（中药学专业论文）祛膜止血乳膏的制备工艺及质量标准研究.pdf

摘 要 目的：目的：以中医药理论为指导，结合正交试验，优选出斑蝥最佳提取工艺路线， 在此基础上利用乳化法制备一种治疗子宫内膜出血症的新药祛膜止血乳膏，并 对其进行质量检查及相关的稳定性研究等。 方法：方法：根据中医临床经验及组方筛选，确定斑蝥、鸦胆子油为方中基本组成， 以液相色谱 c18柱，流动相乙腈-水（32：68）以 1.5ml/min 于：229nm 波长，30 条件下检测斑蝥素含量，并结合浸膏得率、经济效益综合制定出斑蝥的最佳提取 工艺，斑蝥提取物调节相对密度备用。以乳膏的成型情况为基础对基质的组成及制 备方法进行筛选，最终选定以硬脂酸、白凡士林、羊毛脂、十八醇、十六醇、液体 石蜡、吐温-80、单硬脂酸甘油酯、甘油、水为基质基本组成，三乙醇胺、吐温 -80、乳化剂op为混合乳化剂，于 60条件下将鸦胆子油与油相混匀，斑蝥提取物 与水相混匀，反相法成乳制得祛膜止血乳膏。样品的含量测定采用气相色谱法，以 亚油酸为对照品，十七酸为内标物，rtx-wax （crossbond-peg） （30m0.25mm 0.25um）色谱柱，进样口 220，氮气流速 0.8ml/min，检测器温度 250，程 序升温：柱温 170保持 1min，然后以 5/min 升温至 240，保持 1min 检测亚 油酸含量；以斑蝥素为对照品，色谱柱：db-1701 （30m0.32mm0.25um）, 进样口温度：220；氮气流速1.5ml/min；检测器温度250；程序升温：初始温 度 120保持 1min，然后以 5/min 升温至 210，保持 1min 后以 10/min 升 温至 250，保持 10min 检测斑蝥素含量；以药典方法检查性状、装量差异、及稳 定性等。 结果：结果：制得了治疗子宫内膜出血症的乳膏剂，且该制剂的制备工艺可行，质量 标准在现行条件下可控，制备的产品性质稳定。 结论：结论：该制剂的生产工艺科学合理，质量标准可控，与预期结果基本符合，可 作为指导工业生产及临床用药的依据。 关键词 祛膜止血乳膏；生产工艺；质量评价；斑蝥；鸦胆子油 study of the preparation and quality standards and stopping bleeding cream abstract purpose:purpose:select the best extraction process under the guidance of chinese medicine theory and orthogonal experiments and create a new drug for hemorrhagic endometrial treatment- driving membrane and stopping bleeding cream.and inspect its quality and study on stability. methods:methods: determine the cantharidin and brucea javanica oil are the basic composition in the prescription.the conditions of detection of cantharidin content are:c18 hplc column, the mobile phase is acetonitrile:water-32:68,the velocity of flow is 1.5ml/min, the detection wavelength is 229 nm and the test temperature is 30. combined with extract yield, economic efficiency to develop the best extraction cantharidin process. regulate the relative density of cantharidin extraction and reserve it. selecte matrix composition and preparation method by the forming case of the cream. finally selected the elements of matrix are stearic acid, white petrolatum,lanolin, octadecanol, cetyl alcohol, liquid paraffin, tween -80, glycerin monostearate, glycerin and water;and the emulsifiers are triethanolamine, tween -80 and emulsifier op. mix javanica oil with the oil phase,and mix cantharidin extraction with water phase under the temperature of 60，then make the driving membrane and stopping bleeding cream by inverting method. contents of the sample was determined by gas chromatography,and the testing conditions are: linoleic acid as reference, seventeen acid as the internal standard,by rtx-wax (crossbond-peg) (30m 0.25mm 0.25um) column, inlet 220, nitrogen flow rate is 0.8ml/min, detector temperature is 250 , temperature program:keep the column temperature 170 for 1 min, and then to 5/min heating to 240, maintain 1 min to detect the linoleic acid content; cantharidin as reference,by db-1701 （30m0.32mm0.25um）column, inlet 220, nitrogen flow rate is 1.5ml/min, detector temperature is 250 , temperature program:keep the column temperature 120 for 1 min, and then to 5/min heating to 210, maintain 1 min then 10/ min heating to 250 to detect the cantharidin content;and use the methods in pharmacopoeia to detect character, load difference, stability and so on. results:results: created the cream to cure the hemorrhagic endometrial,and the process is feasible, quality standards can be control under modern conditions and the product is stable. conclusions: the process of the preparation of the production is scientific and rational, quality standards can be control, the results are consistent with the expected.it can be used as the guiding in industrial producting and the basis for clinical treatment. key words:key words: driving membrane and stopping bleeding cream; producting process; quality evaluation; cantharidin; javanica oil author: tutor: 陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明学位论文独创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本 论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明 的法律结果并由本人所承担的法律责任。 学位论文作者签名 日 期： 年 月 日 关于学位论文使用授权的声明 关于学位论文使用授权的声明 陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机 构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其 他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。 （保密论文在解密后应遵守此规定） 论文作者签名日 期： 年 月 日 论文导师签名日 期： 年 月 日 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 1 - 引 言 子宫内膜出血症是目前困扰我国多数女性的一种常见多发病，其病因多种多 样，包括功能失调型、器质病变型、内膜炎症型等多种类型，主要症状为月经失去 其正常有规律的周期，代之以不同频率的经量过多，经期延长，或表现为不规律的 子宫出血，时流时止，血量也时多时少等。无排卵供血一般无疼痛，失血过多时常 伴有贫血症状。该病早期不易被发觉，后期治疗周期长，见效慢，且易引发贫血 症、败血症、不孕症等，甚至转化为癌变，给女性朋友的身心带来极大危害。目前 常用的治疗方法有止血、调整周期、促排卵、放射及超短波、手术治疗等。传统的 西医治疗方法往往治愈率高，但病情易反复，患者需遭受多次痛苦。我院贺丰杰教 授在自己多年临床和教学实践的基础上，通过反复试验验证，潜心研究开发了创新 药祛膜止血乳膏。该药是以斑蝥、鸦胆子两味药材为基础制成的水包油型乳膏剂， 用于手术中一次性注入宫腔，治疗子宫内膜出血症，在理论上具有疗程短、副作用 小、痛苦少、一次治愈永不复发等优点，在工业生产和临床应用上具有广阔的开发 和应用前景。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 2 - 正 文 1. 选题依据及文献综述 1.1 选题依据 目前，子宫内膜出血症是临床上常见的一种多发病，其病因多种多样，且对人体 的伤害极大，可引起贫血、宫颈炎等多种病症，甚至可能转化为癌变，给广大女性 朋友的身心带来很大危害。目前常用的治疗方法有止血、调整周期、促排卵、放射 及超短波、手术治疗等。西医治疗方法的针对性强，往往治愈率较高，但弊端在于 该治疗方法未能针对病因病症，病情易反复，患者需遭受多次痛苦。采用中医药方 法治疗疾病讲究追根刨底，找出发病的原因，从而达到标本兼治，治愈后不易复发 的目的。在目前对子宫内膜出血症的治疗中，常用的方法均为西医治疗方法，而结 合中医药理论，采用中药及相关剂型的治疗方法未见报道。我院贺丰杰教授以自己 多年临床和教学实践的基础为依托，经若干年对上千例确诊为子宫内膜出血症患者 的临床治疗研究发现，以鸦胆子油等五味中药为组方治疗，其疗效确切，有良好的 研究和推广应用价值。通过反复试验，对处方进行潜心筛选研究发现，以斑蝥、鸦 胆子两味药材为基础，制备适宜的制剂，用于手术中一次性注入宫腔，发挥其化腐 生肌、燥湿解毒的功效，可治疗各种不同类型的子宫内膜出血症，理论上具有疗程 短、副作用小、痛苦少、一次治愈永不复发等优点，在临床应用和工业生产上具有 广阔的开发和应用前景。 与此同时，女性的子宫是一个开口向下、充积水分的黏性腔体，注入给药虽然 可以直达病灶，但是困难在于如何延长药物与子宫内壁的接触时间，使其很好地发 挥治疗作用，同时又不能使其药物的毒性给机体带来伤害。如何选择适宜的剂型， 从而得到疗效显著且满足上述要求的制剂，是该方新药研究的重点及难点所在。如 能在后续研究中很好地解决上述问题，本课题的研究将会推动子宫内膜出血症治疗 方法的革新，为后续的深入研究奠定理论及实验基础。 1.2 文献综述 1.2.1 斑蝥 斑蝥是芫青科南方大斑蝥(mylabris phalerata pall.)或黄黑小斑蝥(m. cichorii l)的干燥体，呈长圆形，头及口器向下垂，有较大的复眼及触角各 1 对， 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 3 - 触角多已脱落，背部具革质鞘翅各1对，黑色，有3条黄色或棕黄色的横纹；鞘翅下 面有棕褐色薄膜状透明的内翅 2 片，胸腹部乌黑色，胸部有足 3 对，有特殊的臭气 1。 图 1 斑蝥中药材 1.2.1.1 斑蝥的化学成分 斑蝥的化学成分主要有斑蝥素(cantharidin)(1%-1. 2%)、脂肪(12%)及树脂、 蚁酸、色素等,其中主要起药理作用的是斑蝥素。 斑蝥素是无色无味的发亮结晶体，属斑蝥酸内酐，化学名为：外-1，2 顺式-二 甲基-3，6-氧桥六氢化邻苯二甲酸酐，是倍半萜衍生物的一种，分子式为 c10h12o4， 分子量是 196。晶体呈白色片状，120完全升华，熔点 215-216，微溶于水，易 溶于丙酮(1g：40ml)、氯仿(1g：65ml)、二氯甲烷、乙醚 (1g：560ml)、乙酸乙酯 (1g：150ml)等。研究表明斑蝥素是斑蝥抗癌的有效成分，也是其毒性的主要成分 2。 斑蝥的体内除斑蝥素外，还含有脂肪、蚁酸、蜡质、色素和多种微量元素等。 其中微量元素共 17 种，总量为 10.53mg/g，与抗癌作用有关的元素 mn(0.41ug/g)、 mg(27.7ug/g)的含量均较高；相反地，致癌元素 ni、cr、as、cd 和 be 等极低， 其它有害元素 hg、pb、sn 等含量也很低 3。 除此之外，斑蝥中还含有结合性斑蝥素如斑蝥酸钙、斑蝥酸镁、斑蝥酸钾、斑 蝥酸钠等，这些物质在酸性环境中能够解离出斑蝥酸或斑蝥素，这些碱性离子的存 在能够大大降低斑蝥素的毒性或刺激性 4。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 4 - 1.2.1.2 斑蝥的药理作用 斑蝥具有破血消癥、攻毒蚀疮、引赤发泡的功效，用于治疗癥瘕肿块、积年顽 癣、瘰疬赘疣、痈疽不溃、恶疮死肌等证。 抗肿瘤作用： 斑蝥中，斑蝥素等属单萜烯类成分，具有明显的抗肿瘤活性，是一种较为理想 的抗癌中药。其抗癌机制主要包括: 抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡；抑制癌细 胞的侵袭和转移；抑制癌细胞脱氧核糖核酸(dna)的复制，增加放、化疗的敏感 性。 斑蝥素等治疗原发性肝癌效果明显，与手术治疗及放疗相比有明显优势。另有 报道证明，斑蝥素及其衍生物对乳腺癌、食道癌、肺癌、贲门癌、肠癌、肝硬化等 疾病也有一定疗效；另外，它还能治疗慢性肝炎和神经性皮炎等，同时可用于治疗 疥癣、消瘰病，还可以通利水道，是一种很强的利尿剂 5,6 。提取或合成斑蝥素后 再进行结构转化生成斑蝥素的衍生物，不仅保留或提高了斑蝥素的抗癌活性，同时 毒副作用也大大降低。 免疫增强和升高白细胞作用： 斑蝥素具有升高白细胞的作用，它对骨髓造血系统的影响可能与加速骨髓粒细 胞的成熟、释放和促进骨髓造血干细胞的增殖有关 6。去甲斑蝥素能够显著抑制体 外刺激因子 coa 及脂多糖引起的小鼠淋巴细胞的增殖及混合淋巴细胞反应，而对没 有促细胞分裂素刺激的淋巴细胞无作用，该抑制作用通过有选择地作用于激活的淋 巴细胞而产生 7。去甲斑蝥素还对化学抗癌药物引起的白细胞降低有一定拮抗作 用，能促进小鼠骨髓细胞 dna 的合成，亦可促进正常小鼠有核细胞 dna 的合成 8。去 甲斑蝥酸钠升高白细胞的机制主要是缩短白细胞的骨髓成熟及释放时间，促进骨髓 造血干细胞向粒-单系祖细胞分化 9。 其他作用： 斑蝥水浸提液的体外试验发现，斑蝥素可抑制 12 种致病皮肤真菌，可杀死丝虫 幼虫，对一些常见植物病原真菌的菌丝生长和菌核萌发有一定的抑制作用 10。此 外，斑蝥还具有抗纤维化和抗氧化损伤作用，抗炎、抗病毒、抗菌、促雌激素样作 用等 11。 1.2.1.3 斑蝥的临床应用 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 5 - 在现代临床研究中，不只是斑蝥生药及提取物的应用得到了推广和进步，尤其是 近年来出现的各类新型制剂 （如斑蝥素糖衣片、去甲斑蝥素片、甲基斑蝥胺针剂、斑 蝥酸钠注射液、羟基斑蝥胺片等） 大大改善了传统中药的各种弊端，减轻了患者的用 药困难，剂量准确，减少毒副作用，甚至在疗效上取得了与西药近似相等的结果。 治疗癌肿： 斑蝥可用于治疗肝癌、食管癌、颈部淋巴肉瘤等，临床总有效率较高 12。上海 曙光医院用复方斑蝥片治疗肺癌效果满意；中药复方斑蝥汤治疗 45 例晚期鼻咽癌与 西药对照结果较为理想 13。 治疗面瘫： 将大巴豆、大斑蝥及鲜生姜 6g 合用制成药膏外敷于面部，2-3 次即可痊愈 14。 治疗皮肤病： 斑蝥单用或与其他药物合用可治疗传染疣、神经性皮炎、疥疮、皮癣等多种皮 肤性疾病，疗效显著 15。 其他： 斑蝥还可用于治疗病毒性肝炎、牙痛、甲沟炎、鼻炎、斑秃、酒糟鼻、狂犬 病、乳腺增生等多种常见多发疾病，应用广泛。 斑蝥为大毒药物，外用 1%浓度的斑蝥提取液，表皮即出现发泡、流黄水现象， 夏季用药更为明显；超剂量内服伤肾，可见尿闭、尿血症状，甚至引起肾功能衰 竭，因此用药时要依据患者的年龄、体质强弱、病程长短、疾病轻重，及对药物耐 受程度等将剂量严格控制在安全范围内，中病即止。临床用药过程中要对斑蝥进行 科学、合理、谨慎地利用，使之安全可靠，发挥更大的作用。 1.2.2 鸦胆子油 鸦胆子是苦木科鸦胆子属植物 (brucea jauanica l merr) 的种子，始载于本 草纲目拾遗 ，又名老鸦胆、苦棣子、苦参子、鸦蛋子，解苦楝、小苦楝，落叶灌木 或小乔木，高 1-3 米，生于山坡、村边、路旁灌木丛或草丛中，主要分布在我国的 广西和广东。鸦胆子以种子入药，在 医学衷中参西录 中记载有治疟疾作用，在 广 西中草药中记载有治疗早期血吸虫病、治痔作用，在纲目拾遗书中记载有治疣 作用。该药味苦、性寒、有毒，具有清热燥湿、杀虫解毒之功效，常用于治疗痢 疾、久泻、疟疾、痔疮、疗毒、鸡眼等。临床上一直以来常用其油溶性部分发挥疗 效，本方中所需鸦胆子油经提取预实验研究发现，其提取率及提取溶剂石油醚的回 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 6 - 收率均较低，不利于工业生产及环境保护。现多选用超临界二氧化碳流体萃取法制 得鸦胆子油，可直接从相关厂家购得，因此本方中选用鸦胆子油作为处方组成。 图 2 鸦胆子中药材 1.2.2.1 鸦胆子油的化学成分 鸦胆子油中，三油酸甘油酯(triglycerides)是其主要成分，占总量的 85%，还 有一些饱和及不饱和脂肪酸：包括油酸(oleia cid，约占总油量的 10%)、软脂酸 (palmitic acid)、硬脂酸(stearic acid)、亚油酸(linoleic acid)、十七碳烷酸 (heptadecoic acid)、花生烯酸(arachidonic acid)、豆蔻酸、二十碳烯酸 (n-eicosenoic acid)和山蕍酸等 16。除此之外，还含有三萜醇类物质：蒲公英赛醇 (taraxerol)、甘遂二烯醇(tirucalla-7，24-dien-3-ol)、羽扇醇(lupeol)、24- 亚甲基环阿屯烷醇(24-methylenecycloartanol)、环阿屯醇(cycloartanol)、-香 树精和-香树精(-amyrin and -amyrin)等 17。 其中，油酸和亚油酸与肿瘤细胞膜有特殊的亲和力，抗癌活性较强；三油酸甘 油酯虽自身不具有抗癌能力，但可以通过水解反应得到油酸。另外，采用溶剂萃取 后硅胶柱层析分离的方法将鸦胆子油分离，得到的一部分物质对金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、溶血性链球菌、淋球菌都有显著的镇痛、止痒 及抗炎作用，也是鸦胆子油治疗尖锐湿疣的活性成分 16。 1.2.2.2 鸦胆子油的药理作用 抗癌作用：鸦胆子油在临床上主要发挥其抗癌作用。 抗胃癌及胃炎作用： 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 7 - 孙波等 18通过实验验证了鸦胆子油乳在体外具有明显的抑制 sgc-7901 增殖的作 用，从而发挥其抗胃癌作用。用鸦胆子油乳颗粒剂不同剂量、不同给药时间，能对 胃炎的形成有显著地抑制作用：如抑制幽门结扎大鼠胃溃疡、阿斯匹林所致小鼠胃 溃疡、小鼠束水应激性胃溃疡、大鼠醋酸慢性胃溃疡、氨水所致大鼠慢性萎缩性胃 炎的形成等 19。 抗肾癌作用： 实验证明，鸦胆子油乳可使细胞周期中 s 期细胞的百分比含量显著下降，使 g1 期细胞百分比含量明显提高，证明鸦胆子油乳剂有抗肾癌作用；对 grc-1 及 rlc-310 细胞的生长有明显抑制作用，可直接破坏肾癌细胞的细胞膜、线粒体膜、内质网膜 及核膜等各类膜性部分，使该细胞变性死亡而发挥抗肾癌作用；能降低肾癌细胞的 恶性度，从而改善体质，延长生命 20。 抗膀胱癌作用： 鸦胆子油乳介入或加栓塞剂可使 mnu 诱发的大鼠膀胱肿瘤发癌率大大降低，说 明该物质有抗癌作用 21。体外实验证明，鸦胆子油乳对 biu-87 细胞生长有明显的抑 制作用，也能够直接破坏膀胱癌细胞的各类膜性部分，使膀胱癌细胞变性坏死，说 明鸦胆子油乳膀胱灌注对膀胱癌早期病变有显著的抑制作用 22。鸦胆子油乳与美蓝 合用可使黏膜上皮细胞脱落坏死，肌层和浆膜充血水肿坏死，微血管内有鸦胆子油 乳微栓形成，细胞质膜结构破坏 23，证明鸦胆子油乳对膀胱肿瘤有作用。 抗前列腺癌和前列腺增生作用： 10%鸦胆子油乳剂对体外培养的前列腺癌细胞的生长和 dna 的合成有明显的抑制 作用，可破坏前列腺上皮细胞的细胞膜、粗面内质网和基膜等，使细胞变性死亡， 可通过破坏细胞膜性结构抑制细胞增生而发挥治疗前列腺增生作用 24。 其他抗癌作用： 鸦胆子油制剂还可以发挥抗肝癌、卵巢癌、大肠癌、脑肿瘤等的作用 20。 总之，鸦胆子油是一种有效的抗癌药物，在诸多方面发挥其抗癌作用，其抗癌 机理有抑制肿瘤细胞的 dna 合成、破坏肿瘤细胞的膜性结构、诱导肿瘤细胞凋亡 等。 降血脂降血压作用： 鸦胆子油乳剂可以使血清胆固醇酯酰基转移酶活性进一步增强，血清总胆固 醇、甘油三酯的含量降低，心肌、肝脏的组织总脂活性及肝甘油三酯脂肪酶无明显 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 8 - 改变，而脂蛋白脂肪酶的活性增高；口服灌胃能明显降低高脂血症沙鼠中甘油三 酯、总胆固醇水平，并使血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性增强，脂蛋白脂肪酶活 性升高 25,26 ，因此而发挥降脂作用。 1.2.2.3 鸦胆子油的临床应用 鸦胆子在临床上应用最多的是其乳剂制品。根据鸦胆子油乳在体内的分布代谢 特点，临床上主要适用于上述胃癌、肺癌、脑癌、直肠癌及肝癌等的治疗。近期的 疗效主要表现为症状明显改善，食欲、体重普遍增加，免疫功能增强；远期的疗效 表现主要为生存期的延长等。 除此之外，鸦胆子油还被用于治疗： 尖锐湿疣：对黏膜面的尖锐湿疣效果最好，其机理可能是鸦胆子油的毒性作 用使细胞发生退行性变异, 细胞核固缩最后坏死而脱落 22。 恶性胸腔积液: 与丝裂霉素治疗恶性胸腔积液的疗效无明显差异，且副作用 小，对人体的损害少 27。 带状疱疹：采用鸦胆子油口服乳剂治疗带状疱疹治愈率高，且疗程短，可提 高细胞的免疫功能, 提高机体的免疫力。 1.2.3 拟选用剂型的现代研究 本方中拟选用 o/w 型乳膏剂，具体分析见下述。 乳膏剂基质大致分为 3 部分：水相基质、油相基质和乳化剂。水相基质一般常 用蒸馏水或水溶性药物的溶液；常用的油相多数为固体，如硬脂酸、蜂蜡、石蜡、 高级醇等，为调节适宜的粘稠度一般还加入液状石蜡、凡士林、植物油等 28。乳化 剂是乳膏基质组成的关键，其本质是表面活性剂。选择表面活性剂应根据其性质， 尤其是hlb值的大小，单一或两种及两种以上配合使用效果较好。常用的o/w型乳化 剂有一价皂、脂肪醇硫酸(酯)钠类、聚氧乙烯醚的衍生物类 28。 1.2.3.1 乳膏剂的制备方法 乳膏剂是多年来中医药临床应用上的一种常见剂型，过去在美容护肤品行业应 用较为普遍。随着近年来西方医学的不断渗透，我国的中医药事业在学习借鉴的基 础上也取得了很大的成就，尤其在剂型改革上洋为中用，结合中药治疗的特点和优 势，研究发展了一批中药新剂型与新制剂，乳膏剂就是其中的一种。成型的中药乳 膏剂具有性质稳定，载药性好，应用方便等优点，是一种较为成熟的中药剂型，目 前在临床上的应用较为广泛。 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 9 - (1)乳化方式： 目前国内制备乳膏剂的常用乳化方式有：将含有乳化剂的水相加入油相中； 将油相加入含有乳化剂的水相中；油、水相置于同一容器内共热乳化。杨人全 等 29研究发现，将乳化剂加入油相中乳化的效果较好，制得的乳剂性质稳定，乳球 径小，分布均匀。后来，章宝燕等 30通过实验证明，乳化剂后加法制得的乳滴粒径 小，分散均匀，质量稳定，释放度高，可在生产中进一步推广应用。 (2)乳化温度和时间： 乳化完全的关键在于选择适宜的乳化温度和乳化时间，传统的研究认为，乳膏 剂的皂化温度一般为 70-80，约需 10min-15min。邵民象等 31通过改进发现，加 热所选择的温度应等于或略高于油相组分中的熔点最高者，各组分按熔点高低应依 次加入，从而避免低熔点物质在高温油相中受热时间过长而导致其结构破坏，乳化 搅拌至大约 50以下即可。 (3)药物加入方法： 一般的，油溶性药物加入油相基质中，再与水相基质混匀；水溶性药物加入水 相基质中，再与油相基质混匀；药物既有油溶性又有水溶性时，应分别加入。 对既不溶于水相又不溶于油相的特殊药物，邵民象 31等改研合法加入为乳化法 加入，即将不溶性药物先溶于适量乙醇中，乳化前在不断搅拌下加入水相，使其微 晶化均匀分布。因乙醇的沸点较低，可在乳化温度下挥发散去，不会对成品造成影 响。当药物挥发性强或受热易被破坏时，传统方法是待乳剂冷却至 40以下时加 入，1995 年国家卫生局颁布的医院制剂中将其修正为室温下用研合法加入 32。 1.2.3.2 乳膏基质乳化不完全的补救方法 在制备乳膏剂的过程中，常因油水相温度偏低、搅拌速度慢或搅拌不彻底等原 因导致乳化不完全甚至不成乳现象，盛国荣等 33在多年的配制经验中摸索发现，把 乳化不完全的基质加热至 75-80时离开热源，不断搅拌(方向可正可反)可以达到 重新乳化完全的目的，制得的乳膏剂与一次乳化成型的基质在性质及使用上并无差 别。 1.2.3.3 乳膏的质量检查 乳膏剂的质量要求有：具有适当稠度，润滑无刺激性；性质稳定，基质与 药物不发生配伍禁忌；不妨碍皮肤的正常功能，有利于药物的吸收释放；有吸 水性，能吸收伤口分泌物；易清洗，不污染衣物。 为满足上述要求，对产品的质量检查应包括稳定性试验、细腻度检查、主药指 标成分的含量测定等。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 10 - 2. 祛膜止血乳膏制备工艺研究 2.1 研究内容 2.1.1 剂型选择 子宫内膜出血症属于宫腔黏膜部位的疾病，西医常用的治疗方法包括口服药物 治疗，手术借助现代仪器切割治疗，用相应的物理疗法等，病情易反复；中医则以 内治为主，常采用口服汤剂等方法，治疗疗程长，患者经受的痛苦较大。近年来的 研究表明，治疗该病的药物以局部用药的形式疗效较好，可直接作用于病灶，药物 利用率高，因此考虑选用注入给药方式。由于该病发于宫腔内部，其内环境湿热， 黏膜分泌物含水量高，故不能选用传统的液态剂型。为方便使用，延长药物在体内 的停留时间，从而达到提高吸收和生物利用度的目的，故考虑选用黏附力较强，不 易形变，且易被吸收的半固体剂型乳膏剂。临床应用时，该制剂于手术中一次 性宫腔注入，可直接接触病变部位，从而发挥疗效，作用强而持久，且一次治愈永 不复发，符合临床需要，故选择制成乳膏剂。研究发现，水包油型乳膏剂相比更有 利于皮肤、黏膜等对药物的吸收利用，故本方中选用水包油型乳膏剂。 2.1.2 工艺路线的初步确定 祛膜止血乳膏的工艺研究内容包括：药材的来源与检验、斑蝥的最佳提取工艺 确定、成型工艺的研究、成品的质量检查、处方的确定及小试中试的放大等几个部 分。具体工艺路线见附图 1。 2.2 提取工艺研究 2.2.1 药材的鉴定与前处理 1 2.2.1.1 药材的鉴定 (1)斑蝥 试验所用的斑蝥药材购自陕西省西安市中药材市场，经鉴定属南方大斑蝥，且 符合中国药典 2010 版一部及有关各项规定。照中国药典一部，本品经薄层色谱鉴 别，结果符合要求(见下图 3)；经液相色谱测定含量，本品含斑蝥素为 0.518%，符 合药典规定。本品有大毒，内服慎用，孕妇禁用。 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 11 - 图 1 斑蝥的薄层鉴别结果 (2)鸦胆子油 精制鸦胆子油所附说明书要求的质量标准为： 本品为苦木科植物鸦胆子 brucea javanicallmerr,的干燥成熟果实经石油醚 提取后得到的脂肪油。总酸量按油酸计算不得少于 90.0。 性状 本品为黄色的澄明液体；气特异，味苦。 本品能与乙醚、氯仿、二硫化碳、四氯化碳任意混合。在甲醇、乙醇、戊醇中 微溶。在水中不溶。 相对密度 应为 0.9000.920(附录)。 折光率 应为 1.4681.472(附录)。 碘值 应为 8095(二部附录)。 酸值 应不得大于 6（二部附录）。 鉴别 取本品 0.2ml，加无水乙醇至 10ml，照分光光度法(附录)测定，在 270nm 处有最大吸收。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 12 - 总酸量测定 精密称取本品 2g，加中性乙醇 20ml，精密加入氢氧化钾乙醇溶 液(0.5mol/l)25ml，回流3040分钟，放冷，再用中性乙醇10ml冲洗冷凝器，加酚 酞指示液 2 滴，用盐酸液(0.5mol/l)滴定至红色消失，并以空白试验做对照，按下 式计算： 282.5 （-） 1000 总酸量100 式中 供试品消耗盐酸液(0.5mol/l)ml 数； 空白试验消耗盐酸液(0.5mol/l)ml 数； 供试样品的克数。 功能与主治 抗癌药。用于消化道肿瘤及宫颈癌，也可用于肺癌。 贮藏 置无菌容器内遮光，密闭保存。 制剂 鸦胆子油乳注射液。 经鉴定，所购鸦胆子油相对密度：0.908；折光率：1.469；碘值：90；酸值： 4.9；总酸量：92.8%，符合上述标准。 2.2.1.2 药材的加工炮制 斑蝥临用前应除去杂质，粉成细粉，晾干备用；鸦胆子油置于 0-5下密封保 存，随用随取。 2.2.2 斑蝥的提取工艺研究 2.2.2.1 提取溶剂的选择 选择95%乙醇、丙酮、氯仿加1%盐酸分别做为提取溶剂，以斑蝥素含量为检测 指标，考察各溶剂能否将斑蝥素有效地提取出来。 指标及测定方法： 斑蝥素：照高效液相色谱法(中国药典2010 年版一部附录)测定。 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：c18柱；流动相乙腈-水（32：68）；流 速：1.5ml/min；检测波长：229nm；柱温：30。理论塔板数按斑蝥素峰计算应 不低于 3000。 对照品溶液的制备 取斑蝥素对照品 1g，加甲醇 1ml 使溶解，即得。 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 13 - 供试品溶液的制备 取斑蝥药粉 5g，精密称定，加 10 倍量溶剂浸泡 30min， 水浴回流提取3次，合并提取液，滤过，提取液低温蒸干，加甲醇定容至10ml，取 续滤液即得。 测定法 精密量取对照品溶液(1g/ml)2ul注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面 积值。取供试品溶液 2ul 注入液相色谱仪，记录色谱图，计算，即得。 试验结果：见下表 1。 表 1 几种溶剂对斑蝥素的提取率 溶剂 95%乙醇 丙酮 氯仿加 1%盐酸 6.65 3.05 4.49 提取率(mg/g) 6.82 3.17 4.70 平均值 6.74 3.11 4.60 由表中结果可以直观看出，丙酮和氯仿的提取得率与 95%乙醇相比较低，结果相 差近一倍，因此选用乙醇做为提取溶剂。 2.2.2.2 提取工艺的确定 试验方法 采用乙醇回流提取，选择乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间四个因 素，每个因素选择三个水平，按 l9(3 4)正交表安排试验。每份试验取斑蝥细粉共 5g，共计 9 份进行乙醇回流提取试验，以斑蝥素含量、干膏收率为指标进行综合评 分。根据实际情况并参照常用比例，将斑蝥素含量和干膏收率的权重系数分别定为 0.6 和 0.4，从而筛选最佳工艺，因素水平见表 2。 表 2 因素水平表 水平 a 乙醇浓度（%） b 溶剂用量（倍） c 提取次数（次）d 提取时间（h） 1 60 6 1 1 2 75 8 2 1.5 3 95 10 3 2 指标及测定方法 斑蝥素：照高效液相色谱法(中国药典2000 年版一部附录 vid)测定。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 14 - 色谱条件与系统适用性试验 与上相同。 对照品溶液的制备 与上相同。 供试品溶液的制备 精密称取斑蝥细粉 5g，按正交表进行试验，合并提取液， 低温蒸干，用甲醇定容，滤过，取续滤液即得。 测定法 精密量取对照品溶液(1g/ml)2ul注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面 积值。取供试品溶液 2ul 注入液相色谱仪，记录色谱图，计算，即得。 干膏得率：称取斑蝥细粉 20g，按正交表进行试验，合并提取液，置已称重 的千燥蒸发皿中，水浴低温浓缩至干，置烘箱中干燥 3h(60)，取出，于干燥器中 冷却至室温，称量，计算干膏得率。 试验结果：数据分析结果见表 3 和表 4。 表 3 正交试验设计及结果 序号 a b c d 斑蝥素含 量（%） 干膏得率(%) 综合评 分 1 1 1 1 1 0.239 22.44 54.19 2 1 2 2 2 0.367 34.94 83.72 3 1 3 3 3 0.276 37.21 74.72 4 2 1 2 3 0.294 29.37 68.55 5 2 2 3 1 0.401 30.57 83.30 6 2 3 1 2 0.308 22.50 62.93 7 3 1 3 2 0.440 23.10 80.18 8 3 2 1 3 0.327 15.78 58.09 9 3 3 2 1 0.477 22.83 84.54 k1 2.12632.0292 1.75212.2203 k2 2.14782.2511 2.36812.2683 k3 2.22812.2219 2.38202.0136 r 0.1018/ 3 0.2219/ 3 0.6299/ 3 0.2547/ 3 =6.5022 由表中可以看出，a 因素所引起的差别最小，因此以 a 列为误差列，分析 b、c、 d 三因素的影响。 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 15 - 表 4 方差分析表 方差来源 离差平方和 (ss) 自由度 (v) 均方(ms)f p b 97.1 2 48.6 6.48 c 862.9 2 431.5 57.53 d 122.3 2 61.2 8.16 （误差）a 15 2 7.5 从以上方差分析结果可以看出，c 因素有显著的影响；影响因素 cdba；且 c3d2b2a3为最佳组合。但考虑到乙醇的经济因素，故将 a 因素降低一个水平，即 a2， 所以最佳工艺条件为c3d2b2a2，即每次加入8倍量75%乙醇，浸润，回流提取3次，每 次 1.5h。 (3)验证试验 为了验证上述结果的准确性，以保证提取工艺的合理可行，按上述确定的工艺 条件，安排重复试验，试验结果见表 5。 表 5 验证试验结果 方案 试验号 出膏率(%) 斑蝥素含量(mg/g) 1 25.70 4.12 2 24.38 3.98 c3d2b2a2 3 26.25 4.18 验证试验结果证明，该工艺稳定，具有重现性和可操作性。根据斑蝥药材中斑 蝥素含量为 5.18mg/g，可知斑蝥素的转移率为 80%左右。 2.2.2.3 浓缩工艺研究 为尽量减少温度过高、受热时间过长引起斑蝥提取物中所含斑蝥素类成分的破 坏，故需在减压条件下回收提取液中的乙醇。预试中发现，将斑蝥提取物可以蒸馏 水超声溶解后加入乳膏的水相中，故需将回收乙醇后的药液减压浓缩至无醇味的清 膏即可。为了尽可能地减少清膏的含醇量，尽量减少有效成分的损失，以斑蝥素的 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 16 - 含量为指标对在减压条件下(温度为 40-45，真空度为 0.08-0.1mpa)浓缩而成的不 同相对密度的清膏进行了比较，其结果如下。 表 6 提取药液浓缩工艺考察结果 清膏相对密度(60) 斑蝥素含量(mg/g) 1.0 4.23 1.1 3.95 1.15 3.87 1.2 3.83 试验结果表明，浓缩时间越长，斑蝥素的损失越大，因此应选择减压浓缩至相 对密度 1.0-1.1(60)的清膏。 2.3 制剂成型工艺研究 2.3.1 乳膏基质的筛选 乳膏剂由药物和基质组成。基质不仅是乳膏剂的赋形剂，也是药物的载体，对 产品的质量及药物的释放吸收都有重要影响。目前常用的基质可分为油脂性基质、 乳剂型基质和水溶性基质三类。根据该药所治的疾病及黏膜患处的生理病理情况， 不能选择穿透力差、不易与分泌物混合、具有封闭性的油脂性基质。同时因为水溶 性基质润滑作用差，易失水干涸，不利于成品的贮存和放置等，也不宜选用。而乳 剂性基质穿透能力强，药物容易释放，对黏膜的正常功能影响小，能基本满足本品 所治疾病的要求，故本方选用乳剂性基质。 乳剂性基质分为 w/0 型与 o/w 型两种。w/0 型乳剂的基质油腻性较大，不易与皮 肤黏膜结合，药物释放速度较 o/w 型慢，而且 o/w 型乳剂的基质油腻性较小，易清 洗，释药速度较其它基质快， 0/w 型乳剂基质能满足本品所治疾病的需要，因此选 择使用 0/w 型乳剂基质。 常用的乳剂型基质有硬脂酸、凡士林、羊毛脂、液体石蜡、单硬脂酸甘油酯、 鲸蜡醇等。查阅文献后，预试选择了 3 种配方，采用软膏剂的常规制备方法进行空 白基质成型试验，结果如下： 祛膜止血乳膏的制备工艺研究 - 17 - 表 7 基质配方筛选结果 配方 组成 乳化剂 外观性状 1 鲸蜡醇、白凡士林、吐温-80、甘油、水 三乙醇胺、 乳化 剂 op、吐温-80 成型性较差， 颜色发黄 2 硬脂酸、白凡士林、单硬脂酸甘油酯、 十八醇、十六醇、吐温-80、甘油、水 三乙醇胺、 乳化 剂 op、吐温-80 基本成型，硬度较 好，但不够细腻 3 硬脂酸、白凡士林、羊毛脂、十八醇、 十六醇、液体石蜡、吐温-80、单硬脂酸 甘油酯、甘油、水 三乙醇胺、 乳化 剂 op、吐温-80 成型性好，硬度适 宜，细腻洁白 以上结果表明，配方 3 所制得的基质外观性状良好，稳定性高于配方 1、2 所制 得的基质，因此选用配方 3 中基质的组成配比。 2.3.2 乳化剂的筛选 乳化剂是影响乳膏质量的主要因素。常用的 0/w 型乳化剂有三乙醇胺、吐温 -80、乳化剂 op 等。以加处方量鸦胆子油的成乳情况为指标考察不同乳化剂及混合 乳化剂的乳化效果，结果如下表。 表 8 乳化试验结果 乳化剂 乳化效果 三乙醇胺 不能成乳 单一乳化剂 乳化剂 op 不能成乳 三乙醇胺、吐温-80 很难成乳 混合乳化剂 三乙醇胺、吐温-80、乳化剂 op 能够成乳 试验结果表明，3 种乳化剂混合使用能够达到理想的成乳效果，故乳化剂选用 三乙醇胺、吐温-80、乳化剂 op 混合使用。 2.3.3 乳化剂加入方法的确定 参考相关文献，拟对不同乳化剂加入方法制备的乳膏基质进行质量比较。目前 实验室及工业生产中常用的乳化方式有：a 将乳化剂加入水相；b 将乳化剂加入油 相。回收乙醇后的清膏含水量较大，水溶性强，本品选择将其加入水相。本方中油 相比例较大，不利于成乳，因此确定将乳化剂加入水相。此法又有两种乳化方式， 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 - 18 - 即将油相加入含乳化剂的水相和将含乳化剂的水相加入油相。通过加入两种处方药 物后的乳化试验发现，将油相加入含乳化剂的水相的方法成乳性较好，制成的乳膏 外观细腻、涂展性好、性质稳定。 2.3.4 乳化温度的筛选 乳化温度对制成的乳膏性质也有很大的影响，常用的乳化温度一般为 70