（食品科学专业论文）菊米中黄酮类化合物的纯化、分离、鉴定及其抗氧化活性研究.pdf

浙# l ：工商大学硕士学位论文 菊米中黄酮类化合物的纯化、分离、鉴定 及其抗氧化活性研究 摘要 菊米多为菊科植物甘野菊的花蕾制作而成，在我国作为一种饮品 使用有着悠久的历史，具有清热解毒、清火明目、平肝降压、预防感 冒等作用，长期饮用，能生津养颜、延年益寿，对视力衰退及高血压 患者有明显疗效。 黄酮类化合物是野菊花的主要有效成分之一( 菊米初提物总黄酮 含量可达1 3 ) 。目前，菊米中总黄酮还未得到充分开发，本文以菊 米为原料，以黄酮吸附率、解吸率为评价指标，用大孔吸附树脂对菊 米总黄秀阿进行纯化，分别采用静态、动态等试验考察大孔树脂对菊米 总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果显示，2 0 0 7 0 2 树脂分离效 果较好，在最佳吸附工艺条件下二次纯化后黄酮质量分数超过8 5 。 有关菊米化学成分的研究报道较少，为进一步揭示菊米的化学成 分，开发其活性成分，本实验对菊米的化学成分及其生物活性进行了 研究。首先采用液质联用技术分析菊米乙酸乙酯相中的黄酮类化合 物，分析其可能的化学结构，并为进一步分离单体采用何种分离溶剂 提供依据。其次，运用溶剂萃取、硅胶柱色谱法等色谱技术从菊米的 乙酸乙酯萃取物中分离得到3 个黄酮类化合物，运用紫外光谱、质谱 浙江上商人学硕上学位论文 和核磁共振等波谱学检测技术，鉴定出它们的化学结构，其化学结构 分别为( i ) 山奈酚、( i i ) 香叶木素、( i i i ) 橙皮苷，以上化合物 均为首次从该植物中分离得到。 采用d p p h 法评价了初提物总黄酮、纯化后总黄酮及化合物i i i i 的抗氧化活性。结果表明：纯化后的总黄酮有一定的抗氧化能力， 在相同的高浓度条件下，纯化后总黄酮抗氧化能力大于v c 。除化合 物i i i 夕b ，其他两种化合物对d p p h 自由基均具有很强的抗氧化活性， 在相同的低浓度条件下，这两种化合物抗氧化能力就大于v c 。抗氧 化能力的大小顺序是：化合物i i 化合物i v c 化合物i i i 。 关键词：菊米；总黄酮；纯化；化学成分；抗氧化 浙江工商大学硕士学位论文 s t u d i e so nt h ep u r i f i c a t l 0 n 、i s o l a t i o n 、 i d e n t i f i c a t i o na n da n t i o x i d a n ta c t i v i t y 0 f f l a v o n o i d sf r o mj u m i a bs t r a c t j u m i ，a l m o s tm a d ef r o mt h eb u do fc h r s a n t h em e m i n d i e u m ，h a s b e e nu s e da sak i n do fd r i n k sf o ral o n gt i m ei no u rc o u n t r y j u m ih a s a n t i b a c t e r i a l ，a n t i i n f l a m m a t o r ya c t i v i t i e sa n dp l a y sp r o t e c t i v er o l e si n l i v e rd i s e a s e s ，a n di ti se s p e c i a l l ye f f i c i e n tt r e a t m e n to fh y p e r t e n s i o na n d v i s i o nf e e b l e n e s s f l a v o n o i di so n ek i n do fc o m p o n e n t sw i t haw i d e r a n g eo f b i o a c t i v i t i e si nc o m p o s i t a e ( t h ec o n t e n to ff l a v o n o i d si nj u m ii sl3 ) f o rn o w , t h e r eh a s n tb e e nf u l ld e v e l o p m e n ti nj u m i i nt h i ss t u d y , b y u s i n gj u m ia st h em a t e r i a l sa n dw i t ha d s o r p t i o nr a t e s ，d e s o r p t i o nr a t e sa s i n d e x e s ，t h e s t a t i ca n dd y n a m i ca d s o r p t i o nt e s t sw e r ee m p l o y e dt o i n v e s t i g a t ee f f e c t sa n da f f e c t i v ef a c t o r so fp u r i f i c a t i o no ff l a v o n o i d si n j u m iw i t hm a c r o p o r o u sr e s i n t h eo b t a i n e df l a v o n o i d sp r o d u c th a st o t a l f l a v o n o i d sp u r i t yr a t eo fm o r et h a n8 5 b y u s i n gr e s i n2 0 0 7 0 2f o rt w i c e p u r i f i c a t i o n i v 浙江工商人学硕士学位论文 t h e r eh a v el e s ss t u d ya n dr e p o r ta b o u tt h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t s f r o mj u m i i no r d e rt oi n v e s t i g a t et h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t sa n dt h ea c t i v e c o m p o n e n t so fj u m id e e p l y ，i nt h i ss t u d y , t h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t sa n d t h eb i o l o g i c a la c t i v i t yo fj u m iw e r ei n v e s t i g a t e d t h r e ep u r ec o m p o u n d s w e r ei s o l a t e db ys o l v e n te x t r a c t i o na n dc h r o m a t o g r a p h ym e t h o d sf r o m e t h y la c e t a t ee x t r a c t s t h es t r u c t u r e so ft h r e ec o m p o u n d sw e r ee l u c i d a t e d o nt h eb a s i so fs p e c t r a le v i d e n c e s u c ha su v , e s i m s ，1 h n m r ， 1 3 c - n m r t h e ya r ek a e m p f e r o l ( i ) 、d i o s m e t i n ( i i ) 、h e s p e r i d i n ( i i i ) t h o s ec o m p o u n d sw e r ei s o l a t e df r o mt h i sp l a n tf o rt h ef i r s tt i m e t h ea n t i o x i d a n ta c t i v i t yo fr a w f l a v o n o i d s 、p u r i f i e df l a v o n o i d s 、 c o m p o u n d si 1 1 1 w a s i n v e s t i g a t e db yd p p h m e t h o d t h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h ep u r i f i e df l a v o n o i d sh a v es o m ea n t i o x i d a t i v ee f f i c i e n c yi n t h es a m eh i g hc o n c e n t r a t i o ne v e nm o r et h a nv c ；e x c e p tc o m p o u n di i i ， t h e s e o t h e rt w o c o m p o u n d sh a v es t r o n g e rs c a v e n g i n ga c t i v i t y t o d p p h f r e er a d i c a l st h a nv cju s ti nt h es a m el o wc o n c e n t r a t i o n t h e a n t i o x i d a t i v e e f f i c i e n c yo ft h ei s o l a t e dc o m p o u n d sw a si nt h eo r d e ro f d i o s m e t i n ( i i ) k a e m p f e r o l ( i ) v c h e s p e r i d i n ( i i i ) k e y w o r d s ：j u m i ；f l a v o n o i d s ；p u r i f i c a t i o n ；c h e m i c a lc o n s t i t u e n t s ； a n t i o x i d a n ta c t i v i t y v 浙江工商大学硕士学位论文 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 本人为获得浙江工商大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的 材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 签名： 隰冲厂月旭 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解浙江工商大学有关保留、使用学位论文 的规定：浙江工商大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的 复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部 分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内 容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 醐：沙7 年一m 浙江工商人学硕士学位论文 1 1 菊米的研究概况 第1 章引言 菊米以菊科植物野甘菊( c h r s a n t h em e m i n d i u m ) 含苞未放的花蕾为原料经杀 青烘干制成【l 】，是遂昌县的传统饮品，仅产于浙江山区，具有清热解毒、清火明 目、平肝降压、益肾补肾、降脂、消暑、醒酒、预防感冒等作用1 2 1 。长期饮用， 能生津养颜、延年益寿，对视力衰退及高血压患者有明显疗效【3 】。 菊米富含水份、蛋白质、脂肪、膳食纤维、维生素、碳水化合物、氨基酸、 矿物元素等成分，黄酮类化合物是菊米中重要的药效成分。目前，为发挥资源优 势，菊米的种植和饮用己具有一定的规模，遂昌县从1 9 9 6 年开始对遂昌菊米进行 了栽培技术试验，并推广应用。全2 0 0 2 年，遂昌菊米种植面积达到8 6 7 h m 2 ，总 产2 5 3 5 t ，实现产值2 0 2 8 万元，产品远销省内外，出口我国香港地区、比利时和 口本等国。存遂昌建立了无公害农产品生产基地3 0 0 h m 2 ，绿色食品生产基地6 7 h m 2 【4 l 。 虽然如此，相对于国内外对野菊花化学成分的研究【5 8 】来讲，目前对对菊米 中黄酮类化合物的研究很少，仅有本实验室人员初步研究了总黄酮的提取、部分 成分的分离分析、鉴定与相应的活性研究9 ，1 0 】。除此之外，国内外关于菊米的研 究主要集中在其栽培技术【l l , 1 2 年 j 降血压、降血脂、抑菌、抗心律失常和舒张血管 等作用的研究【1 3 1 6 1 等作用。毛胜凤，张新风，余树全1 4 i 研究测定了野菊花4 6 埯 l觥、屺i ( s o f l a v a n o n c s s o f l a v a n o n c s )6 黄烷3 孵爽唧磊耳剃类t 。h a t c 。n c 。，炉 赞烷3 。4 n ：黔炎( 卿一唧 ( d i h ? v d r o e h a l e o 一一n 伪) o ” 挖您鬃类卿 掣燹印 ( x a n t h o n e s ) o ” 黄酮类化合物具有以下物理【2 0 l 和化学性质：黄酮类化合物大多为结晶固体 【2 ，少数为无定形粉末。有取代基( - o h ，o c h 3 ) 或形成交叉共轭体系的多呈 黄色，共轭程度越高颜色就越深，羟基或甲氧基引入7 或4 位时对颜色影响较 大，而引入其他位置则影响较小。通常，黄酮、黄酮醇及其苷类多呈灰黄色至黄 色；查耳酮为黄色至橙色；二氢黄酮、二氢黄酮醇类因c 2 和c 3 之间的双键被 氢化，交叉共轭体系中断，几乎没有颜色；异黄酮因苯环取代在3 位，共轭程 度减少，仅显微黄色；花色素的颜色除了与共轭程度有关外，还与外界环境的p h 有关，p h 8 5 时 变成醌式结构显蓝色。 浙订：工商大学硕r 上学位论文 黄酮类化合物的结构及存在状态使溶解度有显著差异。一般游离苷元难溶或 不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。其中黄 酮、黄酮醇、查耳酮是平面型分子，因分子堆砌较紧密，分子间引力较大，故更 难溶于水，而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面型，故排列不紧密，分子间 引力降低，有利于水分子进入，因而对水的溶解度稍大。多数苷类因以离子形式 存在，具有盐的通性，故亲水性较强，偏向于较大的水溶性。黄酮类分子中具有 的羟基可提高在水中的溶解度。由于它们多数都具有酚羟基，因此纯的苷或苷元 都较易溶于碱性有机溶剂、二甲基甲酞胺等。羟基经甲基化后，则增加在有机溶 剂中的溶解度。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不 溶于苯、氯仿等有机溶剂，糖链越长，则水中溶解度越大。 根据分子中的酚羟基和毗喃环的性质，黄酮类物质具有一些特征的显色反应： 如盐酸镁粉、或钠汞齐等还原反应，结构中带有3 o h 、5 - o h 或邻位羟基者，均 能与金属盐类试剂如铝盐、镁盐、铁盐等形成颜色较深的络合物。各种黄酮类物 质植物成分的颜色反应【2 2 】见表1 2 所示，母示有荧光。 表1 2 各类黄酮类化合物的显色反应 t a b l e1 - 2t h ec o l o rr e a c t i o no fd i f f e r e n tf l a v o n o i d s 1 2 2 黄酮类化合物的分析方法 目前分析黄酮类化合物的方法主要有：分光光度法、紫外光谱法、高效液相 色谱法、核磁共振法和质谱法等。 浙江工商大学硕士学位论文 1 2 2 1 利用分光光度法 黄酮类化合物的测定多采用硝酸铝比色法。其基本原理为黄酮类化合物与 a l 州0 3 ) 3 进行络合显色，以芦丁为标准溶液，在u v 5 1 0n n l 处测定黄酮类化合物 的含量。但硝酸铝比色法专一性较差，测定受处理过程颜色变化的影响【2 3 1 。罗 宪堂【2 4 j 等利用该法测定了山香圆叶中的黄酮类成分的含量。 为了提高硝酸铝比色法的准确度，人们对该法进行了多项改进。尉芹【2 5 1 等 发现硝酸铝比色法在测定杜仲总黄酮时的主要干扰因素是绿原酸，他们采用纸层 析法将样品中的黄酮与绿原酸分离后，再用硝酸铝比色法测定黄酮含量，从而提 高了测定的准确度。彭科怀【2 6 1 等利用黄酮类化合物的铝盐络合物本身具有的黄 色进行比色，检测花粉中总黄酮含量。王宗花【2 7 1 等发现在阳离子表面活性剂 ( c i m a b ) 存在下，m 0 6 + 与黄酮类化合物形成胶束配合物体系，使测定的灵敏度有 了较大的提高，他们以芦丁为对照品，在4 1 0 n m 波长处测定黄酮类化合物的总含 量。 1 2 2 2 紫外光谱 紫外光谱又称紫外一可见光谱，是有机分子中各种电子吸收了紫外光辐射的 能量发生跃迁而产生的。由于紫外光谱与电子运动有关，所以又称为电子光谱。 虽然紫外光谱是由分子内电子吸收了紫外光而得到的，但是并非所有的紫外光都 能被电子吸收。根据量子理论，电子能级是不连续的，电子从某个低能级向某个 高能级跃迁所需要的能量，只对应于某个特定波长的紫外光的能量。因此，当用 紫外光照射有机分子时，若控制光源，按波长由短到长的顺序依次照射样品，则 只有能引起电子跃迁的那些波长的紫外光才能被吸收，其余波长的紫外光会顺利 地通过样品。将吸收强度随波长的变化记录下来，就得到紫外光谱。从化合物的 紫外光谱可以了解有机分子中的共轭体系及其取代情况。 黄酮类化合物，因分子中存在桂皮酰基( c i n n a m o y l ) 及苯甲酰基( b e n z o y l ) 组成 的交叉共轭体系，在甲醇中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。出现在3 0 0 - - 4 0 0 n m 之间的吸收带称为带i ，出现在2 4 0 - - - 2 8 0 n m 之间的吸收带称为带i i 。不同 类型的黄酮化合物的带i 或带i i 的峰位、峰形和吸收强度不同，因此从紫外光谱 可以推测黄酮类化合物的结构类型。 浙江工商人学硕上学位论文 1 2 2 3 高效液相色谱法 高效液相色谱( h p l c ) 法具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高的特 点，适应于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析，是对黄 酮类化合物进行分离分析常用的方法。 高效液相色谱法可用来测定黄酮总含量。在h p l c 法中，有不水解黄酮类化 合物，以芦丁为对照品，以芦丁和槲皮素来定性黄酮色谱峰例或辅以二极管阵 列检测器定性色谱峰来测定总黄酮的含型2 9 1 ；也有经水解，测定黄酮水解后的 主要苷元来测算总黄酮含量 3 0 , 3 1 1 或综合考虑游离苷元与总苷元的含量来推算总 黄酮的含量1 3 2 1 等方法。 高效液相色谱法对黄酮类化合物进行分离分析时，通常用反相c 1 8 色谱柱3 3 1 ， 且优先选择甲醇水及乙腈水体系为流动相，但由于黄酮分子中存在酚羟基，在 水中会部分解离。未解离的羟基与固定相作用导致拖尾现象，但若在流动相中加 入少量的酸即可抑制解离，克服拖尾现象。有时，为了提高分离度常需要进行梯 度洗脱。侯镜德【3 4 1 等以芦丁为标准物，使用高效液相色谱法测定了毛竹叶中的 总黄酮含量。f e r - a si m a dk a n a z e 3 5 1 等采用反相h p l c 法分离了橙皮苷、桔皮苷、 柚皮苷三种黄酮类化合物。 1 2 2 4 核磁共振光谱法 将具有非零自旋量子数的核放入磁场后，用适宜频率的电磁波照射，处在不 同环境中的自旋核就会在不同磁场强度下发生共振，通过记录仪记录下这些信 号，就得到核磁共振谱图。核磁共振谱图得到的信息有三：一、信号的位置对应 化学环境与化学位移；二、信号的积分对应自旋核的数目；三、信号的分裂对应 相邻自旋核的自旋偶合作用。核磁共振现在已经成为黄酮类化合物结构分析的一 种重要方法。1 h n m r 主要根据c 环质子的信号确定黄酮类化合物的结构类型，a 、 b 环质子及取代质子的化学位移、偶合常数、峰面积等参数，解析取代基的种类、 位置、数目及成苷情况等。a 环及b 环质子的化学位移主要有如下规律：b 环上质 子较a 环上质子的共振峰位于较低场；2 - h 及6 h 一般较b 环上其他质子的化学 位移大；a 环5 h 的化学位移较其他a 环质子大；酚羟基成苷后，将使邻位碳上氢 质子的共振信号向低场方向位移。 浙江工商大学硕士学位论文 1 2 2 5 质谱法 在测定黄酮类化合物的配基和苷的结构方面，电子轰击质谱法是一种有效的 方法。特别是在可利用的化合物样品量很少( 即低于1m g ) 的时候。多数黄酮类化 合物甙元因分子离子峰( 衍) 较强，往往成为基峰，故一般无须作成衍生物进行测 定，但是当采取气相质谱( g c m s ) 联用手段进行分析时，为了提高样品的挥发 度，则须作成甲醚衍生物等。黄酮类化合物的甙类如不作成衍生物，则其分子离 子峰一般难以看到。甚至其全甲基化及全乙酞化衍生物，也只能给出一个低强度 的分子离子峰。除了分子离子峰外，黄酮类化合物苷元也常常生成【m 1 】+ ，( m h ) 主峰。如为甲基化衍生物，则可以得到 m 1 5 1 + ，( m c h 3 ) 离子。黄酮类化合物的 化学结构有一定的规律性，许多中药中分离出的黄酮类化合物大多是己知化合物 或其衍生物。因此，根据紫外光谱、核磁共振谱和质谱以及它们的理化常数，一 般能顺利地进行鉴定和结构测定，如果有必要的话，还要通过化学降解或合成方 法来阐明结构。 1 2 3 黄酮类化合物的纯化方法 有关黄酮类化合物分离、纯化的研究报道很多，如重结晶法、树脂法、超临 界流体萃取法、铅盐沉淀法等，以树脂法为多。 1 2 3 1 重结晶法 重结晶法利用黄酮类化合物不溶于酸，易溶于热水、乙醇和丙酮的性质，将 黄酮类化合物粗提取液先进行酸析，再用乙醇或者丙酮溶解提取，浓缩或氨化成 盐析出，再用活性炭脱色，反复重结晶即可得到纯品 1 2 3 2 树脂法 吸附树脂是一类有机高分子聚合物吸附剂，具有物理化学稳定性高、吸附选 择性独特、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和，使用周期长、节 省等优点。该法是以大孔吸附树脂为吸附剂和分子筛的柱色谱分离形式其原理 是吸附性和分子筛性。吸附性主要来源于范德华力和氢键作用力：分子筛性来源 于大孔树脂的多孔性结构产生的渗透和过滤作用被分离的成分根据其分子的大 小彳、= 同和吸附能力的差异而分离【36 近年来大孔吸附树脂在中药成分( 如黄酮、生物碱等) 精制纯化等领域中应用 浙江工商大学硕士学位论文 越来越广泛【3 7 - 3 9 1 。刘健伟【3 8 1 等对d 1 0 1 型( 非极性) 、h z 8 0 6 型( 中等极性) 和a b 8 型( 弱极性) 3 种大孔吸附树脂进行了筛选，并对甘草中总黄酮分离纯化工艺进行 了研究。王雅君【3 9 】等则用d 1 0 1 大孔树脂进行了制备菟丝子总黄酮的研究。这些 研究表明，大孑l 吸附树脂对于黄酮类化合物具有良好的分离纯化效果，与传统的 分离方法相比，具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等优 点 1 2 3 3 超临界流体萃取法 该法( s u p e r c r i t i c a lf l u i d se x t r a c t i o n ，s f e ) 是2 0 世纪8 0 年代发展起来的一项 提取分离技术，利用超临界流体( s u p e r c r i t i c af l u i d s ，s c e ) 为萃取剂，从液体或固 体中萃取出待测组分，其中超临界二氧化碳最为常用( s c f c 0 2 ) 1 4 0 1 。s f e 具有提 取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等 优点，同时还可以通过控制临界温度和压力的变化，达到选择性提取和分离化合 物的目的。超临界状态易于实现，安全无毒，且萃取分离一次完成，无溶剂残留； 是惰性气体，操作安全，价廉易得；萃取可以在室温附近的温和条件下进行，对 易挥发组分或生理活性物质破坏很小，适于天然活性成份的萃取；溶剂和溶质分 离方便，只需改变温度和压力就可以实现溶质和溶剂的分离，操作简便。m i s h i m a 等4 1 1 用s f e - s f c 从黄芩根中萃取黄芩甙和黄芩甙元。姚伟席，刘志敏等都分 别用此法从银杏叶中萃取出了黄酮化合物。因此，在当今人们渴望回归大自然的 潮流中，该提取方法倍受青睐，用超临界二氧化碳提取银杏叶黄酮类成分的方法， 己受到人们的关注，在欧洲已有专利报道【4 3 舶】。 1 2 3 4 铅盐沉淀法 在中药的乙醇或甲醇提取液中加入饱和的中性乙酸铅水溶液，可使具有邻二 酚羟基或羧基的黄酮类化合物沉淀析出；如果中药的乙醇或甲醇提取液中所含的 黄酮类化合物不具有上述结构，则加中性乙酸铅发生的沉淀为杂质，过滤除去， 再向滤液中加碱式乙酸铅，可使其它黄酮类化合物沉淀析出。滤取黄酮类化合物 的铅盐沉淀，悬浮于乙醉中，通入h 2 s 进行复分解，滤除硫化铅沉淀，滤液中可 得黄酮类化合物。由于初生态的硫化铅沉淀具有较高的吸附性，故多不用h 2 s 脱 铅，而用硫酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树脂脱铅。 浙江_ l 商人学硕_ 上学位论文 1 2 4 黄酮类化合物的分离方法 要确定黄酮类化合物的结构，首先必须经过分离得到黄酮类化合物的单体。 分离黄酮类化合物的方法除了经典的溶剂萃取法，常用的方法还有硅胶柱层析、 聚酰胺柱层析、葡聚糖凝胶( s e p h a d e xl h 2 0 ) 柱层析、高速逆流色谱等。 1 2 4 1 硅胶柱层析 常规柱层析中，使用的硅胶是一种坚硬无定型立体网状结构的硅酸聚合物颗 粒，硅胶的分子式是s i 0 2 h 2 0 ，它的内部具有很多小孔，这种孔的存在使得硅胶 具有很大的表面积。在硅胶颗粒的内部，分子与分子之间的相互作用是对称的， 其力量相互抵消，而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到 固体内部分子的作用力大，表面层所受的作用力小，因此在硅胶固体的表面就存 在着这种剩余的力。在一定的条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作 用主要是物理作用。物理作用来自于硅胶表面与溶质分子之间的氢键作用，范德 华力，如诱导力、色散力，其特点是吸附速度快，存相同情况下，吸附过程和脱 附过程是同时进行的，被吸附物质在一定条件下可以被解吸出来。不同的化合物 由于其分子结构不同，因此与硅胶表面作用力的大小也刁 化合物m 。纯化后的总黄酮在低浓度条件下 清除率彳、= 高，但当浓度达到2 0 0 烬m l 。1 时纯化后的黄酮样品对自由基的清除率已 经达至1 9 4 7 2 ，比同等浓度的v c 的清楚能力还要高。 6 3 本章小结 本章实验采用分光光度法测定了菊米所分离单体对d p p h 自由基的清除率并 与对照物v c 的清除率进行了比较。结果表明，采用d p p h 法评价了初提物、纯化 后总黄酮、化合物i i i i 的抗氧化活性，结果表明：纯化后的总黄酮在相同的高 浓度条件下对l t v c 有较强的抗氧化能力。除化合物i l i 乡 b ，其他化合物对d p p h 自 由基均具有很强的抗氧化活性，在较低的浓度条件下清除能力强于v c 。在相同 浓度条件下化合物i i i i 抗氧化的大小顺序是：化合物i i 化合物i v c 化合 物i 浙江工商人学硕r 上学位论文 第7 章结论 1 、通过分析8 种树脂( 包括常用的a b 8 、d 1 0 1 等) 对菊米总黄酮的吸附、解吸 特性，综合考虑吸附量、吸附率、解吸率和各种影响因素，最终确定采用2 0 0 7 0 2 型树脂进行二次纯化，其具有吸附量大，解吸容