（茶学专业论文）茶叶中甲基化EGCG的调查研究.pdf

独创性声明 学位论文题目：茶叶中甲基化e g c g 的调查研究 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师龚正礼副教授指导下进行的 研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为 获得西南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工 作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者：旗 签字日期：加6 年6 月j 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被 查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院可以将学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口保 密期限至年月止) 。 学位论文作者签名：矗各导师签名：丕仃钞匕 签字日期：年月 日 签字日期：加l 年6 月r 日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 电话：f! 邮编： 西南大学硕士学位论文 中文摘要 摘要 e g c g 是茶叶儿茶素中含量最高也是最为重要的一种生理活性物质，在多种生物活性功能中扮演 着极为重要的角色。e g c g 3 ”m e 和e g c g 4 ”m e 是e g c g 的两种甲基化派生产物，分子结构分别为( 一) 一 表没食子儿茶素3 - 0 ( 3 0 一甲基) 没食子酸酯( c 一1 ) 和( 一) 一表没食子儿茶素3 - 0 ( 4 - 0 一甲基) 没食子酸 酯( c - 2 ) 。它们在抗过敏，尤其是在抗花粉过敏方面表现出非常显著的功效。 据日本研究报道：甲基化e g c g 可以阻隔i g e 受器，而i g e 受器是细胞内产生过敏反应的主要受 器，这个成效还表现在人类的嗜碱细胞上，丽嗜碱细胞是释放组胺的血液细胞，甲基化e g c g 对抑制 组胺释放的功效比e g c g 更强。甲基化e g c g 在多个方面表现出来的生物学功能已经在体外和体内的 临床实验中都得以证实。在日本，约有近三分之一的人患有不同程度的花粉症过敏，因此，此类研 究在日本业界受到高度重视。然而，在国内，甲基化e g c g 的研究报道甚少，相关文章未见请报端。 本研究论文以西南片区栽种的主要茶树品种和部分野生茶树资源为样本，采用h p l c 检测分析了 样本中的甲基化e g c 6 的含量，筛选出高含量甲基化e g c g 的茶树品种和资源：还通过一系列的工艺 研究，揭示出影响茶叶中甲基化e g c g 含量高低的内外因素。研究结果如下： 1 、通过对茶树品种的广泛调查研究e g c g 3 ”m e 在中叶种中含量较高( 如4 2 为0 7 7 、n o 5 1 为1 3 8 、n o 5 5 为0 9 4 等，在西部茶资源广泛推广的茶树品种中，5 8 品种的e c 羚g 3 ”m e 含量 最高，含量为1 _ 0 3 ) ，在小叶种茶树品种中的含量次之，而在以云南大叶种为代表的大叶种茶树 品种中含摄甚微。 2 、在被分析的6 9 个茶树资源样本中。含有e g c g 4 ”m e 的茶树品种共计1 9 个，仅占所有资源的 2 7 5 ，其中最高的为0 2 2 ，晟低的只有0 ，0 6 。 3 、同一时期，不同地域的生态环境对茶树中e 6 c g 3 ”m e 含量变化的影响是显著的，n 0 5 5 和 n o 3 是分别生跃在重庆二圣茶场和五马坪茶场的同一品种，其阱c g 3 ”m e 含量分别为0 9 4 和0 3 8 ， 其比值为2 4 7 ：i ，n o 5 8 和n o 2 6 是分别生长在四川省茶科所茶场和五马坪茶场的同一茶树品种， 其e g c g 3 ”m e 含量分别为1 0 3 和0 3 4 ，比值为3 0 3 ：1 ，说明低海拔和高光照条件对甲基化e g c g 的生成非常重要。 4 、随着鲜叶成熟度的提高，e g c g 3 ”m e 的含量也逐步升高，但到达一定的成熟度后，茶叶中纤 维素含量相对增加，儿茶素含量不断下降。研究发现，e g c g 3 ”m e 在1 芽3 叶中的含量最高，在l 芽2 叶和1 芽4 叶中e g c g 3 ”m e 的含量相当，且低于而l 芽3 叶1 0 左右。在茎梗中含量甚微。 5 、随着萎凋时间的增加e g c g 3 ”m e 的含量不断上升。当萎凋时间达8 小时左右，e g c g 3 ”m e 的 含量达到最大，之后，萎凋时间越长，e g c g 3 ”m e 的含量逐步降低，当到达1 8 小时，其含量已经低 于未萎凋状态的一半。通过试验方差分析，萎凋时间对茶树中e g c g 3 ”m e 含量变化的影响达到极显 著水平。 6 、同一品种制成不同茶类的研究发现：绿茶中e g c g 3 ”m e 含量最高，鸟龙茶中的e g c g 3 ”m e 含 量次之，仅为绿茶中e g c g 3 ”m e 含量的5 0 左右，在红茶中很难发现e g c g 3 ”m e ，说明以酶性氧化 西南大学硕士学位论文 中文摘要 置曾_ 罡蔓曼曩曼量墨曼墨皇基皇皇曼皇| 曼曼皇| 曼皇墨曼皇墨置量墨墨鼍皇曼皇曼皇鼻曼墨量墨皇皇| e 曼蔓i i 曼曼蔓罡曼曼曼曼s 为主的发酵工序促使了e g c g 3 “ d ef l 】甲基被取代或降解。 7 、同一品种在不同季节的甲基化e 6 c g 的含量也存在显著差异，秋茶中e g c g 3 ”m e 的含量最高， 比春茶、夏茶中e g c g 3 ”m e 的含量均高出2 0 左右，夏茶次之、春茶最低。通过试验方差分析，季 节变化对茶树中e g c g 3 ”m e 含量变化的影响达到显著水平 f a ( a _ o 1 ) 。 本次研究以高效液相色谱法，分析检测了6 9 个茶树品种和少许商含量品种的不同影响因子下的 茶样，筛选出高含量e g c g 3 ”m e 的茶树特异资源，其中高于1 以上的品种可作为茶树特异资源，具 有广阔的应用前景，可作为特异的育种材料或作为今后提取e g c g 3 ”m e 的特种株系。 关键词：茶儿茶素甲基化e g c g 花粉症h p l c 2 西南大学硕士学位论文 谗正摘登 a b s t r a c t ： e g c g ( e p i g a l l o c a t e c h i n 一3 - g a l l a t e ) i st h eh i g h e s tc a t e c h i nc o n t e n ta n dm o s ti m p o r t a n tp h y s i o l o g i c a l a c t i v i t ys u b s t a n c ei nt e aq u a l i t y ，i tp l a y sac r u c i a li m p o r t a n tr o l eo ns e v e r a lb i o l o g yf u n c t i o n s e g c g 3 “m e a n d踮c g 4 “m ea r et w o o - m e t h y l a t e d e g c g d e r i v a t i v e s s t r n c t u r a lf o r m u l aa r e ( ) - e p i c a t e c h i n - 3 - o 一( 3 - o - m e t h y l ) g a l l a t ea n d ( 一) - e p i c a t e c h i n - 3 一o - ( 4 o m e t h y l ) g a l l a t er e s p e c t i v e l y t h e y h a v eb e e no b s e r v e ds i g n i f i c a n c ee f f i c a c yo na na n t i - a l l e r g i ca c t i o n ，e s p e c i a l l yo na n t i p o l l e n - a l l e r g i ca c t i o n a sr e s e a r c hs h o w si nj a p a n ，o - m e t h y l a t e de g c g m a y i n h i b i tl 豳r e c e p t o f ，w h i c hi sam a j o ra l l e r g i c r e s p o n s er e c e p t o ri nt h ec e l l s t h i se f f e c th a sa l s ob e e nf o u n di nt h eh u m a l lb a s o p h i l i cc e l l s h u m a n b a s e p h i l i cc e l l i sab l o o do n ew h i c hr e l e a s eh i s t a m i n e o - m e t h y l a t e de g c gh a sm o r ei n h i b i t o r ye f f e c to n h i s t a m i n er e l e a s i n gt h a ne g c g al o to fb i o l o g yf u n c t i o n sh a v eb e e np r o v e di nv f l r oa n di nv i v oc l i n i c e x p e r i m e n t s i nj a p a n ，a b o u to n e t h i r dj a p a n e s ea i et a k e nv a r i o u sd e g r e e so fp o l l e n - a l l e r g i ca c t i o n s o t h i sr e s e a r c hi sp a i dg r e a ta t t e n t i o ni nj a p a n w h i l e ，t h e r ei sl i t t l er e s e a r c hr e p o r to n0 - m e t h y l a t e dc a t e c h i n i nc h i n a ，r e l e v a n tr e s e a r c hh a sn o tb e e nf o u n di nt h en e w s p a p e r t h i sr e s e a r c hc h o o s e ss o m ep r i m a r yt e ap l a n tv a r i e t i e sg r o w i n gi ns o u t h w e s tc h i n aa n ds o m e w i l d g r o w i n gt e ap l a n t sr e s o u r c e sa se x p e r i m e n ts a m p l u s i n gh p l ct oa n a l y z eo - m e t h y l a t e de g c g c o n t e n to f s a m p l e s ，a n ds c r e e n o u ts o m eh i g h e ro - m o t h y l a t e de g c gc o n t e n tt e a p l a n tv a r i e t i e sa n d r e s o u r s e s a n dt h e n ，t h r o u g has e r i e so fp r o c e s s i n gs t u d i e s , s o m ee x t e r n a la n di n t e r n a lf a c t o r sw h i c ha r e r e l a t e dt ot h ec o n t e n to fo - m e t h y l a t e de g c gw e r eo p e n e du p t h i sr e s e a r c hr e s u l t s 勰f o l l o w s ： 1 、胁u g ht e ap l a n tv a r i e t i e si n v e s t i g a t i o n sa n ds t u d i e s i tf i n d st h a tm i d d l i n g - b l a d e - p r o f i l ev a r i e t yh a s h i g h o rc o n t e n to fe g c g 3 ”m e ( s u c ha sn o 4 2 = 0 7 7 、n o 5 1 = 1 3 8 、n o 5 5 = 0 9 4 a n ds oo n i n t h ew e s tt e ap l a n tv a r i e t i e sw h i c ha r ep l a n t e dw i d e l y , n o 5 8h a st l l eh j g l l e s te g c g 3 ”m ec o n t e n t ，( t h e c o n t e n ti s1 0 3 ) ，i nt h es m a l l l e a fv a r i e t i e s ，t h ec o n t e n to fe g c g 3 ”m et a k es e c o n dp l a c e ，w h i l ei nt h e l a r g e - l e a f v a r i e t i e s ，s u c ha sy u n a nl a r g e l e a fv a r i e t y , i th a sl o w e s tc o n t e n to fe g c g 3 ”m e ，e v e nn o t h i n g 2 、i nt h e6 9t e ap l a n tv a r i e t i e sw h i c ha r ea n a l y s i z e d ，a l t o g e t h e rt h e r ea r e1 9t e ap l a n tv a r i e t i e so w n i n g e g c g 4 ”m e ，o n l yt a k i n g2 7 5 a m o n ga l lr e s o u r s e s t h e r e i n t u ，t h eh i g h e s tc o n t e n ti s0 2 2 ，t h el o w e s to n e i so n l y0 0 6 3 、i nt h es a l l et i m e d i f f e r e n ta r e a se n t i r o n m e n te f f e c to nt h ec o n t e n to fe g c g 3 ”m ea r cr e m a r k a b l e n o 5 5a n dn o 3a r et h es a m et e ap l a n tv a r i e t i e s 。b u tt h e yg r o wo nd i f f e r e n ta r e a s ，n o 5 5i sp l a n t e do n c h o n g q i n ge r s h e n gt e ag a r d e n n o 3i sw u m a p i n go n e s 铀ec o n t e n to fe g c g 3 ”m ea r e0 9 4 a n d0 3 8 r e s p e c t i v e l y , r a t i oi s2 4 7 ：1 ，n o 5 8a n dn o 2 6a r ea l s ot h es a m et e ap l a n tv a r i e t y , r e s p e c t i v e l yg r o wi n s i c h u a nt e ar e s e a r c hi n s t i t u t ea n dw u m a p i n gt e ag a r d e n n ec o n t e n to fe g c g 3 ”m ea r e1 0 3 a n d0 3 4 r e s p e c t i v e l y , r a t i oi s3 0 3 ：1 ，i ts h o w st h a tl o w e ra l t i t u d ea n dh i g h e ri l l u m i n a t i o na r ev e r yi m p o r t a n tt o c o m p o u n do fo - m e t h y l a t e de g c g 4 、a st h el e a v e sd e g r e eo fm a t u r i t yi m p r o v i n g 。t h ec o n t e n to fe g c g 3 ”m ei nt e ai n c r e a s es t e pb ys t e p ， w h e na r r i v i n ga tad e f i n i t em a t u r i t y , t h ec o n t e n to fc e l l u l o s ei nt e ah a sa l s oi n c r e a s e d ，g r a d u a l l y , t h ec o n t e n t o fc a t e c h i ns t e a d f l yd e c r e a s e s r e s e a r c hf o u r i d ：t h ec o n t e n to fe g c g 3 ”m ei st h em o s ti no n eb u dt h r e e l e a v e s a n dt h ec o n t e n to fe ( 汇g 3 ”m ei no n eb u dt w ol e a v e si sa sm u c ha si no n eb u df o u rl e a y e s ，1 0 w e t 1 0 t h a ni no n eb u dt h r e el e a v e s w h i l et h e r ei sl i t t l ee ( 圮g 3 ”m ei nt h es t e m 5 、a sw i t h e r i n gt i m ee x p a n d i n g 。t h ec o n t e n to fe g c g 3 ”m eg r a d u a l l yi n c r u a s e s ，w h e nt h ew i t h e r i n g t i m er e a c h e s8 h ，e g c g 3 ”m em a yr e a c hi t st o pc o n t e n t ，a f t e r w a r d s ，a st h ew i t h e r i n gt i m el o n g e r ，t h ec o n t e n t o fe g c g 3 ”m ed e c r e a s e ss t e pb ys t e p ，w h e nt h et i m ea r r i v e sa t1 8 h ，t h ec o n t e n th a sah a l fc o m p a r e dw i t h n o n - w i t h e r i n gs t a t e 3 西南大学硕士学位论文 英文摘要 6 、n es a m et e ap l a n tv a r i e t ym a yb ep r o c e s s e dd i f f e r e n tt y p e so ft e a r e s e a r c hs h o w s ：g r e e nt e ah a sa h i g h e s tc o n t e n to fe g c g 3 ”m e ，o o l o n gt e at h es e c o n d ，h a so n l yah a l fc o m p a r e dw i t hg r e e nt e a ，w h i l e ，i t i sd i f f i c u l t yt of i n de g c g 3 ”m ei nt h eb l a c kl e a i ts h o w st h a tf e r m e n t a t i o ni sb a s e do ne n z y m a t i co x i d i z e d ， w h i c hc a u s e sm e t h y li sr e p l a c e do rd i s c o m p o s e d 7 、i nd i f f e r e n ts e a s o n ，t h ec o n t e n to fe g c g 3 “m ei nt h es a m ev a r i e t yh a sa l s od e f i n i t ed i f f e r e n c e ， a u t u m nt e ah a sm o l t2 0 t h a l ls n i n l l l e rt e ao rs p r i n gt e a ，s u m m e rt e at h es e c o n d ，s p r i n gt e ai st h el o w e s t t 1 i i sr e s e a r c hu s i n gh p l ct oa n a l y s i s6 9t e ap l a n tv a r i e t ya n ds o m eh i g hc o n t e n tv a r i e t ys a m p i eu n d e r d i f f e r e n ti n f l u e n c ec o n d i t i o n s ，s c r e e n so u ts o m es p e c i f i ct e ap l a n tr e s o u r c e sw i t hh i g h e g c g 3 ”m e c o n t e n t ，i nw h i c h ，t h e s em o r et h a nl v a r i e t ya r er e g a r da ss p e c i f i ct e ap l a n tr e s o u r c e s ，t h e yh a v eb r o a d a p p l i c a t i o no u t l o o k m a ya c ta ss p e c i f i cb r e e d i n gr e s o u r c e so rs p e c i f i cp l a n t sw h i c hm a p p l i e dt o b e e x t r a c t e de g c g 3 ”m e k e yw o r d ：t e a c a t e c h i n 0 - m e t h ) ，l a t e dc a t e c h i np o l l i n o s i s h p l c 4 西南大学硕士学位论文 文献综述 第1 章文献综述 1 1 概述 饮茶在我国已有数千年的历史，茶叶因富含茶多酚、生物碱、蛋白质、氨基酸、脂肪、维生素 等生物活性成分，不仅天然可口，而且具有多种保健功能和药用价值，被誉为“二十一世纪饮料之 王”，茶逐渐成为一种风靡全球的保健饮料【9 】。而茶作为药用【l j 最早见于神农本草经，唐代陆 羽所著茶经是世界上第一本系统论述茶叶的专著，但茶叶的生化成份和生理生化直到十九世纪 中叶才开始研究。进入二十世纪中叶，随着科学技术的进步，人们对茶叶的研究才进一步加深：日 本根据茶叶中的多酚类物质单宁、单宁酸可与烟中的尼古丁形成无毒复合物的原理，研制出低烟碱 含量的香烟茶熘；利用茶叶中的茶多酚等抗氧化物质研制成商品化的天然抗氧化剂；还从茶叶 中提取酚醛酪将其聚合后用于胶合板工业。印度从废茶中提取咖啡碱。英国的费拉默蒂有限公司则 研制成功茶福。前苏联学者从碎茶中提取茶红素、茶黄索应用于高档食品。在医药方面，人们对茶 叶的药理功能尤其抗癌作用越来越感兴趣。茶叶中含有大量的酚类衍生物( 又称单宁、茶鞣质) ，在 新茶中的含量可达到2 5 3 5 ( 鲜叶干重) ，而其中儿茶素类化合物又占有6 0 8 0 ，它们的基本结构 为2 一连( 或邻) 苯酚基并毗喃衍生物，具有酚类抗氧剂的通性。其中以表没食子儿茶素没食子酸酯 ( e p i g a t l o c a t e c h i ng a l l a t e ) 的研究最引人注目，现已被列为一种潜在的抗癌药物，在中、美、日 等国被广泛深入研究，目前有关如何利用低档茶和茶叶加工的碎料【1 0 l 来制备儿茶素及其儿茶素单体 技术日益受到人们的关注。 1 ，2e g c g 概况 1 2 1 e g c g 的物理性质”3 绿茶是一种传统饮料，有效成分是茶多酚。茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，主要由儿茶素、 黄酮类物质、花青素和酚酸等四大物质组成。儿茶素是茶叶中最重要的生理活性物质【1 ”，约占多酚 类的8 0 ，属黄烷醇类，其基本结构是n 一苯基苯并毗喃，分为酯型和非醢型两类结构上的主要 区别在于羟基取代的数量和位置不同。儿茶素f 1 2 主要由表没食子儿茶素没食子酸酯( e g c g ) 、表没食 子儿茶素( e g c ) 、表儿茶素没食子酸酯( e c g ) 和表儿茶素( e c ) 等单体组成，其中表没食子儿茶素没食 子酸酯( e g c g ) 是含量最高也是最为重要的一种组分，约占茶叶千重的8 - 1 5 。e g c g 具有很强的抗 氧化活性和清除自由基功能，已成为医药和食品研究领域的热点之一。e g c g 结构如图1 所示； 5 西南大学硕士学位论立文献综述 1分子结构 o h h o 蕾t 左蝗一囊搜食子儿蘩素波早一( 一式) f i l1l e g c g ( e p i 曩l t o c - t e c h i ni a t | x t e ) ( l - e g c g 是由表没食子儿茶素( e g c 图1 左边a 、b 、c 部分) 与没食子酸( 图l 右边d 部分) 经脱水生成的多酚类化台物) 12 2e g c g 的提取与分析方法 茶多酚( t e a p o l y p h n e n 0 1 s ，简称t p ) 是存在于茶叶中的多羟基酚类化合物，其中大部分为儿 茶素。目前我国工业化提取儿茶素的方法主要是溶剂萃取法o ”和离子沉淀法“，溶剂萃取法是现 在最广泛采用的方法，该方法工艺成熟稳定，提取率较高，但生产时使用多种有机溶剂，且用量大， 有些甚至是有毒溶剂( 如氯仿) ，今后很难为食品和医药等行业所接受。离子沉淀法减少了有机溶剂 的使用量，生产的儿茶素纯度高，但工艺操作控制较严，需严格控制p h 值，否i l l l j i , 茶素可能会氧 化，在工艺中大量使用酸碱液废液、废渣处理量大，容易造成环境污染。其次，还有几种提取技 术正处于试验阶段：超l 临界流体萃取技术“”是一种新型的提取天然物质的分离技术，具有低能耗、 无污染、高分离能力、质量好、速度快等优点，这些特点迎合崇尚纯天然的发展潮流。但设各要求 高，一次性投资大，对于提取儿茶素来说，超临界c 0 z 提取效果不是很好，而超临界萃取剂、助溶剂 在超临界状态下的溶解度等研究尚来成熟，因此很难进入规模化大生产。吸附树脂法“”提取儿茶素 工艺简单能耗少，树脂再生容易，可反复利用，提取效率高，提取过程无污染，符合环保要求，条件温和 不会破坏儿茶索活性，具有良好的发展前景，关键是怎样找到一种对儿茶索吸附能力强、解吸容易的 树脂。儿茶素单体制各方法主要有凝胶层析法、h p l c 制备以及高速逆流色谱法“”“1 等技术，前两种 技术操作繁琐，耗时长，设备材料昂贵高速逆流色谱具有适应性好、操作简单、回收率高、重现性好、 分离效率高、分离量大等特点，因而具有良好的应用和开发价值 儿茶素的分析方法。“”1 有容量法、比色法、原子吸收法、色谱法，其中高效液相色谱( h p l c ) 法“”l ”1 由于具有精确、简单、快捷的特点。现已成为分析茶叶中各组分的主要方法。近年来，采用 高效液相色谱( i p l c ) 测定儿茶素的研究文献也有报道。”“2 ”，如李捕。”等以甲醇一己酸一水为流动 相，对茶饮料中单组分e g c g 进行了h p l c 的定量测定，朱勤艳等以乙氰一乙酸乙醅忆s o 一溶液为 流动相，对茶中茶多酚进行了h p l c 的定性测定。钟世安”“等采用绿色分析方法，选用乙醇一乙酸一 水无毒溶剂为流动相，同时对六种儿茶素组分进行定量分析。 6 西南大学硕士学位论义 史献综述 1 2 3e g 0 6 的功能研究 自从1 9 2 9 年e 1 本人首先从茶中提取分离出儿茶素以来，许多专家和学者x - f 儿茶素进行了深入细 致的研究，研究发现：儿茶索具有抗过敏f 3 0 】、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、降咖脂平除胆囿醇、抑制 细菌和病毒等多种生物学功能，并且已经在食品、保健、美容、医药等领域川已开发出许多重要的 热点产品。根据国内外学术期刊将儿茶素类可能的利用方式及其他对人体的生理效麻【3 2 1 【3 3 1 整理归纳 如下： 1 、抗氧化、清除自由基 、油脂抗氧化剂 儿茶素是天然的油脂抗氧化剂，其抗氧化活性优于b h a 、b h t ( 人工合成抗氧化剂) 及维他 命e 。 、色素保护剂 儿茶素类可防止天然食品着色剂( p 一胡萝h 素) 的降解退色，其效果比维他命c 高出2 0 倍。 、清除自由基 儿茶素类可清除人体产生过多的自由基以保护细胞膜的结构，可减缓人体衰老，在中国大 陆及日本已有利用儿茶素类加工而成的抗衰老药物。如浙江大学茶叶科技开发公司生产的茶亦 宝、清基一号等。 2 、除臭剂 儿茶素类对除去甲硫醇臭味有良好效果，日本利用儿茶素类制成商品化的除臭1 3 香糖、 香烟滤嘴，以除去抽烟者之口臭。 3 、抗菌、抗病毒及改变人体肠内微生物之分布 儿茶素类抗菌及抗病毒之功能，早在中国唐宋踌期的医学书籍中已有记载，并早已用茶 入药来治疗炎症。近代科学研究确认儿茶素类对人体内很多致病细菌( 如肉毒杆菌) 有抑制 的效果，同时又不致伤害肠内有益细菌族群( 如乳酸菌) 的繁衍，中国大陆及前苏联在临床 上有应用茶汁抑制病原蕴的繁殖。以治疗赤痢的记录。 4 、防龃齿作用 茶叶具防龃齿作用，一般多认为是茶中氟的功能，当然氟元素可以取代牙齿中羟磷灰石 的羟基成为氟磷灰石，使牙釉质对酸的侵蚀具有强抵抗力。然而儿茶索类能强烈抑制生龃菌， 临床上也证明儿茶素类可明显减少菌斑及牙周指数，但对口腔中其他微生物没有影响。 5 、抑制血压上升 根据人体试验报道：健康人每日摄取5 0 0 毫克儿茶素类，三个月后测定其饮食前后之血 压，发现摄取后的扩张压与收缩压都显著下降。因此证明长期摄取几茶素类有抑制血压上升 的功效。 7 西南k 等预卜挚应论文史献综述 6 、抑制血糖上升 儿茶素类对部份的糖分解酵素有抑制作用，因此当人体摄取糖类时能抑制糖类的分解， 降低血糖。 7 、抑制血液中胆固醇浓度上升 日本科研学者竹尾忠一以动物试验证实长期食用含e g c g0 5 - 0 1 的食物能降低血浆中 总胆固醇、游离胆尉醇、l d l 胆固醇及三甘油脂含量，同时增加h d l 胆固醇含量。中国大陆 曾对1 2 0 位高血腊病人进行试验显示：e g c g 具有抑制血小板凝集，并有治疗动脉硬化的效 果。 8 、抗癌及抗突变 很多研究报告显示：茶浸提液或茶多酚有抗癌及抗突变的活性，其作用原理都仅限于推 论阶段。由于引起人类致癌因子非常复杂，有关此项研究还有待进一步分析，抗突变在微生 物已有许多实验获得证实，在人体内试验尚无报道。 9 、抗辐射及紫外线【3 4 l 调查发现：二次大战时居住广岛遭受原子弹辐射感染的日本人移居产茶区长期饮茶后 比末移居产茶区者其寿命较长且健康状况较好。同一时期法国与前苏联的研究者证实茶中 的多元酚类对含锶9 0 ( s r 9 0 ) 的小自鼠有防护效果，认为儿茶素类有防辐射的功能。在中国 大陆进行放射治疗时有以茶浓缩液作为白血球增加剂使用。动物试验发现儿茶素类能抗w b 所引发的皮肤癌。 由于儿茶素类有多种用途及生理功效p ”，因此美国、日本及中国大陆已积极探讨儿茶素类的 生产研究，目前己步入商品化阶段，国内对此项研究起步很晚，尚待进一步努力，以扩大茶叶的 利用价值。 1 2 4 儿茶素含量变化的影响因子f 3 】【4 l 茶树与存在的环境是一个统一体，茶树在系统发育过程中，由于对环境长期适应的结果，形 成了一定遗传特性的品种，因而备品种对环境条件都有一定的要求。反之，环境条件对茶树生长 发育又产生深刻的影响使茶树物质代谢的方向【蚓与强度发生了变化。了解这一变化的规律，对 进一步获得茶叶的有效成分有积极作用。 环境条件是非常复杂的，其中光照、温度、水分等气象条件是茶树生长发育所必需的也是必 不可少的条件：栽种在不同地理状况的茶树由于受到不同的气候条件的影响，茶树的物质代谢类 型也发生显著的改变，当外在因素作用于茶树后，必然会以茶树体内的化学成分的种类和数量比 例上的变化表现出来。 茶树体内的多酚类的变化”i 不仅受到其内因( 品种) 的制约，也受外界条件( 自然环境和农 技措施、加工条件f 7 】 ”】) 的影响只有了解物质代谢的生化规律才能阐明外界条件的影响，才能 驾驭自然和拟订正确先进的农技措施，从而获得所需要的品质成分。 8 阴南人学硕 位f 仑文文献综述 i i 1 、茶树新梢伸育过程中茶多酚的变化 据研究显示，荣树新梢的不同伸育程度对儿茶素类的含量和组成有很大的差异。根据国内对大 部分茶树资源的调商分析，在一芽一叶初展、一芽二叶中儿茶素含量较高。一般来讲，l - e g c g ，l - e c g 和l - e g c 变化显著，le g c g 和l - e c g 随新梢伸育强度提高，其含量渐次降低，而l - e g c 有增加的趋 势。程启坤等把卜e g c 的增加作为茶芽老化的标志，根据这种消窿羌系得出“儿茶素品质指数”的 经验公式，用以表达鲜叶嫩度。 儿茶素品质指数。c ”- 1 3 ) 的品种或株系，对于e g c g 的工业化生产、茶树新品种选育、 提高茶树鲜叶或干茶的品质、组织培养材料选择等方面都具有重要意义。福建省农业科学院茶叶研 究1 4 l j 所用等度高效液相色谱法，分析检测了4 5 个品种或株系的春梢、夏梢、秋梢e g c g 含量。旨在筛 西南大学硕士学位论文 文献综述 选出高含量e g c g 的茶树特异资源。结果表明：e g c g 含量在不同品种、株系间的茶树新梢中差异很 人。在4 5 个品种或株系中，春梢、夏梢、秋梢的e g c g 含量变化范围分别为1 4 5 1 8 0 3 、0 9 7 1 4 8 4 、1 3 8 1 6 7 5 ，春、夏、秋平均分别为1 21 9 、1 0 5 9 、7 6 7 ，年平均 为1 0 ，1 5 。有2 1 1 个品种、株系的e g c g 含量年平均高1 i 1 3 ，为超常规水平的高e g c g 的重要材料， 因此，可视为特异资源，具有广阔的应用前景，可作为特异的育种材料或作为提取e g c g 、酯型儿茶 素的特种株系。 1 3 甲基化e g c g 茶叶富含多种生物调节活性，具有多种药理性功能，e g c g 是茶叶中最重要的一种生理活性物 质，在多种生物学功能中扮演着极为重要的角色，具有抗氧化和抗菌作用的天然保健成分。在日本 农业技术研究机构所属的蔬菜、茶业试验场的科研成果中d “，一种叫做“别尼夫基”的茶对抗花粉 过敏症有很强的作用效果，“别尼夫基”茶与现有茶相比，具有独特的香味且儿茶素含量较高，尤其 是含有约1 新型儿茶素衍生物甲基儿茶素，对抗过敏反应有强烈抑制作用。日本研究显示： 甲基儿茶素是茶叶儿茶素中抗过敏作用最强的，尤其是对抗花粉过敏症具有非常显著的功效。目前 调查研究发现甲基化儿茶素以e g c g 3 ”m e 、e g c g 4 ”m e 为主，e g c g 3 ”m e 、e g c g 4 ”m e 是e g c g 的两种 甲基化派生产物，分子结构分别为( 一) 表没食子儿茶紊3 - 0 ( 3 0 - 甲基) 没食子酸酯( 0 1 ) 和( 一) - 表没食 子儿茶素3 - 0 ( 4 - - 0 甲基) 没食子酸酯( c - 2 ) 。e g c g 3 ”m e 、e g c g 4 ”m e 为白色粉末状物质，易溶于水和 有机溶剂，其结构式如图2 所示： 拦g c g e g c ；g 3 。m e e g i c 恼4 。m e h c h ； h h h c h l 圉2 ：甲基儿茶素的分子结构式 f i 9 2 ：s t r u c t u r a l f o r m u l ao fo - m e t h y l a t e de g c g 当今日本有近三分之一的人患有不同程度的花粉过敏症，所以该项研究受到日本业界高度重视 小川制药、太阳制药、三井农林等几大公司均投以重金，加紧秘密研发。鉴于富含甲基e g c g 的产品 对花粉过敏症有良好的效果，因此在日本有着非常巨大的潜在市场。日本茶叶研究所进行了3 0 多种 西南大学硕士学位论文 文献综述 茶叶品种中的甲基化e g c g 的调布研究，调查结果显示l ”】，3 0 个茶树品种中几乎都不含有甲基e g c g 。 中国是茶树的发源地，茶树资源相当丰富，拥韵。人鼙的野生茶树资源和人工栽培品种，因此，在中 国进行种质资源的调查研究具有重要的现实意义。本次研究虽然是对茶树品种资源调查的基础性研 究，但无论在学术还是在生物学功能应用开发方面都具有非常重要的现实意义，这将为我们以后 更好的开发利用茶树资源，提高茶叶的生产附加值指明新的芨展方向，必将对茶业的可持续发展产 生积极的影响。 1 4 花粉症 花粉症【4 3 1 ( p o l l i n o s i s ) 又称季节性变态反应性鼻炎( s e a s o n a la l l e r g i rr h i n i t i s ) 或枯草热 ( h a yf e v e r ) ，是特应性个体对花粉的一种超敏反应，致敏物为花粉( p o l l e n ) 。本病的特点1 4 4 是发病 有明显的季节性，此季节与致敏花粉【4 m 的播散期相符合。花粉症属g e l l c o o m b s 分型的第1 型变态 反应】，即反应素型变态反应，抗体为免疫球蛋白e ( i g e ) ；效应器官是鼻粘膜、眼结膜、支气管粘 膜和平滑肌。临床症状主要表现为鼻黏膜，眼结膜和支气管的卡他性炎症，有时还引起小支气管痉 挛。主要原因 4 7 】为：机体首次接触花粉变应原【4 2 】，体内产生i g e 抗体，结合于肥大细胞和嗜碱性粒 细胞，再次接触时，花粉变应原与上述细胞表面两个或两个以上的临近i g e 分子搭桥结合，致肥大 细胞脱颗粒，释放生物活性介质( 组织胺是引起花粉症鼻部症状的主耍介质) ，并产生相应的临床 症状。据1 9 9 1 年的研究报告：花粉症在一些国家发病率较高，居民发病率约为3 一4 。在美国 f 4 8 嗯人口超过5 0 0 0 万人、发病率达3 3 ，仅这方面的医药花费超过3 8 亿美元年，如非镇静性抗组 胺药物“氯雷他定”1 9 9 9 年销售额就达2 3 亿美元。我国居民的患病率，据在乌鲁木齐市的调查， 为0 9 - 1 7 不等。在银川流行区调查，发病率高达3 ，个别地区为5 。我国对花粉的研究始于 6 0 年代，之后，在乌鲁本齐、银川i 、沈阳、呼和治特、广州、南宁等地相继开展了有关花粉症的基 础和临床研究h ”，均获得了一定的成就口“。到目前为止，花粉症已成为变态反应性疾病中研究较为 深入、免疫治疗效果较好的病种之一，也是我国变态反应学界研究比较广泛的课题之一口”。 进入二十一世纪以来，花粉症已成为变态反应性疾病中最常见的疾病之一，日本尤为典型，大 约有3 0 的日本人患有不同程度的花粉过敏症。因此，除了在医药上的研究外，日本科研学者还花 费了大量的心血来开发研制抗过敏性食物来作为生理功能调节食品。近年来，从台湾的冻顶乌龙、 日本的“别尼夫基”茶叶口3 l 中分离出的e o c 0 3 ”m e 、e g c g 4 ”m e ，对抑制i 型变态反应有显著的效果 明显优于e g c g ，因此，e g c g 3 ”m e 、e c , c g 4 ”m e 的发现为抗过敏性疾病的预防研究提供新的研究方向。 1 5 甲基化e q c g 的作用机理及功能 在我国，甲基化e g c g 的研究未现报刊，关于此方面的研究仍是一项空白，在日本e g c g 3 ”m e 、 e g c g 4 ”m e 在抗过敏性方面的生物学功能在体外和体内的实验中都得以证实，部分富含甲基化e g c g 的产品己进入商业发展阶段。 日本研究表明剐：甲基化e g c g 可以阻隔i g e 受器，