（果树学专业论文）琯溪蜜柚汁胞粒化过程中生理变化与基因差异表达分析.pdf

福建农林大学博士学位论文 中文摘要 摘要 瑁溪蜜柚 c i t r u sg r a n d i s ( l ) o s b e c kc v g u a n x i m i y o u 属亚热带常绿乔木果 树，是我国最主要的栽培柚类品种。汁胞粒化是柚类，也是柑橘类普遍发生的一 种生理病害，严重影响珀溪蜜柚的食用品质和商品价值。因此，汁胞粒化原因的 研究成为瑭溪蜜柚生产的关键问题。本文通过对瑁溪蜜柚果实成熟过程中汁胞粒 化与活性氧代谢、细胞结构、矿物质、内源激素关系的研究，瑭溪蜜柚汁胞m r n a 差异显示实验体系的建立和差异片段的获得，采用r a c e 技术，克隆汁胞发育 ( 正常发育与粒化) 相关基因的c d n a 全长，探讨了瑁溪蜜柚果实汁胞粒化过程 中的生理生化变化，并为从分子水平上阐明瑁溪蜜柚汁胞粒化的机制奠定基础。 取得的主要研究结果如下。 1 、以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的瑁溪蜜柚果 实为材料，探讨馆溪蜜柚果实成熟过程中汁胞粒化与活性氧代谢的关系。研究果 实成熟过程中汁胞m d a 、h 2 0 2 、木质素含量，活性氧清除酶( p o d 、s o d 、c a t ) 活性和内源抗氧化物质( a s a 、g s h ) 含量的变化。与不易发生粒化的适龄树果 实相比，易发生汁胞粒化的老龄树果实汁胞成熟过程中，汁胞粒化指数，h 2 0 2 、 m d a 和木质素含量增加，a s a 和g s h 含量减少，s o d 活性前期减少后期增加， c a t 活性增加，p o d 活性显著增加。瑁溪蜜柚果实成熟过程中，活性氧代谢失 调导致活性氧( h 2 0 2 ) 积累和p o d 活性的增强而促进木质素的合成，从而导致 汁胞粒化的发生。 2 、通过石蜡切片对瑁溪蜜柚果实( 1 0 月8 日) 粒化和未粒化汁胞的观测表 明，粒化汁胞汁囊痈肿、囊壁角质增生、细胞层增加、细胞壁增厚，细胞壁的次 生内镶物和复饰物的木质化程度增加，出现汁胞粒化现象。 3 、以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的瑭溪蜜柚果 实为材料，探讨瑁溪蜜柚果实成熟过程中汁胞矿质元素的变化。在瑁溪蜜柚汁胞 粒化过程中，n 、k 含量维持较高水平：与未粒化汁胞相比，粒化汁胞n 、p 、 z n 、m g 、n i 、c u 含量较高，而c a 含量较低。 4 、以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的珀溪蜜柚果 实为材料，探讨瑭溪蜜柚果实成熟过程中汁胞内源激素的变化。瑁溪蜜柚由于自 花不亲和，其自然单性结实果实为无核果实，在果实粒化过程中内源激素的不均 福建农林大学博上学位论文中文摘要 衡分布，尤其是在粒化起动和加快阶段果实汁胞中i a a 、g a 3 、z r 浓度偏低和 a b a 浓度偏高，以及g a 3 、z r 和a b a 各自之间比例的改变引起的内源激素失 衡是导致粒化的原因之一。 5 、以瑁溪蜜柚老龄树( 母树) 不同粒化阶段果实的未粒化和粒化汁胞为材 料，建立m r n a 差别显示技术体系，包括汁胞总r n a 提取方法、d d r t - p c r 体 系的优化。应用改良c t a b 法提取瑁溪蜜柚汁胞的r n a ，获得的r n a 质量高。 筛选了d d r t - p c r 体系中各反应因素的浓度，优化后2 0p l 体系各组分浓度为： e d n a 第一链产物2 “l ( i 玎反应体系中总r n a 的用量为2r t g ) 、d n t p m i x 浓度 为4 0g m 、单引物浓度为o 4p m o l l 以和t a qd n a 聚合酶用量为0 2u 。该反应 体系的产物经电泳检测，可以获得数量适宜、条带清晰、重复性好的e d n a 片段。 6 、用9 条锚定引物与2 0 条随机引物组成了引物对1 8 0 个，对供试瑁溪蜜 柚未粒化汁胞和粒化汁胞进行了反转录p c r 扩增，应用m r n a 差异显示技术研 究珀溪蜜柚汁胞粒化过程中未粒化和粒化汁胞基因的表达，获得了差异e d n a 片 段2 5 个，回收c d n a 差异片段并进行克隆、测序及同源性比较分析。得到与粒 化有关基因差异表达的e d n a 片段7 个，与未粒化有关基因差异表达的e d n a 片段9 个。m i y o u l 、m i y o u2 、m i y o u7 、m i y o u8 、m i y o u1 7 等5 个片段已在 g e n b a n k 中登录，登录号分别为：f j 8 6 6 6 2 5 、f j 8 6 6 6 2 6 、f j 8 6 6 6 2 9 、f j 8 6 6 6 2 7 、 f j 8 6 6 6 2 8 ，抽取部分差异片段经反n o r t h e r n 杂交获得2 条阳性片段。 7 首次采用r a c e 技术，克隆瑁溪蜜柚汁胞发育( 未粒化与粒化) 相关基因 的e d n a 全长，根据与粒化有关的m i y o u 2 2e d n a 片段设计引物，进行保守区和 5 r a c e 的克隆，通过序列拼接得到了e d n a 全长序列，登录号为f j 8 6 6 6 3 0 ；序 列分析表明得到的e d n a 全长共1 6 0 2b p ，其中，5 u t r 为1 4 2b p ，y u t r 为2 0 4b p ， y u t r 区域还含有典型的加尾信号a a t a a 和p o l y ( a ) 尾；开放阅读框( o r f ) 共有 1 2 5 4 个碱基组成，编码4 1 8 个氨基酸。将序列经过b l a s t t g 较，该序列与翻译延 伸因子1 y 高度同源，其中，与烟草、水稻的翻译延伸因子1 y 的同源性分别是 8 1 3 、7 9 。翻译延伸因子与蛋白质合成延伸有关。 8 、根据汁胞未粒化基因差异c d n a 片段m i y o u l 设计引物，采用r a c e 技术 克隆了该片段5 端全长序列，将获得的5 端e d n a 与m i y o u l 差异片段拼 接，拼接后得n m i y o u l 全长序列，其大小为11 5 2b p ，包含1 个8 1 9b p 的开放阅读 框架，编码2 7 2 个氨基酸。其中，5 u t r 为7 7b p ，y u t r 为2 4 4b p ，y u t r 区域还 福建农林大学博士学位论文中文摘要 含有p o l y ( a ) 尾。登录号为f j 8 6 6 6 2 4 。进一步的b l a s t 分析显示，该c d n a 全长序列 与2 0 s 蛋白质酶体的1 3 亚基5 高度同源。其中，与鹰嘴豆的2 0 s 蛋白质酶体的1 3 亚 基5 同源性较高，为8 4 9 ，与水稻、小麦的同源性分别为7 6 1 和7 4 6 。2 0 s 蛋 白质酶体与蛋白质的降解有关。 关键词瑁溪蜜柚；汁胞；粒化；m r n a 差别显示；生理生化 福建农林大学博士学位论文 第一章 a n a n a l y s i so np h y s i o l o g i c a lc h a n g e sa n dg e n e d i f f e r e n t i a l e x p r e s s i o n si nt h ep r o c e s so fp u m m e l of r u i t 【c i t r u sg r a n d i s ( l ) o s b e c kc v g u a n x i - m i y o u 】j u i c es a cg r a n u l a t i o n a b s t r a c t g u a n x i - m i y o u p u m m e l o c f t r u sg r a n d i s ( l ) o s b e c kc v g u a n x i m i y o u ，a so n e k i n do f s u b t r o p i c a le v e r g r e e nf r u i tt r e e s ，i sap r i m a r yc u l t i v a ri nc h i n a j u i c es a cg r a n u l a t i o ni s o n ek i n do fw i d e s p r e a dp h y s i o l o g i c a ld i s e a s e si np u m m e l oc a t e g o r y , s oa si nc i t r u s c a t e g o r y , w h i c hs e r i o u s l yh i n d e r se a t i n gq u a l i t ya n dc o m m o d i t yv a l u eo fg u a n x i m i y o u p u m m e l of r u i t t h u s ，t h ee f f e c t i v es t u d yo nj u i c es a cg r a n u l a t i o ni sc r u c i a lt oi m p r o v e g u a n x i - m i y o u p u m m e l of r u i tp r o d u c t i o n i nt h i sa r t i c l e ，b yt h er e s e a r c ho ni n t e r r e l a t i o n o fj u i c es a cg r a n u l a t i o nw i t ha c t i v e o x y g e nm e t a b o l i s m ，c e l ls t r u c t u r e ，m i n e r a l ， e n d o g e n o u sh o r m o n e ，t h ee s t a b l i s h m e n to ft h ee x p e r i m e n t a ls y s t e mo f g u a n x i - m i y o u p u m m e l oj u i c es a cm r n a d i f f e r e n t i a ld i s p l a ya n da c q u i r e m e n to fd i f f e r e n t i a lf r a g m e n t s ， t h ec l o n i n go fr e l a t i v eg e n e si nt h ep r o c e s so f g u a n x i m i y o u p u m m e l oj u i c es a c g r a n u l a t i o n ，t h ep h y s i o l o g i c a la n db i o c h e m i c a lm e c h a n i s mo fj u i c es a cg r a n u l a t i o n d u r i n gt h ef r u i tm a t u r a t i o no f g u a n x i - m i y o u p u m m e l of r u i t sw a sp r e s e n t e d b yr a c e t e c h n i q u e s ，t h eg e n e se d n a f u l ll e n g t hr e l a t e dt ot h en o r m a l d e v e l o p e dj u i c es a c ( n o r m a l g r o w t ha n dg r a n u l a t i o n ) w a sc l o n e d ，w h i c hw o u l dl a ya f o u n d a t i o nf o re x p l o r i n go r a n g e j u i c es a c sg r a n u l a t i o nm e c h a n i s mi nm o l e c u l a rl e v e l t h er e s u l t sw e r ea sf o l l o w s ： 1 f r u i t so fp u m m e l of r o mo l d - a g et r e e sw i t hh i g h e rr a t i oo f j u i c ys a cg r a n u l a t i o nf r u i t s ， c o m p a r e dw i t hn o r m a lf r u i t s ，a n dp r o p e r - a g et r e e sw i t hl o w e r r a t i oo fg r a n u l a t i o nf r u i t s ， c o m p a r e dw i t hn o r m a lf r u i t sw e r eu s e dt oe x p l o r et h er e l a t i o n s h i pb e t w e e ng r a n u l a t i o n a n da c t i v eo x y g e nm e t a b o l i s mo f j u i c ys a ci np u n a n e l o c t r u sg r a n d i s ( l ) o s b e c kc v g u a n x i m i y o u 】f r u i td u r i n gm a t u r a t i o n t h ec h a n g e si nc o n t e n to fm d a ，h 2 0 2 ，a n d l i g n i n ，a c t i v i t i e so fr e a c t i v e - o x y g e n s c a v e n g i n ge n z y m e s ( p o d 、 s o d 、c a t ) ，c o n t e n t s o fe n d o g e n o u sa n t i o x i d a n t s ( a s a 、g s h ) i np r o c e s so f j u i c ys a cg r a n u l a t i o nw e r es t u d i e d t h ei n d e xo f j u i c ys a cg r a n u l a t i o na n dc o n t e n t so fh 2 0 2a n dm d ar o s ew h i l ec o n t e n t so f a s aa n dg s hd e c r e a s e d ，w h e r e a ss o da c t i v i t yf i r s td e c l i n e da n dt h e ni n c r e a s e da n d c a ta c t i v i t yi n c r e a s e db u tp o da c t i v i t yr o s em o r es i g n i f i c a n t l yi nt h ef r u i t sf r o mt h e o l d a g et r e e si nc o n t r a s tt op r o p e r - a g et r e e s t h er e s u l t ss u g g e s tt h a tt h ed i s o r d e ro f a c t i v e o x y g e nm e t a b o l i s mo fj u i c ys a co fp u m m e l o f r u i td u r i n gm a t u r a t i o nr e s u l ti nt h e 4 福建农林大学博士学位论文第一章 a c c u m u l a t i o no fa c t i v eo x y g e n ( h 2 0 2 ) a n dt h ei n c r e a s ei np o d a c t i v i t y , w h i c hp r o m o t e s t h es y n t h e s i so fl i g n i n , a n df i n a l l yc a u s e sj u i c ys a cg r a n u l a t i c n 2 b yo b s e r v a t i o no np a r a f f i ns e c t i o n so f g u a n x i - m i y o u p u m m e l of r u i t ( o c t o b e r8 ) g r a n u l a t i o na n dn o - g r a n u l a t e dj u i c es a c s ，i tw a sf o u n dt h a tt h ej u i c es a c s w e r e o v e r s t a f f e d ，c y s t i cw a l lh o r n i n e s sh y p e r p l a s i ao c c u r r e d ，c e l ll a y e ri n c r e a s e d ，c y t o d e r m i n c r a s s a t e d ，a n dt h el i g n i f i c a t i o no fs e c o n d g r o w t hi n f i l l e ra n dc o m p l e xo r n a m e n to f c y t o d c r mi n c r e a s e d ，a sar e s u l t ，t h ej u i c es a cg r a n u l a t i o ne m e r g e d 3 i nt h ep r o c e s so f g u a n x i - m i y o u p u m m e l of r u i tg r o w t h ，t h ec o n t e n t so fn ，k m a i n t a i n e dar e l a t i v e l yh i g l ll e v e l c o m p a r e dw i t h1 1 0 - g r a n u l a t e d j u i c es a c s ，t h e g r a n u l a t e dj u i c es a c sw e r eh i g h e ri nc o n t e n t so fn ，p ，z n , m g ，n ia n dc u ，b u tl o w e ri n c o n t e n to fc a 4 d u et ot h es e l f - i n c o m p a t i b i l i t y , t h en a t u r a lp a r t h e n o c a r p yo f g u a n x i - m i y o u p u m m e l o f r u i t si sn o n - n u c l e a rf r u i t s t h ei m b a l a n c e de n d o g e n e s i sh o r m o n ed i s t r i b u t i o ni nt h e p r o c e s so fg r a n u l a t i o n ，p a r t i c u l a r l ya tt h eb e g i n n i n ga n de x c e e d i n gp h r a s e s ，c o n c e n t r a t i o n o fi a a ，g a 3 a n dz ri nj u i c es a c sw a sq u i t el o w , b u tt h a to fa b aw a sh i 曲t h e e n d o g e n e s i sh o r m o n ei m b a l a n c ec a u s e db yc h a n g e si nc o n c e n t r a t i o nr a t i oa m o n gg a 3 ， z ra n da b ai so n er e a s o no fg r a n u l a t i o n 5 g u a n x i m i y o u p u m m e l of r u i to l d - a g et r e e ( s e e dt r e e ) j u i c es a c si nd i f f e r e n tp h r a s e s w a sa p p l i e da se x p e r i m e n t a lm a t e r i a l st oe s t a b l i s hm r n ad i f f e r e n t i a ld i s p l a yt e c h n i q u e s y s t e m ，i n c l u d i n gj u i c es a c sm a i nr n ae x t r a c t i o na n dp u r i f i c a t i o nm e t h o d s ，d d i m p c r s y s t e mo p t i m i z a t i o n ，a n dr e v e r s e dn o r t h e r n b l o ta p p l i c a t i o nt or e m o v ef a l s ep o s i t i v er a t e o fc d n ad i f f e r e n t i a lf r a g m e n t s b yt h ei m p r o v e dc t a bm e t h o di n g u a n x i m i y o u j u i c e s a c sr n ae x t r a c t i o n ，t h eo b t a i n e dr n aw a so fh i g hq u a l i t y b yc o m p a r i n gk e yf a c t o r si n d d i m p c rt h e g u a n x i m i y o u j u i c es a c sg r a n u l a t i o ng e n ed d i u p c rs y s t e mw a s e s t a b l i s h e d t h eo p t i m i z i n gr e a c t i o ns y s t e mc o n t a i n e d2 “le d n a ，4 0 p md n t pm i x ， 0 4 i t m 0 1 l 一1s i n g l ep r i m e r , a n d 0 2 u t a qd n ap o l y m e r a s ed o s a g e t h r o u g h e l e c t r o p h o r e s i sd e t e c t i o n ，t h e s er e a c t i o np r o d u c t sc o u l dg e te d n af r a g m e n t si ns u i t a b l e q u a n t i t y , c l e a rb a n d sa n dg o o dr e p r o d u c i b i l i t y 6 n i n ea n c h o r i n gp r i m e ra n d2 0r a n d o mp r i m e r sm a d eu p18 0p r i m e rp a i r s t h er e v e r s e t r a n s c r i p t i o np e ra m p l i f i c a t i o nw a st e s t e do n g u a n x i m i y o u s a m p l en o r m a la n d g r a n u l a t e dj u i c es a c s b ya p p l i c a t i o no fm r n ad i f f e r e n t i a ld i s p l a yt e c h n i q u e s ， g u a n x i m i y o u n o r m a la n dg r a n u l a t e dj u i c es a c sg e n ee x p r e s s i o n sw e r es t u d i e d ，a n d e d n ad i f f e r e n t i a lf r a g m e n t sw e r eo b t a i n e d e d n ad i f f e r e n t i a lf r a g m e n t sw e r er e c y c l e d a n dc o m p a r e da n da n a l y z e db yc l o n i n g ，s e q u e n c i n ga n dh o m o l o g yc o m p a r i s o n 7e d n a f r a g m e n t sc o n c e r n i n gg r a n u l a t i o ng e n ed i f f e r e n t i a le x p r e s s i o n sa n d9e d n af r a g m e n t s 5 福建农林大学博士学位论文第一章 r e l a t e dt oa n g r a n u l a t i o ng e n ed i f f e r e n t i a le x p r e s s i o n sw e r ea c q u i r e d t h ea c c e s s i o n n u m b e ro fg e n b a n kd a t a b a s eo fm i y o u l 、2 、7 、8 、17 ，t h e s e5f r a g m e n t sw e r ef j 8 6 6 6 2 5 ， f j 8 6 6 6 2 6 ，f j 8 6 6 6 2 9 ，f j 8 6 6 6 2 7a n df j 8 6 6 6 2 8 t h r o u g hr e v e r s en o r t h e r nb l o tf r o m e x t r a c t i n gd i f f e r e n t i a lf r a g m e n t s ，2p o s i t i v ef r a g m e n t sw e r eo b t a i n e d 7 b yr a c et e c h n i q u e ，e d n af u l ll e n g t hr e l a t e dt og e n e so fj u i c es a c sg r o w t h ( n o r m a l g r o w t ha n dg r a n u l a t i o n ) w a sc l o n e d b a s e do nm i y o u 2 2e d n af r a g m e n t sr e l a t e dt o g r a n u l a t i o n , t h ep r i m e r sw e r ed e s i g n e d ，c o n s e r v a t i v er e g i o nc l o n ew a sc a r r i e do u t ，a n d g u a n x i m i y o u p u m m e l of r u i tj u i c es a c sg r a n u l a t i o np r o c e s s5 e n ds e q u e n c ew a sc l o n e d b y5 r a c e b e c a u s e3 e n ds e q u e n c ew a sa n c h o r i n gp r i m e r , a n di tw a sj o i n t e d 研t l l5 e n ds e q u e n c e ，ae d n af u l ll e n g t hr e l a t e dt og r a n u l a t i o nw a so b t a i n e da n di t st h e a c c e s s i o nn u m b e ro fg e n b a n kd a t a b a s ew a sf j 8 6 6 6 3 0 t h es e q u e n c ea n a l y s i si n d i c a t e d t h ef u l ll e n g t ho fe d n aw a s16 0 2b p ，a m o n gw h i c ht h es i z eo f5 u t rw a s1 4 2b p ，t h a to f 3 q i t rw a s2 0 4b p ，a n dy u t rr e g i o ni n c l u d e dt y p i c a lt a i ls i g n a l saa t aaa n dp o l y ( a ) t a i l o p e nr e a d i n gf r a m e ( o r e ) w a sm a d eu po f12 5 4b a s e ，e n c o d i n g4 18a m i n oa c i d t h eb l a s ts h o w e dt h i se d n aa n dn u c l e o t i d es e q u e n c eh a dh o m o l o g yw i t h1 一丫m r n a f u l ll e n g t ho ft o b a c c oa n dr i c et r a n s l a t i o ne l o n g a t i o nf a c t o r , 81 3 a n d7 9 r e s p e c t i v e l y t r a n s l a t i o ne l o n g a t i o nf a c t o ri sak e yf a c t o ri nt h ep r o c e s so fp r o t e i ns y n t h e s i s ，w h i c h w a sd i s p l a y e di ng r a n u l a t e dj u i c es a co f g u a n x i m i y o u s oi tw a ss p e c u l a t e dt h a ti t s p r o t e i ns y n t h e s i sw a sv i g o r o u s 8 a c c o r d i n gt om i y o u lc d n af r a g m e n t sd e s i g n e dp r i m e r so fj u i c es a c sn o r m a lg e n e d i f f e r e n t i a le d n af r a g m e n t s ，5 f u l l l e n g t hs e q u e n c ew a sc l o n e db yr a c et e c h n i q u ea n d j o i n t e dw i t hm i y o u lf r a g m e n t ，a n dt h e ne d n a f u l ll e n g t hw i t ht h es i z eo f115 2b pw a s g a i n e dw h i c hi n c l u d e dao p e nr e a d i n gf r a m eo f8 19b pa n de n c o d i n g2 7 2a m i n oa c i d i t s a c c e s s i o nn u m b e ro fg e n b a n kd a t a b a s ew a sf j 8 6 6 6 2 4 t h e r e a m o n gt h es i z eo f5 u t r w a s7 7 b p ，t h a to fy u t rw a s2 4 4b pa n dy u t rr e g i o nc o n t a i n e dp o l y ( a ) t a i l t h e f u r t h e rb l a s ta n a l y s i ss h o w e d ，t h i se d n ah a dh i g hs e q u e n c ei d e n t i t yw i t hp 5s u b u n i to f 2 0 sp r o t e a s o m e i th a dt h eh i g h e s th o m o l o g yw i t ht h a to fc h i c k p e a ( 8 4 9 ) ，a n dn e x t w i t ht h a to fr i c e ( 7 6 1 ) a n dw i t ht h a to fw h e a t ( 7 4 6 ) p r o t e a s o m ei sak i n do f p r o t e o l y t i ce n z y m ec o m p o u n d se x i t i n g i n c e l lc y t o p l a s ma n dn u c l e u sa n dp l a y sa i m p o r t a n tr o l e i nd e g r a d i n gt h ei n t r a c e l l u l a rp r o t e i nc e l lp r o t e i na n dm a i n t a i n i n gc e l l n o r m a lm e t a b o l i s m ，t h e r e f o r e2 0 sp r o t e a s o m e p l a y s ar o l ei n s a cg r o w t ho f g u a n x i - m i y o u f r u i t k e yw o r d s ：g u a n x i m i y o u p u m m e l o 【c t r u sg r a n d i s ( l ) o s b e c kc v g u a n x i m i y o u ； j u i c es a c ；g r a n u l a t i o n ；p h y s i o l o g i c a lb i o c h e m i s t r y ；m r n ad i f f e r e n t i a ld i s p l a y 6 福建农林大学博士学位论文缩写词 英文缩写 a b a a m p a o s 姆 a s a a u a p b p c a t c t a b d d h 2 0 d d d e p c d e s d n t p d t t e b e d t a e s t g a 3 g s h h 2 0 2 l u i p t g l b m d a n a a c o d p c r p o d r a c e r n a r n a s e r p m r ，r - p c r r o s s o d s d s t r i s x g a l z r 缩写词 英文全称 a b s c i s i ca c i d a m p i c i l i n a l l e n e o x i d es y n t h a s e s a d a p t e rp r i m e r a s c o r b a t e a b r i d g e du n i v e r s a la m p l i f i c a t i o np r i m e r b a s ep a i r s c a t a l y s e c e t y lt r i e t h y la m m o n i u mb r o m i d e d i s t i l l e dd e i o n i z e dw a t e r m r n ad i f e r e n t i a ld i s p l a y d i e t h y lp y r o c a r b o n a t e d i v i n y le t h e rs y n t h a s e s d i o x yn u c l e i o t i d et r i p h o s p h a t e s d i t h i o t h r e i t o l e t h i d i u mb r o m i d e e t h y l e n e d i a m i n et e t r a a c e t i ca c i d e x p r e s s e ds e q u e n c et a g g i b b e r e l l i n r e d u c e dg l u t a t h i o n e h y d r o g e np e r o x i d e i n d o l e a c e t i ca c i d i s o p r o p y t h i o - b d g a l a c t o s i d e l u r i a 一b e r t a n im e d i a m a l o n d i a l d e h y d e s o d i u ma c e t a t e o p t i c a ld e n s i t y p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n p e r o x i d a s e r a p i da m p l i f i c a t i o no fc d n ae n d s r i b o n u c l e i da c i d r n a a s e r e v o l u t i o n sp e rm i n u t e r e v e r s et r a n s c r i p t i o np c r r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s s u p e r o x i d ed i s m u t a s e s o d i u md o d e c y ls u l f a t e t r i - h y d r o x y m e t h y la m i n o m e t h a n e 5 - b r o m o - 4 - c h l o r o 一3 i n d o l y l p - d g a l a c t o s z e a t i nr i b o s i d e 中文全称 脱落酸 氨苄青霉素 丙二烯氧化物合酶 接头引物 抗坏血酸 缩短的通用扩增引物 碱基对 过氧化氢酶 十六烷基三乙基溴化铵 双蒸水 m r n a 差别显示 焦碳酸二乙脂 联乙烯醚合酶 脱氧核苷三磷酸 二硫苏糖醇 溴化乙锭 乙二胺四乙酸 表达序列标签 赤霉素 还原型谷胱甘肽 过氧化氢 吲哚乙酸 异丙基硫代b d 半乳糖苷 l b 培养基 丙二醛 醋酸钠 光密度 多聚酶链式反应 过氧化物酶 c d n a 末端的快速扩增 核糖核酸 核糖核酸酶 每分转 反转录p c r 活性氧 超氧化物歧化酶 十二烷基磺酸钠 三羟甲基氨基甲烷 5 溴4 氯3 吲哚p d 半乳糖 玉米素核苷 独创性声明 本人声明，所呈交的学位( 毕业) 论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的 研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的 地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献 的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行 为，由本人承担应有的责任。 学位c 毕业，论文作者亲笔签名仑；苍日期：二。，7 多 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位( 毕业) 论文的规定，即学校有权 送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容， 可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。o 学位c 论文储亲笔躲令主吞嗍d 。哆多 指导教师亲笔签名： v 惟炒 日期：钏。了、二 | 福建农林大学博士学位论文第一章 第一章文献综述 1珀溪蜜柚汁胞粒化研究进展 1 1珀溪蜜柚的生产现状 瑭溪蜜柚( c i t r u sg r a n d i s ( l ) o s