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浙江工商大学硕士学位论文 几种天然产物及食品添加剂的鱼鲞防蝇效果研究 摘要 咸鱼鲞是我省沿海地区的传统海产品加工销售产业之一。然而， 鱼鲞在加工储藏过程中很容易招引苍蝇叮、蛀虫咬，而使其感官品质 下降，商品价值降低，加上近几年来，因为防蝇而产生的“毒鱼鲞” 事件屡屡曝光，这不仅影响了鱼鲞加工产业的正常运作，更是严重地 威胁了消费者的健康。 本研究以印楝素、天然除虫菊素、茶皂素、稳定型二氧化氯和辣 椒素作为鱼鲞加工过程中的防蝇物质，分别对大头金蝇成虫的驱避作 用和抑制产卵作用以及对大头金蝇幼虫的抑制生长作用和杀灭作用 这四个方面进行了防蝇效果室内研究。研究表明，印楝素、天然除虫 菊素和辣椒素对大头金蝇成虫均有不同程度的驱避作用和抑制产卵 效果，在鱼鲞晾晒的第一天，各物质对大头金蝇的抑制产卵中浓度 i c 5 0 分别为2 1 5 4m g l 、3 3 1m g l 、2 1 8 5 7m g l ，9 5 抑制产卵浓度 i c 9 5 分别为1 6 7 7 5m g m 、1 7 5 6m g l 、2 6 9 0 6 9m g l ，在鱼鲞晾晒的 第二天，各物质对大头金蝇的抑制产卵中浓度i c 5 0 分别为3 1 5 2m e , l 、 5 0 5m g l 、1 0 2 2 4m g l ，9 5 抑制产卵浓度i c 9 5 分别为2 8 6 6 7m g l 、 2 8 0 1m g l 、9 0 3 2 4m g l ，稳定型二氧化氯对大头金蝇成虫也有较强 的驱避作用和抑制产卵效果，但有效时间只有一天，其对大头金蝇的 抑制产卵中浓度i c 5 0 为3 7 1 4m g l ，9 5 抑制产卵浓度i c 9 5 为6 0 8 2 6 浙江工商大学硕士学位论文 m g l ：在对大头金蝇幼虫的抑制生长作用和杀灭作用方面，印楝素 均表现出较强的效果，在处理浓度为5 4m g l 鱼鲞上，大头金蝇幼虫 的最终体重只有对照组的三分之一，而校正死亡率达到了7 8 7 6 ；天 然除虫菊素对鱼鲞上的大头金蝇幼虫也有强烈的杀灭作用，8m g 几 的浓度处理就达到了8 5 以上的杀灭效果，而浓度升高到1 6m g l 时，杀灭效果达到了1 0 0 ；茶皂素、稳定型二氧化氯和辣椒素对大 头金蝇幼虫均没有影响。 此外还对稳定型二氧化氯对鱼鲞酸价及过氧化值的影响进行了 研究，结果表明，在晾晒过程中，它能加速鱼鲞酸价的升高；在储藏 过程中，它对鱼鲞的酸价没有明显影响，但能加速鱼鲞过氧化值的升 高。试验过程中，所有处理鱼鲞的酸价和过氧化值都大大低于国家标 准。 对天然除虫菊素在鱼鲞中残留量的测定表明，除了在晾晒第一 天处理浓度为3 2m g l 的鱼鲞中的天然除虫菊素残留量高于残留限 量标准( 3 0 ) ，幼虫就会一直在鱼鲞上孽生，直到鱼蠢被吃光或开始化蛹才离开。 ( 二) 间接危害 浙江工商大学硕士学位论文 所谓间接危害，是指苍蝇幼虫为了寻找新的食物来源和新的孽生场所，从其 他场所或鱼鲞上转移到新的鱼鲞上，并对其进行蛀蚀而产生的危害。幼虫在生长 发育期间，需要有充足的食物来源和适宜的生存环境，一旦食物来源有所短缺或 生存环境不适宜，它就会离开原来的孽生场所，而转向附近其他有充足食物来源 和适宜环境的孽生场所。因此在鱼鲞晾晒和储藏过程中，一些湿度相对较低或蛀 蚀程度严重的鱼鲞上的幼虫就会爬向湿度相对较高且没有被蛀蚀或蛀蚀程度轻 微的鱼鲞上，从而造成蛀蚀的恶性循环，使更多的鱼鲞受到危害。 三、影响苍蝇对鱼鲞危害程度的因素 影响苍蝇对鱼鲞危害程度的因素很多，主要是鱼鲞在晾晒前的破损程度、鱼 鲞在晾晒过程中的湿度、鱼螽的盐度等。 ( 一) 鱼鲞的破损程度 鱼鲞在晾晒前所受的破损程度越大，其对苍蝇的吸引力就越大，就越容易受 苍蝇的叮咬。研究表明，这是因为破损的鱼易受微生物的侵蚀而产生一些对苍蝇 有巨大吸引力的物质，如氨、硫化氢等 - q 此外，鱼鲞的破损程度越大，就越容 易吸引苍蝇在其身上产卵，这是由于苍蝇习惯于将卵产在鱼鲞的遮阴处和裂缝 处，而破损程度大的鱼鲞就为苍蝇提供了这样的产卵场所。破损的鱼鲞还有利于 苍蝇幼虫的取食。 ( = ) 鱼鲞的湿度 鱼鲞在湿度相对较高的时候，对苍蝇的吸引力最大。据报道，当鱼鲞的含水 率在4 0 6 0 的时候，对苍蝇的吸引力尤其大，而当含水率高于7 0 或低于 3 0 的时候。对苍蝇的吸引力很小嘲。鱼鲞的含水量大小还会影响苍蝇在鱼鲞上 的产卵量，苍蝇在含水量为6 0 7 0 的鱼鲞上的产卵情况比含水量在4 0 5 0 的鱼鲞上严重很多，当含水量低于4 0 时，苍蝇几乎不会在鱼鲞上产卵1 7 。 此外，含水量大小对苍蝇幼虫在鱼鲞上的蛀蚀程度也有影响，据研究，苍蝇幼虫 生长发育最适湿度为6 1 7 0 ，高于8 0 便不能正常进食和生长，低于4 0 就停止发育，甚至死亡1 6 l 。因此鱼鲞的含水量降低到一定程度以后，就不太会受 到苍蝇以及苍蝇幼虫的危害。 0 0 3 的甲基嘧啶磷以浸没的方式处理晾硒前的鱼体，可以有效的 防治绿头苍蝇对鱼干的危害，同时还可以防治储藏过程中的皮蠢1 1 6 h 1 叼；卞氯菊 酯比甲基嘧啶磷更有效，在浓度为o 0 0 2 5 0 0 1 时，就能有效的防治绿头苍蝇 的危害，且作用时间长1 1 9 1 1 2 0 1 ，o 4 的除虫菊+ 胡椒基丁醚( 1 ：2 ) 混合乳油均 匀喷洒在鱼体上，其对绿头苍蝇的防治效果为8 3 以上1 2 1 1 。 虽然用杀虫剂来防治苍蝇的方法具有高效、低成本、操作简便等优点，但它 的残留问题一直影响着传统鱼于的质量安全。在马拉维的传统鱼干防蝇田间实验 表明，用o 0 6 8 的甲基嘧啶磷和0 0 4 3 的杀虫畏处理鱼干，鱼干中的杀虫剂残 留量分别低于6 m g k g ，但用0 1 1 1 的除虫菊酯+ 胡椒基丁醚( 1 ：1 ) 混合乳油 处理鱼干。鱼干中的胡椒基丁醚残留量却高于w h o 和f a o 的农药残留限量标 准( 2 0 m g k g ) 0 9 1 。 3 、天然产物 关于将天然产物应用于鱼干储藏过程中的防虫害方面，国外有不少研究，但 对鱼于加工过程中的防蝇研究较少。鱼肝油和一些植物油一直被用于防治鱼干中 的虫害，有实验研究表明，花生油、可可豆油、棕榈油、玉米油、葵花子油和芝 麻油等都可以用来防治鱼干中的虫害。它们主要是通过杀死虫卵来达到鱼干中的 防虫效果，但对成虫和幼虫不起作用。和粮食作物的防虫不一样，由于鱼的肌肉 组织会大量的吸油，用鱼肝油和植物油来防治鱼干中的虫害般要求油的用量在 5 6m l k g 才能起到防虫效果1 3 3 1 。据报道，一些柑皮油，如橙皮油、柠橡皮油、 柚子皮油、蜜柑皮油等也可以用来防治鱼干中的虫害，但是它与植物油不一样， 它的有效时间比较短暂，一般都只有2 4 小时或更短1 3 4 i 。此外，某些以天然植物 浙江工商大学硕士学位论文 表l i 传统鱼干加工和储藏过程中的虫害以及应用于防治各类虫害的杀虫剂 t a b l el lc h e m i c a li n s e c t i c i d e sa p p l i e df o rt h ec o n t r o lo f p e s ti n f e s t a t i o no f t r a d i t i o n a ld r i e df i s hd u r i n gp r o c e s s i n ga n ds t o r a g e - ，- 浙江工商大学硕士学位论文 为材料做成的粉末或天然提取物也可以控制鱼干中的害虫用量为1 0 8 0 g ，l o o g 鱼干的印楝子粉末，不仅可以抑制皮蠹成虫在鱼于上产卵，还可以有效杀 死鱼干中的皮蠢成虫i 擒用1 4 9 l o o g 鱼干的橙皮粉或柚皮粉处理鱼干，可以驱 避鱼干中的白腹皮蠢i 蚓。辣椒粉、胡椒粉、大蒜粉等也被用来防治鱼干储藏过 程中的虫害，在非洲的塞内加尔和马里常用这种方法【2 扪关于将天然产物应用 于鱼干加工过程中的防蝇研究很少。m a t h e n 等用花生油、葵花子油、芝麻油、 橙皮油防治传统鱼干在加工过程的苍蝇危害，虽然有效果，但并不是很理想1 3 7 j ； 白胡椒提取物、大蒜提取物、杨桃提取物也可应用于鱼干防蝇，但防治率不高1 3 1 1 。 ( = ) 物理防治方法 在鱼鲞防虫害方面，常用的物理防治方法是辐射，使用尼龙网罩，用新型材 料包装鱼鲞等。对鱼干进行适当的辐射不仅可以控制鱼干中的虫害，还可以杀死 鱼干中的致病性微生物，并且它不会影响鱼干的品质【埘。以高密度聚乙烯为主 要材料再镶嵌一层厚度为2 5 “m 的低密度聚乙烯制成的容器来包装鱼干，可以防 止鱼干受虫蛀或微生物的危害1 铷。用尼龙网罩隔离晾晒过程中的鱼干可以有效 的防止蝇类的侵扰1 4 0 h ，但这种方法在生产中成本比较高，而且使用起来也不 方便，很难推广 二、发展趋势 鉴于杀虫剂所带来的残留问题，以及天然产物在驱蝇杀虫方面的研究，国内 外许多专家一致认为，对已经应用于鱼干储藏中防虫害的或已研究过具有驱蝇杀 虫效果的天然产物和食品添加剂进行鱼鲞防蝇方面的研究，以开发出具有高效， 无毒或低毒低残留，同时又不改变传统鱼干加工工艺和感官品质以及商品价值的 天然防蝇药剂已成为传统鱼干加工过程中防蝇研究的一大发展趋势，同时也是消 除传统鱼干质量安全问题的有效途径。 三、本课题研究的几种防蝇物质的特性 ( 一) 印楝素 印楝素是从印楝树各部位提取出来的一种天然昆虫生长调节剂，对多数昆虫 具有较强的的杀虫、拒食、抑制生长发育、胃毒、忌避、抑制呼吸、抑制昆虫激 浙江工商大学硕士学位论文 素分泌和降低昆虫生育能力等多种生理活性，其中以杀虫、拒食、忌避和抑制生 长发育作用尤为显著l , l o l - i , 1 3 1 。据统计，印楝制剂可以防治的害虫种类超过2 5 0 种， 包括农业、林业、畜禽、卫生以及储藏害虫，现已经广泛应用于各个领域的虫害 防治。另外，它还有抗疟疾h 4 l 、抗炎h 5 】、抑制动物和人体内真菌生长1 4 们、抗生 育力m 等药用价值而被人们当作中药材来使用。印楝素的毒性很低，大鼠经口 急性毒性l d s o 韬e5 0 0 0m g l 【g 以上，属于低毒类物质1 4 s l 。 ( 二) 稳定型二氧化氯 稳定型二氧化氯，一种高效强氧化剂，具有消毒、杀菌、防腐、除臭、保鲜， 漂白等多种功能，现已被广泛应用于食品，医药，纸张，纺织品，水处理等方面。 在食品方面，主要是用于饮用水的消毒以及农产品，畜产品和水产品的保鲜和防 腐。据悉，将稳定型二氧化氯应用于食品中的驱蝇防蝇已经有相关的专利报道 1 4 9 j 。国家卫生部已批准稳定型二氧化氯为新型食品添加剂( g b 2 7 6 0 - - 1 9 9 6 ) 。稳 定型二氧化氯的急性毒性为小鼠经口l d r , o 5 0 0 0m g k g ，属于实际无毒类物质 1 5 0 1 1 5 l l 。 ( 三) 夭然除虫菊素 天然除虫菊素，一种公认的世界上最安全最有效的天然杀虫剂，几乎对所有 农业害虫及家蝇、蚊子、蟑螂等家庭卫生害虫都有极强的杀虫效果，是目前能应 用于鱼干防蝇防蛀的两种杀虫剂之一i 5 】；其急性毒性大鼠经口l d s e 为1 0 5 0 2 7 8 0m g k g ，经皮l d s o 为2 0 0 0m g k g 以上，属于低毒类物质【5 2 1 ( 四) 辣椒素 辣椒素，红辣椒的主要辛辣成份，具有辛辣刺激性气味，在食品中作调味料 使用唧1 ，可以促进肾上腺分泌儿茶酚胺并显著抑制蜡性芽孢杆菌及桔草杆菌的 生长，具有抗病菌、抗肿瘤和镇痛消炎作用p 4 1 ，还可作为健胃剂，促进食欲、 改善消化等生物学功能1 5 5 1 ，动物采食后，能促进胃液分泌、增强食欲，促进血 液循环，提高机体的抗病能力，还有驱虫、发汗等功效，可用于动物的腹泻、炎 症等疾病防治 5 6 1 ，其在食品餐饮、畜禽饲料与医疗药品等方面具有较高的应用 价值 ( 五) 茶皂素 茶皂素，一种从茶叶、茶籽、茶根等部位提取的天然产物，具有多种生物活 浙江工商大学碗士学位论文 性和功能。在农业方面，既可作为直接杀虫剂，又可作为增效剂1 5 7 1 ，对家蝇幼 虫有较强的浸杀效果p 明；在食品工业方面对啤酒有发泡功能；在医药方面，具 有化痰止咳、抗渗消炎等作用，还能调节人的血糖水平【5 9 】。其急性毒性大鼠经 口l d 如为4 4 9 7m g l 【g ，经皮l d 卯为1 0 0 0m g i 【g ，属于低毒类物质删。 第四节研究目的及研究内容 一、研究目的及意义 随着食品安全意识的不断提高，各国对食品中的农药残留限量控制越来越严 格。根据w h o 和f ：a o 农药联合委员会规定，目前能够用于鱼的防蝇防蛀方面 的杀虫剂只有甲基嘧啶磷和以胡椒基丁醚为增效剂的除虫菊酯【5 1 。其中，以胡椒 基丁醚为增效剂的除虫菊酯不仅能杀死鱼干上的苍蝇幼虫，而且对苍蝇还有驱避 作用，从而可以有效的防止苍蝇对加工过程中的鱼干的町咬，并且大大减少苍蝇 在鱼干上的产卵量，但是在有效剂量的使用情况下，鱼干中的胡椒基丁醚残留量 很高，据报道，用以胡椒基丁醚为增效剂的除虫菊酯来防治鱼干中的苍蝇危害， 当除虫菊酯的有效使用剂量为o 0 7 4 的时候，胡椒基丁醚在鱼干上的残留量为 3 2 3m g l 【g ，超过了w h o 和f a o 的农药残留限量标准( 雯om g k g ) 1 , s l o 而甲 基嘧啶磷虽然不会产生残留量超标的问题，但它只对苍蝇的幼虫有强烈的杀灭效 果，而对苍蝇的卵和成虫没有影响，因此用了甲基嘧啶磷的鱼干还是会有幼虫的 尸体在上面，这在一定程度上影响了鱼于的感官品质和商品价值i 卯。此外，将一 些高毒，高残留的杀虫剂，比如d d t 、敌百虫、残杀威、倍硫磷、西维因等， 作为防虫药剂滥用于传统鱼干的虫害防治一直是全球非常普遍的现象1 2 3 1 1 2 扪。 在我国，自从“毒鱼鲞”事件曝光以后，有关部门规定，在鱼鲞上不得使用任 何化学合成的杀虫剂，导致沿海地区的鱼鲞加工业大大缩水，某些地区甚至在“非 生产季节”不加工鱼鲞，一些地区，特别是那些以鱼鲞加工与销售为龙头产业的 沿海乡镇面临严重的困境。 目前，有关技术人员与鱼鲞加工户一致认为采用对人体低毒无害的驱蝇防 蝇剂是解决此难题的最佳方案。天然产物在农业病虫害防治尤其是在绿色和有机 茶叶、水果和蔬菜生产中的开发应用已成为热点领域，用有活性的天然产物逐步 浙江工商大学顼士学位论文 替代部分人工合成的化学农药是国内外农产品生产厂家和食品消费者的共同目 标。 本研究就是以无毒或低毒、低残留的天然产物以及已用于食品加工的食品添 加剂作为防蝇材料，对其在鱼鲞加工过程中的防蝇效果进行了室内模拟研究，其 目的在于研究出一种或几种在鱼鲞加工过程中防蝇效果较好的绿色防蝇物质，其 意义在于填补我国关于鱼鲞防蝇方面的技术空白，并为我国鱼鲞( 干) 加工业创 建一个安全的绿色平台，更重要的是，本研究的结果可望为进一步开发安全无害、 高效低成本、同时不改变传统工艺和风味的鱼鲞加工绿色防蝇技术提供可参考的 资料。 二、研究内容 本研究以低毒、低残留的印檬素、天然除虫菊素、茶皂素和已作为食品添加 剂使用的稳定型二氧化氯、辣椒素作为鱼鲞加工过程中的防蝇物质，对箕分另i j 进 行了三个方面的室内防蝇效果研究： 1 、各物质对大头金蝇町咬鱼鲞的影响。 2 、各物质对大头金蝇在鱼鲞上的产卵影响。 3 、各物质对大头金蝇幼虫在鱼鲞上的生长和死亡影响。 此外，还对稳定型二氧化氯对鱼鲞理化品质的影响，以及天然除虫菊素在鱼 鲞上的残留量进行了分析和研究。 浙江工商大学硬士学位论文 第二章实验材料与实验方法 第一节主要实验材料与化学试剂 一、防蝇材料 印楝素原粉：由云南建元生物开发有限公司提供，含量为1 2 0 4 。 稳定型二氧化氯：由杭州转峰食品添加剂有限公司提供，有效成分含量为5 。 天然除虫菊素原药：浅黄色透明流动液体，由云南玉溪亚临界植物化工有限责任 公司提供，含量为5 0 。 茶皂索原粉：由中国农业科学院茶叶研究所提供，含量为4 0 。 辣椒素原粉：由浙江恒昌远大商贸有限公司提供，含量为8 0 。 二、其他实验材料 大头金蝇：蝇种由l 四) i l 简阳大众养殖有限公司大头金蝇养殖基地提供，野生驯化 的1 0 0 纯种。 苍蝇养殖笼：自行设计与加工铝合金质框架，外用尼龙网罩住。体积分别为 1 0 0c m 5 0c m x 5 0c m 和2 0 0c m x l 5 0 c m 5 0c m 各2 个。 实验用黄鱼：由温岭市松门镇提供，大小为6 0 8 0 9 左右。 三、化学试剂 浙江工商大学硬士学位论文 无水乙醇 9 5 乙醇 乙醚 三氯甲烷 冰乙酸 乙酸胺 碘化钾 硫代硫酸钠 酚酞 甲基红 可溶性淀粉 氢氧化钾 氢氧化钠 磷酸 乙酰丙酮 丙酮 碘 硫酸 邻苯二甲酸氢钾 重铬酸钾 正己烷 无水硫酸钠 弗罗里硅土 天然除虫菊素标准品：含量为 9 8 以上，主要含瓜叶菊索 i 、荣莉菊素i 、除虫菊素i 和除虫菊素 a r a r a r a r a r a r a r a r a r a r a r 杭州长征化工厂 安徽安特生物化学有限公司 杭州化学试剂有限公司 杭州双林化工试剂厂 杭州化学试剂有限公司 上海试四赫维化工有限公司 汕头市西陇化工厂 杭州萧山化学试剂厂 上海三爱思试剂有限公司 。 上海三爱思试剡有限公司 菱湖食品化工厂 杭州萧山化学试剂厂 杭州萧山化学试剂厂 浙江新安化工集团股份有限公司 上海凌峰化学试剂有限公司 衢州巨化试剂有限公司 油头市西陇化工厂 浙江永进化工有限公司 上海化学试钢有限公司 江苏鸿声化工厂 国药集团化学试； l 隋限公司 上海化学试剂有限公司 温州市化学用料厂 云南玉溪亚临界植物化工有限责任公司 1 3 一 从 从 从 从 从 从 从 从 浙江工商大学硬士学位论文 第二节主要仪器与设备 本研究中应用的主要仪器与设备列于表2 - - 2 。 表2 2 仪器与设备 t a b l e2 - 2i n s t r u m e n t sa n de q u i p m e n t s 第三节实验方法 一、大头金蝇的饲养 幼虫饲养：以黄鱼粉、麦麸和水为饲料，按1 ：2 ：7 混合作为幼虫培养料对 幼虫在阴暗处进行饲养，直至幼虫化蛹。培养温度为3 5 ，环境湿度为6 0 - - 7 0 。 成虫饲养：以新鲜黄鱼和奶粉红糖水混合液( 奶粉：红糖：水- - - - - 5 0 0 ：1 0 0 ： 3 ) 对成虫在苍蝇养殖笼中进行饲养( t ；3 0 3 5 c ，r h ：6 0 7 0 ，t 光：t 暗= 1 2 ：1 2 ) ，直至成虫会产卵( 大约4 5 天) ，随后单用奶粉红糖水混合液 饲养，当成虫全部成熟，并处于产卵高峰期时( 大约1 0 1 2 天) ，用于防蝇效 浙江工商大学硕士学位论文 果试验。 二、鱼鲞的腌制 黄鱼的腌制按照温蛉鱼鲞的传统腌制方法进行腌制，具体臆制方法是：将已 经去内脏的黄鱼( 6 0 g ) 完全浸没于3 0 水中盐渍，盐渍时间为2 4 小时 然后将腌制好的黄鱼放入冷柜，- - 1 8 条件下冷藏备用 三、各防蝇物质对鱼鲞的处理 将腌制好的黄鱼均匀切成8 l og 左右的鱼块，分别浸没于不同浓度的防蝇 物质水溶液中，并设一个不加任何物质的清水处理作为对照，在一定时间后取出， 以进行防蝇效果实验。每个防蝇物质各设5 个浓度梯度，每1 0 0m l 溶液处理黄 鱼1 0 0 9 。 不同浓度防蝇溶液的配制：在电子天平上准确称取一定量防蝇物质，直接加 清水溶解稀释，以配制成不同浓度的防蝇溶液，如果防蝇物质不溶于水，先用少 量无水乙醇进行预溶解，然后加清水溶解稀释。各防蝇物质对鱼鲞的不同处理浓 度、处理时间见表2 - - 3 。 表2 3 各物质对鱼鲞的处理 t a b l c2 - 3t m a t m e n t so f s a l t e dd r i e df i s h 四、防蝇效果试验研究方法 分别进行了各防蝇物质对大头金蝇在鱼鲞上的町咬和产卵影响试验，以及各 防蝇物质对大头金蝇幼虫在鱼鲞上的生长和死亡影响试验。 浙江工商大学硕士学位论文 ( 一) 各物质对大头金蝇叮咬鱼鲞的影响 将对照组和处理组的鱼块分别均匀分装于2 个培养皿中，于上午7 时前随机 放入饲养有8 0 0 1 0 0 0 只大头金蝇的苍蝇养殖笼( 1 0 0c m x 5 0c m x 5 0c m ) 中，观 察大头金蝇叮咬鱼鲞的情况。培养皿中的鱼块要求均匀分布，并且切过的那一面 要朝上，每个培养皿中鱼块的数量为8 l o 块，每个浓度处理鱼块数量为1 6 2 0 块，实验条件( t ：3 0 3 5 ，r h ：6 0 7 0 ，t 先：t _ = 1 2 ：1 2 ) 大头金蝇叮咬鱼鲞情况的观察和测定( 采用直接数数法) 陋1 l ：以1 5 分钟内 大头金蝇时刻叮在鱼块上的个数作为叮咬情况的表征，一天的观察测定有效次数 不少于2 0 次( i - 午7 时到1 0 时1 0 次，下午4 时到7 时l o 次) ，每个处理5 次重复。观察时，每个处理随机取一个培养皿上的鱼块作为观察和测定的对象。 各防蝇物质对大头金蝇在鱼鲞上的驱避效果用驱避率表示 计算方法： 驱避率= 塑型黑黼嘉器严- o 嗍 统计方法：所得数据的显著性检验用邓肯氏新复极差法( d m r t ) 统计陋2 1 ， 统计软件为s a s 软件。 ( 二) 各物质对大头金蝇在鱼鲞上产卵的影响 将对照组和处理组的鱼块分别均匀分装于5 个培养皿中，于上午8 时随机放 入饲养有5 0 0 0 6 0 0 0 只左右大头金蝇的苍蝇笼( 15 0c m x 2 0 0c r u x 5 0c m ) 中，晚 上8 时，将苍蝇笼中的鱼块取出，并检测各个处理鱼块上的产卵情况，产卵情况 以培养皿中单个鱼块上的产卵数作为表征。培养皿中的鱼块要求均匀分布，并且 切过的那一面要朝上，每个培养皿中鱼块的数量为8 1 0 块，每个浓度处理鱼块 数量为4 0 5 0 块，每个处理3 次重复，实验条件( t ：3 0 3 5 ，r h ：6 0 7 0 * 0 ，t 光：ti t - - - - 1 2 ：1 2 ) 。防蝇物质对大头金蝇在鱼鲞上的抑制产卵效果用抑 制产卵率表示。 卵的计数( 采用称量法) f 1 3 l ：将各处理鱼块上的卵全部取出，晾干，然后 在电子天平( o 0 0 0 1g ) 上称量，再根据每l o 个卵的重量，间接得出鱼块上的产 卵个数。 每l o 个卵的重量的确定：随机取大约1 0 0 个左右的卵，晾干，然后在电子 浙江工商大学硕士学位论文 天平( o 0 0 0 1g ) 上称量，记下所取卵的重量，然后对所取卵的数量进行精确数 数，由此得出每1 0 个卵的重量。重复操作5 次，取平均值。 计算方法： 产卵数= 蒜舞誉篇m 删产孵= 型雩淼笋- 咣 统计方法：所得数据的显著性检验用邓肯氏新复极差法( d m r t ) 统计，统 计软件为s a s 软件，线性回归和杌率值分析在e x c e l 软件上进行统计分析 6 3 1 - 1 6 5 1 。 ( 三) 各物质对大头金蝇幼虫生长和死亡的影响 大头金蝇幼虫的培养方法1 1 3 l ：取已经晾晒一天的各浓度处理鱼鲞1 0g ，放 入1 0 0m l 小烧杯中，各接种5 0 条刚孵化出来的幼虫，烧杯口用双层医用脱脂 纱布封住，避免幼虫爬出烧杯，并在生化培养箱中恒温恒湿培养( 1 - - 3 0 ，r h = 6 0 ) ，每天更换鱼鲞作为新的培养料( 从第二天开始，更换的新料为晾晒了两天 的成品鱼鲞，更换量为3 0g ) ，直至幼虫停止进食，并开始化蛹为止。每个处理 3 次重复。 大头金蝇幼虫生长情况和死亡情况的观察和测定1 2 】：每隔2 4h ，将烧杯中 的幼虫全部取出，对活幼虫进行记数，并让它们在吸水滤纸上自由爬行，以除去 幼虫表面的水分和残留物，然后在电子天平上称量，以求得单个幼虫的体重。各 物质对大头金蝇幼虫在鱼鲞上的生长情况和死亡情况的影响分别用每2 4h 幼虫 的体重和每2 4h 幼虫死亡率及校正死亡率来表示。 计算方法： 死亡率= 罂二丝墨堡5 0 适丝皇鏊1 0 0 校正死亡率= 竺丝号琶嘉煮矗凳笋1 0 0 唧l 统计方法：所得数据的显著性检验用邓肯氏新复极差法( d m r t ) 统计，统 计软件为s a s 软件 浙江工商大学硕士学位论文 五、稳定型二氧化氯对鱼鲞理化品质的影响 将经过稳定型二氧化氯处理的成品鱼鲞在常温( 2 0 ) 下进行密封包装储 藏，并于储藏后0 d 、7 d 、1 4 d 、2 0 d 、2 6 d 、3 0 d 分别测定其理化指标，理化指 标包括酸价和过氧化值。每个处理3 次重复，每次重复测定3 次，然后取平均值。 1 、酸价测定 采用g b t s 0 0 9 3 7 - 2 0 0 3 ， 2 、过氧化值的测定 采用g b t5 0 0 9 5 6 - 2 0 0 3 ， 六、天然除虫菊素在鱼鲞中的残留 将经过天然除虫菊素处理的鱼鲞在晾晒后1d ，2d 以及进行常温密封包装贮 藏后2 d ，6d ，1 4 d ，3 0 d 分别测定其天然除虫菊素的残留量。每个处理3 次重 复，每次重复测定3 次，然后取平均值。 天然除虫菊素在鱼鲞中的残留测定方法参照中华人民共和国进出口商品检 验行业标准s n0 2 1 8 9 3 出口粮谷中天然除虫菊素残留量检验方法，并作了一 些改动。 具体操作步骤如下： 1 、除虫菊素标准储备液的配制 准确称取适量的天然除虫菊素标准品，用少量正己烷溶解，然后用正己烷配制 成浓度为0 1 0m g m l 的储备液。 2 、样品处理 提取：称取试样约2 0g ( 精确至o 1 9 ) ，置于2 5 0m l 锥形瓶中，用5 0m l 正己烷一丙酮混合液( 4 + 1 ) 振荡提取2 小时，抽滤，并将滤液用旋转蒸发器蒸 干，然后加入正己烷并定容至2 5m l ，作为试样提取液。 净化：在层析柱中依次加入1c m 高的无水硫酸钠、2g 弗罗里硅土，顶端再 加le m 高的无水硫酸钠。以5m l 正己烷淋洗柱，待液面降至无水硫酸钠表面时， 准确吸取2 5 0m l 提取液加到柱上，待液面降至无水硫酸钠表面时，加入1 2m l 无水乙醚一正己烷混合液( 1 + 9 ) 混合液进行淋洗，待液面降至无水硫酸钠表面 浙江工商大学硕士学位论文 时，弃去流出液，立即加入无水乙醚一正己烷混合液( 1 + 1 ) 混合液进行洗脱，同 时开始收集1 0m l 洗脱液，作为试样测定液供气相色谱测定。 3 、测定 色谱条件：扎色谱柱：石英毛细管柱，3 0m x o 5 3 删m ( 内径) 。 b 氮气：纯度9 9 9 9 ，1 1m l m i n 。 c 色谱柱温度：2 2 0 。 d 进样口温度：2 5 0 。 e 检测器：电子俘获检测器 检测器温度：2 8 0 。 标准曲线的制作：准确吸取天然除虫菊素标准储备液，用正己烷定容，配制 成浓度为0 0 、o 1 、0 2 、0 4 、0 8 、1 6 、3 2 、6 4 、1 2 8t l g m l 的标准液，用微 量进样器依次准确吸取不同浓度标准溶液l 止注入气相色谱仪测定，以瓜叶菊 素i 、茉莉菊素i 、除虫菊素i 和除虫菊素i i 的峰面积之和为纵坐标，浓度为横 坐标，绘制标准曲线。 试样测定：用微量进样器准确吸取1 此测定液，注入气相色谱仪测定，取 试样的天然除虫菊素峰面积之和与标准曲线比较定量。 4 、结果计算和表达 试样中的天然除虫菊素含量按下式进行计算： ，c 1 0 0 n 一一 m 式中： 静试样中的天然除虫菊素残留量，g k g c 一由标准曲线上查出的试样测定液中相当于天然除虫菊素的浓 度， t g m l 1 0 0 _ 试样提取液换算成试样测定液的体积，m l 聍试样的质量，g 浙江工商大学硕士学位论文 第三章实验结果与分析 第一节各物质对大头金蝇叮咬鱼鲞的影响 一、印楝素的影响 印楝素处理对大头金蝇町咬鱼鲞的影响结果( 表3 - - 1 ) 表明，在上午7 时到 l o 时这个时闻段，浓度为2m g n 的印楝素处理鱼鲞上大头金蝇的町咬个数与对 照组相比，没有显著性差异( p o 0 5 ) ，当浓度达到6m g l 时，与对照组相比有 显著性差异( p o 0 5 ) ，表明6m g ，l 的印楝素处理对大头金蝇已没有驱避作 用，浓度为1 8m g l 、5 4m g l 、1 6 2m g l 的印楝素处理对大头金蝇的驱避率也 有不同程度的下降，分别为5 5 5 6 、7 1 2 3 、9 4 5 2 。 表3 一i 印楝素对大头金蝇町峻鱼鲞的影响 t a b l e 3 - le f f e c t o f a z a d i r a c h t i n o n p r e s e n c e o f c h r y s o m y a m e g a c e p h a l a o rs a l t e d d r i e df i s h 注：表中同列数字后标有相同字母表示经d m r t 检验在5 水平上无显著性差异表中同列数字后标有不 同字母则表示经d m r t 检验在5 水平上有显著性差异 浙江工商大学硕士学位论文 二、稳定型二氧化氯的影响 稳定型二氧化氯处理对大头金蝇叮咬鱼鲞的影响结果( 表3 2 ) 表明，在 上午7 时到l o 时这个时间段，随着稳定型二氧化氯浓度的增大，鱼鲞上大头金 蝇的叮咬个数显著减少，当浓度为1 2 0m g l 时，鱼鲞上大头金蝇的町咬数为0 ， 即对大头金蝇的驱避率达到了1 0 0 ，而浓度为1 5m g l 、3 0m g l 和6 0m g l 的 稳定型二氧化氯处理对大头金蝇的驱避率也分别达到了3 7 5 、6 4 3 和9 4 6 。 但是到下午4 时到7 时，稳定型二氧化氯对大头金蝇的驱避作用明显降低，其中 1 5m g l 的浓度处理对大头金蝇已几乎没有驱避作用了，而3 0m g l 、6 0m g l 、 1 2 0m 班和2 4 0m g l 的浓度处理对大头金蝇的驱避率也分别下降到3 8 5 7 、 5 0 o o 、7 0 o o 和8 8 5 7 。 表3 2 稳定型二氧化氯对大头金蝇町咬鱼鲞的影响 t a b l e3 - 2e f f e c to f s t a b i l i z e dc h l o r i n ed i o x i d eo i lp r e s e n c eo f h r y s o m y am e g a c e p h a l a o i ls a l t e dd r i e df i s h 注：表中罚列数字后标有相同字母表示经d m r t 检验在5 水平上无显著性差异，表中同列数字后标有不 同字母则表示经d m r t 检验在5 水平上有显著性差异 三、天然除虫菊素的影响 ，天然除虫菊素对大头金蝇叮咬鱼鲞的影响结果( 表3 3 ) 表明，天然除虫 菊素对大头金蝇的驱避能力很强，在很低的浓度下就表现出了较高的驱避效果， 且随着浓度的升高，驱避效果显著增强，各浓度处理鱼鲞上的大头金蝇叮咬个数 都有显著性差异( p 0 0 5 ) ；高浓度情况下( 9 0m g l ) ，才表现出驱避作用，且随着浓度的升高， 驱避能力也有所提高，但提高幅度不大；但辣椒素对大头金蝇的驱避作用持效性 比较长，在鱼鲞晾晒的第一天，其对大头金蝇的驱避能力随时间的延长，不但没 有降低，反而有一定程度的提高，在上午7 时到1 0 时，浓度为9 0m g l 、2 7 0m g l 和8 1 0m g f l 的处理对大头金蝇的驱避率分别为3 0 4 3 、5 6 5 2 和5 4 4 3 ，而 在下午4 时到7 时，各浓度处理对大头金蝇的驱避率分别达到了5 6 7 2 、7 6 1 2 和8 0 6 0 。 浙江工商大学硕士学位论文 表3 4 辣椒索对大头金蝇叮咬鱼鲞的影响 t a b l e3 - 4e f f e c to f c a p s a i c i no np r e s e n c eo f c h r y s o m y am e g a c e p h a l a o ns a l t e dd r i e df i s h 注：表巾同列数字后标有相同字母表示经d m r t 检验在5 e , 水平上无显著性差异。表中同列数字后标有不 同字母则表示经d m r t 检验在5 水平上有显著性差异 五、茶皂素的影响 茶皂素处理对大头金蝇叮咬鱼鲞的影响结果( 表3 5 ) 表明，茶皂素对大 头金蝇几乎没有驱避作用，各浓度处理鱼鲞上的大头金蝇叮咬个数与对照组相 比，都没有显著性差异( p 0 0 5 ) 。 表3 - - 5 茶皂素对大头金蝇町咬鱼盎的影响 t a b l e3 - 5e f f e c to f t e a s a p o n i ao np r e s e n c eo f c h r y s o m y a m e g a e e p h a l a o ns a l t e dd r i e df i s h 注：表巾同列数字后标有相同字母表示经d m r t 检验在5 水平上无显著性差异，表巾同列数字后标有不 同字母则表示经d m r t 检验在5 水平上有显著性差异 - 2 3 淅江工商大学颈士学位论文 第二节各物质对大头金蝇在鱼鲞上产卵的影响 一、印楝素的影响 印楝素对大头金蝇在鱼鲞上的产卵影响结果( 表3 6 ) 表明，晾晒过程中， 第二天大头金蝇在鱼鲞上的产卵数比第一天少很多，为第一天的2 5 3 5 ；在晾 晒第一天，浓度为2m g l 的印楝素处理鱼鲞上，大头金蝇的产卵数与对照组相 比，没有显著性差异( p o 0 5 ) ，其余各处理鱼鲞上的产卵数与对照组相比，都 有显著性差异( p o 0 5 ) ，其余各处理鱼鲞上的产卵 数与对照组相比，都有显著性差异( p f o 0 5 ( 1 ，3 ) = 1 0 1 2 9 7 6 ，回归方程显著。 第二天：y = 2 1 1 8 7 l n ( x ) - 2 0 8 6 4 线性相关系数r = o 9 7 8 2 ，显著性检验：在置信水平口= 0 0 5 时，f _ 1 3 4 5 5 5 7 f o 0 5 ( 1 ，3 户1 0 1 2 9 7 6 ，回归方程显著 通过几率值分析1 6 3 1 1 6 4 1 得：印楝素的抑制产卵率直线为： 第一天：y = 1 8 3 9 6 x + 2 5 4 7 5 线性相关系数r = o 9 7 9 3 ，抑制产卵中浓度i c ，o = = 2 1 5 4m g l ， 1 4 2 0 3 2 6 7m g l ，9 5 抑制产卵浓度i c 9 y = 1 6 7 7 5m g l ， 11 0 5 9 2 5 4 4 7m g l 第二天：y = 1 7 1 0 4 x + 2 4 3 6 9 线性相关系数r = 0 9 8 6 5 ，抑制产卵中浓度i c 5 0 = 3 1 5 2m g l ， 2 3 5 7 4 2 1 3m g l ，9 5 抑制产卵浓度i c 9 产2 8 6 6 7m g l ， 2 1 4 4 2 3 8 3 2 6m g l 2 4 9 5 置信区间为 9 5 置信区间为 9 5 置信区间为 9 5 置信区间为 浙江工商大学硕士学位论文 表3 - - 6 印楝素对大头金蝇在鱼鲞上产卵的影响 t a b l e3 - 6e f f e c to f a z a d i r a c h t i no no v i p o s i t i o no f c h r y s o m y a m e g a c e p h a l a o ns a l t e dd r i e df i s h 注：表中同列数字后标有相同字母表示经d m r t 检验在5 水平上无显著性差异，表中同列数字后标有不 同字母则表示经d m r t 检验在5 水平上有显著性差异 1 0 0 9 0 8 0 抑7 0 掣s 。 窭s 。 ；4 0 3 0 2 0 1 0 0 o2 55 07 51 0 01 2 51 5 0 浓度( r a g i ) 匿匿夏圈 1 7 5 图3 - - 1 印檬索对大头金蝇在鱼鲞上的抑制产卵效力曲线 f i g u r e3 - 1i n h i b i t i o nc u r v eo f a z a d i r a c h t i no bo v i p o s i t i o no f c h r y s o m y am e g a c e p h a l a o i ls a l t e dd d e df i s h 2 5 浙江工商大学硕士学位论文 二、稳定型二氧化氯的影响 稳定型二氧化氯对大头金蝇在鱼鲞上的产卵影响结果( 表3 7 ) 表明，在晾 晒第一天，各浓度稳定型二氧化氯处理鱼鲞上的产卵数与对照组相比，都有显著 性差异( p 0 0 5 ) ，稳定型二氧化氯对大头 金蝇几乎没有抑制产卵效果。稳定型二氧化氯对大头金蝇在鱼鲞上的抑制产卵效 力曲线( 图3 2 ) 表明，在晾晒第一天，稳定型二氧化氯浓度与抑制产卵率呈 现对数型线性相关，线性回归方程为： y 。= 2 0 7 1 4 l n ( x ) - 2 5 3 6 1 线性相关系数r = 0 9 8 5 6 ，显著性检验：在置信水平a = 0 0 5 时，f = 1 0 2 3 2 4 7 f o 0 5 ( 1 ，3 ) = 1 0 1 2 9 7 6 ，回归方程显著 通过几率值分析得：稳定型二氧化氯的抑割产羚率直线为： y = 1 3 5 0 6 x + 2 8 7 9 8 线性相关系数r = 0 9 8 7 7 ，抑制产卵中浓度i c ，旷= 3 7 1 4m g l ，9 5 置信区间为 3 0 3 7 4 5 4 1m g l ，9 5 抑制产卵浓度1 c 9 5 - - 6 0 8 2 6m g l ，9 5 置信区间为 4 9 7 1 5 7 4 3 6 9m g l 。 表3 - - 7 稳定型二氧化氯对大头金蝇在鱼盏上产卵的影响 t a b l e3 - 7e f f e c to f s t a b i l i z e dc h l o r i n ed i o x i d e0 1 3o v i p o s i t i o no f c h r y s o m y am e g a c e p h a l a 0 1 1s a l t e dd r i e df i s h 注：表中同列数字后标有相同字母表示经d m r t 检验在5 水平上无显著性差异。表中同列数字后标有不 同字母则表示经d m r t 检验在5 。a 水平上有显著性差异 浙江工商大学硕士学位论文 抑 制 产 卵 塞 浓度( m g 1 ) e j 匠菱三圈 图3 - - 2 稳定型二氧化氯对大头金蝇在鱼盎上的抑制产卵效力曲线 f i g u r e3 - 2i n h i b i t i o nc l l l n eo f s t a b i l i z e dc h l o r i n ed i o x i d eo no v i p o s i f i o no f c h r y s o m y am e g a c e p h a l ao ns a l t e dd r i e df i s h 三、天然除虫菊素的影响 天然除虫菊素对大头金蝇在鱼鲞上的产卵影响结果( 表3 - - 8 ) 表明，在晾晒 第一天，各浓度天然除虫菊素处理鱼鲞上的产卵数与对照组相比，都有显著性差 异( p f o 0 5 ( 1 ，2 户1 8 5 1 2 8 2 ，回归方程显著。 第二天：y = 2 8 5 8 7 l n ( x ) + 1 6 0 7 线性相关系数r = 0 9 8 9 4 ，显著性检验：在置信水平o t = 0 0 5 时，f - 1 3 9 8 2 3 f 0 0 5 ( 1 ，3 ) = 1 0 1 2 9 7 6 ，回归方程显著。 浙江工商大学硕士学位论文 通过几率值分析得：印楝素的抑制产卵率直线为： 第一天：y = 2 2 6 1 7 x + 3 8 2 5 线性相关系数r = 0 9 7 2 6 ，抑制产卵中浓度i c s e = 3 3 1m g ，l ，9 5 * * 置信区间为2 5 4 4 2 9m g l ，9 5 抑制产卵浓度i c 9 严1 7 5 6m g l 。9 5 置信区间为1 3 5 3 2 2 8 1 m g l 。 第二天：y = 2 2 0 3 3 x + 3 4 5 1 线性相关系数r = 0 9 9 5 2 ，抑制中产卵浓度i c ，a = 5 0 5m g l ，9 5 置信区间为4 4 6 5 7 1m g l ，9 5 * , 抑制产卵浓度1 c 9 5 - - - - 2 8 o lm g ，l ，9 5 置信区问为2 4 7 5 3 1 7 1 m g l 。 抑 制 产 卵 窒 v 051 01 52 0 2 5 3 0 3 5 浓度( m g t ) 匝e 夏固 图3 3 天然除虫菊素对大头金蝇在鱼整上的抑制产卵效力曲线 f i g u r e3 - 3 i n h i b i t i o nc u i v e o f n a t u r a lp y 嘣h f i n o n o v i p o s i t i