临床免疫学课件.ppt

临床常用免疫学检查,1,一.血清免疫球蛋白测定（Ig）【原理】：Ig是一组具有抗体活性的球蛋白，由B淋巴细胞受抗原刺激后增殖分化形成的浆细胞合成和分泌，存在于人体的血液、体液、外分泌液及某些细胞膜上。其分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。IgG主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成和分泌，是唯一能够通过胎盘的Ig，含量最高。IgA分为血清型和分泌型两类。分泌型由呼吸道、消化道等淋巴样组织大量合成，在外分泌系统中发挥重要的作用。,2,IgM的分子量最大，是机体受抗原刺激后最先产生的抗体，在机体早期的免疫防御中有重要地位。IgD含量较少，且极易被纤溶酶或胰蛋白酶水解。有些抗核抗体及抗基底膜抗体属于此类。IgE由消化道、上呼吸道粘膜下的浆细胞分泌，在血清中含量最少。在型变态反应性疾病的发病中有重要的作用。,3,抗体：B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的免疫蛋白，这类免疫球蛋白被称为抗体（antibody,Ab）免疫球蛋白：将抗体或化学结构与抗体相似但无抗体活性的球蛋白统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。,4,N端,C端,5,6,7,8,9,【参考值】IgG7.6-16.6g/LIgA0.71-3.3g/LIgM0.48-2.12g/LIgD0.6-2.0g/LIgE0.1-0.9g/L【临床意义】减低:各类先天性和获得性体液免疫缺陷、联合免疫缺陷的病人及长期应用免疫抑制剂的患者。此时5种Ig均有降低。,10,增高：（1）单克隆增高：表现为5种中仅有一种增高而其他Ig不增高或可降低，主要见于免疫增殖性疾病。如原发性巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、过敏性皮炎、外源性哮喘。（2）多克隆性增高：表现IgG、IgA、IgM均增高。常见于慢性感染、慢性肝炎、肝癌、淋巴瘤及系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病。,11,二.血清补体的检查【原理】补体是血清中具有酶活性的一组不耐热的大分子球蛋白。由三组球蛋白分子组成：C1-C3；B因子、D因子、P因子；C1抑制物、I因子、H因子。补体分子由干细胞、巨噬细胞等分泌，它的产生与抗原刺激无关，但可被抗原、抗体复合物所活化产生溶菌和溶细胞现象。补体通过经典和旁路两种那个途径参与机体灭活病原体的免疫反应，也参与破坏自身组织或细胞免疫损伤。,12,13,14,（一）总补体溶血活性测定（CH50）【原理】补体系统能被溶血素致敏的绵羊红细胞所激活，导致补体的连锁性活化，引起致敏绵羊红细胞溶解。补体活性与溶血程度之间在一定的范围内（20%-80%溶血素）呈正相关系，故一般以50%溶血作为终点较为准确。【参考值】50-100KU/L,15,【临床意义】主要反映补体经典激活途径活化的活化程度。增高：见于各种急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤，妊娠时也可升高。降低：意义更大1.补体成分大量消耗，如血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、系统性红斑狼疮等；2.补体大量丢失，如外伤、手术和大失血的病人；3.还可见于补体合成不足，如肝硬化、慢性肝炎等,16,（二）血清C3的测定【原理】C3是由肝细胞合成与分泌，是血清中含量最多的补体成分，无论经典途径还是旁路途径都参与，因而可以反映出补体的活化情况。【参考值】0.85-1.7g/L【临床意义】增高：C3可作为急性时相反应蛋白，在各种急性炎症、传染病早期、某些恶性肿瘤减低：肾炎、狼疮等。,17,三.细胞免疫检查淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，可分为T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞。临床上各种免疫病时均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的改变。,18,（一）T细胞免疫检测1.T细胞花结形成试验【原理】T细胞表面有特异性绵羊红细胞受体，可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花结样细胞，称为和那个细胞玫瑰花结形成试验。本试验所得花结的百分率，基本代表了被检标本中的T细胞占淋巴细胞的百分率。,19,【参考值】64.4%6.7%【临床意义】升高：见于甲亢、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、中度慢性肝炎、系统性红斑狼疮活动期及器官移植排斥反应等。降低：见于免疫缺陷性疾病，如AIDS、联合免疫缺陷病等。亦可见于恶性肿瘤、麻疹、流感等病毒感染，以及放疗、化疗和应用糖皮质激素等。,20,四.感染免疫检测（一）抗链球菌溶血素“O”(ASO)测定【原理】链球菌溶血素“O”是A群溶血性链球菌代谢产物之一，能溶解人类和一些动物的红细胞。其具有一定的抗原性，刺激机体产生相应的抗体，称为ASO。【参考值】1：400【临床意义】升高见于A群溶血性链球菌感染及感染后免疫反应所致的疾病，如感染性心内膜炎及扁桃体炎等。,21,（二）伤寒与副伤寒的血清学检查机体感染伤寒、副伤寒沙门菌1周后，逐渐产生相应的抗体，第4周后血清中抗体达到高峰。检测伤寒与副伤寒沙门菌的相关抗原及抗体，有助于伤寒与副伤寒的诊断。1.肥达反应【原理】肥达反应时检测患者血清中有无伤寒、副伤寒沙门菌抗体的一种反应。将被检血清倍比稀释后，分别与伤寒沙门菌菌体“O”抗原、鞭毛“H”抗原和副伤寒沙门菌甲、乙、丙的鞭毛抗原，在生理盐水介质中进行凝集价的测定。凝集效价升高或动态升高有助于伤寒、副伤寒的明确诊断。,22,【参考值】“O”凝集价1：80“H”凝集价1：160副伤寒甲乙丙凝集价1：80【临床意义】“O”凝集价1：80、“H”凝集价1：160、副伤寒甲乙丙凝集价1：80则有辅助性诊断意义。若抗体效价依次递增或恢复期较急性期升高4倍或以上，则更有诊断意义。,23,2.酶联免疫吸附试验（ELISA）【原理】伤寒沙门菌脂多糖为抗原，用间接ELISA法检测伤寒病人血清中的特异性IgM抗体，有助于早期诊断伤寒。Vi抗原存在于伤寒沙门菌表面，可以阻止伤寒沙门菌“O”抗原与其相应抗体的凝集反应。当体内存在伤寒沙门菌时就有一定量的Vi抗体存在，细菌清除后抗体亦随之消失，故测定Vi抗体有助于检出伤寒带菌者。,24,【参考值】IgM抗体阴性或滴度1：20Vi抗体滴度1：20【临床意义】.本试验敏感，于发病1周后即见明显升高，故有早期诊断价值，此时肥达反应大多呈阴性反应。.如果Vi抗体滴度1：20，有助于检出伤寒慢性带菌者。,25,（三)结核分支杆菌抗体和DNA测定【原理】机体感染结核分支杆菌后，体内可产生结核特异性抗体。【参考值】结核特异性抗体阴性结核分支杆菌DNA阴性【临床意义】结核特异性抗体阳性表示有结核分支杆菌感染。DNA特异性更强，灵敏度更高，但应防止污染引起的假阳性。,26,（四）幽门螺旋杆菌抗体的测定【参考值】阴性【临床意义】幽门螺旋杆菌抗体阳性见于胃、十二指肠幽门螺旋杆菌感染，如胃炎、消化性溃疡等，其敏感性大于90%，特异性为85%。也可见于胃癌和胃粘膜相关性淋巴样组织淋巴瘤。,27,五.病毒感染（一）汉坦病毒抗体IgM测定【原理】汉坦病毒是肾综合征出血热的病原体。汉坦病毒抗体IgM是感染汉坦病毒后出现于患者血清中的一种特异性抗体。【参考值】阴性【临床意义】人体感染汉坦病毒2-3天后，即可在血清中检出抗体，7-10天后达到高峰，其后开始下降。因此检测汉坦病毒抗体IgM有助于肾综合征出血热早期诊断。,28,（二）流行性乙型脑炎病毒抗体IgM测定【原理】人体感染流行性乙型脑炎病毒后，早期可产生特异性IgM抗体。【参考值】阴性【临床意义】急性乙型脑炎血清特异性IgM抗体于发病后3-4天出现，两周阳性率达高峰，因此IgM抗体有助于早期诊断。乙型脑炎病后机体可产生中和抗体，2个月时达高峰，可持续5-15年，常用于人群隐性感染的流行病学调查。,29,（三）寄生虫感染免疫检测1.弓形虫抗体和DNA测定【原理】弓形虫感染为人畜共患疾病，人体感染后，可引起发热、关节及肌肉疼痛、淋巴结肿大等，若孕妇感染可引起流产、胎儿先天畸形等。弓形虫抗体有IgM和IgG两型。【参考值】IgM、IgG阴性DNA阴性【临床意义】IgM升高是近期感染；IgG升高是既往感染的指标；DNA阳性诊断意义更大。,30,（四）梅毒血清学检测【原理】当机体感染梅毒螺旋体后，即产生梅毒螺旋体抗体，包括特异性和非特异性抗体。反应素检测为定性试验，特异性抗体检测有助于梅毒的确诊。【参考值】梅毒螺旋体抗体阴性【临床意义】1.定性试验用于梅毒的初筛，一期梅毒阳性率为70%，二期达100%，但因为其抗原为非特异性，故可出现假阳性。2.定性试验的前提下，特异性抗体试验阳性可确诊。,31,（五）艾滋病病毒抗体和RNA【原理】艾滋病是由人获得性免疫缺陷病毒引起的获得性免疫缺陷综合征。当机体感染病毒数周到半年后，患者体内可出现抗体。【参考值】抗体阴性；RNA阴性【临床意义】临床上抗体阳性，又具有体重减轻10%以上，持续发热达381个月以上，持续腹泻1个月以上等任何一项，可诊断为艾滋病。,32,33,六.肿瘤标志物检测肿瘤标志物是指能够区分肿瘤或非肿瘤的化学物质，包括肿瘤抗原、激素、受体、酶等。目前分5类：1.原位性肿瘤相关抗原，如本-周蛋白2.异位性肿瘤相关抗原，如肺癌时ACTH升高3.胎盘和胚胎性肿瘤相关物质，如甲胎蛋白4.病毒性肿瘤相关物质，如EB病毒5.癌基因、抑癌基因及其产物,34,（一）甲胎蛋白（AFP）【原理】AFP是人胚胎时期血液含有的一种特殊的糖蛋白，由胎儿的卵黄囊和肝细胞合成，其浓度从胎龄6周逐渐上升，至16-20周达高峰，出生后下降1个月降至正常水平。AFP是诊断肝细胞癌的重要指标。【参考值】300g/L是诊断阈值，但也有部分原发肝癌AFP正常。（2）病毒性肝炎、肝硬化大部分AFP200ng/L,35,甲胎蛋白（AFP）,（3）妇女妊娠3-4个月后，AFP开始升高，7-8个月时达高峰，一般在400g/L以下，分娩后3周恢复正常。妊娠期AFP异常升高，胎儿神经管缺损、畸形。（4）其他：生殖腺胚胎性肿瘤等，AFP可升高,36,甲胎蛋白（AFP）,AFP1963年肿瘤胎蛋白卵黄囊和肝细胞合成妊娠100天高峰出生后下降几个月-1年内降至正常水平参考值400ng/ml原发肝癌近20%AFP正常（2）病毒性肝炎、肝硬化绝大部分AFP400ng/ml,37,甲胎蛋白（AFP）,（3）内胚层癌、畸胎瘤、睾丸癌、卵巢癌、胃癌与其伴肝转移者AFP可升高（4）妇女妊娠3个月后，AFP开始升高，7-8个月时达高峰，一般在400ng/ml以下，分娩后3周恢复正常妊娠期AFP异常升高，胎儿神经管缺损、畸形？,38,（二）癌胚抗原（CEA）【原理】CEA1965年结肠癌血清中发现具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白。最初被认为是结/直肠癌的特异性肿瘤标志物，CEA在消化道外的肿瘤：肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、胰腺癌等也存在。参考值：5g/L,39,【临床意义】：（1）消化器官癌的诊断：CEA升高主要见于结/直肠癌、胃癌、胰腺癌等，病随病程的进展而升高，对判断疗效和预后有一定价值。（2）鉴别原发和转移性肝癌：原发性CEA升高者不超过9%，而转移性阳性率高达90%，且绝对值明显增高。（3）其他：肺癌、乳腺癌、膀胱癌等亦可增高。CEA轻度升高，也可见于溃疡性结肠炎、肝硬化、阻塞性黄疸等。癌症病人的胸、腹水、消化液、分泌物中的CEA常升高,40,（三）糖类抗原125（CA125）【原理】CA1251983年卵巢浆液性囊腺癌细胞免疫小鼠，+骨髓瘤杂交=单克隆抗体OC125OC125识别的抗原为CA125CA125是一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤上皮细胞内。主要用于辅助诊断恶性浆液性卵巢癌、上皮性卵巢癌等。【参考值】2.5万U/ml,41,糖类抗原125（CA125）,【临床意义】：（1）卵巢癌血清CA125升高，阳性率97%，CA125是对诊断卵巢癌有较大临床价值，对判断疗效和复发的良好指标。（2）其他非卵巢恶性肿瘤也有一定的阳性率。宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等也有一定的阳性反应。在许多良性和恶性胸、腹水中发现CA125升高非恶性肿瘤，也有不同程度的升高，但阳性率较低，如良性肿瘤、子宫肌瘤、肝炎肝、硬化等也会增高，但多数不超过10万U/L。早期妊娠，也有CA125升高,42,（四）糖类抗原15-3（CA15-3）【原理】CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，属糖蛋白，对乳腺癌的诊断和术后随访检测有一定价值。【参考值】25000U/L【临床意义】：（1）乳腺癌30-50%患者CA15-3明显升高，但早期阳性临床低，乳腺癌治疗后复发及乳腺癌转移后阳性率升高。乳腺癌初期的敏感性60%，乳腺癌晚期的敏感性80%（2）其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如结肠癌、支气管癌、转移性卵巢癌、原发性肝癌等。,43,（五）组织多肽抗原（TPA）测定【原理】TPA是一种非特异性肿瘤标志物，其升高主要用于辅助性诊断迅速增殖的恶性肿瘤，且在恶性肿瘤的疗效观察上敏感性较高。【参考值】130U/L【临床意义】恶性肿瘤患者血清TPA水平显著升高，与肿瘤发生部位和组织类型无相关性，多见于膀胱转移细胞癌等。恶性肿瘤好转后，TPA水平降低，若再次升高，提示肿瘤复发。急性肝炎、胰腺炎等也可升高。,44,（六）前列腺特异抗原（PSA）【原理】PSA是一种前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶，在前列腺癌时可升高。【参考值】：4ug/L【临床意义】PSA是高度的前列腺组织特异抗原，90-97%的前列腺癌患者的血清PSA明显升高，手术后降至正常，若再次升高，应考虑肿瘤的复发与转移。部分良性前列腺瘤、前列腺炎时也可升高。,45,铁蛋白（Ft）,铁蛋白（Ft）1937年分离得到的含铁蛋白质生理作用：具有强大的结合和储备铁的能力由人体网状内皮细胞分泌，人体内的2/3的铁在肝、脾、骨髓和肠黏膜细胞中某些肿瘤细胞也可合成并释放铁蛋白铁蛋白（Ft）的含量能反映肝脏储铁量和体内储铁总量,46,铁蛋白（Ft）,参考值：男性20-280ug/L女性12-145ug/L临床意义：（1）肝癌、肺癌、胆管癌、胰头癌、淋巴瘤、白血病、泌尿系肿瘤、脑肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、非何杰金氏病等SF升高（2）输血或铁剂治疗SF升高（3）再障、溶血性贫血、地中海贫血SF升高（4）原发性含铁血黄素沉积症SF升高,47,铁蛋白（Ft）,（5）结缔组织病SF升高（6）各种肝脏疾病及慢性肾衰SF升高（7）感染性疾病SF升高（8）脑脊液Ft的测定有助于脑部疾病的诊断（9）缺铁性贫血SF下降,48,细胞角质素片段抗原21-1（CYFRA21-1）,血清CYFRA21-1是指细胞角蛋白19的片段（CK19），角蛋白是构成细胞骨架的一种中间丝状物。CK19主要分布在单层上皮细胞，如肠上皮、胰管、胆囊、子宫内膜、输尿管及肺泡上皮。参考值：3.3ug/L,49,细胞角质素片段抗原21-1（CYFRA21-1）,临床意义：（1）鳞状上皮细胞癌、非小细胞肺癌、大细胞肺癌、肺癌、腺癌、小细胞肺癌，转移性肺癌血清CYFRA21-1升高（2）子宫癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、肝癌血清CYFRA21-1升高（3）血清CYFRA21-1值与肿瘤的进展程度和组织分型相关,50,神经特异性烯醇化酶（NSE）,NSE是神经母细胞瘤的肿瘤标志物NSE也是小细胞肺癌最敏感、最特异的肿瘤标志物参考值15ug/L临床意义：（1）小细胞肺癌的鉴别诊断、监测效果、复发（2）神经母细胞瘤的鉴别诊断、监测病情变化、疗效、复发等（3）神经内分泌肿瘤NSE升高如：嗜铬细胞瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、胰岛细胞瘤等,51,鳞状上皮癌相关抗原（SCC-Ag）,1977年子宫颈鳞状细胞癌中获得参考值：2.5ug/L临床意义：（1）SCC-Ag在子宫颈癌、肺癌、食道癌、头颈部癌等各种鳞癌中升高子宫颈癌的阳性率80%肺鳞癌的阳性率46.5%食道癌的阳性率31%监测疗效、复发、转移、预后等（2）肝炎、肝硬化、肺炎、肾衰、结核等，有一定的SCC-Ag阳性率,52,七.自身抗体的检查机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答，产生自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞的现象，称为自身免疫。自身抗体的检查，对自身免疫病的诊断、疗效观察均具有重要意义。,53,（一）类风湿因子（RF）检查【原理】RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液中。【参考值】乳胶凝集法为阴性血清稀释度1：10,54,【临床意义】1.未经治疗的类风湿性关节炎的病人，RF阳性率70%，且滴度1：160。临床上动态观察滴度的变化，可作为病变活动及药物治疗后疗效的评价。2.其他风湿性疾病（如系统性红斑狼疮）、感染性疾病（结核病、感染性心内膜炎）等，RF也可升高。,55,（二）抗核抗体检查【原理】抗核抗体是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，无器官及种族特异性。依据其与细胞核不同抗原成分其反应而分为抗核蛋白抗体、抗双链DNA抗体、抗单链DNA抗体、抗可溶性核成分抗体及抗核仁抗体。,56,1.抗核抗体测定（ANA）【参考值】血清滴度1：40【临床意义】.阳性主要见于系统性红斑狼疮（SLE）。未经治疗的SLE患者，阳性率达96%，但特异性差。.类风湿性关节炎、系统性硬化病、皮肌炎等也可出现阳性反应。根据细胞核着染后的荧