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文档简介
新型安全的Barrett食管及食管腺癌动物模型的建立,1,近年Barrett食管(BE)、食管腺癌(EA)发病率显著上升,成为研究热点目前其发病机制尚不十分明确,也没有确实有效的方法来防治有必要建立安全、有效、合理的动物模型进行系统研究,2,目前由反流引起BE、EA的动物模型多为在手术引起食管内胃十二指肠反流的基础上,加用特异性食管致癌剂(如亚硝胺类物质)的方法制作致癌剂长期使用对研究者有害国外初步研究表明,铁剂是一种肿瘤增效剂本研究目的:用铁剂代替致癌剂,建立新型BE及EA动物模型,并研究食管病理改变,3,材料与方法,1、实验动物与分组雄性SD大鼠150只,随机分成3组:对照组15只单纯铁剂组45只单纯胃十二指肠食管反流组45只反流加铁剂组45只,4,2、模型制作方法1)术前处理术前禁食24h,禁水12h。2)手术方式对照组及铁剂组行伪开腹术反流组与反流铁剂组行食管十二指肠端侧吻合术,5,正常大鼠食管胃十二指肠,食管,十二指肠,胃,食管,十二指肠,胃,胃,大鼠食管十二指肠吻合术后,6,3)术后处理及标本采集:术后观察大鼠饮食、活动情况,每周测定体重铁剂组与反流铁剂组于术后2周开始腹腔内注射右旋糖苷铁(50mg/kg,每周2次,共22周)术后8周每组各处死5只,其余大鼠于24周全部处死,取出食管进行研究,7,3、食管标本分析大体形态观察常规HE染色,光镜下组织学检查,8,结果,1、大鼠模型生活情况无反流组及铁剂组饮食、活动、体重基本正常术后两反流组大鼠体重下降,2周后体重均渐上升,至19周左右两组体重逐渐下降至24周,共死亡8只。存活率94.7,9,2、大体形态学观察结果,无反流组大鼠在整个实验过程中食管粘膜光滑。1)术后8周铁剂组仅见少数食管粘膜粗糙。两反流组食管壁增厚,食管不规则增粗,食管下段出现不同程度糜烂、溃疡、增生。反流铁剂组病变的累及范围及严重程度较反流组重,反流组又较铁剂组重。,10,2)术后24周各实验组食管病变较8周时加重铁剂组半数以上存在局灶性粘膜白斑样增生。未出现赘生物两反流组食管较前显著增粗,壁较前显著增厚,病变范围逐渐向上扩大,部分大鼠食管下段出现赘生物,11,24周各组大鼠肉眼可见病变率分别为:对照组0,铁剂组53.8,反流组94.7,反流铁剂组100。对照组及铁剂组与两反流组比有显著差别(P0.05),两反流组间差异无显著性。,12,食管大体形态,对照组食管粘膜,铁剂组食管粘膜,13,食管大体形态,反流组,反流铁剂组,反流铁剂组,14,3、食管粘膜光镜下形态变化,对照组大鼠食管下段组织结构正常1)8周时铁剂组食管粘膜上皮增生,分布不均两反流组食管粘膜出现以下改变:溃疡;上皮过度增生,部分角化。化生:鳞状上皮内出现柱状上皮化生,大部分为肠腺化生。上述改变以反流铁剂组病变程度重,15,2)24周时铁剂组食管粘膜仍主要表现为上皮增生,程度加重,无异型增生及肿瘤发生。反流组与反流铁剂组食管粘膜上皮多为重度增生,角化过度,腺上皮化生更多见,某些部位可发现上皮异型增生及食管腺癌。,16,与反流组比P0.05;与反流铁剂组比*P0.05,*P0.01,各组Barrett食管及食管腺癌发生情况,17,正常食管粘膜,食管溃疡、炎症,18,食管上皮重度增生,腺上皮化生(BE),19,腺上皮异型增生,20,食管腺癌,21,讨论,大鼠行食管十二指肠吻合术,造成胃十二指肠食管混合反流,可诱发明显的食管粘膜损伤(反流性食管炎)过量的铁剂能促使食管粘膜发生增生改变在致食管反流的基础上注射过量铁剂能制作BE及EA动物模型,安全、有效、成功率高,22,可能机制:铁超载有利于DNA的合成和细胞增殖过量铁剂可能造成组织氧化性损伤铁超载破坏机体对恶性细胞的免疫监视铁超载使抗氧化活性的微量元素耗竭外国初步研究表明,铁剂可加重反流导致的食管损伤因此铁剂可能对EA的形成是一增强因子,特别在反流导致粘膜损伤的基
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