（运动人体科学专业论文）淫羊藿对大鼠递增负荷运动后机能变化的影响.pdf

学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研 究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他 个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名：日期：汐孑年彰稠五，日 学位论文版权使用授权书 本人完全了解武汉体育学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关 数据库。 作者签名：妇导师签名：垒鱼生日期：。扩年缃弓丑 1 引言 淫羊藿属植物的化学成分主要为黄酮、木酯素、生物碱和多糖，此外有棕榈酸、 硬脂酸、油酸、亚麻酸等。其中绿原酸具有较强的抗菌作用，含量为0 2 5 。目前 研究表明其中有效成分为多糖和黄酮。淫羊藿首见于神农本草经，本品具有温肾 壮阳，强筋骨，祛风湿的功能。用于治疗肾虚阳痿、宫冷不孕、风湿痹痛等多种疾病。 本品煎剂及醇浸出液有降压、强心、抗心律失常、镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗衰老 等作用。为临床最常用的药物之一。 近年来，对淫羊藿的研究指出，其具有抗衰老，对免疫系统，对血小板凝集，对 骨代谢，对神经系统，生殖系统和肾功能，以及对血流动力学均有积极影响。因此， 推断其对运动机能能力也有积极影响。 自2 0 世纪8 0 年代起，我国运动医学界已开始重视并致力于借助中药来消除运动性 疲劳与提高机体运动机能能力的研究，并已取得显著成果。现代科学研究表吼很 多传统中药如紫河车、黄芪、枸杞、红景天、人参等都具有调节身体机能的作用，增 强机体免疫力，增强机体运动耐力和促进机体疲劳恢复等作用 。 本文所采用的实验是以w i s t a r 大鼠为实验模型。目前，国内外建立运动疲劳模型 主要以大鼠为研究对象，运动方式以跑台和游泳为主口4 ，。游泳是大鼠本能的一种运 动方式，通过给予适宜水温和充足的运动空间，可以使大鼠的运动能力得以充分的发 挥。将大鼠分为三组，分别分为淫羊藿用药与运动组，运动组，以及空白对照组。运 动组( s ) 1 6 只，运动加灌药组( s m ) 1 6 只，空白对照组( c ) 1 6 只。适应性饲养三天， 室温3 4 ，自由饮食。c 组自由饮食，不加任何干预措施；s m 组从第四天开始灌淫羊 藿3 m 1 天，药物浓度1 7 8 9 m 1 ，灌药后三小时开始游泳：s 组和c 组每天灌生理盐水， s 组和s m 组第四天开始游泳，每天一次。所处环境为，水温3 0 ，水深4 5 c m ，具体实 验装置为直径7 5 c m 的透明胶桶。经过适应性游泳练习以后。被试大鼠开始在桶内游泳， 负重体重的5 ，游泳时间渐增，一共游泳8 天。游泳时间从首次2 0 分钟开始，每两天 增加1 0 分钟；至5 0 分钟两次运动后即刻，三组大鼠分别各采尾尖血2 0 u 1 ，用于血成分 的分析，另采1 m l 尾尖血静置3 0 分钟，3 0 0 0 转分，用于血清c k 、s o d 、m d a 及a l t 的测 试。休息2 4 小时后，4 戊巴比妥钠麻醉大鼠，心脏采血3 m l ，静置3 0 分钟，3 0 0 0 转 分，离心1 0 分钟，静置，备用。 2 文献综述 2 1 淫羊藿的研究现状 淫羊藿首见于神农本草经，本品具有温肾壮阳，强筋骨，祛风湿的功能。用 于治疗肾虚阳痿、宫冷不孕、风湿痹痛等多种疾病。本品煎剂及醇浸出液有降压、强 心、抗心律失常、镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗衰老等作用。为临床最常用的药物之 一o 2 1 1 本草资源考证及化学成分 淫羊藿全球有3 0 多个种，我国有1 9 个种，5 个变种。中国是淫羊藿属最主要分 布区，约占世界总数的7 0 诤3 。主要品种有箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿及 朝鲜淫羊藿等。 淫羊藿属植物的化学成分主要为黄酮、木酯素、生物碱和多糖，此外有棕榈酸、 硬脂酸、油酸、亚麻酸等。其中绿原酸具有较强的抗菌作用，含量为o 2 5 。目前研 究表明其中有效成分为多糖和黄酮。朱永智等呻1 比较了不同品种，不同产地的淫羊藿 多糖的含量，证明了朝鲜淫羊藿的多糖含量稍高。本属各种均含有黄酮类有效成分， 其总黄酮类有效成分，其总黄酮含量在2 一6 之间，除药典收载的5 种外，粗毛淫羊 藿分布广、产量大，其总黄酮含量为3 1 9 一4 1 4 。植物黄酮称为植物性激素，有 调节心血管、生殖和免疫系统的作用，是重要的植物有效成分之一，但其水溶性差， 生物利用度低。据国外文献报道n 们，其天然活性成分与磷脂在一定条件下进行复合， 得到天然活性成分磷脂复合物( p h o s p h 0 1 i p i dc o m p l e x ) ，4 即淫羊藿黄酮磷脂复合物 ( e f l ) ，其理化性质和生物特性较原化合物均有不同程度的改变，具有较强的亲脂性， 可有效地提高天然活性成分在体内的吸收，显著地改变其生物有效性。 2 1 2 淫羊藿的药理作用 是重要的植物有效成分之一，但其水溶性差，生物利用度低。据国外文献报道口3 ， 其天然活性成分与磷脂在一定条件下进行复合，得到天然活性成分磷脂复合物 ( p h o s p h o r1 i p i dc o m p l e x ) ，即淫羊藿黄酮磷脂复合物( e f l ) ，其理化性质和生物特 性较原化合物均有不同程度的改变，具有较强的亲脂性，可有效地提高天然活性成分 在体内的吸收，显著地改变其生物有效性。 2 1 2 1 抗氧化作用 淫羊藿中的有效成分( e s p s ) 能明显提高动物血液及其组织中超氧化酶歧化物 ( s o d ) 、谷胱苷过氧化物( g s h - - p x ) 的活性；并能明显降低老龄动物血清及肝组织中过 氧化脂质( l p 0 ) 的含量，使老龄动物心肌中脂褐质含量降低，从而具有抗氧化、延缓 衰老的作用。陈瑜等的研究表明淫羊藿总黄酮的作用规律在于逆转功能对立的促凋亡 基因与抗凋亡基因、促增殖基因与抗增殖基因在衰老淋巴细胞中表达的异常，重塑基 因表达的良性平衡，重建衰老免疫稳态，从而达到抗衰老的目的。 2 1 2 2 对免疫系统作用 淫羊藿可以作用于免疫器官，从而有效的提高动物的免疫能力。王刚等口3 的研 究表明：淫羊藿多糖可显著提高小鼠因荷瘤所导致的胸腺指数下降，溶血素形成减少， 2 溶血空斑值降低及迟发性超敏反应低下。荷瘤鼠的脾指数也显著升高，即淫羊藿多糖 可显著提高荷瘤小鼠的免疫功能。淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮均可显著提高巨噬细胞 对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，可显著拮抗环磷酰胺所致小鼠单核巨噬细胞吞噬功 能降低p ，。淫羊藿及淫羊藿多糖和淫羊藿甙都可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功 能，并能使受环磷酰胺损伤的小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能恢复至正常水平，淫羊 藿总黄酮对大剂量氢化可的松和羟基脲所致免疫功能低下模型小鼠巨噬细胞的吞噬 功能有明显增强作用。淫羊藿及其提取物还可以通过影响巨噬细胞因子的分泌而调节 免疫机能。淫羊藿甙可使小鼠腹腔巨噬细胞在l p s 刺激下，促进i l 一1 和t n f 的产生。i l 一 1 和t n f 是重要的免疫调节物质，同时也是炎症介质，因此肾切除7 8 大鼠的腹腔巨噬 细胞，其分泌i l - 1 和t n f 明显增加可能是炎症反应的结果，淫羊藿可以使i l 一1 恢复正 常水平，缓解炎症反应。对于正常机体，淫羊藿甙则可促进巨噬细胞分泌i l 一1 和t n f ， 增加机体免疫机能。因此，淫羊藿对巨噬细胞分泌i l 一1 和t n f 具有双向调节作用。 一张逸凡等u 训的研究表明：淫羊藿总黄酮对巴豆油所致小鼠耳肿胀、醋酸所致小鼠 腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶所致大鼠足肿胀及巴豆油所致肉芽组织增生具有 显著抑制作用，对佐剂关节炎大鼠的原发性足肿胀和继发性足肿胀均有显著抑制作 用。刘铁汉等n 1 1 引利用放射免疫测定方法( r i a ) 研究淫羊藿苷及其肠菌代谢产物( 宝藿 苷i 和淫羊藿元) 对炎症性细胞因子的作用，发现在不同的实验条件下，淫羊藿苷及其 肠菌代谢产物对各种炎症性细胞因子( i l 一6 、i l 一8 、t n f 一、i l 一1 等) 均有特异的抑 制作用。初步机理研究表明：淫羊藿总黄酮能显著降低炎症渗出物中前列腺素e 和丙 二醛的含量，提高小鼠红细胞过氧化酶的活力。对去除肾上腺小鼠耳肿胀仍然起抑制 作用，对大鼠肾上腺重量和肾上腺内维生素c 含量无明显影响。 2 1 2 3 对血小板凝集的影响 血小板( p l a t e l e t ) 是哺乳动物血液中的有形成分之一。血小板在长期内被看作 是血液中的无功能细胞碎片。由骨髓造血组织中的巨核细胞产生。多功能造血干细胞 在造血组织中经过定向分化形成原始的巨核细胞，又进一步成为成熟的巨核细胞。血 小板表面有许多不同受体，这些受体与相应的配体结合，即被激活。当血管内皮细胞 受损时，内皮下组织中的i 型和型胶原暴露，两者中有一9 肽结构的活性部位。从 这一活性部位通过v w f 因子与血小板膜上的受体糖蛋白1 b 连接，实现了血小板与损伤 部位的粘附。a d p 、肾上腺素、凝血酶和胶原等都是血小板的致聚剂。不同的致聚剂 引起的聚集过程表现有所不同。如加入a d p 可直接引起血小板聚集，而聚集的血小板 释放的a d p 可以再次引起新的血小板聚集。从而可以出现两个聚集波。胶原本身不能 直接引起血小板聚集，只能在诱导血小板释放a d p 后引起。聚集发生的机制至今已知 有花生四烯酸途径，致密颗粒途径和血小板激活因子途径，已知不少因素如c a 2 + 和纤 维蛋白原都与血小板的聚集有关。 李氏等u 副对大鼠体外实验表明，淫羊藿煎剂和多糖都增加1 m i n 和5 m i n 的血小板聚 集率；从体内实验的强度看，多糖是促进在鼠血小板经a d p 诱导的聚集作用的主要成 分，多糖多次灌胃后，循环中血小板数量增多，表示促进血小板生成，同时增强血小 板聚集作用。 2 1 2 4 对血流动力学的影响 近年来淫羊藿影响血流动力学的研究值得关注。血液的流变特性对于维持正常血 液循环，尤其是微循环，有着十分重要的作用，因此血液流变性质的改变直接影响着 3 人体组织血液供应状态。血液粘度增高与降低直接关系着人体组织器官血液供应的 减少于增加，从而影响人体组织器官的功能及代谢。另一方面，对出血后止血有重要 生理意义。事实上，即使在心脏、血管和血容量都正常的情况下，仅仅由于血液流变 特性的改变，也可导致心血管系统疾病的发生，并且还可引起其他器官系统功能和代 谢的变化。当人体患某些疾病时或在某些疾病发生之前，血液流变性质会发生改变， 导致所谓“血液粘滞异常综合症”。这种综合症可以是多种病理过程的病因或者为中 间过程，提示疾病发生的可能或发展程度。岳攀等3 一的研究表明淫羊藿提取物能降 低麻醉犬总外周血管阻力和左室舒张末期压，增加冠状动脉血流量、心输出量、每搏 输出量、心肌收缩参数、心肌舒张参数、心指数和心搏指数。造血器官指生成血细胞 的器官，包括骨髓、胸腺、淋巴结、肝脏以及脾脏。其中骨髓、胸腺、淋巴结及脾脏 又称淋巴器官。毕可红等磕刀还从分子水平研究证实了淫羊藿甙( i c a ) 促进骨髓c f u - - g m 集落形成，提高小鼠的造血功能。淫羊藿甙可诱导机体产生i l 一2 、i l 一3 、i l 一6 等， 作用于骨髓多能干细胞，促使血细胞增殖、分化、成熟，对机体造血功能有重要作用。 2 2 淫羊藿与机能能力 自2 0 世纪8 0 年代起，我国运动医学界已开始重视并致力于借助中药来消除运动性 疲劳与提高机体运动能力的研究，并已取得显著成果u 钊。现代科学研究表明，很多传 统中药如紫河车、黄芪、枸杞、红景天、人参等都具有调节身体机能的作用，增强机 体免疫力，增强机体运动耐力和促进机体疲劳恢复等作用n5 1 。作为运动营养补剂，淫 羊藿对机体的各个脏器都有一定修复，促进作用，可加强机体机能的恢复。 2 2 1 影响机能能力的因素 由于训练对象是人，所以一切训练方法和手段必须遵循人体自身的客观规律。训 练中之所以采用大运动量练习，其生理依据有三点u 引：一是“强度法则 ，由于人 体有反应和适应的基本生理特性，作为刺激人体的训练内容安排，只有保证负荷强度 的不断增加，才能促使机体机能最大水平的发挥，单纯增加训练负荷量不具备引起机 体最大兴奋的条件，也不符合专项训练要求；二是“痕迹效应”，在一定范围内机体 接受的刺激越大，其反应也越大，受到的影响也就越深刻，为训练改进机体机能提供 了坚实而有力的基础：三是“超量恢复 ，机体通过自身的代偿机制和固有的生理反 应，在物质含量、机能水平等方面都会出现超过训练前的现象。另外，大运动量训练 的过程必须遵照循序渐进的原则，要符合人体生理上的基本特性：刺激反应一适应 一再刺激一再反应再适应依次不断循环的过程。如果在训练中不根据运动员的实际 情况，运动负荷的安排相对运动员来说刺激过大，会引起机体不良反应，如过度疲劳、 损伤和疾病等。相反，刺激过小，引起机体的反应也小，以致训练对机体结构、机能 产生的影响也小，保证不了训练质量。 负荷强度一般是指练习的速度、远度、高度和单位时间里练习的负重量等。负荷 量和负荷强度彼此依存又相互影响，任一方面改变必然导致另一方面的变化，而且总 负荷的量和性质也都会发生变化n l 埔一 。引起组织兴奋的刺激( 运动负荷就是一种刺 激) 必须具备一定的强度、一定的时间、一定的强度一时间变化率，三者都必须同时 满足，缺一不可。就强度来说，它存在一个基强度，即刺激的强度小到一定的时候就 不能再小，如果刺激的强度小于基强度，哪怕时间再长，也引起不了组织的兴奋。 但是即使是通过机体的指标制订的运动训练计划，也有无法正常执行的阶段。这 涉及到机体当时的状况以及疲劳的恢复程度。一旦没有完全恢复，而还要继续进行运 4 2 2 4 本文所采用的指标 2 2 4 1 肌酸激酶( c k ) c k 是肌酸激酶的英文缩写，他的主要功能是参与c p ( 磷酸肌酸) 的合成。c p 是一种 高能磷酸化合物，在体内a t p 不足时，c p 能为a d p 在无氧情况下提供高能磷酸键，使其转 变为a t p 以供机体组织活动急需。c p 的主要原料是肌酸，后者由甘氨酸、蛋氨酸和精氨 酸合成。肌酸在肝脏及胰脏中合成后，经血液运到骨骼肌，心肌及大脑等需要磷酸肌酸 的组织，在这些组织中经磷酸化作用，生成磷酸肌酸即c p 。在这一过程中，c l ( 起到了关 键性的催化作用。在机体急需c p 时，也就是在高强度大运动量训练或比赛时，c k 的数量 及活性明显增加，以尽可能多的合c p 。肌酸激酶( c k ) 能催化c p 及a d p 产生肌酸( c ) 及 a t p 。正常情况下。肌细胞膜结构完整，c k 很少渗透出细胞膜，故血清c k 活性很低。 剧烈运动后，肌细胞膜的结构受到影响且有一定程度的损伤时，c k 就会渗透出肌膜， 使血清c k 升高许多倍出1 。血清c k 同运动强度和运动时间关系密切，可反映机体运动 损伤情况。 血清肌酸激酶( c k ) 是骨骼肌细胞中能量代谢的关键酶之一，正常情况下极少透出 细胞膜，运动训练后，血清c k 值升高，一般在运动后8 2 4 h 达最高峰，啪3 升高的幅度 与恢复的快慢，可反映运动强度和训练量的大小以及身体的适应情况。 c k 在代谢过程中催化肌酸( c r ) 和a t p 或磷酸肌酸( c r p ) 和a d p 之间的转化。正常情 况下，c k 存在于肌细胞中，由于其分子量较大，不易透过细胞膜进入血液，故血清中 c k 的含量甚微，当在运动时的牵拉作用以及肌肉收缩过程中代谢产物在肌肉组织中的 大量堆积，导致骨胳肌细胞膜被破坏，c k 就会大量释放入血，引起血浆中的c k 的升高。 而运动与运动系统的损伤息息相关。k i b l e r 等心刀认为大运动量训练容易导致肌肉、 肌腱和骨骼系统损伤，损伤的肌肉无论表现出明显或者不明显的临床症状，都将影响 运动成绩，所以运动训练前对损伤部位的肌肉进行检查评估和训练后采用积极的恢复 措施是很重要的。与注重负荷量的大运动量训练有关的运动性疾病有：运动性贫血、 运动性血尿、运动性蛋白尿、骨膜炎、肌肉痉挛和慢性疲劳综合征等。p e r r y 旧。和h a n 汹1 研究发现大运动量训练容易引起机体发生肌腱和骨膜等慢性炎症( 例如旋转关节 肌腱炎、胫骨骨膜炎和跟腱等) ，引发这些炎症的原因都是过度使用，而且这种慢性 炎症往往被一些急性损伤( 如软组织和关节外伤) 引发的炎症所掩盖，易出现误诊，所 以要特别引起队医的重视，做好恢复措施。c 1 e m e n t 等瑚3 研究发现过度训练是引起跑 步选手跟腱炎的主要原因，是疲劳肌肉过度负荷引起组织微损伤的结果。过度训练综 合征表现为运动成绩下降和疲劳、情绪低落且容易感染疾病。b u d g e t t u 认为过度训 练综合征的治疗和精神压力的解除过程需要3 个月以上的时间。上述疾病的产生与大 运动量训练期间的恢复密切相关口纠。因此，可以通过血清c k 活性的变化评定肌肉承 受刺激和骨骼肌微细损伤及其适应与恢复的敏感的生化指标，间接反应其运动能力。 2 2 4 2 超氧化物岐化酶( s 0 d ) 与丙二醛( _ d a ) s o d 是人体内重要的抗氧化活性物质，它可以清除人体代谢中不断产生的自由基， 保护肌体组织免受自由基和过氧化损伤。长时间疲劳运动可引起心肌线粒体自由基生 成增多，这已是不争的事实口3 1 。而自由基的存在，一方面可使线粒体脂质双层发生脂 质过氧化反应，脂质双层结构和功能发生改变，同时，自由基可以激活p l a ，使p l a 活性增加，膜磷脂降解速度加快。另一方面，自由基可攻击膜内巯基，使膜内蛋白质 分子发生链式聚合反应，线粒体膜渗透性转运通道( m i t o c h o n d r i a l ) 打开的可能性增 6 加，从而使线粒体膜渗透性转运受到影响。这些变化不可避免地导致线粒体膜结构和 功能的改变，表现为膜的渗透性转运增加，ca的转运受到影响，钙代谢发生紊乱，使 线粒体内钙积聚，从而影响到呼吸链酶驯必矧；f口jj蓼垦琏稚聩|寝弱荫胙鞠j 妻萋；鲢塑霞臻掣翼蓊薹韶冬蕊潜簿；弱孺毓墓前剩姻荪蓟蒯篓细胞双-而僧钚 蓦叫i 雾丽蓁鼎签幕婴重雾雌篓冀嘲砑塞鄯落2 ； 戮篓蓉罐i 可抑制血小板功能，而剧烈运动可引起强度依赖性血 小板活化口s 。5 副。尽管结果尚存分歧，但其中原因可能主要是方法上的。除运动强度 外，运动时间；试验对象等也是影响血小板的重要因素。 3 实验方法与结果 3 1 实验方法 3 11 实验对象 w i st a r 大白鼠，雄性，1 6 0 一1 8 0 9 ，4 8 只，购自湖北省动物中心。 3 12 实验试剂 谷丙转氨酶( a l t g p t ) 测试盒( 赖氏法) ；超氧化物歧化酶( s o d ) 测试盒( 黄 嘌呤氧化酶法) ：肌酸激酶( c k ) 测试盒( 比色法) ；丙二醛( 佃a ) 测试盒( 硫代 巴比妥酸法) ；冰醋酸( 自备) 。 3 13 实验仪器 7 2 1可见光分光光度计，血球分析仪。 3 14 动物模型的建立 目前国内外建立运动疲劳模型主要以大鼠为研究对象，运动方式以跑台和游泳为 主b 4 1。跑台运动需要电刺激来使动物产生疲劳状态，运动过程中容易产生运动以外的应激 ，游泳是大鼠本能的一种运动方式，通过给予适宜水温和充足的运动空间，可以使大 鼠的运动能力得以充分的发挥。这两种方法各有利弊，但许多学者认为前者优点更多 ，主要是：大鼠天生就会游泳，在接受游泳训练时，不会产生强烈的抵触情绪，承受体 力外的不良刺激少，是一种卷入“情感因素 最少的训练方式。因此，游泳运动是建立动物疲劳模型的一种比较理想的训练方式。将4 8 只大鼠随 机分为三组，运动组( s ) 1 6 只，运动加灌药组( s m ) 1 6 只，空白对照组( c ) 1 6 只。 适应性饲养三天，室温3 4 ，自由饮食。c 组自由饮食，不加任何干预措施：s m 组从 第四天开始灌淫羊藿3 m l 天，药物浓度1 7 8 9 m l ，灌药后三小时开始游泳；s 组和c 组每天灌等剂量的生理盐水，s 组和s m 组第四天开始游泳，每天一次。所处环境为， 水温30 ，水深4 5 c m ，具体实验装置为直径7 5 c m 的透明胶桶。经过适应性游泳练习以 后。被试大鼠开始在桶内游泳，负重体重的5 ，游泳时间渐增，一共游泳8 天。游泳 时间从首次2 0 分钟开始，每两天增加1 0 分钟：至5 0 分钟两次运动后即刻，三组大鼠分 别各采尾尖血2 0 u 1 ，用于血成分的分析，另采1 m 1 尾尖血静置3 0 分钟，3 0 0 0 转分，用 于血清 x 反映血容量的变化。因此，有报告指出在耐力训练中运输氧的红细胞与氧结合能使 h b 增加，并且使持久性能增强。也有报道指出，红细胞压积是影响血液粘度最重要 的因素，长时间运动使h t 过度增加，导致血液粘度也增大，会对氧运输产生阻碍， 并且使持久性降低。 在运动中或运动后维持良好的红细胞的流变性，对于o ：的运输、c 0 的排出、微 循环的有效灌注、血液黏度以及整个血液维持正常的生理功能是致关重要的。肖国强 等h 羽报道，大强度运动后即刻红细胞由双凹扁平圆盘形变为周围肿胀或一面凹、另一 面凸的帽形。也有研究证明，无论百米h 钔还是马拉松运动员h 5 3 在运动后均出现红细胞 变形能力的显著下降。n a g e s w ar i 等喳报道，力竭运动后，出现全血黏度、血浆黏 度和渗透压升高，红细胞脆性增加、变形能力下降乃至红细胞溶血等对血流变不利的 影响，进而影响人体能量的供给，降低运动能力附j 。 长时间大强度运动时体内产热明显，通常以出汗的方式散热，导致水分和无机盐 的丢失。如果大量排汗，水分和无机盐得不到补充，将形成高渗脱水，由此引起容量 减少，血浆渗透压升高，血液浓缩，血细胞压积增加。在强度升级极限运动试验后， 全血及血浆黏度均明显增加h 。卢晓、赵春景等研究发现，健康成人大强度运动负荷 后，红细胞聚集性增强，异常红细胞增多，并伴有溶血发生，膜对n 0 2 一通透性下降， 红细胞形态发生改变，使球形系数增高，膜蛋白结构发生重新组合：膜的粘弹性系数 增高，单个红细胞膜的流动性和变形性降低。 h b 是血液中o ：和c o ：的主要携带者，血液中9 8 5 的氧是通过h b 携带运输的，机体 h b 水平与多种因素有关1 。由于铁在h b 中以亚铁粒子的形式存在，而h b 处于高氧环境， 故f e 会自动氧化产生o ：，同时大强度耐力训练也产生大量过剩的自由基，在内外自由 基的攻击下，红细胞膜受损，膜变形能力下降而被吞噬h 引。另外，大强度耐力训练导 致机体铁的排出量增加和负氮平衡遭到破坏，使得h b 的生成原料铁和蛋白质相对不 足，从而导致h b 含量下降。 2 2 4 5 白细胞 正常人外周血中的白细胞( w b c ) 包括粒细胞、淋巴细胞、单核细胞，它们起源于 骨髓的多能干细胞1 矧。自细胞的生理功能十分复杂，耳前还不完全清楚，它们通 过不同方式和机理参与机体的免疫反应，发挥识别和清除异物的功能，以达到保护机 体自身的目的1 钇删。一般认为，粒细胞和单核细胞的机能都具有变形运动和吞噬作 用，当人体有微生物、细菌或异物侵入时，这些白细胞可改变形态进入到组织中去， 进行吞噬，消灭异物，对人体起保护作用。淋巴细胞能产生一种免疫物质( 球蛋白) ， 叫抗体，能抵御侵入人体的微生物、细菌或毒素( 总称为抗原) ，这种抵御作用也就是 人体的一种免疫作用。运动会引起白细胞的某些指数改变，随之对人体免疫反应和免 疫功能也将有一定影响。 有研究者唧1 认为大鼠运动力竭后多形核中性粒细胞( p 0 1 ym o r p hn u c l e a r n e u t r o p h 订s ，p 硎s ) 骨架( 微管和微丝) 发生明显改变：p m n 粘弹性发生明显改变，其 粘性参数和弹性模量明显增加。c a i m i 等也作了运动训练对健康受试者、早期急性冠 状动脉硬塞病人及冠状动脉术后病人的白细胞流动特性、p m n 膜流动性及细胞浆液c a 2 + 浓度的趋向的研究。更多的研究集中在运动与免疫的关系即运动对白细胞、淋巴细胞、 中性粒细胞和n k 细胞的数量以及生理功能改变的研究上。如丁玄宙等研究认为剧烈运+ 动会使人外周血中t 淋巴细胞和单核细胞数目明显少，其他研究也报道了剧烈运动损 害运动员的非特异性免疫功能、会抑制n k 细胞的活性。 8 血3 m 1 ，静置3 0 分钟，3 0 0 0 转分，离心1 0 分钟，静置，备用。 s m 组与s 组递增负荷运动情况 运动时间运动强度 第一天适应性游泳无负重 第二天 适应性游泳无负重 第三天适应性游泳无负重 第四天2 0 分钟负重体重的5 第五天2 0 分钟负重体重的5 第六天* 3 0 分钟负重体重的5 第七天3 0 分钟负重体重的5 第八天4 0 分钟负重体重的5 第九天4 0 分钟负重体重的5 第十天5 0 分钟负重体重的5 第十一天5 0 分钟负重体重的5 3 。1 。5 测试原理 3 1 5 1 超氧化物歧化酶( s o d ) 测试原理 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基( 0 2 - ) ，后者氧化 羟胺形成硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。 当被测样品中含s o d 时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝 酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被 测样品的s o d 活力。 高等动物细胞内只有二种s o d 即铜锌一s o d 与锰s o d ，二者相加等于总s o d 。l ( n c 可 抑制铜锌一s o d 活力，而锰s o d 活力不变，而经样本前处理过的样本中锰s o d 活力丧失， 但铜锌一s o d 活力不变。 3 1 5 2 丙二醛( _ d ) 测试原理 ， 过氧化脂质降解产物中的丙二醛( m d a ) 可与硫代巴比妥酸( t b a ) 缩合，形成红 色产物，在5 3 2 姗处有最大吸收峰。 因底物为硫代巴比妥酸( t h i b a b i t u r i ca c i dt b a ) 所以此法称t b a 法。 3 1 5 3 肌酸激酶( c k ) 测试原理 肌酸激酶( c k ) 催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，后者很快全部水解为 磷酸，此时三磷酸腺苷和二磷酸腺苷仍稳定，加入钼酸铵可生成磷钼酸，可进一步还 原钼蓝，根据生成无机磷的量可算出酶的活力。 3 1 5 4 谷丙转氨酶( a l t g p t ) 测试原理 谷丙转氨酶( a l t ) 在3 7 0 c 及p h 7 4 条件下，作用于丙氨酸及a 一酮戊二酸组成的底 物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应3 0 m i n 后( 固定时间) 加入2 ，4 一二硝基苯胼( d n p h ) 1 0 盐酸溶液，既中止反应j 同时d n p h 与酮酸中羟基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性 条件下呈红棕色，于5 0 5 n m 比读吸光度并计算酶活力。 3 1 6 统计学处理 实验数据采用s p s s 统计学软件包进行t 检验，检验显著性水平为p 0 0 5 ，非常显 著性水平为p s m 组 的趋势。 运动后即刻s 组、c 组和s m 组的s o d 活性的平均值分别为：3 7 7 。3 8 ( u m 1 ) 、 3 5 9 6 4 ( u m 1 ) 和4 0 5 4 2 ( u m 1 ) ，虽然各组间s o d 的活性值没有显著性差异，但存在 着s m 组 s 组 c 组的趋势。 运动后即刻s 组、c 组和s m 组的m d a 活性的平均值分别为：1 1 9 6 ( n i i l 0 1 m 1 ) 、 1 1 9 8 ( n i i l 0 1 m 1 ) 和1 3 8 1 ( n m 0 1 m 1 ) ，虽然各组间m d a 的活性值没有显著性差异，但 存在着s m 组 c 组 s 组的趋势。 运动后即刻s 组、c 组和s m 组的a l t 活性的平均值分别为：4 4 5 ( u m g p r o t ) 、 5 3 4 ( u m g p r o t ) 和6 3 0 0 ( u m g p r o t ) ，s m 组与s 组相比较有明显升高，经独立样本t 检验，两者存在显著性差异p = o 0 2 6 ，三组数据存在着s m 组 c 组 s 组的趋势。 3 2 3 运动后即刻血细胞检测结果( 见表2 ) 表2 运动后即刻三组大鼠的血细胞检测 ( x s d ) 备注：宰p c 组 s m 组的趋势。 运动后即刻s 组、c 组和s 鹾组的r b c 活性的平均值分别为：7 9 6 1 0 1 2 l 、 7 4 3 1 0 1 2 l 和6 1 3 1 0 1 2 几，虽然各组间r b c 值没有显著性差异，但存在着s 组 c 组 s m 组的趋势。 运动后即刻s 组、c 组和s m 组的h g b 的平均值分别为：1 4 6 1 4 ( g l ) 、1 3 9 0 0 ( g 几) 和1 2 1 5 7 ( g 几) ，虽然各组间h g b 值没有显著性差异，但存在着s 组 c 组 s m 组的趋势。 运动后即刻s 组、c 组和s m 组的p l t 平均值分别为：4 6 7 4 3 1 0 9 l 、 3 0 3 8 3 x1 0 9 几和2 2 1 5 0 1 0 9 几，虽然各组间p l t 值没有显著性差异，但存在着s m 组 c 组 s 组的趋势。 3 2 4 运动休息2 4 小时后血清检测结果( 见表3 ) 表3 运动后2 4 小时三组大鼠的血清检测 ( x s d ) 备注：l 、岬 s m 组的趋势。 运动休息2 4 小时后s 组、c 组和s m 组的s o d 活性平均值分别为：2 9 1 2 8 ( u m 1 ) 、 3 1 1 4 5 ( u m 1 ) 和2 6 8 0 9 ( u m 1 ) ，虽然各组间c k 的活性值没有显著性差异，但存在着 c 组 s m 组 s 组的趋势。 运动休息2 4 小时后s 组、c 组和s m 组的如a 活性平均值分别为：8 1 l ( n m o l m 1 ) 、 8 7 1 ( n n l o l m 1 ) 和6 2 6 ( 咖0 1 m 1 ) ，s m 组m d a 值明显下降，低于s 组，经独立本t 检 验，两者存在着显著性差异，p = 0 0 1 7 ，s m 组m d a 值低于c 组，经独立样本t 检验存 在着显著性差异p = o 0 3 ，s 组与c 组间没有显著性差异，三组数据存在着c 组 s 组 s m 组的趋势。 运动休息2 4 小时后s 组、c 组和s m 组的a l t 活性平均值分别为：7 3 5 ( u m g p r o t ) 、 7 0 0 8 ( u m g p r o t ) 和6 1 0 0 ( u m g p r o t ) ，虽然各组间a l t 的活性值没有显著性差异， 但存在着s 组 c 组 s m 组的趋势。 3 2 5 运动休息2 4 小时后三组血细胞检测结果( 见表4 ) 表4 运动后2 4 小时三组大鼠的血细胞检测 ( x s d ) 备注：木p s 组 c 组的趋势。 运动休息2 4 小时后s 组、c 组和s m 组的h g b 平均值分别为：1 2 9 3 3 ( g l ) 、 1 2 5 1 7 ( g l ) 和1 2 9 2 0 ( g l ) ，虽然各组间h g b 值没有显著性差异，但存在着 s 组 s m 组 c 。组的趋势。 运动休息2 4 小时后s 组、c 组和s m 组的p l t 平均值分别为：3 1 7 3 3 1 0 9 几、 3 5 5 8 0 1 0 9 l 和3 4 5 1 7 1 0 9 l ，虽然各组间p l t 值没有显著性差异，但存在着c 组 s m 组 s 组的趋势。 1 3 4 分析与讨论 4 1 淫羊藿对抗氧化能力的作用 自d i l l a r d ( 1 9 7 8 ) 首次将自由基的研究引入运动医学领域以来，关于运动对自由 基及其防御体系的影响已有很多报道。生物体内内源性自由基不断形成及清除，一旦 这种产生与清除之间失去平衡而引起自由基浓度增高到一定程度就可能会对组织细 胞造成损伤。 s o d 是一种金属酶，是机体主要的自由基清除剂，能使生物体内多种途径生成的 毒性o 厂猝灭。保护细胞不受自由基损伤。 i d a 是脂质过氧化物过程中一种较稳定的产 物，通常被用于反映生物体的脂质过氧化程度，也间接的反映生物组织中自由基生成 的多少，从而也反映机体细胞受氧自由基攻击的严重程度。s o d 活性较高时，m d a 含量 相应较低，说明机体能有效清除自由基，因此我们通过检测s o d 和m d a 来评估组织内自 由基代谢情况。 运动后即刻，s 组，c 组，s m 组的泐a 值并无统计学差异。在正常生理情况下，自由 基的产生和清除处于平衡状态，体内的自由基防御体系能有效地清除所产生的自由基， 使自由基浓度保持相对恒定。而运动会使这种平衡遭到破坏。运动中耗氧量增加，能 量代谢加强、抗氧化酶活性下降、胞浆c a 2 + 离子浓度升高都可以引起氧自由基增多。 氧自由基及其引起的脂质过氧化反应可以攻击细胞膜及线粒体等其它生物膜，造成离 子、能量代谢紊乱，从而导致运动疲劳。运动对于人体来讲就是“破坏”。人体的运 动就是机能的平衡被反复的打破。所以，运动会改变机体内原来的氧自由基水平。而 本实验运动后即刻，m d a 浓度并没有增高，表明分解代谢状态增加氧化应激，机体的 抗氧化能力却并没有受到损伤。其机制很可能是由于，本实验所采用的运动负荷不够 大，没有引起足够的刺激，来打破体内原有的这种平衡。其他研究证实，急性运动能 促进体内自由基的产生，且产生的多少与运动强度大小及持续时间长短存在一定关 系，而体内相应存在的抗自由基酶系统各家报道不一。不同的运动方式，s o d 和m d a 的变化情况不同。d a v i s e ( 1 9 8 2 ) 发现，大鼠在跑台上进行亚极量运动至力竭时，肝脏和 骨胳肌中的自由基信号明显增强，自由基的产生率增加2 3 倍。徐波( 1 9 9 6 ) 等研究了 一次急性力竭运动对大鼠骨骼肌红肌、白肌中脂质过氧化水平的影响，结果表明，运动 组红肌中的m d a 含量较安静组有显著性升高( p c 组 s 组的趋势。 运动2 4 小时后，c 组，s 组的m d a 值均与s m 组存在显著性差异，且三组间存在着 c 组 s 组 s m 组。运动后即刻m d a 没有出现显著性差异，而运动停止后2 4 小时，这种差 异表现出来。究其原因，很可能是在运动后即刻，体内的自由基水平已经出现显著性 变化，只是由于运动后即刻，自由基尚未大量融入至血液，因此，立即对大鼠尾尖采 血，未见m d a 变化。而随着2 4 小时后的逐渐恢复，运动性氧自由基在体内浓度逐渐平 衡，所以2 4 小时后所得数据为显著性差异。一般认为，运动引起自由基增加的机制有 两点：一是剧烈运动时耗氧量增加，氧代谢的结果必然产生自由基；二是局部组织缺 氧及代谢产物堆积，影响线粒体的氧化功能，同时氧气大量消耗为氧的单电子还原提 供了更多的机会，从而激发了一系列产生更多自由基的反应。运动源性自由基增多， 脂质过氧化物直接损伤内皮细胞，导致内皮细胞退行性变化和通透性改变过程会加 强，m d a 是脂质过氧化产物( l p o ) 代谢的代表性产物，是自由基作用与生物膜中的多 “ 4 3 淫羊藿对免疫能力的影响 运动员安静时外周血白细胞总数及其分类与非运动员无明显差异嘲1 但也有相反 报道。庄洁等汹3 用流式细胞仪分析了3 1 例优秀运动员安静状态时的外周血淋巴细胞， 并与成人正常值比较，除c d 3 + 细胞无显著差异外，c d 4 + 和c d 8 + 分别明显降低和升高， c d 4 + c d 8 + 比值下降。不同强度和持续时间运动均会引起外周血粒细胞，单核细胞，自 。然杀伤细胞和t ，b 淋巴细胞出现不同程度增加，尤其是中性粒细胞朋1 。 本研究发现，无论是在运动后即刻，还是在运动恢复2 4 小时后，s m 组的w b c 值 都与s 组的w b c 值存在显著性差异。分别是运动后即刻，s m 组与s 组间w b c 的浓度 间存在着显著性差异，p = o 0 1 5 ，运动后即刻s m 组的白细胞总数的仅为7 7 5 1 0 9 个 l 。运动、刺激和疾病对免疫系统各有独特的效应，又可相互影响。如运动可影响对 疾病的抵抗力，而疾病可影响运动能力。运动后血液循环加速，因此进入血液中的白 细胞大量增多。同时，还能刺激体内某些激素的分泌，加快骨萌生成白细胞的速度， 促进血液中白细胞数量增多，存活时间延长。白细胞是具免疫能力的一类细胞，通过 血液循环系统遍及全身各器官。表明相同强度运动后，s m 组的炎性损伤较小，该组 大鼠的素质较好，药物有降低运动引起的炎性损伤的作用；当然储备血量的参与循环 后，导致血液被稀释引起1 j l b c 偏低也是一个因素。而当恢复2 4 小时后发现，仅有s m 组的的白细胞浓度增长，而其他两组的船c 的浓度则是不同程度的下降，且s m 组与 s 组的增加值间存在着显著性差异，p = o 0 4 2 ，即经过2 4 小时恢复后，s m 组w b c 升高 表明，在恢复过程中，s m 组血量的恢复，导致稀释血液又被浓缩了，恢复到或接近 正常状态。提示，s m 组的大鼠体内的炎症反应较s 组小。有研究表明，运动导致的 炎症反应可引起白细胞增多。运动诱发白细胞增多的程度与运动强度有关，并与训练 水平成反比关系。叶东惠研究证明身体素质状况与运动后即刻白细胞总数增加存在着 反比关系。因此，淫羊藿能降低运动过程及恢复过程中机体的大强度刺激带来的应激 反应。 4 4 淫羊藿对运动刺激后骨骼肌的保护作用 本实验过程中，在运动后即刻以及2 4 小时后，s m 组，s 组，c 组的c k 值均没有统计 学差异。但是存在一定的变化趋势。据文献报道，运动可引起血清c k 活性升高，其变 化存在个体差异，且受负荷强度、时间、方式等因素影响。也有入认为它与运动强度 和运动时间关系密切。m m k a n t e r 及殷劲等的实验证实了大强度或疲劳负荷时血清 c k 均增高显著。也有人认为，血清c k 增高与运动持续时间有关，短时间运动对c k 影响 不大，只有较长时间运动，才能使c k 活性增加，运动时间越长，其活性增加愈明显。 因此，提示该强度的运动对机体骨骼肌产生了一定的刺激，而这种运动的刺激包 括强度，负荷，所持续时间没有足够大到引起骨骼肌的损伤。但是s m 组有骨骼肌损伤 低的趋势，从而试推断其具有保护骨骼肌的作用，但仍需进一步验证。同时，也可试 推断s m 组的大鼠在其他条件等同的条件下具有更好的适应该强度的运动能力；此外， 恢复2 4 小时后，各组的c k 值均有不同程度的下降，s m 组的c k 值仍旧最小，说明此时s m 组的大鼠的骨骼肌损伤具有最小的趋势，该组大鼠的骨骼肌的功能状态可能最好，因 而可推断其具有能够更好的适应更大强度的运动的能力，具有可被发掘的运动能力的 潜力最大。在此过程中，s 组的c k 值一直是最高的，提示此强度下的运动可能已经给 大鼠骨骼肌造成伤害，若没有任何干预，其恢复程度较s m 组慢。c 组的c k 值一直较s m 组略高，可能与饲养环境，室温较高有关，导致大鼠代谢加快，引起c k 值偏高，虽然 不具有统计学意义，但无法排除是方法上的问题，可进一步实验检验。 1 6 4 5 淫羊藿对血细胞的影响 红细胞内存在的血红蛋白，可进行氧气和二氧化碳的运输，并缓冲机体内产生的 酸碱物质。在衡量有氧运动时，常选用的重要指标。像著名的高原训练法，以及国际 反兴奋剂组织明文禁止的e p o 都是通过改变h g b 而实现提高运动员的有氧能力的。 本研究表明，运动后即刻，r b c 的值为：s 组 c 组 s m 组，h g b 的值为：s 组 c 组 s m 组；表明经过一周多的渐增负荷的训练，s 组的r b c 和h g b 较c 组有提高的趋 势，运动导致运动即刻的r b c 的下降，一方面由于运动加速了红细胞膜的机械损伤， 引起溶血：另一方面j 由于运动引起体内代谢加快，体内渗透压的改变及氧自由基的 增加，均可导致r b c 破裂。但是本实验的结果表明，s 组r b c 的值具有高于c 组的趋 势。这种现象很可能是由于此强度对于大鼠适中，并未造成r b c 的溶血以及破裂；另 一方面，很可能是由于当机体运动过程中失水过多，引起r b c 和h g b 浓度的升高。因 为，运动引起的血量的变化也可引起机体r b c 和h g b 浓度的变化，血液的稀释作用， 导致机体r b c 和血红蛋白的浓度降低也是原因r b c 和h e 浓度变化的原因。 而s m 组从数值上看，具有低于s 组和c 组的趋势，可能是由于运动过程中，s m 组充分调动了储备血量，导致了r b c 和h g b 被稀释了，稀释了的血液降低了血液的粘 稠度，。促进氧的运输、增加心输出量和氧在机体的转运，提高机体的有氧运动能力。 也可能由于运动过程中的脱水或者饲养条件导致s 组和