药物分离纯化技术---制备色谱分离技术.ppt

1,制备色谱的特点：最有效的制备性分离技术；实验室规模、小批量生产、产业化制备；不同领域产品量不一样，阐明化学结构和生物活性，3050mg足够，分析用标准品100mg以上，有机合成通常需要g级以上；,薄层色谱柱色谱,2,制备薄层色谱法设备简单，操作方便、分离快速、灵敏度及分辨率高；切割谱带更加方便；自动化：自动点样仪、自动程序展开仪、薄层扫描仪、多种强制流动技术、多种联用技术如傅立叶变换红外、拉曼、质谱等。,3,常规制备薄层色谱PTLC薄层板制备为了增大上样量，增加了吸附剂用量。固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶支撑：玻璃板或铝箔,平均25m,540m硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P,4,硅胶粒径范围影响：越细越均匀，分离度越高，但？粒径范围宽，分离效率低，怎么办？,-薄层厚度的渐变薄层厚度从底部到前沿逐渐增加，这样展开剂的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保持较窄的谱带。,5,薄层板的制作方法：常采用湿法：平铺法和涂铺法。,煅石膏或羧甲基纤维素钠水溶液,6,薄层色谱条件选择,开放型,操作不连续,7,常用溶剂(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等；(2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等；(3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等；(4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等；(5)偶极作用溶剂：二氯甲烷(6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。,8,上样和展开先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质；低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等），且溶剂极性尽可能小。样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，5-10%；带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。？,9,样品检测有色物质直接观察斑点；荧光物质在紫外灯下观察；无色无荧光可在荧光板分离，紫外光下显示暗斑；喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以用碘蒸气显色，可逆；,10,常用显色剂：硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110烤5分钟，不同有机物显不同的颜色；0.05%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，背景淡红色；酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150烤薄层；5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120烤，还原性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。,11,样品收集：切割：刮刀或与真空相连的管型刮离器；回收：极性尽可能低的溶剂洗脱，通常1g吸附剂用5mL溶剂，丙酮和氯仿常用，甲醇因溶解硅胶及其中含有的杂质不常用。4型玻璃沙芯漏斗过滤洗脱液，再用0.2-0.45m滤膜过滤。硅胶的黏合剂以及荧光指示剂等杂质，可用SephadexLH-20过滤纯化。,12,常规制备TLC速度慢，效率低，如何提高？加压离心,13,加压制备OPLC弹性气垫，外压使没有气相存在，展开剂强制流动，展开速度加快,更细的固定相颗粒、更长的薄层板,14,离心制备CTLC离心力加速流动相，分离速度快，操作简单，占用空间小，使用溶剂少，可反复使用，可进行梯度洗脱，进样量大，一次分离量0.1-0.2g.,15,不同制备TLC方法的比较,16,常规柱色谱技术：可使用较大直径的色谱柱，更多的固定相，因此样品量可以更大；分离速度较慢，样品可能被不可逆吸附；不适合小颗粒的吸附剂？改进方法：减压、加压等,17,柱色谱常用固定相(1)硅胶：官能团和分子的几何形状，对异构体的分离选择性远大于其他色谱方法。烷基卤素（FClBrI）醚硝基混合物腈叔胺酯酮醛醇酚伯胺酰胺羧酸95%；(3)分离程序简单，不需要为了得到纯品进一步分析所得到的组分。,过载：低浓度时，进样量增加使得容量因子改变超过10,39,浓度过载和体积过载,K不变，线性结果可预测,K变化，非线性结果难预测,40,边缘切割与循环色谱分离分离不佳时,密闭进样器是将流经检测器的柱流出液通过多通阀连至泵的入口；交替柱循环装置是连接两根色谱柱，通过阀门将第二根色谱柱切割得到的样品再加到第一根色谱柱上循环分离。,41,中心切割,适当损失组分，但避免色谱峰两端微量组分的污染。,42,制备加压色谱设备要求(1)泵：流量大，压力不需要太大；(2)进样器：大样品环六通阀，环管细而长而不是短而粗，样品溶液低浓度，大体积；(3)色谱柱：装填均匀常采用柱床压缩技术即径向压缩和轴向压缩；(4)检测器：不需要高灵敏；,43,快速色谱法简单易行,44,低压和中压色谱法,45,制备HPLC,46,生产级的HPLC(1)溶剂花费是最大成本，昂贵、毒性、难处理溶剂不使用；(2)填料易得，性能好，重现性好；(3)溶剂回收再用；(4)直径大于5cm的色谱柱需专门设计，保证床层稳定，避免高压破坏。,47,模拟移动床色谱(SMB)通常的色谱存在下列问题：(1)不能连续操作；(2)溶剂和分离材料利用率低；(3)流出组分被高度稀释；SMB同样的分离材料，生产力增加60倍，溶剂消耗量减少80倍。,48,模拟移动床色谱原理：,49,模拟移动床色谱原理：,50,模拟移动床色谱原理：,51,制备气相色谱：,52,径向