免疫自身抗体PPT课件.ppt

自身抗体,1,自身抗体检测的意义,诊断与鉴别诊断病情活动性评估和监测协助转归和预后的评判预警,2,诊断：综合手段临床+实验室+影像+病理,抗体依赖,抗体部分依赖,SLESSMCTDRAAPSGPAGBM(Goodpasture)AIH,PM/DMSScPBC,抗体非依赖,系统性血管炎：BDTAPANGCARPC,ANA斑点型/RNP,5-10%血清阴性,Jo-1阳性率70%,Scl70,AMA-M2,3,自身抗体是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白ANA抗体谱自身免疫性肝病抗体谱ANCA磷脂抗体谱RA抗体谱器官特异性免疫病相关抗体甲状腺：TG-Ab、TPO-Ab炎性肠病：ASCA皮肤：天疱疮抗体/类天疱疮抗体胃：抗胃壁细胞抗体、抗内因子抗体I型DM：IAA、ICA、GAD,4,抗核抗体,ANA概念：抗核酸和核蛋白抗体的总称细胞核内和细胞浆内成分ANA产生机制：分子模拟/自身抗原改变/细胞凋亡检测底物鼠肝、鼠肾（大/小鼠组织不含SSA/RO抗原）人喉癌上皮细胞(Hep-2),5,ANA的诊断价值和除外价值,ANA阳性诊断CTD？,ANA阴性除外CTD？,假阳性未加稀释的正常人血清1/3呈阳性低滴度ANA可见于感染、肿瘤、正常人意义未明的核型作为CTD的筛选试验必须强调滴度、核型,假阴性重症SLE，抗体与大量抗原结合沉积于组织主要成分为抗dsDNA，疾病缓解期大量蛋白尿时从尿/肠道丢失技术：甲醇、乙醇固定导致SSA抗原丢失某些核抗原成分在胞浆内或胞浆比核质更丰富(如SSA/RO，Jo-1，rRNP等),球蛋白亦丢失,6,弥漫性结缔组织病,ANA18项抗ENAa-Jo-1a-Scl70a-rRNP,7,IIF法原理,8,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型（Homogeneous）H：抗组蛋白、抗dsDNA、ANuA斑点型（Speckle）S：与抗ENA有关核膜型（Membranous）M抗dsDNA、板层素抗体、gp210抗体核仁型（Nucleolar）NRNA聚合酶、PM-Scl-SSc着丝点型（Centromere）C：CENP，ACACREST胞浆型：AMA、抗Jo-1、抗rRNP,9,抗dsDNA,抗rRNP,AMA,RNA多聚酶/抗Scl-70,板层素抗体Gp210抗体,抗Jo-1抗SSA,10,H,M,S,N,11,胞浆型,着丝点型,纺锤体型,核点型,12,ANA分类,抗DNA（dsDNA,ssDNA)抗组蛋白（Histone)抗非组蛋白（ExtractableNuclearAntigen,ENA）抗核仁（Nucleolus）,书写习惯：ANA(+)型别滴度,13,抗DNA,抗ssDNA抗体：针对嘌呤和嘧啶碱基，在多种疾病中及正常人血清中存在，无特异性抗dsDNA抗体：针对脱氧核糖核酸骨架，对SLE有较高的特异性抗dsDNA阳性者85%5年内发展为SLE抗dsDNA与疾病活动度相关抗dsDNA与LN相关：循环免疫复合物在肾小球基底膜沉积,或肾小球原位免疫复合物形成,14,检测方法及结果意义,放射免疫法(Farr):敏感20%间接免疫荧光法(短膜虫或马疫锥虫为底物):特异1:10酶联免疫吸附法(ELISA):敏感100,书写习惯：抗dsDNA-IF(+)1:320/ELISA:800U/L,15,抗dsDNA-SLE特异性抗体,与SLE疾病活动相关，阳性者即使目前病情稳定，80%在5年内出现病情活动。,16,抗组蛋白抗体AHA,组蛋白是染色质的基本结构核小体的重要组成部分.由H1，H3,H2A,H2B,H4组成在多种自身免疫性结缔组织病（如SLE、SS、RA、SSC)中出现；药物引起的狼疮中阳性率达95%.不同药物所致的抗组蛋白的亚单位抗体不同异烟肼：H1,H2A,H2B,H3和H4的滴度基本一致肼苯哒嗪：抗H3和抗H4抗体普鲁卡因酰胺：抗H2A-2B复合物抗体.,17,抗ENA抗体（4+7）,18,抗ENA抗体（4+7）,双扩散-4（特异）抗Sm抗SSA抗SSB抗RNP（抗U1RNP）滴度：1：11：41：16,免疫印迹-7（敏感）抗Sm28/29/13.5KD抗SSA52/60KD抗SSB45/47KD抗RNP73/32/17.5KD抗Jo-155KD抗Scl-7070/86KD抗rRNP38/16.5/15KD,后3个可单开双扩散法,19,抗ENA的测定-免疫双扩散法,不同稀释倍数仅第一种为阳性,20,免疫印迹法,21,正确看待免疫印迹法的检测结果,免疫印迹中条带只表明在电场泳动中出现1）分子量相同的区带，2）由于形状、所带电荷而泳动速度相同可造成不同分子量蛋白在相同部位出现条带免疫印迹中的多肽抗体并不一定是某种特异性抗体印迹阴性并不代表该抗体一定阴性片段的集合完整蛋白,片段的出现是否齐备与双扩散法相互验证与临床是否吻合,双扩散法：针对整蛋白（有二级结构），更特异,22,抗Sm抗体,抗原：核内小核糖核蛋白，其抗原决定簇主要在与u1,u2,u4-u6RNA连接的B和D蛋白多肽上三条带同时出现时有一定意义抗Sm抗体阳性往往抗RNP抗体阳性-linksetSLE中阳性率：30%左右，SLE的标记抗体，几乎只出现于SLE与疾病活动度不相关,23,抗RNP抗体,抗核内的核糖核蛋白（u1RNP抗体）若抗Sm抗体阳性，抗U1RNP往往也阳性-linkedset抗RNP抗体阳性常出现抗Sm抗体28、29KD高滴度抗RNP抗体是MCTD的特异性抗体区分CTD与非CTD2530%SLE出现抗RNP阳性与双手肿胀,雷诺氏现象,肌炎和指(趾)端硬化和肺动脉高压相关,24,抗SSA、SSB抗体,抗SSA多在胞浆中，52KD与SS相关，60KD与SLE相关抗SSA在SLE中阳性率40%，抗SSB在SLE中阳性率10-15%抗SSB阳性，抗SSA也应阳性；抗SSA阳性，抗SSB可以阴性母亲抗SSA和抗SSB抗体阳性新生儿狼疮及婴儿心脏传导阻滞常与亚急性皮肤型狼疮、平滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、淋巴结肿大、高球/RF、NS损伤、WBC减少、晚发SLE有关,故ANA-时，SSA可+,25,抗rRNP抗体,抗原：核糖体60s亚基P0，P1，P2磷酸化蛋白，主要位于胞浆与SLE中枢神经系统表现相关对SLE高度特异，出现于1015%的SLE常常在SLE活动期中存在,与抗dsDNA的消长相平行,但其不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴,与SLE病情活动性不完全同步,26,抗Scl-70抗体,抗原：DNA拓扑异构酶1硬皮病（SSc）中抗Scl-70阳性率40%左右，为SSc的标记抗体，提示弥漫性SSc双扩散法：小牛胸腺浸出物与肺间质病有关-抗Scl-70阳性SD病人,发生肺间质病变的危险性较抗Scl-70阴性的SD病人增加10倍，阳性者易出现皮肤硬化快速进展和SRC,27,抗Jo-1抗体,抗原是组氨酰tRNA合成酶，胞浆中PM/DM的标记抗体PM/DM病人中2535%阳性，合并肺间质变的PM/DM病人中高达6070%阳性抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎并肺间质变,三炎：肌炎、关节炎、间质性肺炎三症：发热、技工手、雷诺,28,肌炎特异性抗体MSA,PL-7：苏氨酰tRNA合成酶PL-12：丙氨酰tRNA合成酶EJ：甘氨酰tRNA合成酶OJ：异亮氨酰tRNA合成酶KS：天冬酰tRNA合成酶Mi-2：组蛋白乙酰基转移酶复合物的解旋酶组分（H）Ku：DNA结合蛋白（SN）SRP：信号识别颗粒,29,抗合成酶抗体发热关节炎雷诺现象技工手间质性肺炎,抗SRP阳性率4%秋季急性起病多发性肌炎严重肌无力累及心脏死亡率较高,抗Mi-2阳性率1520%95%DM皮肤病变：披肩疹、V形症,肌炎特异性抗体MSA,皮肤病变为主，肌炎轻,30,ACA（抗着丝点抗体）,抗原为CENP-A、B、CCREST(软组织钙化,雷诺现象,食道功能障碍,指端硬化,毛细血管扩张)综合征80%阳性（calcinosis/Raynaudphenomena/esophagealDysmotility/sclerodactyly/telangiectasia）在SS和自身免疫性肝病中也可存在PBC中阳性率53.5%，阳性者易出现门脉高压和消化道出血ACA阳性的SS更易出现淋巴瘤，高球少，RP多,抗PCNA（抗增殖性核抗原）：抗原-DNA多聚酶的辅因子对SLE高度特异，阳性率低15%,SLE特异，但阳性率低,31,ANuA（抗核小体抗体）,对SLE的特异性98%可见于药物性狼疮早期SLE、非活动期SLE检出率高于抗dsDNA,32,抗RNP与抗rRNP,二者抗原不同，抗RNP的抗原是含尿嘧啶的核糖核蛋白，主要在核内，而抗rRNP的抗原是主要在胞浆内核糖体亚基中的磷酸蛋白抗RNP与雷诺现象、肺动脉高压相关，是MCTD的特异性抗体；抗rRNP与NPSLE相关，是SLE的特异性抗体,33,NEnglJmed358;9,34,CTD诊断时ANA的检测策略,35,自身免疫性肝病,生化：1）转氨酶增高ALT、AST2）胆管酶增高ALP、GGT（胆红素、TBA）3）排除其他病因：饮酒、病毒、药物,自身免疫性肝炎-AIH,原发性胆汁性肝硬化-PBC原发性硬化性胆管炎-PSC,36,自身免疫性肝病,AIH抗体谱,PBC抗体谱,ANAa-SMAa-KLMa-SLA,AMAAMA-M2Gp210SP100,37,自身免疫性肝病的抗体谱,AIH型ANA、a-SMA、pANCA型抗KLM、抗LC1型抗SLA/LPPBCAMA-M2抗gp210、抗SP-100PSCANA、a-SMA、ANCA,38,自身免疫性肝病抗谱,鼠肝鼠肾-KLM,鼠胃-抗平滑肌抗体；抗肌动蛋白抗体,Hep2-抗核点抗体；鼠肝-ANA,鼠肾-AMA；猴肝-SLA,39,AMA,抗细胞浆成分：靶抗原-丙酮酸脱氢酶E2（PDC-E2）和X蛋白AMA-M2在PBC中阳性率96%，特异性97%；滴度与疾病严重度和预后不相关M1M9AMA-M2、M9-预后好AMA-M4、M8-预后差,对优思弗效果佳,40,AMA亚型抗体种类及其疾病相关性,41,PBC中出现的自身抗体及意义,42,抗磷脂抗体,43,肺栓塞,布-加综合征,下腔静脉血栓,肠缺血,肠穿孔,脾梗塞,肾梗塞肾静脉血栓肾衰竭,心肌梗塞,Addison,肾上腺,骨梗死,脑梗塞,CRVOCRAO,眼,胰腺炎,流产、早产、宫内发育迟缓、先兆子痫,什么时候想到APS？,静脉血栓、动脉栓塞、病理妊娠APTT延长（体内高凝、体外不凝）,44,APTT与纠正实验,即刻、孵育2h均不能被纠正加入磷脂可纠正,45,抗磷脂（Phospholipid）抗体,狼疮抗凝物抗心磷脂抗体梅毒血清试验假阳性（RPR+，TPPA确证阴性）2GP12GP1（载脂蛋白）与磷脂结合，改变表面结构，暴露抗原决定簇，介导抗磷脂抗体结合到膜磷脂。2GP1是必需的辅助因子，测2GP1可能比测ACL更有意义。动静脉血栓形成、血小板减少、习惯性流产、神经精神狼疮有关,46,系统性血管炎,ANCA血管炎抗体谱：ANCA+AECA,47,血管大小的定义,大血管-主动脉及一级分支中等血管：肌性动脉和小动脉内膜弹力层肌层外膜小血管毛细血管和后微静脉、微动脉,48,49,ANCA,以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原靶抗原：PR3，MPO、乳铁蛋白酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶、杀菌/通透性蛋白C-ANCA（胞浆型）：主要抗原PR3P-ANCA（核周型）：主要抗原MPO书写：ANCA（+）P1：20，MPO-ANCA，PR3-ANCA,P-ANCA,C-ANCA,50,不同疾病中出现的ANCA,51,pANCA（核周型）,pANCAMPOANCA特异性较差，MPA（60%-80%），EPGAIBD，PSC、PAN、SLE、RA、SS与坏死性新月体肾小球肾炎NGGN相关，且与疾病活动度相平行,52,cANCA（胞浆型）,cANCA，其抗原主要是中性粒细胞颗粒内的和单核细胞溶酶体的丝氨酸蛋白酶3cANCAPR3ANCAGPA中特异性为95%，与疾病活动性平行少数MPA、CSS、PAN等也可阳性,53,类风湿关节炎相关抗体,54,类风湿因子（RheumatoidFactor）,靶抗原为IgG的FC片段，是抗IgG的Ig与疾病活动性有关阳性不足以诊断RA，阴性不能除外RA多种结缔组织病（SLE，SD，SS，PM/DM）、感染疾病（SBE，TB，hepatitis）、肝硬化、结节病、淋巴瘤等均可阳性，正常人2%阳性，老年人可达5%阳性冷球蛋白血症、SS可出现RF高滴度阳性病后半年才产生，有关节外表现者滴度高。持续高滴度RF预示疾病严重，骨侵蚀发生率高，预后差两次或多次阳性/高滴度阳性/存在IgM、IgG、IgA型对RA特异性提高,55,抗核周因子-(APF),靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中对RA诊断的敏感性35%，特异性高达91%RF阴性者40%阳性APF与疾病严重程度、关节外表现及放射学进展相关，提示预后欠佳,56,抗角蛋白抗体-（AKA）,6周龄雄性Wistar大鼠的中1/3食道切片为底物以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为阳性对RA诊断的敏感性32-44.13%、特异性89-90%RF阴性者34%阳性与RA的病情严重程度相关,提示预后不良,57,抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体,对RA诊断高度敏感（46.6%）和特异性（96.6%）可以在关节炎早期出现,与严重的骨关节破坏相关与APF、AKA以及HLA-DR4之间有相关性,与RF之间无相关性,58,抗MCV（mutatedcitrullinatedvimentin）(突变型瓜氨酸波形蛋白),敏感性高，联合抗CCP提高诊断敏感性与RA严重程度和疾病活动度有一定相关,59,抗GPI(葡萄糖-6-磷酸异构酶),敏感性25%，特异性80%，与RA关节外受累相关,5%早期RA18%RA类风湿结节4