（生理学专业论文）迷走复合体微量注射nesfatin1对摄食及葡萄糖敏感神经元的作用.pdf

，嬲煳鳓 类神经元经多管微电极给予0 9 n a c l ，注射前后神经元放电频率的变化无统计学意义。 3 ) d v c 内微量注射n e s f a t i n - 1 后摄食量减少，体重减轻。 结论n e s f a t i n 一1 能够调制d v c 胃扩张敏感神经元和葡萄糖感受神经元的兴奋性，可 以使大鼠摄食减少，体重减轻。这可能是n e s f a t i n 一1 抑制摄食的部分机制。 硕士研究生：王文杰( 生理学) 指导教师：蒋正尧教授 关键词：电生理；n e s f a t i n - l ：迷走神经复合体( d v c ) ；葡萄糖敏感神经 元；摄食 n e s f a t i n - 1a c t so nt h ed o r s a lv a g a lc o m p l e xt oi n h i b i tf e e d i n ga n dt o m o d u l a t et h ea c t i v i t yo fg l u c o s e , s e n s i n gn e u r o n s a b s t r a c t n e s f a t i n - 1i sa n8 2a m i n o a c i dp e p t i d et h a t s u p p r e s s e s f o o di n t a k ea f t e ri n t r a c e r e - b r o v e n t r i c u l a ri n j e c t i o n n e s f a t i n 一1 ( r e s i d u e s 1 - 8 2 ) i sas e c r e t e df r a g m e n t n u c b 2i s c l e a v e d p o s t t r a n s l a t i o n a l l yb yp r o h o r m o n ec o n v e r t a s e si n t oan - t e r m i n u s f r a g m e n t n e s f a t i n 一1a n dt w oc - t e r m i n a lp e p t i d e s , ，n e s f a t i n - 2a n dn e s f a t i n - 3 ，i c v i n j e c t i o no f n e s f a t i n , 一1d e c r e a s e sf o o di n t a k ei nad o s e - - d e p e n d e n t m a n n e r ，w h e r e a si n j e c t i o no fa n a n t i b o d yn e u t r a l i z i n gn e s f a t i n 一1s t i m u l a t e sa p p e t i t e i nc o n t r a s t i c v i n j e c t i o no fo t h e r p o s s i b l ef r a g m e n t sp r o c e s s e df r o mn u c b 2d o e sn o tp r o m o t es a t i e t y ，a n dc o n v e r s i o no f n u c b 2t on e s f a t i n 一1i sn e c e s s a r yt oi n d u c ef e e d i n gs u p p r e s s i o n c h r o n i ci c v i n j e c t i o no f n e s f a t i n - 1r e d u c e sb o d yw e i g h t ，w h e r e a sr a t sg a i nb o d yw e i g h ta f t e rc h r o n i ci c v i n j e c t i o n o fa na n t i - n e s f a t i n 1 a n t i b o d yn e s f a t i n , - 1 一i n d u c e da n o r e x i ao c c u r si nz u c k e rr a t sw i t ha l e p t i nr e c e p t o rm u t a t i o n ，a n da na n t i - n e s f a t i n - 1a n t i b o d yd o e sn o tb l o c kl e p t i n i n d u c e d a n o r e x i a t h i ss u g g e s t st h a tn u c b 2i sal e p t i n - i n d e p e n d e n ts a t i e t ys i g n a l i n g i nc o n t r a s t ， c e n t r a li n j e c t i o no fa - m e l a n o c y t e - s t i m u l a t i n gh o r m o n ee l e v a t e sn u c b 2 g e n ee x p r e s s i o ni n t h ep a r a v e n t r i c u l a rn u c l e u s , ，a n ds a t i e t yb yn e s f a t i n - 1i sa b o l i s h e db ya na n t a g o n i s to ft h e m e l a n o c o r t i n 一3 4r e c e p t o r , w ei d e n t i f yn e s f a t i n - 1a sas a t i e t ym o l e c u l et h a ti sa s s o c i a t e d w i t hm e l a n o c o r t i ns i g n a l l i n gi nt h eh y p o t h a l a m u s o b j e c t i v et oe x a m i n et h ee f f e c t so fn e s f a t i n - 1o ng a s t r i cd i s t e n s i o ns e n s i t i v en e u r o n sa n d g l u c o s e r e s p o n s i v en e u r o n si nr a td o r s a lv a g a lc o m p l e x ( d v c ) m e t h o d s ( 1 ) e l e c t r o p h y s i o l o g i c a lr e c o r d i n gw a sa d o p t e dt oi n v e s t i g a t et h ec h a n g e si nf i r i n gr a t eo f g a s t r i cd i s t e n s i o nn e u r o n sa n dg l u c o s e r e s p o n s i v en e u r o n sb e f o r ea n da f t e rm i c r o i n j e c t i o no f n e s f a t i n 1i n t ot h ed v c ( 2 ) e t h o l o g ym e t h o dw a sa d o p t e dt oi n v e s t i g a t et h ec h a n g e so ff o o di n t a k ea n db o d yw e i g h t b e f o r ea n da f t e rm i c r o i n j e c t i o no fn e s f a t i n - 1i n t ot h ed v c r e s u l t s ( 1 ) t h e1 0 9n e u r o n sw e r er e c o r d e di nd v c ，o fw h i c h3 1w e r ea c t i v a t e db yg l u c o s ea n d i d e n t i f i e da sg l u c o s e e x c i t e d ( g l u c o s e e x c ) n e u r o n s ；4 6w e r ed e p r e s s e da n di d e n t i f i e d 嬲 g l u c o s e i n h i b i t e d ( g l u c o s e i n h ) n e u r o n s ；o t h e r3 2f a i l e d t or e s p o n dt og l u c o s e o f2 6 g l u c o s e e x c i t e dn e u r o n se x a m i n e di nr e s p o n s et on e s f a t i n - 1 ，2 0w e r ea c t i v a t e d ，3f a i l e dt o r e s p o n dt on e s f a t i n 1 o f3 9g l u c o s e i n h i b i t e dn e u r o n se x a m i n e di nr e s p o n s et on e s f a t i n - 1 ， 3 3w e r es u p p r e s s e d ，1w a sa c t i v a t e d ，a n d5f a i l e dt or e s p o n dt on e s f a t i n - 1 ( 2 ) e i g h t y n i n en e u r o n sw e r er e c o r d e di nd v c ，6 9o ft h e mr e s p o n d e dt og a s t r i cd i s t e n s i o n ( g d ) ，4 8w e r ee x c i t e d ( g d e x c ) ，2 1w e r ei n h i b i t e d ( g d i n h ) ，a n d2 0f a i l e dt or e s p o n dt o g d 3 2o u to f4 2g d e x cn e u r o n sw e r ee x c i t e d ，w h e r e a s1 6o u to f1 8g d - i n hn e u r o n s w e r es u p p r e s s e db yn e s f a t i n 一1 t w ot y p e sn e u r o n sw e r ef a i l e dt or e s p o n dt o0 9 n a c i ( 3 ) f o o di n t a k ea n db o d yw e i g h td e c r e a s ea f t e rm i c r o i n j e c t i o no f n e s f a t i n 一1i n t ot h ed v c c o n c l u s i o nn e s f a t i n 1i si n v o l v e di nt h em o d u l a t i o nt h ee l e c t r i ca c t i v i t yo fg d s e n s i t i v e n e u r o n sa n dg l u c o s e r e s p o n s i v en e u r o n si nd v c o u rd a t ac l e a r l yd e m o n s t r a t et h a t t h i s n e w l y d i s c o v e r e dp e p t i d em a y e x e r ta tl e a s tap a r to fi t sp h y s i o l o g i c a la c t i o n so nt h ec o n t r o l o ff o o di n t a k ea sad i r e c tr e s u l to fi t sr o l ei nc o n t r o l l i n gt h ee x c i t a b i l i t yo fn e u r o n si nt h e d v c p o s t g r a d u a t es t u d e n t ：w e n - j i ew a n g ( p h y s i o l o g y ) d i r e c t e db yp r o f z h e n g - y a oj i a n g k e yw o r d s ：n e s f a t i n 1 ；d o r s a lv a g a lc o m p l e xd v c ；g l u c o s es e n s i n gn e u r o n ；g a s t r i c d i s t e n s i o n ；f e e d i n g 目录 弓f 言1 第一章实验材料”3 1 1 动物准备“ 1 2 药剂配制 1 3 实验仪器” 第二章实验方法及观察指标 2 1 电生理学方法 2 1 1 麻醉” 2 1 2 胃部手术 2 1 3 头部手术” 2 1 4 电极制备 2 1 5 细胞外放电的记录和微压力注射 2 2 观察项目 2 2 1 葡萄糖敏感神经元的鉴别标准和方法一 2 2 2 胃扩张敏感神经元的鉴别标准和方法” 2 2 3n e s f a t i n l 对d v c 葡萄糖敏感神经元和胃扩张敏感神经元放电 2 3 行为学方法 2 3 1 实验动物 2 3 2 迷走神经复合体埋管术 2 3 3 摄食行为测试一 2 4 组织学检查” 2 5 统计学处理 第三章实验结果 3 1 电生理学结果 3 1 1 微量注射葡萄糖对d v c 神经元电活动的影响 3 1 2n e s f a ti n 一1 对葡萄糖敏感神经元的影响“1 l 3 1 3 胃扩张对胃扩张敏感神经元的影响一1 4 3 1 4n e s f a t i n - 1 对胃扩张敏感神经元的影响1 6 3 20 9 n a c l 对葡萄糖敏感神经元和胃扩张敏感神经元的影响”1 9 3 2 10 9 n a c l 对葡萄糖敏感神经元的影响1 9 3 2 20 9 n a c l 对胃扩张敏感神经元的影响 3 3 行为学结果 讨论 结论“ 参考文献 附图 文献综述 攻读学位期间的研究成果 j 变谢 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明” 前言 前言 n e s f a t i n - 1 是2 0 0 6 年1 0 月发现的一种由8 2 个氨基酸组成的可以抑制摄食的调节 肽n3 ，其前体是n e f a 基因编码的l h4 2 0 个氨基酸组成的多肽( n u c l e o b i n d i ni i ，简称 青岛火学硕十学位论文 乏血脑屏障的室旁器官，其可以直接受血源性饱感信号的影响，而孤束核则可以通过 第一章实验材料 1 1 动物准备 第一章实验材料 健康成年w i s t a r 大鼠( 由青岛市药检所提供) ，雌雄不拘，体重2 2 0 - - 2 8 0 克。置 于室温2 2 2 。1 2 1 2 小时昼夜循环光照条件下生活，自由饮水，标准的实验用食物 喂养。在实验前大鼠要适应环境至少7 天。任何动物实验均符合青岛大学动物饲养道 德规范指导方针。实验中保持体温在3 7 1 ( 肛表) ，由智能温控仪自动控制。 1 2 药齐| j 配韦0 ( 1 ) n e s f a t i n 1 ：购自美围肽制品公司，用0 9 n a c l 溶液配制 ( 2 ) 葡萄糖溶液：s i g m a 公司产品，药品名d 一( + ) 一g l u c o s e ，用0 9 n a c l 溶液 配制，浓度为0 5m o l l ，p h7 4 。 ( 3 ) 氯化钠溶液：0 5m o l l ，用以排除渗透压，n a ，c 1 一的影响，p h7 4 。 ( 4 ) 2 0 乌拉坦溶液：腹腔麻醉，0 9 n a c l 溶液配制。 ( 5 ) 4 多聚甲醛溶液：用0 1 m ，p h 7 4 的p b s 溶液配制，用于动物灌注定。 ( 6 ) 1 中性红染液：脑片染色用， 中1 生红l g 溶解于双蒸水9 8 m l 0 2 m 的醋酸钠缓冲液( p h ：4 8 ) 2 m l ( 7 ) 2 滂胺天蓝( p h ：7 7 ) 醋酸钠6 8 4 9 滂胺天蓝2 0 0 9 加蒸馏水1 0 0 m l 3 青岛人学硕+ 学位论文 1 3 实验仪器 q c 1 1 j 型直方图分析仪 m e z 8 2 0 1 型微电极放大器 s s e w 一3 3 0 1 电子刺激器 s n 一3 型脑立体定位仪 v c 一1 l 型双道记忆示波器 r t a 一11 0 0 m 热敏式记录仪 s s 1 0 2 j 型刺激隔离器 c m 一1 9 0 0 冰冻切片机 c a t - - 5 1 2 1 7 微电极拉制仪 n i h o nk o h d e n n ih o nk o h d e n n i h o nk o h d e n n a r is h i g es n 一3t o k y o ，j a p a n n ih o nk o h d e n n ih o nk o h d e n n ih o nk o h d e n 德国l e i c a 公司 美国s t o e l t i n g 公司 s u m p p c 生物信号处理系统上海医科大学 z z 一1 型智能温控仪 x y z 一1 型监听器 四道压力注射仪 饮食自动分析仪( 4 7 5 5 2 0 0 2 ) 自制 自制 p m 2 0 0 0 b ，m ic r od a t ai n s t r u m e n t ，i n c u s a 4 意大利u g o 制造 第二章实验方法及观察指标 2 1 电生理学方法 2 1 1 麻醉 第二章实验方法及观察指标 选用质量2 2 0 - 3 0 0g 的w i s t a r 大鼠，用2 0 乌拉坦( 1g k g ) 腹腔注射麻醉。实 验中根据大鼠麻醉状态酌情追加剂量，每次补充0 2m l ，保证动物保持麻醉状态。维 持体温( 3 7 1 ) a c 。 2 1 2 胃部手术： 腹部备皮，在剑突下作约l c m 长的皮肤横切口，分离筋膜和肌肉，分层打开腹腔。 于胃大弯部胃底部作约l c m 长切口，置入薄膜囊，由聚乙烯软管连至5 m l 注射器，实 验时注入温生理盐水以扩张胃刺激胃壁机械感受器，然后切口缝合。结扎幽门处以防 青岛人学硕十学位论文 射到神经元表面。根据电生理学原则，细胞放电活动以单位放电频率为观察指标，设 置监控窗口，如细胞放电幅度因加压注射发生急剧变化时，可视为压力注射引起的电 极移位所导致，这些数据不作为统计资料n 引。放电信号经m e z - - 8 2 0 1 型微电极放大器 输入v c 一1 l 双道示波器的上线显示波形，电信号经由示波器同步y 轴输出，通过s u m p - - p c 生物信号处理系统输入计算机，由h i s t o 软件进行放电频率分析。 2 2 观察项目 2 2 1 葡萄糖敏感神经元的鉴别标准和方法： 按照p a x i n o s - - w a t s o n 图谱定位d v c 区的范围：a p ：1 1 3 1 4 3 m m ，l ：0 7 - 1 7 m m ，深 度7 5 - 8 7 m m 。将电极移至d v c 区对应的上方，旋转旋钮使电极下降，根据监听器监 测的声音变化，以及监视器显示基线漂移突然变小的现象，可以判断电极尖端到达空 第 二章实验方法及观察指标 n i h o nk o h d e n ) ，放电频率由“生物电信号直方图记录”软件( h i s t o g r a mv e r 1 0 ，上 海) 进行分析处理。神经元放电频率稳定至少1 2 0 s 后，以0 5 m l s 的速度将0 5 - 2 m l 的生理盐水( 3 7 ) 推入胃内水囊，造成对胃壁的持续扩张( 1 0 3 0 s ) 后将生理盐水 抽空，观察对神经元放电频率的影响。胃扩张后与扩张前相比较放电频率增加2 0 以 上的神经元为g d 兴奋型神经元( g o e x c ) ，与扩张前相比放电频率降低2 0 以上则为 g d 抑制型神经元( g o i n h ) ，待放电频率恢复并稳定至少1 2 0 s ，多管微电极注射 n e s f a t i n 一1 观察3 - 4 m i n ，待神经元放电频率恢复并稳定至少1 2 0 s ，多管微电极注射生 理盐水作为对照。胃扩张或加药前后放电频率变化超过2 0 的神经元列入统计。 2 2 3n e s f a tin - 1 对d v c 葡萄糖敏感神经和胃扩张敏感神经元放电频率 的影响： d v c 内压力注射( 3 0 3 5 0p s i ) 注射n e s f a t i n 一1 ，观察其对葡萄糖感受神经元 和胃扩张敏感神经元的电活动的影响。 2 3 行为学方法 2 3 1 实验动物 质量2 5 0 2 8 0g 的w i s t a r 大鼠置于摄食分析仪中，设置生物周期1 2 1 2 h 开关 灯( 开灯8 ：0 0a m ) 每次微量注射均在暗周期前3 0 分钟( 1 9 ：3 0p m 8 ：0 0 - 2 0 ：0 0 为 光照期) 大鼠可以自由的饮水和摄食。在实验前至少要适应环境7 天。任何动物实验 均符合青岛大学动物饲养道德规范指导方针。 8 4 只老鼠用于实验中随机分成6 组，1 4 只用于注射n e s f a t i n - 11 5p m ，1 4 只用 于注射n e s f a t i n - 12 5p m ，1 4 只用于注射n e s f a t i n 一15 0p m ，另外4 2 只注射生理盐 水作为对照。 2 3 2 迷走神经复合体埋管术 质量2 5 0 - 2 8 0g 雕j w i s t a r 大鼠，用8 的水合氯醛( 4 0 0m g k g ) 腹腔注射麻醉，大 鼠俯卧位，用耳杆固定在立体定位仪上，头部正中切口，剥离骨膜，使前后囟位于同 一水平面。用三棱针在颅骨表面钻孔，清除脑膜，参照大鼠脑图谱，将长1 5m m ，内径 o 3m m ，外径0 4l l l m 的自制不锈钢套管垂直置入迷走神经复合体( 坐标为前囟后1 3 8m m ， 正中线旁开0 4 嗍，颅骨表面下8m m ) ，将一小螺丝钉固定于颅骨表面，用5 0 2 胶和自 凝造牙粉固定套管，并置入不锈钢内芯防止套管阻塞 7 青岛大学硕士学位论文 2 3 3 摄食行为测试 手术后的大鼠经过至少7 天的恢复后放进摄食分析仪器内使其适应环境7 天后进 行摄食测试。针芯拔出后，将与1 肛l 微量注射器相连的注射针插入套管中。注射针头 超过外套管边缘2m m 。n e s f a t i n 一1 ( 1 5p m ) 0 5g l ，或者无菌生理盐水0 5 “l 通过 微量注射器缓慢均匀地分别注入到迷走神经复合体内，2m i n 内注射完毕，注射完毕后 留针1m i n 。拔针后丌始计时，记录大鼠2 4 小时的摄食量。另外两组同样的方法注射 n e s f a t i n 一12 5 p m ，5 0 p m 拔针后开始计时，记录大鼠2 4 小时的摄食量。另外同一只老 鼠连续打药1 0 天，自身对照，观察体重和脂肪含量的变化。 2 4 组织学检查 电生理学实验结束后，微电极接阴极，无关电极接阳极，利用离子电渗方法( 1 0m ， 2 0m i n ) ，将电极内的滂胺天蓝电泳入脑组织，标记电极所在位置。所有电生理和行为 学实验后大鼠，经左心室相继灌注生理盐水2 0 0m l ，4 多聚甲醛2 0 0m l 。大脑取出后 冷冻3 0m i n ，用冷冻切片机将大脑切成5 0um 厚的脑片，在显微镜下观察注射点和针 道的位置( 见图4 ，图5 ) 。只有注射位置正确的大鼠，其数据才被用于统计分析中。 2 5 统计学处理 实验结果采用均数标准误，比较给药处理前后单位放电频率，以t 一检验确定有 无差异，p o 0 5 者说明结果有统计学意义。 8 第二章实验结果 3 1 电生理学结果 第三章实验结果 3 1 1 微量注射葡萄糖对d v o 神经元电活动的影响 细胞外记录d v c 内具有自发性放电的神经元的活动。记录到的这些自发放电神经元 中有1 0 9 个微量注射葡萄糖加以鉴定。观察到微量注射葡萄糖后这些神经元有的兴奋有 的抑制。与对照组微量注射0 5 m 的n a c l 作比较，排除由于渗透压和n a + 以及c l 一的影响。 在1 0 9 个神经元中，有4 6 个微量注射葡萄糖后放电频率降低，鉴定为葡萄糖敏抑制型神 经元( g s i n h ) ；3 1 个放电频率升高鉴定为葡萄糖兴奋型神经元( g s - e x c ) ；有3 2 个微量 注射葡萄糖后没有任何反应。在d v c 内记录到1 0 9 个神经元，给予葡萄糖加以鉴定。微 量注射葡萄糖后，葡萄糖兴奋型神经元的放电频率由原来8 8 9 1 8 3 h z 升高到 1 3 3 7 2 0 3 h z ，( t = 4 0 5 ，p ( 0 0 1 ) ，差异有显著性，放电频率平均升高了 5 2 3 8 1 7 1l ；葡萄糖抑制型神经元的放电频率由原来的8 8 1 2 11 h z 降低到 5 4 9 2 0 5 h z ，( t = 3 3 4 ，p 0 0 1 ) ，差异有显著性，放电频率平均降低3 8 7 5 1 3 1 7 r e s p o n s et og s g s - - e x cg s i n hn or e s p o n s et o t a l n3 14 63 21 0 9 9 青岛大学硕士学位论文 表3 2 葡萄糖对葡萄糖敏感神经元放电频率的影响 t a b 3 2 t h ee f f e c to fg l u c o s eo nt h ef i r i n gr a t ea n de f f e c t i v el a t e n c yo fg s - e x cn e u r o n sa n g s - i n h n e u r o n si nd v c g s e x c3 18 8 9 1 8 31 3 3 7 2 0 34 0 5 o o l * g s i n h4 68 8 1 2 1 15 4 9 2 0 53 3 4 0 0 1 毒 表3 3 d v c 内葡萄糖敏感神经元的放电频率变化率及葡萄糖作用的潜伏时间 t a b3 3 t h ee f f e c to fg l u c o s e0 1 1t h ef i r i n gr a t ea n de f f e c t i v el a t e n c yo fg s - e x cn e u r o n sa n d g s i n hn e u r o n si nd v c r e s p o n s i v et y p e n f i r i n gv a r i e dr a t e ( ) l a t e n c y ( s ) 第三章实验结果 3 1 2n e s a tin - 1 对葡萄糖敏感神经元的影响 在3 1 个g s - e x c 中，对其中2 6 个经多管微电极给予n e s f a t i n 一1 ，其中有2 0 个神 经元放电频率从9 1 4 2 0 7 h z 升高到到1 3 0 8 2 2 5 h z ，p 0 0 1 ，差别有统计学意义， 放电频率平均升高了4 0 8 1 5 9 6 。3 个对n e s f a t i n - 1 没有明显反应。在4 6 个g s - i n h 中，共有3 9 个神经元经多管微电极给予n e s f a t i n - 1 ，其中3 3 个放电频率从 8 3 1 2 2 2 h z 降低到4 8 9 2 1 3 h z ，p o 0 5 ) 。 表3 4 n e s f a t i n - 1 对葡萄糖敏感神经元放电频率的影响 表3 4t h ee f f e c to fn e s f a t i n - 1o nt h ef i r i n gr a t eo fg s - e x ca n dg s - i n hn e u r o n si nd v c g s e x c2 09 1 4 + 2 0 71 3 0 8 _ + 2 2 54 5 7 o 0 1 宰 g s i n h3 98 3 1 + 2 2 24 8 9 2 1 34 2 1 0 0 1 掌 青岛大学硕士学何论文 表3 5n e s f a i n - 1 对葡萄糖敏感神经元的作用 t h b 3 5 t h ee f f e c t so fn e s f a t i n - 1o nt h ea c t i v i t yo fg s - e x cn e u r o n sa n dg s - i n hn e u r o n si n d v c 表3 6n e s f a t i n 一1 作用于d v c 内葡萄糖敏感神经元引发的放电频率变化率和作用潜伏时间 t a b 3 6 t h ee f f e c to fn e s f a t i n - 1o nt h ef i r i n gr a t ea n de f f e c t i v el a t e n c yo fg s - e x cn e u r o n sa n d g s - i n hn e u r o n si nd v c r e s p o n s i v et y p e n f i d n g v a r i e dr a t e ( ) l a t e n c y ( s ) 图3 1 ：注射0 5 m 葡萄糖放电频率升高；注射n e s f a t i n - 1 放电频率升高；注射0 9 n a c i 无变化 f i 9 3 1 i n j e c t i o no f2 mg l u c o s e ：s i g n i f i c a n ti n c r e a s eo ff i r i n gr a t e ；n e s f a t i n l ：s i g n i f i c a n t i n c r e a s e ；i n j e c t i o no f0 5 mn a c h n oe f f e c t 芝 c d 芒 c ，) g s n e s f a t i n 1 n a c i 图3 2 注射0 5m 葡萄糖放电频率降低：注射n e s f a t i n - 1 放电频率降低：注射0 9 n a c i 无变化 f i g3 2i n j e c t i o no f2 mg l u c o s e ：s i g n i f i c a n td e c r e a s eo ff i r i n gr a t e ；n e s f a t i n - l ：s i g n i f i c a n t d e c r e a s e ；i n j e c t i o no f0 5 mn a c hn oe f f e c t ； 2 o 8 6 4 2 0 青岛人学硕士学位论文 3 1 3 胃扩张对胃扩张敏感神经元的影响 记录d v c 内另一组具有自发性放电的神经元的活动。记录n 8 9 个神经元给予胃扩张 刺激加以鉴定。观察到胃扩张后这些神经元有的兴奋有的抑制。其中有4 8 个神经元胃 扩张后放电频率升高，鉴定为胃扩张兴奋型神经元( g d - e x c ) ；有2 1 个神经元胃扩张后 放电频率降低，鉴定为葡萄糖抑制型神经元( g d - i n h ) ；有2 0 个神经元胃扩张后无明显 反应( 表3 7 ) 。 胃扩张后，胃扩张兴奋型神经元的放电频率从9 3 7 1 2 0 0 1 t z 升高到1 4 0 2 1 8 8 h z ， p 0 0 1 ，差别有统计学意义放电频率平均升高了5 2 6 9 + 1 9 4 4 。胃扩张抑制型神经元 胃扩张后放电频率从l o 0 1 2 1 4 h z 降低到5 6 9 1 2 8 h z ，p 0 0 1 ，差别有统计学意 义，放电频率平均降低4 2 2 6 1 0 6 7 见表3 4 。 表3 7 胃扩张对d v c 神经元放电频率的影响 t a b 3 7 t h ee f f e c to fg do nt h ef i r i n gr a t eo fg d - e x cn e u r o n sa n dg d - i n hn e u r o n si nd v c 1 4 第三章实验结果 表3 8 胃扩张对d v c 内胃扩张敏感神经元放电频率的影响 表3 8 t h ee f f e c to fg do nt h ef i r i n gr a t eo fg d - e x cn e u r o n sa n dg d i n hn e u r o n si nd v c g d e x c 4 8 9 3 7 1 _ + 2 0 01 4 0 2 _ + 1 8 84 0 4 o 0 1 g d i n h2 11 0 0 1 _ + 2 1 4 5 6 9 + _ 1 2 84 1 1 o 0 1 表3 9 d v c 内胃扩张敏感神经元的放电频率变化率和作用潜伏时间 t a b 3 9 t h ee f f e c to fg do nt h ef i r i n gr a t ea n de f f e c t i v el a t e n c yo fg d - e x cn e u r o n sa n d g d - i n hn e u r o n si nd v c r e s p o n s i v et y p e n f i r i n gv a r i e dr a t e ( ) l a t e n c y ( s ) g d e x c4 8 ( + ) 5 2 6 9 + _ 1 9 4 4 1 6 8 1 + _ 4 2 3 g d i n h2 1( 一) 4 2 2 6 + _ 1 0 6 7 1 4 9 8 _ + 4 7 8 1 5 青岛人学硕十学位论文 3 1 4n e s f a tin - 1 对胃扩张敏感神经元的影响 在4 8 个g d e x c 中，对其中4 2 个经多管微电极给予n e s f a t i n - 1 ，其中有3 2 个神 经元放电频率从9 1 4 2 0 7 h z 升高到到1 3 0 8 2 2 5 h z ，( t = 3 9 8 ，p o 0 1 ) ，差异有 显著性，放电频率平均升高了4 0 8 1 5 9 6 。1 0 个对n e s f a t i n - 1 没有明显反应。在 2 1 个g d i n h 中，共有1 8 个神经元经多管微电极给予n e s f a t i n - 1 ，其中1 6 个放电频 率从9 0 4 1 7 h z 降低到6 1 1 6 3 h z ，( t = 3 2 9 ，p 0 0 5 ) 表3 1 0n e s f a t i n - 1 对胃扩张敏感神经元的影响 t a b3 1 0 t h ee f f e c t so fn e s f a t i n 一1o nt h ea c t i v i t yo ft h ed v cg d - s e n s i t i v en e u r o n s 1 6 第二章实验结果 表3 1 1 n e s f a t i n - 1 对胃扩张敏感神经元放电频率的影响 表3 1 i t h ee f f e c to fn e s f a t i n 一1o nt h ef i r i n gr a t eo fg d - e x ca n dg d i n hn e u r o n si nd v c g d e x c3 29 8 4 3 0 41 4 0 1 3 5 54 7 1 o 0 5 ，此变化差异无统计学意义( 表3 1 4 ) 。 此结果表明0 9 n a c l 对葡萄糖敏感神经元的放电频率无影响。 3 2 20 9 n a cl 对胃扩张敏感神经元的影响 统计了3 0 例g d e x c 神经元和1 4 例g d i n h 神经元对0 9 n a c l 的反应。 微量注射n a c l 后，g d - e x c 神经元的放电频率由原来的9 2 l 3 3 4h z 升高到 9 8 7 3 4 5h z ，放电频率变化率为1 1 2 + 1 4 7 ( 表3 1 5 ) 。注射n a c l 后与注射前 比较，p o 0 5 ，此变化差异无统计学意义( 表3 1 6 ) 。 微量注射n a c l 后，g d i n h 神经元的放电频率由原来的1 0 0 8 3 1 7h z 降低到 9 0 l 3 1 3h z ，放电频率变化率为1 7 9 3 4 1 ( 表3 1 5 ) 。注射n a c l 后的放电频 率与注射前比较，p o 0 5 ，此变化差异无统计学意义( 表3 1 6 ) 。 此结果表明0 9 n a c l 对胃扩张敏感神经元的放电频率无影响。 1 9 青岛火学硕十学位论文 表3 1 3 0 9 n a c l 对葡萄糖敏感神经元放电频率的影响 t a b 3 1 3 t h ee f f e c to f0 9 n a c lo nt h ef i r i