生化反应PPT课件.ppt

生化反应,生化反应,1,生化反应,用生化试验的方法，检测细菌对糖、蛋白质等基质的分解能力和代谢产物，用于鉴别细菌的反应，统称为生化反应。,2,糖醇类发酵试验,细菌可发酵的基质糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖等）醇（甘露醇）糖苷（水杨苷）发酵后产生的有机酸乳酸、醋酸、丙酸等发酵后产生的气体甲烷、氢、二氧化碳等,3,一、糖醇类代谢试验,糖发酵试验单糖发酵试验双糖铁/三糖铁发酵试验甲基红试验V-P试验葡萄糖氧化发酵试验（O/F试验)七叶苷水解试验,4,糖发酵试验,原理细菌分解糖丙酮酸酸性产物(或产酸产气)pH指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)培养基：糖发酵管、微量糖发酵管试剂：溴甲酚紫(6.85.2紫黄)应用：观察细菌对糖的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定,5,糖发酵试验结果判断,6,糖发酵试验溴甲酚紫指示剂,7,V.P.试验甲基红试验（M.R.试验）,细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。丙酮酸代谢途径的不同，可通过V.P.和M.R.这一对实验进行鉴别。,8,葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH降至4.4以下,甲基红试剂,培养基变红,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P试剂,培养基变红,脱酸,分解,9,甲基红试验葡萄糖蛋白胨水,培养基：葡萄糖蛋白胨水试剂：甲基红试剂(PH4.46.2红黄)结果：培养基呈现红色：+培养基不变色：应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要见于大肠肝菌与产气杆菌的鉴别,10,甲基红试验,11,V-P试验,原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。培养基：葡萄糖蛋白胨水结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：应用：主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,12,V-P试验,13,氧化/发酵（O/F）试验,原理：细菌对糖的代谢分有氧氧化和无氧酵解。糖在有氧环境下氧化完全，生成CO2和水。在无氧环境下，进行不完全分解（发酵），生成酸类、醇类和气体。发酵型细菌在有氧和无氧的环境中，都可以分解糖。氧化型（非发酵菌）细菌在无氧环境中，不能分解糖，应用：1.葡萄球菌属链球菌属的鉴别O/F发酵型氧化型2.革兰阴性杆菌间的鉴别非发酵菌发酵菌,14,几类细菌O/F试验结果,15,氧化发酵试验（O/F试验）,16,七叶苷水解试验,1.原理：某些细菌（如肠球菌）可水解七叶苷，生成葡萄糖和七叶素。七叶素可与培养基中的柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色的化合物沉淀，使培养基变黑。2.方法：细菌接种培养基24h结果3.结果：黑阳性不变-阴性应用应用：主要用于肠球菌与其他链球菌的鉴别。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。,17,双糖或三糖铁试验,原理：用于观察细菌对糖的发酵能力，以及是否产生硫化氢，可初步鉴定细菌的种属。双糖或三糖：葡萄糖、乳糖或葡、乳、蔗糖葡萄糖:乳糖、蔗糖1:10指示剂：酚红(6.88.0黄红)结果：K/A葡萄糖/乳糖(+/-)，产酸少，斜面因接触空气被氧化变红，底层变酸变黄。红/黄A/A葡萄糖/乳糖(+/+)，产酸大，斜面和底层均成酸性而变黄。黄/黄细菌分解含硫氨基酸，生成硫化氢，遇铁离子形成黑色的硫化铁沉淀物。黑,18,19,蛋白质类代谢试验,靛基质试验硫化氢试验尿素酶试验枸橼酸盐利用试验氨基酸脱羧酶试验（赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸）,20,靛基质试验,原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚（靛基质），当加入吲哚试剂（对位二甲氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚。培养基：蛋白胨水或半固体（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35培养2448h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。（4）结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如ECO、产酸克雷伯菌、普通变形杆菌等,21,靛基质试验原理,色氨酸酶,色氨酸,靛基质（吲哚）,玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）,对二甲基氨基苯甲醛,22,靛基质试验,23,硫化氢试验,原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基结果：培养基变黑为阳性，不变黑为阴性应用：常用于肠道杆菌的鉴定沙门菌属、爱德华菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性,24,硫化氢试验,25,尿素酶试验,原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基试剂：酚红指示剂(6.88.0黄红)结果：培养基变红：+培养基不变色应用：肠杆菌科属间鉴定奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性、雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性、布氏杆菌等,26,尿素酶试验原理,尿素,尿素酶,氨+CO2,培养基pH升高,酚红呈碱性变色,27,尿素酶试验,28,枸橼酸盐利用试验,原理：某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐或铵盐作为碳源，分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，指示剂呈碱性反应培养基：枸橼酸盐培养基试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）结果：培养基变蓝：+培养基不变色：应用：肠杆菌科属间鉴别,29,枸橼酸盐利用试验原理,枸橼酸盐,铵盐,碳酸盐,氨盐,培养基PH上升,溴麝香草酚蓝呈碱性变色,培养基变蓝,培养基,30,枸橼酸盐利用试验,31,氨基酸脱羧酶试验（赖aa、鸟aa、精aa水解）,原理：细菌产生的脱羧酶可使氨基酸脱掉羧基，生成胺和CO2，胺可使培养基PH升高，指示剂变色。（1）赖氨酸：脱羧生成尸胺和CO2（2）鸟氨酸：脱羧产生腐胺和CO2（3）精氨酸：脱羧形成精胺和CO2指示剂：溴甲酚紫（5.26.8黄紫红)结果：紫：阳性黄阴性应用：沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。,32,氨基酸脱羧酶试验（赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸）,33,肠杆菌科作为推测性鉴定的重要生化反应,34,IMViC+-不活泼大肠杆菌与痢疾志贺氏的鉴别,35,i-+肺炎克雷伯与阴沟杆菌、产气杆菌、粘质沙