人工栽培羊肚菌的鉴定论文.pdf

1 9 8 8 西南农业学报 s o u t h we s t c h i n a j o u rna l o f a c u l t u r a l s c i e n c e s 2 0 1 3年 2 6卷 5期 vo 1 2 6 nn 5 文章编号： 1 0 0 1 4 8 2 9 ( 2 0 1 3 ) 0 51 9 8 8 0 4 人工栽培羊肚菌 的鉴定 王 波 ， 鲜 灵 ( 四川省农业科学院土壤肥料研究所 ，四川 成都6 1 0 0 6 6 ) 摘要： 羊肚菌人工栽培已 成功， 但栽培的羊肚菌分类地位不明确。本文对人工栽培的羊肚菌进行 了 形态特征描述和 i t s r d n a 序 列分析 。结果表 明， 人工栽培羊肚茵为梯纹羊肚 菌 mo r c h e l l a i m p o r t u n a， 运用分子生物学技术进 行鉴定 ， 并与 g e n b a n k中下载的 羊肚 菌属 种建立 了系统发育树。 关键词 ： 梯纹羊肚菌 ； 形态特征 ； r d n a i t s ； 系统发育 中图分类号 ： $ 6 2 6 文献标识码 ： a i d e n t i fi c a t i o n o f cu l t i v a t e d m o r c h e l l a wang b o ，xi an l i n g ( s o i l a n d f e r t i l i z e r i n s t i t u t e ，s i c h u a n a c a d e my o f a c u l t u r a l s c i e n c e s ，s i c h u a n c h e n g d u 6 1 0 0 6 6 ，c h i n a ) ab s t r a c t ： mo r c h e l l a h a s b e e n s u c c e s s f u l l y c u l t i v a t e d，b u t t a x o n o mi c s t a t u s o f t h e c u l t i v a t e d s p e c i e s i s n o t c l a r i fi e d i n t h i s p a p e r ，t h e mo t - p h o l o g i c a l c h a r a c t e ris t ic s o f c u l t i v a t e d胍 e 妇 we i e d e s c ri b e d，a n d i t s i ts r dna s e q u e n c e was a i l a l y z e d t h e r e s u l t s h o w e d t h a t t h e c ult i r a t e d f 0 r c kf w a s i d e n t i f i e d t o b e 肘 r c e f i m p o r t u n a b ase d o n t h e m o r p h o l o g i c 8 l c h a r a c t e r i s t i c s a n d mo l e c u l a r h i o l o g i e a l i d e n t i fi c a t i o n， me anwh i l e，i t s p h y l o g e n e t i c t r e e wa s c o n s t r u c t e d wi t h i ts s e q u e n c es o f mo wh e l f r o m g e n e ba n k ke y wo r d s： mo r c h e u a i mp o r t u n a； mo wh o l o g i c ul c h a r a c t e ris t i c s ； r dna i t s； p h y l o g e n e t i e 羊肚菌类大多数为美 味食用菌， 是全球六大最 珍贵食用菌之一 ， 在欧洲 ， 被认为是仅次于黑孢块菌 的美味食用菌 ； 在北美 ， 被认为是最佳食用菌 ， 羊 肚菌是我 国重要 出 口食 用菌产 品。世界上记载有 2 8个种 - 2 j ， 其中我国记载羊肚菌属有 1 1 个种 ， 分别 为黑脉羊肚 菌 mo r c h e l l a a n g u s t i c e o s p e c k ， 脉肋 羊肚 菌 c o s t a t a ( v e n t ) p e r s ， 粗腿羊肚菌 c r a s s e s ， 小羊肚菌 d e l i c i o s a f r ， 高羊肚菌 e l a t a f r ， 高 羊肚菌 紫褐 变种 e l a t a v a r p u r p u r a s e n s k r o m b h (= p u r p u r a s c e n s ( k r o m b h e x b o u d ) j a c q u e t ) ， 羊 肚菌 e s c u l e n t a( l )p e r s (= r o t u n d a( f r ) b o u d ， 羊 肚 菌 坚 挺 变 种 e s c u l e n t a v a r r i g i d a ( k r o m b h ) i r h a l l e t a 1 ， 羊肚菌褐赭色变种 e s c u l e n t a a t u m b r i n a( b o u d ) s i ma i (=m u m b r i n a 收稿 日期 ： 2 0 1 3 0 41 0 基金项 目： 中国科学院微生物研究所 真菌学 国家 重点实验室开 放课题 作者简介： 王波( 1 9 6 3一 ) ， 男， 四川蒲江人， 研究员， 国家食用 菌产业技术体系岗位科 学家 ， 主要 从事食用菌遗 传育种与产业 化关键技术研究 。 e ma l i ： 4 5 0 4 2 9 2 1 6 3 c o m。 b o u d ) ， 薄棱羊肚菌 m i y a b e a n a s i ma i ， 普通羊肚 菌 v u l g a r i s( p e r s )b o u d (= c o n i c a p e r s ) 等l 3 j 。有关羊肚菌的人工栽培成功报道距今有 1 0 0 多年历史。我国和美 国均人工栽培成功羊肚菌 ， 美 国利用工厂进行了栽培 ； 我 国在 田间栽培成功 出羊 肚菌， 云南是利用段木栽培羊肚 菌 j ， 而 四川 是利 用耕地栽培羊肚菌； 我国人工在栽培 的羊肚菌属种 有尖顶羊肚菌l 5 ， 羊肚菌等 ， 由于未见形态特征和 分子标记鉴定证据 ， 人工栽培的羊肚菌是何种?有 必要鉴定出其种名。羊肚菌的鉴定方法有形态学和 分子标记鉴定 ， 由于人 工栽培羊肚菌属种 的子囊果 形态特征与野生的存在差异， 人工栽培的羊肚菌属 种有的个体大、 有圆形、 锥形等， 仅从形态特征上是 难 以准确鉴定的， 还需以分子标记进行辅助鉴定 ， 在 分子标记鉴定上已开展了大量的研究 ， 利用 i t s r d n a序列鉴定 的较多 ， 建立 了羊肚菌属种 的系统发 育树 引， 对我国羊肚菌系统发育研究表明 ， 发现 中 国有 3 0种羊肚菌， 其中有 2 o个为本地种 ， 9个种在 欧洲也有分布， 4 个种可能是火烧适应种 ； 为了快 速鉴定 出羊肚菌物种 ， 建立 了网络参考数据库 。 1 9 9 0 西南农业学报 2 6卷 2 0 0 0 b p 1 0 0 0 b p 7 5 0 b p 5 0 0 b p 2 5 0 b p 1 0 0 b p 图 2 4个羊肚菌样品的 i t s电泳 图谱 f i g 2 th e e l e c t mph o r e t o g r a m o f 4 mo mh e l s pa mp l i fi e d wi t h p r i me ri t s 4 a n di t s 5 估算 ， 检测的羊肚菌属种 4个样品的 i t s条带在7 5 0 b p左右( 图 2 ) 。 2 3 羊肚菌属种的系统发育分析 采用 n e i g h b o r j o i n i n g法 构 建 4个 羊 肚 菌 和 g e n b a n k中下载的 l 2个羊肚菌属种 的基于 i t s系 列的系统发育树状 图( 图 3 ) 。待鉴定的羊肚菌 4个 样品与m o r c h e ll a i m p o u n a 在同一个分枝上， 其序列 系相似性为 1 0 0 ， 而与其它羊肚菌属 的 8个种在 不同分枝上 ， 尖顶羊肚菌与待鉴定的羊肚菌序列相 似性较小 ， 分别在不 同分枝 上， 按照 r e n s k e ( 2 0 0 3 ) 的观点 ， 当序列相 似性 9 9时 ， 为相 同物 种， 因 此 ， 待鉴定的 4个人工栽培羊肚菌应为梯纹羊肚菌 mo r c h e l l a i m p o a u n a ， 而不是尖顶羊肚菌。 3 讨论 羊肚菌人工栽培 已取得成功 ， 在 四川已大面积 栽培出羊肚菌 ， 一般产量达到 1 5 0 0 k g h m ， 高 的达 到 3 0 0 0 k g h m 。人工栽培的羊肚菌大部分认为是 尖顶羊肚菌 ， 由于缺乏分子标记的证据 ， 加上人工栽 培的羊肚菌子囊果个体之 间差异较大 ， 难 以根据系 统特性鉴定出种名 ， 将形态特征与 i t s r d n a序列结 合进行鉴定 ， 才能准确定其分类地位。将人工栽培 的羊肚菌 i ts r d n a序列与 g e n b a n k中记载 的已准 确鉴定的羊肚菌物种的序列进行分析 ， 发现待鉴定 的人工栽培的羊肚菌 4个标本 的 d n a序列与梯纹 羊肚菌相似性达到 1 0 0， 而与羊肚菌其它物种差 异显著 ， 梯纹羊肚菌只在我国云南和河南有分布， 在 四川还未见有报道。 由于 g e n b a n k中登载 的羊肚 菌属种序列 有 6 6 是错误的 引， 因此 ， 利用 g e n b a n k中记载 的羊肚 菌属种的序列进行 比较鉴定 时， 应选择已发表论文 或专业科技人员鉴定后提交的序列。 人工栽培 的羊肚菌物种鉴定为梯纹羊肚菌 ， 表 明梯纹羊肚菌易进行人工栽培 ， 因此 ， 我们在开展羊 肚菌人工栽培研究时 ， 应对定向采集梯纹羊肚菌 ， 对 其进行菌种分离培养 ， 通过系统筛选可获得高产优 质的品种 ， 同时 ， 对其生态习性进行调查 ， 掌握其生 态习性对指导人工栽培羊肚菌具有较大作用。 人工栽培成功的羊肚菌为主要梯纹羊肚菌 ， 而 其它羊肚菌物种是否也能进行人工栽培 ， 还有待于 图3 基于羊肚茵 i t s r d n a序列的 n j系统发育树 nj p h y l o g e n e t i e t r e e o f i ts r dna r e g i o s e q u e n c e s of mo r c h e u a s p p t 髻 上 d 5期 王波等 ： 人工栽培羊肚菌的鉴定 1 9 91 开展人工栽培试验。 目前人工栽培羊肚菌是在耕地 内， 利用 自然气候栽培 ， 产量和产品质量受环境的影 响较大 ， 稳定性较差 ， 因此 ， 还有待开展高产栽培技 术研究和工厂化栽培技术研究 ， 研究建立羊肚菌 的 高产、 稳产技术体系， 是开展规模化人工栽培羊肚菌 的关键 。 参考文献 ： 1 a l e x o p o u l o s c j ， b l a a c k w e ll m， m i m s c wi n t r o d u c t o r y m y c o l o g y 4 t h e d n c j o h n wi l e y & s o n s i n c ， 1 9 9 6 2 k i r k p m， c a n n o m p f， d a v i d j c， e t a 1 a i n s wo r t hb i s b y s d i c t i o n a r y o ft h e fu n g i 9 t h e d n c c ab i n t e r n a t i o n a l ， wa l l i n g f o r d ， 2o o1 3 戴玉成 ， 周丽伟， 杨祝良， 等中国食用菌名录【 j 菌物学报， 2 0 1 0， 2 9( 1 ) ：1 2 1 4 赵琪， 黄韵婷， 徐中志， 等 羊肚菌栽培研究现状 j 云南农 业大学学报 。 2 0 1 0 ， 2 4 ( 6 ) ： 9 0 4 9 0 7 5 程远辉 ， 赵琪 ， 杨祝 良，等利用 圆叶杨菌材栽培羊肚菌初报 j 中国农学通报， 2 0 0 9 ， 2 5 ( 2 1 ) ： 1 7 0 1 7 2 6 赵丹丹， 李凌飞， 赵永昌， 等尖顶羊肚菌人工栽培 j 食用 菌学报， 2 0 1 2。 1 7 ( 1 ) ： 3 2 3 5 7 沈洪， 陈明杰， 赵永昌， 等云南羊肚菌 r d n a的 i t s 序列与 亲缘关 系分析 j 食用菌学报 ， 2 0 0 7 ， 1 4 ( 2 ) ： 1 5一l 8 8 戴璐 ，李峻志，李安利 ， 等 基于 i t s序列分析对秦岭冷水 沟 羊肚菌的鉴定 j