细胞化学染色法PPT课件.ppt

细胞化学染色,1,一、概念,细胞学和化学相结合的一门科学。以细胞形态学为基础，结合运用化学反应原理对血细胞内的各种化学物质（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。,2,二、临床应用,辅助判断急性白血病的细胞类型仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确率约50-70%，如结合细胞化学染色则可提到90%以上。辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断观察疾病疗效和预后发病机制的探讨,3,三、基本步骤,固定显示复染,4,固定,目的：保持细胞结构及化学成分不变。方法：物理法干燥、火焰固定化学法蒸汽固定、液体固定（甲醛、乙醇、丙酮等）,5,显示,偶氮偶联法联苯胺法普鲁士蓝反应雪夫反应金属沉淀法,6,复染,目的：使各种细胞显示出来便于观察染核：中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等染浆：伊红、刚果红、光绿等,7,四、种类,过氧化物酶染色、苏丹黑染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸-雪夫反应-醋酸奈酚酯酶染色酸性磷酸酶染色铁染色,8,过氧化物酶染色(POX),过氧化物酶：是中性粒细胞含量最多的一种酶主要存在于线粒体和溶酶体中主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内氧化还原过程。,9,原理Washburn法四甲基联苯胺法改良pereira染色法,10,四甲基联苯胺法H2O2溶酶体颗粒中的H2OO2四甲基联苯胺O2联苯胺蓝联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠O2蓝色物质（沉淀）,11,正常细胞的染色反应粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）嗜酸阳性最强嗜碱阴性单核细胞系统阴性或弱阳性，（颗粒少而细）其他细胞阴性,12,13,14,临床评价：辅助诊断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色。,15,、帮助鉴别诊断急性白血病的类型急性粒细胞白血病：原粒可呈阳性(粗大，局限性分布），阴性不可排除。急性淋巴细胞白血病：规定阳性率。急性单核细胞白血病：原单可为阴性，少数可弱阳性，（少而细小，常弥散分布）。,16,17,18,急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病鉴别AML-M3强阳性组织细胞白血病、恶性组织细胞病与急单前两者阴性,19,2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化活性增高：再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病活性减低：急粒、慢粒、急单、MDS、放射病、退化性中性粒细胞,20,苏丹黑染色,原理：能溶解于细胞内含脂结构中，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。正常细胞的染色反应同（染色）临床评价染色特异性高于染色染色敏感性高于染色,21,中性粒细胞碱性磷酸酶染色（）,原理：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。,22,中性粒细胞碱性磷酸酶染色（）,原理：磷酸奈酚钠底物PH9.6碱性磷酸酶(中性粒细胞胞质中)奈酚+偶氮盐(有色沉淀),23,正常血细胞染色反应NAP主要存在于中性成熟粒细胞(杆状分叶),24,25,26,27,参考值：成人NAP阳性率10%-40%；NAP积分40-80分,28,积分增加：细菌性感染、再生障碍性贫血、骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。,29,积分下降：慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合症、恶性组织细胞病等。,30,疾病的鉴别类白血病反应慢性粒细胞性白血病细菌性感染病毒性感染急粒急淋恶性淋巴瘤恶性组织细胞病,31,5.恶性组织细胞病反应性组织细胞增多症6.真性红细胞增多症继发性红细胞增多症原发性血小板增多症继发性血小板增多症8.再生障碍性贫血阵发性睡眠性血红蛋白尿,32,过碘酸-雪夫反应,原理：乙二醇基（多糖类物质中）过碘酸双醛基无色品红紫红色化合物,33,正常血细胞染色反应,粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）嗜酸胞质呈红色,颗粒不着色嗜碱反之红细胞系统阴性单核细胞系统原单（可为阴性）,其他为阳性。,34,35,36,淋巴：大多阴性，少数阳性。巨核及血小板：阳性,37,临床评价,红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）白细胞系统疾病：急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状）急粒：少数原粒呈阳性急单：可呈阳性,38,39,M5PAS(+),40,AML-M6,41,42,AML-M7,43,M7PAS(+),44,45,46,47,-醋酸萘酚酯酶染色,原理-醋酸萘酚PH中性-醋酸萘酚酯酶-萘酚+重氮盐(坚牢蓝B)(黑色或灰黑色),48,正常血细胞的染色反应单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+）单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。氟化钠抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的抑制前的阳性率/积分100%,49,临床评价：1、鉴别白血病类型急单急粒急性早幼粒细胞白血病（强阳性，不被抑制）急性粒单细胞白血病,50,其他脂酶染色,氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色几乎仅出现在粒细胞、特异性高。临床意义：急性粒细胞白血病有一定数量白血病细胞阳性，可以肯定白血病细胞中有粒系成分，阴性不排除急粒。,51,醋酸AS-D萘酚酯酶染色染色结果、临床意义基本同-NAE染色。-丁酸萘酚酯酶染色临床意义同-NAE染色，特异性低于-NAE染色,52,酸性磷酸酶染色,原理：偶氮偶联法：Gomori硫化铅法抗酒石酸酸性磷酸酶染色,53,54,55,临床评价：诊断多毛细胞白血病毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石酸抑制。,56,57,铁染色,1、原理：铁+亚铁氰化钾酸性环境亚铁氰化铁（兰色）,58,2、正常血细胞的染色反应贮存铁部位：巨噬细胞和幼红细胞细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状可将细胞外铁分为（-）、（+）、（+）（+）、（+）。,59,细胞内铁：指存在于中幼红、晚幼红、成熟红细胞中的铁。铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。环形铁粒幼细胞：幼红细胞胞质内蓝色颗粒在10(6)颗以上，围核周2/3(1/2)以上者。,60,61,62,细胞外铁,63,细胞内铁,64,环形铁粒幼细胞,65,结果判读：细胞外铁：可分五级标准(-)：无颗粒(+)：有少数铁颗粒或偶见铁小珠(颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者称为铁珠)。(+)：有较多的铁颗粒和小珠。(+)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。(+)：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。,66,细胞内铁：用油镜计数100个中、晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞(铁粒幼红细胞)的百分率。根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况，将铁粒幼红细胞分为四型：I型：幼红细胞内含铁粒1-2粒；型：幼红细胞内含铁粒3-5粒；型：幼红细胞内含铁粒610粒；型：幼红细胞内含铁粒10粒。,67,参考范围：细胞外铁：（+）（+）细胞内铁：