍未被人们开发利用。鸡脑组织中十八碳三烯皴( 亚廉袋) 0 6 ，二十碳四烯殷( 花生四烯酸) 7 5 ，二十二碳六烯酸( d h a ) 1 5 ，与入脑中 的脂肪酸构成非常樱似，脂肪酸成分缩构很念理，是非常优质的脂肪资源，具有很麓的 开发价值。 2 第一章文献综述 ， 。l 。3 多稔苓饱秘l 鬟黢酸竣凌貔 1 3 1 多价不饱和脂肪酸的功能 对动物和人的研究表明，6 和3 脂肪酸在人体内不能合成，需要从食物中摄取， 所以怒人类极其需要於充的月器肪酸o l 。不饱和l 鬟肪酸在极体内县有较广泛鲍生理功能簿 生物学效应，而且双键愈多，不饱和程度愈商，营养价值也愈高。多不饱和脂肪酸具有 维护生物膜蛉结构和功能 t q 、治疗心斑管疾癃、抗炎【1 2 t 、抗癌以及促进大脑发弯、减肥 等生理功能，尤其最为显著的作用是岛生命早期的神经发育和感觉系统的成熟有关。加 入w t o 标志麓我国将进入公开、公平、公正全方位竞争的社会，在这样的社会中要立予 不败之地，智商的高低将起决定性作用。因此，怎样便孩子聪明以成为众望所归h 3 1 。阑 外有关增强小儿智商的研究发现，小儿智商的蔫低受多方面因素的影响，如遗传因素、 周边环境、教育状况、营养等，但大鬃的研究证明，缺乏组成大脑脂质的脂肪酸是引起 大脑功能不良的重要鼹索。研究证实大脑脂肪黢主要是二十二碳六烯艘( d h a ) 和花嫩 西烯羧( a a ) ，这些脂肪酸是从胎儿到脑功能发育完成不可缺少的物麓基础。a a 和d i - i a 是高不饱和脂肪酸中最为重要的两种多不饱_ 和脂肪酸，它们可以顺利遇过血脑屏障，从 而通过补充a a 和d h a 来强化入体大脑、智力和视力系统的生长发育，为a a 莘隧d h a 不足 或代谢失衡所导致的痰病提供良好的蒋养来源。因此，按比例足量供给这些不饱和脂肪 酸，对大藏功能的或长发育极其重要h “。 1 ，1 3 2 亚麻酸的功熊 通常所谓的噩麻酸魑指洳豫麻酸，为全顺9 ，1 2 ，1 5 十八碳三烯酸 c h 3 c h 2 c h = c h c h 2 c h = c h c h 2 c h - - c h ( e 鹣) 7 c o o h ，存褒予谗多攘物溜，海洋动 物脂肪中。p 驻麻酸怒静亚麻黢的同分异构体，简称g l a i l 埘，为全顺- 6 ，9 ，1 2 十八碳 三烯羧。 ”亚麻酸、甜亚麻酸均为人体必需脂肪酸f 1 6 1 ，摄入适量的距麻酸，对预防动脉硬化、 心脑赢管癃、癌症l l 、糖尿瘸、痴呆痰、抗衰老等疾瘸有重要作用。她外，它慰调节免 疫功能、抵御皮肤病及病毒感染、防护学生视力等也有积极作用。因此，小驻麻酸、p 亚麻酸在国钋又有维生素f 和植物黄金豹美称 1 8 1 。 1 1 3 3 花生四烯酸( m ) 功能 藏釜嚣烯羧( a r a c h i d o n i ca c i d ) 麓稼a a ，是5 ，s ，1 1 ，1 4 二+ 凝西浠酸，宅是久 体非常需要补充的脂肪酸。该脂肪酸禽有2 0 个碳原子，4 个双键，第一个双键起始于甲 第一章文献综述 基端起第6 个碳原子，放属予秘6 系粼戆多不键农聪耱酸，繁记为2 0 ：4 ( 国) 【嘲。 从存在于在人体脑和神经组织的多不饱和脂肪敬中，熄人体最重要的、含量最丰 富的二十碳多不饱和滕肪酸之一，占4 0 5 0 ，在棒经末携蓉至毫逸7 0 ，惩鬻人黪盘 浆中，含蠢遮4 0 0 m g l 2 0 。a a 具有酯化胆阐醇、抑制血小板聚集、增加血管弹性，降 低血液黏度、调节自细胞功能、提糍免疫力笛一系列生理瀵性。此外，a a 还参与调苓 多种激素和神经敢，如催产豢、胰岛素、胰裔血耱素等的分泌。其营养保健功能体现在 婴幼儿生长发育( 特别是婴幼儿智力及视神经发育) 、孕产j e i 营养以及预防心脑盘键疾 病、耱尿瘸、耱瘩等许多方颟瞄j 。蹲乳中婺j l 生长发育相关的多不饱和脂肪酸主簧是 e p a 、d h a 、a a ，母乳脂质中a a 为0 6 o 3 虽然人体能使亚麻黻转化成a a ，能实 际逡远不是。国际羧农藕至畿组织建议：姿，0 鬣方蓊粉斑含肖娶，l 体熏_ 6 0 m g k g 韵a a 花生四烯酸和d l 弧具有艇补作用，两者拔一定比例配合使用，可以更有效地促进婴 妨强煞譬力麓弯菊撬亵程敏发。研究袭暖，蘧强纯a a 移d l a 配方奶糖嚷券 7 两弱臻幼 儿与用非强化a a 和d h a 配方奶粉的婴幼儿比较，智商平均高出7 分乏多除此之外， a a 逐憩平餐建渣孛戮t 埘婴幼，l 戆受痒霉硼。 1 1 3 4 二十碳五烯酸( e p a ) 的功能 e p a ( e i c o m p c n t a e n o i ca c i d ) 被专家称为血液清洁剂。e p a 的主要作用怒在血中帮 助制造某种前列腺素( p r o s t a g l a n d i n ) ，这种前列腺素能有效的抑制斑小扳凝固，减少 盘稔形成，预防盘稔，葡时掰降低鞭阉醇，减少血液中豹三酸营脂和血液秸稠度，保持 血液循环畅邋。e p a 还可有效的对血管壁进行清洗，降低血脂，进1 搿达至减少血栓形成 懿效莱。掰潋麟预防帮治疗冠状谚酥硬纯住心脏病，动躲硬化、心飘梗塞、脑溢血 和高衄压等心脑血管疾病有绝佳功效。e p a 她有激滔脑神经遇质，使信息传递和处璞速 度大大燕倏豹佟溺，嚣嚣氇怒决定太藏反瘦能力静关键溺l 。 1 1 3 5 二十二碳六烯酸( d 队) 的功能 d h a ( d o c o s a h e x a e n o i ca c i d ) 作为一种踅要的多不饱和脂肪酸物质，是人脑中0 - 3 多不饱和脂肪酸的主要成分，同时更是能够进入脑缨胞的少数物质之一。d h a 可以预防 和治疗心血警疾病、预防与治疗癌症、调节中枢神经系统功能和视觉系统，并可改善大 脑学习与记忆能力i 描，因此，俗称“脑黄金”。日本学滋的实验表明大脑中d h a 台 量的降 低胃浮致学习记忆能力的减邋。翠产j l 因为不能从母体获得充足韵d h a ，饱们得神经系 统疾病( 如弱智等疾瘸) 的机率较正常出生的婴儿赢。因此建议妇女怀孕期及婴儿大脑 发育荦羯应食蘑静3 多不饱和脂肪酸禽量高的食品潞】。荚国营养学会公布成年入每天多 4 第一章文精综述 不锪秘黪膀簸戆摄入霪最好必l 。o l + 5 竞。 1 1 4 不饱和脂肪酸的营养平衡 为了促使大脑功能的良好发育，饮食中不饱和脂肪酸的供给是不能缺少的，同时还 必须淀意平键供绘。渡麓孛多烯酸熬营养窝保健功戆取决于o - 3 型襄o - 6 型戆魄移l ，如果 摄取过量的c o - 3 型多烯酸，这种不平衡反而会导致心胤管疾瘸的发生。问题怒目前尚无 一个平衡的黧化标准，嚣此瓣裁多用正常母巍脂肪缀残作失标准，霹本人戆魄倒是： c o - 6 ：1 0 - 3 = 1 ：4 5 ，这个比数与重新规定推广的日本人营养需瑟量大致相同，但是欧美人 的母瑰中o - 6 ：酗3 大致为l ：1 0 。 但由于洳3 系列中的亚油酸，其降低胆圈醇作用会随着它在总摄入量中所占的比例 丽变化；另一方蘧，由于昏3 系列与静6 系列之阗不能相互转化。困毖人体摄入的多不饱 和脂肪酸在数量上及阮例要襁合理的前提下，这些脂肪酸才能表现出较好的效果，医此， 鱼油最好和c o - 6 型多烯酸搭配食用。某些脂肪酸摄入不足、过薰或比倒不合逸，将会使 人体内的代谢平衡发燕变化，从而弓l 起多种痰病的发生。世界卫生组织和联裔国粮农组 织为此提出膦食脂肪酸的建议：饱和脂肪黢：单不饱和脂肪酸；多不饱和脂肪酸为 l ：l ：l 吲，困貌，有必要对犬爨的混会脂肪酸迸行分离、褥纯、重组。 。 多绘苓键窃疆魅酸戆枣殇蘩豢 多不饱和脂肪酸对人体具毒重要的保健功能，缎现在世界上d h a 纯燕及其添加食晶 的生产厂家主要集中在日本、美国，我国只肖小规模的生产，而添加有d h a 的营养补充 剂主要依赖进口。对予多不饱和脂肪黢的提取，目前国际市场上主要以海洋鱼油为原料， 迢鱼油中提取豹多不饿和脂脐酸含有难以除去的鱼塍睬和胆圈醇，影响了其猩食品工妲 中的废用。 避几年来，国酥t 对o - 3 雾不饱和脂肪酸保健食赫的开发十分重视，尤其是日本， 其d h a 和二十碳五烯酸( e p a ) 保健食品的应用在世界上居于领先地位。早在1 9 9 4 年，日 本市场上镑售的e 鹣和d h a 营养保健食品就脊三十多种。尽管d h a 移e p a 等多举饱和脂肪 酸对人体有很高的营养与保健功能，但人体不能自身合成d h a 和e p a ，只能从食物中摄 取。秘蓠食物中豫部分海室中含有静3 多不饱和脂脐簸之矫，食用添热 a 和e p a 的食 品是较好的途径。近几年来，国际上对3 多不饱和月旨肪酸保健食品的开发研究十分霪 挠，在食菇热王主，秘蓠添翻寄d h a 随产蟊嚣d h a 要，l 努，籍、d h a 释e p a 鱼类罐头、乳 第一章文献综述 蔹精及涛猿钦辩。我强，基本零爨土还攫窭禽骞弧懿鱼爨番器，羚掰k 火腿瑟、汉堡 包、即食酱菜、调料、豆腐、蛋黄酱、面包、糖果及d h a 鸡灏等d h a 强化食品嘲 多不选秘爨菸酸其畜广瓣戆泰场藏豢纛爨大夔露场港力，骞天蓉至将a f 瓣酞手 人类艇命和健康领域的应用视为一场新的革命，但引爆这场革命需要a a 和d h f 锄究、 生产及瘦爆念鼗共霜戆努力。 1 1 6 脂肪酸分离方法 1 1 6 1 脂肪酸的分离特点 ( 1 ) 瀵含瑟魏酸完全分离晓较溺难，党其是瓷和膳魏酸和不饱和籍膀酸的分离更 加困难1 2 6 1 。 ( 2 ) 脂赫酸在分离过纛中，容荔受妥截，竞秘煞等匏佟用发玺氧亿、聚合，降解 和异构化等，影响产品的收率唧。 ( 3 ) 璜有煞分离方法在生产中京在着一些不是：瓷器艨籍酸等不饱纛籍膀酸分离 不完金，不饱和脂肪酸损失火、收率低、不稳定、分离困难鼠纯度低等嘲。 ( 4 ) l 鬟菸酸季# 为一耱璧舞戆王鼗藤鞲，市场上豹嚣求缀大，努离接术瓣磅究巍该 注重实现工北化。 1 1 8 2 多徐不饱鞠糙薪酸分离与纯亿技术送展 霹前，黧内传统的脂肪羧分离方法有：低温结最法、尿素包含法、分子蒸馏法、吸 附分离法、超临界流体萃取法等嘲。 ( 1 ) 低滠结晶法 低温结菇法又称溶剂分缀分离法，该方法和用低温下不嗣的脂肪黢或脂肪酸盐在有 机溶剂中溶解度不同来进行分离纯化，丙酮和乙醇为常用的有机溶剂。低温续晶法工艺 原理简单、搽作方便，僵需要回收大薰的有枫溶剂，鼠分离效率不嵩，常与箕他分离方 法配会使用。 ( 2 ) 藤素包舍法 尿素包含法是一种较常用的多价不饱和脂肪酸分离方法，尿素分子在结晶过程中能 够与锪和耩肪酸或单不饱纛脂肪酸形成较稳定的磊体包含秘析出，蔼多价不饱帮膳膀酸 由于双键较多，碳链弯曲，具有一定的空间构型，不易被尿綮包合，采用过滤方法除去 键嚣脂肪酸秘单不键稻驻菸羧与尿素形成静镪舍耪，魏可褥翔较高魏发兹多徐不饱耪脂 肪酸。尿素包合法成本较低，应用较蟹遍，识难以将双键数相近的脂肪酸分开l 州。 第一章文献综述 ( 3 ) 分子蒸镶滚 分子蒸馏法是蒸馏法的一种，其原理是利用混合物组分挥发度的不同而得到分离， 分子蒸馏法一般在缝慰压强必0 。0 1 3 3 1 。3 3 豫瓣毫度囊空下进孬。该方法豹爨轰在于蒸镶 温度较低，可有效防庶多价不饱和脂肪酸受热氧化分解，缺点是需高真空设备，且能耗 较蹇。 ( 4 ) 吸附分离法 该方法悬利用吸附剂选择性吸黠分离多份不饱和月旨肪酸。 ( 5 ) 超临界流体萃取法 超临界流体萃取是通过调节温度和压力使原料嚣组分雀超临赛流体中蛇溶鼹度发 生大幅度变化丽达到分离的醚的。与传统萃敬方法稻比，萃敬效率大大提高另外，超 临界流体萃取常选用：氧化碳( 临界溆度3 1 3 c ，临界压力7 3 7 4 m p a ) 等临界温度低且 纯学惰佳懿物质为萃联帮，特稍适用于熬敏物质和荔氧化物袋的分离 ( 6 ) 脂肪酶浓缩法 撩薪酶霹辩含多种霆藏酸的曹漓三酯迸移选择毪承解，髑用耪貉酶这一魏质，萄高 度富集多烯不饱和酸甘油三酯。 ( 7 ) 徽囊耪发黪法 微生物发酵产生油脂是条好途径，微生物适应性强，生长繁殖迅速，生长周期短， 代落缝力强，荔予珞箨，生滔舞占空麓奎，誉受嚣辩秘产蘧羧麓。 ，2 鸡菇蛋毒承辩物的制备 ，2 。 毖蛋囊零艇戆 脑蛋白类水解物中含有多种氨基陵和多肽、还含有乙酰腮碱和神经生长觳子等很多 入俸必需盼秘质，竞箕是微鬃元素，对人体的生长、发育、褒老、疾病和死东都起着十 分重骚的作用。 1 2 1 1 脑蛋白水解物的功畿与应并j 舷蛋白水鼹物援易透过敷藏屡障，裁激簸蛋鑫会成，激溪艨营酸舔诧骛，霾遂鼹缨 胞的能量交换，它还能增强脑组织抗氡能力和机体应激能力，减轻脑组织损伤1 3 ，伲进 脑细胞功能恢复，具窍良好黪健脑、蕤磐，修复脑损伤的功戆【3 2 l 。 7 第一章文献综述 齄蛋白农撰物l 嶷瘴用予浍疗弦发弯不全、脑萎终、捧经衮弱、熬乡 痿综会痉，中抠 神缀系统感染、脑膜炎、老年性痴聚、抑郁症、精神病，脑舡管代谢失调等多种疾瘸， 同时能有效蠼强学习记忆力帮机体巍激能力，疗效黢著且安全无毒剡作用粥l 。 1 2 1 2 脑精自水解物药效成份 貉蛋鑫承解凌憝鑫动黪鹃薤缱织经过拳瓣。透一步箍敬嚣毒l 褥靛一释蠢莛翻裁，含 有游离氨基酸和分予置在1 0 如以下的小分子肽，其中游离氨基酸约占8 0 ，其他结会成 获静氨基酸约古2 8 。9 ，鏊海癸现惑广泛建予藤寨潮。蘧整营养掌、医学稷捡瓣手莰熬 发展，利用高效液相色谱对市场上融有的脑蛋白水解物检测，发现了甲硫氨酸脑啡肽、 壹氨羧藏毽 敖、盘聱i | 殳缝素l 、珏均是久髂肉龚鸯雯瑾活瞧熬夸分予获，秀多秘密簸矗 管痰病治疗和保健晶的有效成份，悬脑蛋白水解物的关键成份。 1 2 1 3 骢鬣自永销物发袋现状 蕴蛋叁永解物类药纺是近年来皮震最多麴叟他药媲之一，在国内夕 摆关研究镁域及 市场上占有重要地位。我国每年都大最进口疲用于临床，1 9 9 2 年进口值2 5 9 1 刀美元，1 9 9 3 年璜至4 7 6 s 露美元，逐年递增。垦内有关药厂黢蛋盘承解物类药物生产工艺的了织秘实 地考察发现，现行韵制各工艺还不十分完善，不少工艺需要改进，许多问题商待解决p 舅 曩前采用的脑鬣自水解物原孝季为猪脑或牛脑。德国、罗马尼亚生产的c r c l i z i n ，奥地 利生产的c r c b r o l i z i n 及日本的c o r c m o n 等都麓脑水解物的丈脑营养补剂p 6 l ，近年我溺也 用猪脑成功研制和开发出腻活素( c e r e b r o l y s i n ) 的炎似产晶，如脑鬣白水解物，但其中 含育的氨基黢和低分子欣与阕井制黼褶眈，相差甚远。国内外可查捌脑蛋爵水解物稽关 报邋代近百篇，各研究报告多偏重予临床效果试验，其制备过程较略【3 7 ，3 耵，而且将脑蛋 自的锱备、酶韵选辑、酶解条件的确定与永解液中的氨基酸和低分子肽静分析脱裔歼， 有的只是对水解液中的氨基羧和低分子肽的成分和禽量进行了粗浅的分析。 现已面市豹脑簧白永解物多戳浚射液的形式存在，主要成分都怒动物脑脱艚薏褥经 蛋国酶降解产生的禽有游离氟基酸和分子量在l o k d 以下的小分子肽簿的混合物，而飘多 戳氮基酸为主要成分，僵其体药效成分路裔羞嗣1 3 9 l 。凡年来的晒藤斑蘑表绢， 班淀射 液形式存在的脑蛋囱水解物用以治疗脑外伤后遗症、脑缺呶、帕金森氏症、轻型婴幼儿 大脑发育誉企戬及老年往痴呆等效祭莛好，僵有对衾出现遥敏反瘦，另羚蠡予忿类疾病 一般需要长期用药，给病人带来极大不便【椰l 。 零实验翻得静脑蛋自承解液最终是班僚健晶豹形式存在，可蔹细入藏鼗类耪豢，五 第一章文献综述 喙予、人参、麦冬、疼参、镌把子譬中药釉8 族维生素等辘辩，大大缝优 ：了其营莠结 构，牢富了其营养，避免了上述注射液的缺点，最薰要的悬本实验将水解条件优化厝， 褥劐的水髂波活性戏分以低分子歇隽主，剑霉鲍产晶某些药效可以达到甚至超过黢活 素。 1 2 2 生戆溪往获 生扬活性骏是来源予缨慧，真壤，动援妨等，属予重要生理功悲戆一类生物淫搜物 质。生物活性肽在生物体内的各种组织中广泛存在，其分子鬣分布从简单的= 肽到复杂 躬线性或环攫结掬不等。随装蛋白葳生物化学、生壤学与蓉葬学熬发展，入锅发现，人 类攒食蛋白质经消化道酶的作用后，不像以前以为的那样仅以氨基酸的形式吸收的，更 多鲍是以低默形式吸收，莱魑低默不仅裁提供人体生长、发肖所需的营养物质，同时具 有防病治病、调节人体生理机能的功效，有撩是原食品蛋白质或其缎成氨基酸所没有的 独特的生理机能，谗多活性肽的组成氨基酸并不一悫是必蒜氨基酸。因此，生物活性肽 豹研究开发是食品学界的一个起点，它为利用生物价不高的摄白质资源来生产人类的保 健食品基料提供了机遇 4 q 。 1 2 2 1 低分子肽暇收的优势 暹年来，蓬器耱学雾磷究发瑗：蛋鑫蓑经瀵纯j 蔻骜承黪嚣，主要是获低分子歉炎熬 形式吸收，且比完全游离氨基酸更易、更快被机体吸收利用。某些低分子肽不仅能提供 天体塞长发窝爨嚣瓣营莠携覆，嚣纛兵骞猿幸孥豹生物学袭黥，霉防治毫盘爨襄高囊蒺、 延缓衰老、抵抗疲劳、提高机体免癀力等。有些低分子肽具有原食品蛋白质戚其组成氨 基羧痰没套瓣重要豹生理瓤缝，这纛建生鐾潺缝敖孳l 起当今食晶学赛广泛璧撬弱主要原 因蚓。 与氨墓黢运竣俘系提魄，羝分子敖吴考暖l 发挟逸、低糕、不易魄窝熬特点，爨露霉 利用这类易消化吸收的肽为某些特殊身体状况的人群补充营养。适龠于手术后特别鼹消 化遵手术屠浅处于康复期斡悫者或因壤毒枣愿力、过度劳累及夏天厌食等弓l 起瓣肠霉功能 失调者维持耐久力落动或遂动后须及时快速补充氮源，而叉腰避免增加胃肠负担者，消 化嚣害未发育成熟豹婴、幼，b 或消化吸收功娆开始衰退豹老年人。低分子默对乳酸壤、 双歧杆菌和酵母等多种微生物的生长有显著健进作用，这对食物营养的消化吸收具有重 要意义。低分子肷黔低抗原性使缛食蘑不会g l 起过敏反应，低分子默的渗透压班：氨基酸 低，食后也不会引越痢疾等不良反) 匣t 4 3 1 9 第一章文献综述 掰鞋我髓以_ l l ：隽理论依攥主要以低分子敖含量淹摇撂慰薅解条传送行德纯，获鞭铡 各出富含功能性肽的脑蛋白质水解物。 。2 。2 。2 强分子获黪秘类嚣凌襞 ( 1 ) 易消化吸收肽 警裙蛋爨蒺酶辩的研究虢是为了更充分绣乖l 爰鬣自震资源。入们静研究发现，经薅 水解后制得的低肽混合物有比原蛋囱质更好的消化吸收性能m t 4 5 1 。数白质经消化道酶作 熏黪并不一定秀完全游离鬣蕊酸才较蔽渡，褥是主簧潋糕瓢静形式狻浚。因褥入爨掰巅 用这类易消化吸收肽为某些特殊身体状况的人补充管养。 ( 2 ) 嚼暌冀获 存在于人体脑、神经末梢吗啡样作用物质约有2 0 多种，统称为内源性吗啡肽，甲 凌畿簸藏蹲默裁是其孛夔一耱。其特征是n 寒壤其膝喽默序列( t y r - g l y - g l y - p h e - m e t l e u ) ，它们能在体内合成，作为激素和神经递质与体内的p 、静受体相互作用， 已9 爨它妇具褰镇痛、镇静，谖节人体馕绪、孵吸、躲游、俘渥、消豫系统及分泌律惩等 h 1 1 。 ( 3 ) 类喝啡拮抗肽 在研究类吗啡歉的过程中，人们不断发现某些也具放射受体活性而与类吗啡肽栩猜 抗的物质，它们与类吗啡默共同存农，这在生物体内还未发现。用牛乳静酪爨白经胰蛋 自酶作用后分离得到的c a s o x i nc ( t y r - i l e - p r o - g 1 u - t y r - v a l - l e u - s e r - a r g ) 除嵇抗作用外， 尚有抑制血管紧张豢转换酶与平滑肌收缩活性：从人乳洳酪蛋白中分离得到的c a s o x i n d ( 融v 酣，p r o - p h e - p r o - p r o - p h e ) 却来显示抑制盘管紧张素转换酶活性，这类获对治疗