常用实验试剂配制.doc

1 DEPC水(1) 1000ml 水 1ml DEPC根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37过夜，送至高压，然后配相关溶液。2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水用HCL调ph至7.5，高压备用。3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)将溶液持续加热至60左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65，否则PFA降解失效。3 0.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC水 1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g (ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml6 50X Denhaldts 液 聚蔗糖（Ficoll 400） 0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA） 0.2g DEPC 水 20ml7 预杂交 buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldts液 1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先9510-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20保存。8 Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4gTween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为 0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween9 Maleic acid buffer(ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl10 Detection buffer (ph 9.5) 0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)0.1M Nacl 2.9g定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl. 11 blocking reagent（封闭液）(2-8保存) (bottle 5) 5g maleic acid buffer 50ml12 blocking solution 封闭液（新鲜配制） 1ml Maleic acid buffer 10ml13 抗体（AP）10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再 稀释。 LB培养基胰化蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10gAmp（100ng/ml）1ml加去离子水950ml搅拌使之完全溶解，用5mol/L的NaOH调PH值至7.0，定容至1L，高压蒸汽灭菌（15磅，1.034105Pa）30min，4保存。 LB琼脂固体培养基LB500mL琼脂粉7.5g高压蒸汽灭菌(15磅，1.034105 Pa) 30 min，冷却至60，加入500mL 100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），分铺20个平板。 100 mg/mL氨苄青霉素（Amp）Amp100mgddH2O1mL用0.2um滤器过滤，-20储存。 1M 30 mg/mL卡那霉素（kana）kana30mgddH2O1mL用0.2um滤器过滤，-20储存。琼脂糖凝胶电泳所用试剂 50TAE(电泳缓冲液)Tris碱 242g冰乙酸 57.1 mL0.5M EDTA（pH 8.0） 100 mL溶于终体积1000 mL去离子水中，使用时1：50稀释。 10加样缓冲液0.25% 溴酚兰0.25% 二甲苯青30% 甘油保存于4。 10mg/mL EB 溶液取溴化乙锭（EB）0.2g溶解于20mL去离子水中，混匀。4避光保存。使用时终浓度为0.5g/mL。 1%琼脂糖凝胶琼脂糖 1g1TAE 100 mL 微波炉加热至完全溶解，摇匀，当温度降至60时，即可铺制平板。 0.1mol CaCl2溶液： 1.1g无水氯化钙，溶于90ml三蒸水中，定容至100ml，用0.22m滤器过滤除菌置于灭菌试剂瓶中，4保 氨苄青霉素（Amp）选择性培养基 LB培养基中加入1.5%的琼脂（15g/L），高压灭菌20min，取出，在无菌条件下，冷却至50左右时（烧手但尚可忍受）加入抗生素或其他必需成分，如为氨苄青霉素（Amp）选择性培养基，则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50g/ml的量加入，即每ml培养基加入1l氨基苄。 氨苄贮存液 将氨苄青霉素钠溶于三蒸水，配成50mg/ml溶液，以0.22m滤纸过滤，1ml一份分装，存于-20。质粒的少量提取 【试剂及配制】 1溶液 葡萄糖（C6H12O6H2O） 1.982g 三蒸水 160ml 0.5mol EDTA pH8.0 4ml 1mol Tris-Cl pH8.0 5ml 以三蒸水定容至200ml，高压灭菌，4保存 0.5 mol EDTA pH8.0 的配制： Na2EDTAH2O 186.1g （如无水，则为175g） 三蒸水 700ml 边磁力搅拌边加入固体NaOH，缓慢少量加入，待充分溶解，pH接近8.0，用酸度计调节pH8.0 （HCl/NaOH）； 1mol Tris-Cl pH8.0 的配制： Tris 碱 121g 三蒸水 800ml 充分搅拌，用浓盐酸将pH调节至8.0，酸度计测量； 2溶液 配制50ml的量，现用现配。 10 mol NaOH 1ml 三蒸水 40ml 10% SDS 5ml 用三蒸水定容至50ml 10mol NaOH 的配制： 40g NaOH晶体加三蒸水至100ml； 10% SDS 的配制： 戴口罩，称10g SDS，溶于80ml三蒸水中，68助溶，加数滴1mol HCl，调pH7.2，定容至100ml； 1mol HCl 的配制： 于通风橱中，三蒸水91.4ml，浓盐酸8.6ml，混匀； 3溶液 5mol 乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5ml 三蒸水 28.5ml 高压灭菌，4保存； 5mol 乙酸钾配制：200ml 乙酸钾 98.14g 三蒸水 160ml 搅拌溶解，定容至200ml; 43ml 乙酸钠（NaAc）pH5.2 配制：500ml 乙酸钠（CH3COONaH2O） 201.1g 三蒸水 200ml 用冰乙酸调节pH为5.2，三蒸水定容至500ml，高压灭菌，4保存。 5平衡酚 在粗酚中加入0.1% 8-巯基喹啉，然后倒入0.1mol Tris-Cl pH8.0，避光磁力搅拌4h，静置后移去水相，再加0.1mol Tris-Cl pH8.0，搅拌、去除水相，反复进行，直到水相pH7.8时为止，装棕色瓶，4保存。 6TE 缓冲液 pH8.0 配制最终使：10mmol Tris-Cl pH8.0 1mmol EDTA pH8.0 7其它试剂：氯仿：乙戊醇（V/V=24：1）、无水乙醇、70%乙醇 2 SSC 先配制20 SSC贮存液，用时稀释。 NaCl 175g 3mol 枸椽酸三钠2H2O 88g 0.3mol 三蒸水加至1000ml，用1mol HCl 调pH7.0 4 SSC/50%去离子甲酰胺（V/V） 去离子甲酰胺的配制：500ml 甲酰胺与25g Bio-Rad AG 501-X8(2050目) 混合，室温避光搅拌4h，过滤，分装为50ml ，-20 存放； 100 Denhardt液 聚蔗糖 10g 聚乙烯吡咯烷酮 10g 牛血清白蛋白 10g 消毒三蒸水定容至100ml 预杂交液 去离子甲酰胺 5ml 20 SSC 2.5ml 加温至50 ，加入硫酸葡聚糖 1g 聚合物溶解后，加入100 Denhardt 500l 10%SDS 500l 10mg/ml变性鲱鱼精子DNA 100l 消毒三蒸水 400l 充分混合； 杂交液 将标记好的探针用沸水浴10min，立即冰酒精冷轧，用预杂交液将探针稀释至0.55ng/l 。 原位杂交缓冲液的配制：3%柠檬酸：100ml蒸馏水中加柠檬酸（C6H8O7.H2O） 3g，PH2.0左右2SSC-1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠（C6H5O7Na3.2H2O，分子量294）8.8g0.5SSC-300ml蒸馏水加100ml 2SSC即可（1：3）0.2SSC-270ml蒸馏水加30ml 2SSC即可（1：9）20%甘油-20ml甘油加80ml蒸馏水即可0.5M TBS-1000ml蒸馏水加氯化钠30g，TRIS 1.2g 纯乙酸0.4-0.5ml,PH7.2-7.60.01M TBS(PH9.0-9.5)配法：1000ml蒸馏水中加NaCL9g, Tris 1.2g免疫组化缓冲液的配制：1 0.2M PB0.2M NaH2PO4：NaH2PO4.2H2O 31.2g（或NaH2PO4.H2O 27.6g） 加重蒸水1000ml0.2M Na2HPO4：Na2HPO4.12H2O71.632g（或NaH2PO4.7H2O 53.6g或NaH2PO4.2H2O 35.6g） 加重蒸水1000ml0.2M PB：19ml+81ml混合即可，pH值约为7.4-7.52 0.01M PBSNaCl8.5-9g, 0.2M PB 50ml,加重蒸水1000ml混匀即可3 0.5M TBS0.5M Tris-HCl缓冲液:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g1N HCl 约420ml重蒸水 至1000ml先用少量重蒸水300-500ml溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷)，加入HCl后，用1N NaOH 或HCl将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml，此液为储备液，于4冰箱中保存，免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05M，用时取储备液稀释10倍即可。主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液等 4 Tris缓冲生理盐水（TBS）0.5M Tris-HCl缓冲液 100mlNaCl 3.5-9g(0.15M)重蒸水 至1000ml先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水1000ml，最终浓度为0.05M。电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L5Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400型）水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚蓝0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型）水 2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青FF1.5g 补足到10ml6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）