细菌分离培养.ppt

实验三细菌分离培养及移植,刘书超预防兽医教研室,细菌的分离纯化技术,分离纯化：,使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的过程称微生物的纯分离技术。得到的纯培养物称纯种。纯种：指一种或一株微生物培养物中所有的细胞只来源同一个细胞的后代。,分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一,临床送检样品或混杂的样品分离受杂菌污染的菌种细菌纯培养物,试验内容：,1.需氧菌的分离移植和增菌平板划线分离营养（普通）斜面接种营养（普通）肉汤增菌2.厌氧菌的分离培养方法（本次试验不做）生物学方法、化学方法、物理学方法,实验要求：,掌握：掌握细菌分离培养的基本要领和方法掌握无菌操作程序掌握细菌在培养基上生长特点认识：认识菌落形态,无菌操作工具,接种工具,分离纯化法：（细菌分离纯化）,1、平板划线法2、稀释涂布平板法3、稀释混合（倾注）平板法4、显微操作器单细胞挑取法5、棋盘格划线法,1.平板划线：,将蘸有混合细菌的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，浓度变稀，经培养得到由单个细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化。,1.平板划线：,平板划线的原则和目的：,图1平板画线法A、B、C分别为1、2、3次画线,A,B,C,注意手势1.培养皿与酒精灯的距离2.左手打开培养皿的动作3.右手握接种棒的姿势4.右手划线的运作姿势,分区划线：多用于粪便等含菌量较多的标本。每划一个区域，将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一个区域。每一区域的划线应接触上一区域接种线的23次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。,连续划线（曲线划线）：分离含菌量较少的培养物,右手持接种环，通过火焰灭菌，冷却后，挑取标本或培养物少许,1.平板划线：,1,4,3,2,细菌在固体培养基中的生长情况：,单个菌落（S型）,菌苔,菌落（R型）,细菌的培养特征：不同种类的细菌在固体、半固体和液体培养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作为细菌鉴别的特征之一。,细菌在固体培养基中生长表现：1、大小（mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。2-4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落）2、形状（圆形、不规则形）3、边缘（整齐、锯齿状）4、表面性状（光滑、粗糙）5、隆起度（扁平、隆起、中凸）6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明）7、硬度（干燥、湿润、粘液）8、溶血（在血培养基上的表现）,2.斜面移植法：培养，保存菌种及其它。,手执塑料杆处,手执试管底露出斜面,试管口离火焰1cm,小指夹棉塞,培养后生长的斜面菌种,液体培养基接种法：用于增菌及纯培养细菌的生长特点观察，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。,细菌在液体培养基中生长的三种不同现象混浊：细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。沉淀：细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）菌膜：需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌环。,操作顺序：接种环灭菌勾取细菌取棉塞接种塞棉塞接种环灭菌标记培养。,思考题：,1、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？2、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？3、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观察菌落的哪些性状？