（分析化学专业论文）界面光散射分析技术的开发及其在生化和药物分析中的应用.pdf

内容摘要 界面光散射分析技术的开发及其在生化和 药物分析中的应用 学科专业：分析化学 指导教师：黄承志教授 内容摘要 研究方向：生物光化学分析 研究生：陆巍( 2 0 0 0 2 2 4 ) 、o a s t e m a c k 等于2 0 世纪9 0 年代初提出的共振光散射$ o n a n l i g h ts c a t t e r i n r l s ) 技术是一项借助普通荧光分光光度计灵敏检测聚集体光散射信号的分析技 术。r l s 技术因其操作简便并有力克服了传统光散射技术灵敏度低和仪器条件要 求严格的缺点而迅速引起了诸多研究者的浓厚兴趣和广泛关注从1 9 9 6 年到现在 短短的7 年间，r l s 技术已经广泛和成功地应用于生物大分子和药物的分析研究 领域。这些研究发现，与测定生物大分子和药物常常采用的吸光光度法和荧光光 度法相r l s 技术除了能获得更高灵敏度的优点外，还具有探针范围更广泛的 优势q ， + 本文分别以与蛋白质作用后既无明显颜色又无显著荧光性质变化的阴离子表 面活性剂十二烷基苯磷酸钠( s o d i u md o d e e y lb e n z e n es u l f o n a t e , s d b s ) 和酸性三苯 甲烷染料水溶性苯胺蓝( w a t e rb l u e ，w b ) 为例，成功建立了能简单，快速和灵敏地 分析蛋白质的r l s 方法，从而进一步证明了r l s 技术在拓展分析探针方面的独特 优势。 。 一( 在p i - i i 9 8 ，离子强度为o 0 0 1 时，十二烷基苯磺酸钠( s o d i u md o d e c y lb e n z e n e s u l f o n a t e s d b s ) 的r l s 信号能被蛋白质强烈增强，其最大散射蜂位于4 7 0 0 n l t l 。 增强的i l l s 信号与蛋白质浓度在一定范围内成正比，该方法分析蛋白质的检测限 小于5 8 1n g m i 。该方法成功地应用于合成样和尿样中蛋白质的分析。 在p h 2 0 9 ，离子强度为o 0 0 1 时，水溶性苯胺蓝( w a t e rb l u e ，w b ) 的r l s 信号 能被蛋白质强烈增强，其最大散射峰位于3 4 6 0 蛳。增强的r l s 信号与蛋白质浓 度在一定范围内成正比，该方法分析蛋白质的检测限小于1 5n g m l 。该方法成功 地应用于合成样和尿样中蛋白质的分析。 虽然r l s 技术具有上述的优点，但依然存在着一些不足之处例如，r l s 技 术还不能把待分析物的光散射信号与其共存物质的光散射信号区分开来。这就在 很大程度上限制了r l s 技术选择性的进一步提高。为了弥补r l s 技术的不足，近 来，我们把r l s 技术与液，液界面( 1 i q u i d l i q u i di n t e r f a c e ) 上的全内反射光( t o t a l h a t e m a lr e f l e c t i o nl i g h t ) 相结合，成功地开发出了全内反射共振光散射( t o t a li n t e r n a l r e t i e c t e di s o r l a n c el i g h ts c a t t e r i n g t i r - r l s ) 技术：种通过检测液，液界面上的r l s 硬南颤蓖大学硕士论文 界面光敬瓣分橱技术的嚣发厦其在生他秘药物分辑串的应搦 信譬的变化檄行待分析物梭测的界面光散射技术f i n t e r r a c i a l l i g h ts c a t t e r i n g t e c h n i q u e ) 。在该授术中，待分析物通过与就它试剂结合形成双亲复合物( a m p h i p h i l i c s p e c i e s ) 瑟吸雅夜液，液界瑶上。这样，在幽入射光于渡液界面全反射蝣在界面上形 袋黪溺渍失渡( e v a n e s c e n tw a v e ) 豹激发下，泼双亲复合秘缝产生显蓑增强豹r l s 镶 号。由于待分析物通过形成双亲复合物而吸附在液液界面上故很好达到了与其 共存物质相分离的目的。因此，t i r - r l s 技术能进一步提高r l s 技术的选择性。 附机3 里( s y n e r g i s t i ca d s o r p t i o nm e c h a n i s m ) 和共吸附机 里( c o a d s o r p t i o nm e c h a n i s m ) ，分 别袋髑e u ( i i i ) 三辛基氧纯麟( t r i o c t y l p h o s p h i n eo x i d e , t o p o ) 、罗丹骥b ( r h o d a m i n e b ，r h b ) 滇记十六烷基三甲铵( c e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u mb r o m i d e ，c t m a b ) 和吖睫 橙( a c r i n d i n eo r a n g e ，a o ) 溴化十六烷基三甲铵( c e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u mb r o m i d e ， c t m a b ) 与核酸作用以及分别采用阴离子袭面活性剂十二烷基苯磺酸钠细d i u m d o d e c y lb e n z e n es u t f o n a t e ，s d b s ) 、卡二靛纂蕊酸钠( s o d i u md o d e e y l s u l f o n a t e ，s d s ) 和十二烷基磺酸钠( s o d i u ml a u r y ls u l f a t e , s l s ) 与维生紊b l ( v i t a m i nb hv b l ) 作用，在 水四氯化碳( h 2 0 c c l 4 ) 界面上进行核酸和v b l 的测定。 在p h8 6 9 ，离子强度为0 0 0 8 时，核酸e u ( i i i ) 和t o p o 在h 2 0 c c h 界面上发 生终合终焉影残三元双亲菱会携核酸e u ( i i i ) 一t o p o 。强越过程孛，羧羧被疆瓣秽 富集在h 2 0 c c h 界面上，引起强烈增强的t i r - r l s 信号，其最大散射峰位于3 4 8 0 n l n 。由此可以减敏地测定核黢。该方法对于扰物质具有良好的选择性f 在p 珏5 7 2 ，离子强度为0 0 0 6m 的条馋下。在水栩中核酸通过妊具有双亲性 豹瓣滋彝c 刑a 骞稳互终瘸澎或三元双亲复合凌麓游棱酸删毳鹚，嚣被瓣l b 和c t m a b 协同吸附在h 2 0 c c h 界面土，碍i 起显著增强的t i r - r l s 信号，其最大 散射蜂位于3 6 7 0n n l 。由此可以灵敏地测定核酸。该方法对干扰物质具有良好的 7 5 1 5 ，蒜子强度灸o 0 0 7m 酶祭佟下，菝酸逶j 鐾与其毒双綮健豹a o 纛 互作阁形成三元双泶复合物a o - 核酸c t m a b ，而被a o 和c t m a b 协 同吸附在h 2 0 t c c h 界面上，引起显著增强的t i r - r l s 信号，其最火散射峰位于 3 6 8 。0i l n l 。由j 墩w 软灵敏蟪测定核酸。该方法对于就勃骥具有良好黔选择性。 在p h3 2 9 ，离子强度凳o 0 0 3 器重，逶避静电俸竭力v b l 能分裂等$ d b s 、s d s 和s l s 相互作用形成双亲复含物v b i - 表面活性剂。由予熬吸附作用，v b l 被吸附 和簧集在h 2 0 c c h 界面上，引起显著增强的t i r - r l s 信号，其最大散射峰位于 堂! 王坠里 t h e d e v e l o p m e n t o fi n t e r f a c i a l l i g h ts c a t t e r i n gt e c h n i q u e s a n dt h e i r a p p l i c a t i o n s i nb i o c h e m i c a la n dp h a r m a c e u t i c a l m 町o r ：a n a l y t i c a ! c h e m i s t r y s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o rc h e n g z h ih u a n g a n a l y s e s r e s e a r c h ：b i o c h e m i c a s p e c t r o s c o p ya n a l y s e s p o s t g r a d u a t e ：w e il u ( 2 0 0 2 2 4 ) a b s t r a c t r e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n g ( r l s ) t e c h n i q u e ，p r o p o s e db yp a s t e r n a e ke ta li nt h e b e g i n n i n go f1 9 9 0 s ，i sas e n s i t i v em e a n s t od e t e c tl i g h ts c a t t e r i n gs i g n a l so f a g g r e g a t e s w i t hac o n v e n t i o n a lf l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t e r a f t e rt h a t , r l st e c h n i q u ea t t r a c t e d m a n yr e s e a r c h e r s m u c h i n t e r e s ta n de x t e n s i v ec o n c e mn o t o n l y f o ri t s s i m p l e m a n i p u l a t i o nb u ta l s of o ri t sh i g l ls e n s i t i v i t ya n dc o n v e n i e n te x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n s ， w h i c hc a n n o tb ea c h i e v e db yt r a d i t i o n a ll i g h ts c a t t e r i n gt e c h n i q u e f r o mt h e19 9 6 y e a r t on o w , t h es h o r tp e r i o do f7y e a r s ，i l l st e c h n i q u eh a sb e e nw i d e l ya n d s u c c e s s f u l l y a p p l i e d t od e t e r m i n eb i o m a c r o m o l e c u l e s a n d ，p h a r m a c e u t i c a l s d u r i n g t h e s e i n v e s t i g a t i o n s i tw a sf o u n d t h a ti l l st e c h n i q u eh a st h ea d v a n t a g eo f p o s s e s s i n gm o r e e x t e n s i v ea r e ao f p r o b er e a g e n t s a sw e l l 勰m u c hb e t t e r s e n s i t i v i t y , t h a n s p e c t r o p h o t o m e t r ya n ds p e c t r o f l u o r i m e t r y , w h i c ha l eo f t e nu s e d 船ar o u t i n ew a yt o a s s a yb i o m a c r o m o l e c u l e sa n dp h a r m a c e u t i c a l s i n t h i s c o n t r i b u t i o n , b a s e do nt h e s i g n i f i c a n t l ye n h a n c e dr l ss i g n a l so fp r o t e i n s i nt h e p r e s e n c eo fs o d i u md o d e c y l b e n z e n es u l f o n a t e ( s d b s ) a n dw a t e rb l u e ( w b ) ，r e s p e c t i v e l y ，w ee s t a b l i s h e ds i m p l e ， r a p i da n ds e n s i t i v ea s s a y so fp r o t e i n sa l t h o u g i ln e i t h e ro b v i o u sc o l o r r l o rf l u o r e s c e n c e c h a n g eo c c u r si nt h e s ei n t e r a c t i o n s ，f u r t h e rd i s p l a y i n gt h ep a r t i c u l a ra d v a n t a g eo f r l s t e c h n i q u e i ne x p a n d i n gt h ea r e ao f p r o b e r e a g e n t s a tp h1 _ 9 8a n di o n i cs t r e n g t h0 0 0 1m ，t h ei n t e r a c t i o n s 。o fp r o t e i n sw i t hs o d i u m d o d e c y lb e n z e n es u l f o n a t e ( s d b s ) g i v er i s et og r e a t l ye n h a n c e dr l ss p e c t r a w i t ht h e m a x i m u m l i g h ts c a t t e r i n gp e a kl o c a t e da t4 7 0 0n m 1 1 1 ee n h a n c e dr l s s i g n a l sa r ei n g o o dp r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o n so fp r o t e i n si nt h er a n g eo f m i c r o g r a m m e l e v e l s w i t ht h i sm e t h o d ，p r o t e i n s ，i n c l u d i n gb o v i n es c r u l t i a l b u m i n ( b s a ) ，h u m a ns c r t l m 西南师范火学硕上论支 捍面光敏射丹析技术的开发及其在生化和药物分析中的应用 a l b u m i n ( h s a ) ，a - c h y m o t r y p s i n ( c h y ) ，l y s o z y m e ( l y s ) ，c a r lb ed e t e r m i n e dw i t ht h e l i m i to fd e t e c t i o nb e l o w5 8 1 n gm l 一a r t i f i c i a ls a m p l e sa n dh u m a nu r i n es a m p l e sw e r e a n a l y z e ds a t i s f a c t o r i l y a t p h 2 0 9a n di o n i cs t r e n g t ho 0 0 1 s t r o n g l ye n h a n c e dr l ss p e c t r ao f t h em i x t u r e o fp r o t e i n sa n dw bw i t ht h em a x i m u ml i g h t s c a t t e r i n gp e a k a t3 4 6 0n mc a nb e o b s e r v e da n dt h ee n h a n c e dr l ss i g n a l sa t3 4 6 0m na r ei n g o o dp r o p o r t i o nt ot h e c o n c e n t r a t i o n so fp r o t e i n si nt h er a n g eo f m i c r o g r a m m el e v e l s w i t ht h ee n h a n c e dr l s s i g n a l sa t3 4 6 0n n l ，p r o t e i n s ，i n c l u d i n gb o v i n es e r a r na l b u m i n ( b s a ) ，h u m a ns e r u i t i a l b u m i n ( h s a ) ，y - g l o b u l i n “- i g g ) ，a c h y m o t r y p s i n ( c h y ) ，l y s o z y m e ( l y s ) a n d c e l l u l a s e ( c e l ) ，c a n b ed e t e r m i n e dw i t 1t h el i m i to fd e t e c t i o nb e l o w1 5 n gm l s y n t h e t i cs a m p l e sa n dh u m a n u r i n es a m p l e sw e r ea n a l y z e ds a t i s f a c t o r i l y h o w e v e r , ar e g r e t t i n g c a s ei st h a tr l st e c h n i q u es t i l ls u f f e r sf r o ms e v e r a l d i s a d v a n t a g e s s u c ha sf a l l i n g t od i s t i n g u i s hl i g h t s c a t t e r i n gs i g n a l so fa n a l y t e s 、析m t h o s eo ft h e i r c o e x i s t i n gf o r e i g ns u b s t a n c e s ，w h i c h a r en o tb e n e f i c i a lt oi m p r o v ef u r t h e r s e l e c t i v i t ya n ds e n s i t i v i t y o n ew a y t os o l v et h i sp r o b l e m ，i no b r o p i n i o n ，i s t oi n t r o d u c e a no i l w a t e r s y s t e m i n a l lo i l w a t e r s y s t e m ，a m p h i p h i l i cs p e c i e s ，i n v o l v i n g b o m h y d r o p h i l i cm o i e t i e sa n dh y d r o p h o b i cm o i e t i e s a r er e p e l l e df r o m b o t lt h ew a t e ra n do i l p h a s e s ，b u t c a nb ew e l la d s o r b e da tt h eo i l w a t e ri n t e r f a c e a sar e s u l t ，a na n a l y t ec a nb e w e l ls e p a r a t e df r o mi t sc o e x i s t i n gs u b s t a n c e sa n db ee n r i c h e dt ot h eo i l w a t e ri n t e r f a c e b ym e a n so fd e v e l o p i n ga na m p h i p h i l i cs p e c i e sw i ma p p r o p r i a t er e a g e n t s a n dt h u s d e t e r m i n a t i o no ft h ea n a l y t ew i t l lb e r e rs e l e c t i v i t ya n ds e n s i t i v i t yc a nb ea v a i l a b l e l a t e l y , w es u c c e s s f u l l yc o m b i n e dr l sm e t h o dw i t l lt o t a li n t e r n a lr e f l e c t e d ( t i n ) l i g h t t op r o p o s eat o t a li n t e r n a lr e f l e c t e dr e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n gr r i r - r l s ) m e t h o dt o a n a l y z ea m p h i p h i l i cs p e c i e sa t a no i l w a t e ri n t e r f a c e b ys i m p l yc o n s t r u c t i n gat i r o p t i c a la r r a n g e m e n t i nt h e s a m p l ec o m p a r m a e n t o fac o n v e n f i o n mf l u o r e s c e n c e s p e c t r o p h o t o m e t e r i n t h e p r e s e n tm e t h o d ，r l ss i g n a l s a r eo b t a i n e df r o mt h e a m p h i p h i l i cs p e c i e s i nt h eo i l w a t e ri n t e r f a c i a l r e g i o n w i t l lt h ee x c i t a t i o no fa n e v a n e s c e n tf i e l dc o u p l e dw i t ht o t a li n t e r n a lr e f l e c t i o no f l i g h ta tt h ei n t e r f a c e s i n c et h e i n t e n s i t yo f t h ee v a n e s c e n t 舶l df o l l o w sa ne x p o n e n t i a l d e c a y w i t lp e r p e n d i c u l a rd e p t h f r o mt h ei n t e r f a c ea n d r a p i d l y f a l l st ou n d e t e c t a b l el e v e l sw i t h i nl e s st h a no n e w a v e l e n g t h ，a m p h i p h i l i cs p e c i e s i nt h ei n t e r f a c i a l r e g i o n c a nb eh i g h l y s e l e c t i v e l y e x c i t e d o b v i o u s l y , d u et o t h es e p a r a t i o no ft h ea n a l y t ef r o mi t sc o e x i a i n gf o r e i g n s u b s t a n c e sa n de n r i c h m e n to ft h ea n a l y t ei nt h eo i l w a t e ri n t e r r a c i a lr e g i o n , t i r 一- r i ，s a b s t 襄 c t m e t h o di sm o r es e l e c t i v ea n ds e r l q i t i v et h a nr l s m e t h o d i nt h i sc o m m u n i c a t i o n , a c c o r d i n gt ot h el i q u i d l i q u i di n t e r a c t i o nm e c h a n i s ma n d t h es y n e r g i s t i c a d s o r p t i o nm e c h a n i s m ，n u c l e i ca c i d sc a r lb ed e t e r m i n e dw i t hg o o d s e t e e t i v i 哆a n ds e n s i t i v i t ya t t h ew a t e r t e t r a e h l o r o m e t h a n e ( i - 1 2 0 l c c l 4 ) i n t e r f a c ew i t h e u ( i i i ) - t r i o c t y l p h o s p h i n eo x i d e ( t o p o ) ，r h o d a m i n eb ( r h b ) - c e t y i t r i m e t h y l a m m o n i u m b r o m i d e ( c t m a b ) a n da c r i n d i n eo r a n g e ( a o ) 一c e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u mb r o m i d e ( c t m a b ) , c o r r e s p o n d i n g l y s i m i l a r l y , b ym e a n so fc o a d s o r p t i o nm e c h a n i s m ，a 越g 瓣y s e l e c t i v ea n ds e n s i t i v ea s s a yo f v i t a m i n b i ( v b i ) i s a l s oe s t a b l i s h e d a tp h 瓢6 9a n di o ns t r e n g t h0 0 0 8 ，t e r n a r ya m p h i p h i l i cs p e c i e sf o r m e db yt h e i n t e r a c t i o no fn u c l e i ca c i d s ，i n c l u d i n gc a l ft h y m u sd n a ( c t d n a ) ，f i s hs p e r md n a ( f s d n a ) ，a n dy e a s tr n a ( y r n a ) ，w i t he u ( i i i ) i nt h e p r e s e n c e o fo i l - s o l u b l e t r i o c t y l p h o s p h i n eo x i d e ( t o p o ) ，a r e a d s o r b e dt ot h ew a t e t q t e t r a c h l o m m e t h a n e ( h 2 0 c c h ) i n t e r f i m e , 垂v i n 鬈矗耄。s i g n i f i c a n t l ye n h a n c e d t i r - r l s s i g n a l s 。i th a s b e e n f o u n dt h a tt h ee n h a n c e dt i r - r l s i n t e n s i t y a t3 4 8 0n i ni s p r o p o r t i o n a l t ot h e c o n c e n t r a t i o no f t h e r m a l l yd e n a t u r e dc t d n a ，f s d n a a n dy r n ai nt h er a n g eo 0 0 2 - 2 + 5 鹕m l ，0 。0 0 2 - 2 5g gm i a n d0 。0 0 3 - 2 0g gm l ，r e s p e c t i v e l ya n dt h e i rl i m i t so f d e t e r m i n a t i o n ( 3 a 托o 1 6n gm l - ，0 1 9n gm l ta n d0 2 8n gm 1 1 ，c o r r e s p o n d i n g l y c o m p l i c a t e da r t i f i c i a ls a m p l e sw i t hh i 蚺l yi n t e r f e r i n gb a c k g r o u n dw e r ed e t e r m i n e d s a t i s f a c t o r i l y , a tp 珏5 。7 2a n di o n i cs t m a g t h0 0 0 6m o ll ，n a t u r a la n dt h e m m l l yd e n a t u r e d n u c l e i ca c i d s ，i n c l u d i n gc a l ft h y m u sd n a ( c t d n a ) ，f i s hs p e r md n a ( f s d _ n a ) ，a n d y e a s tr n a ( y r n a ) c a l lb es y n e r g i s t i c a l l ye x t r a c t e di n t ot h ew a t e r t e t r a e m o r o m e t h a n e ( h 2 0 i c c h ) i n t e r r a c i a lr e g i o na n d a d s o r b t h e r e , r e s p e c t i v e l y , b y r h o d a r a i n eb f 殛沿) a n d c e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u h ab r o m i d e ( c t m a b ) d u et o t h e f o r m a t i o n o fa t e r n a r y a m p k i p h i l i ci o n - a s s o c i a t i o n r e s u l t i n gi ns t r o n g l ye n h a n c e dt i r - r l ss p e c t r aw i t i it h e m a x i m u mp e a kl o c a t e da t3 6 7 。0n m t h e r m a l l yd e n a t u r e dn u c l e i ca c i d sa r em o r e e f f e c t i v et h a nn a t u r eo n e s t h ee n h a n c e dt i r - r l si n t e n s i t ya t3 6 7 0n mi s p r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o no ft h e r m a l l yd e n a t u r e dc t d n a ，f s d n a a n dy r n ai n t h er a n g e0 0 0 1 2 - 2 。0g gm i ，0 0 0 0 7 - 1 6 弘gm l a n d0 0 0 2 3 2 0f a gm l 一，r e s p e c t i v e l y a n dt h e i rl i m i t so f d e t e r m i n a t i o n ( 3 砖a r eo 。1 2n gm l 一，0 0 7n g m l qa n d0 。2 0n gm l 一， c o r r e s p o n d i n g l y a r t i f i c i a ls a m p l e s w i t h h i 曲l yi n t e r f e r i n gb a c k g r o u n d s h a v eb e e n a n a l y z e ds a t i s f a c t o r i l y a tp h7 ，5 6a n di o n i cs t r e n g t h0 0 0 7m 、b yw a yo ft h es y n e r g i s t i ce f f e c to ft h e 西南师范大学域0 论立 界面光散射丹析技术的开发盈j e 征生化和药物分析中的应用 a m p h i p h i l i ca c r i n d i n eo r a n g ea n dc e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u mb r o m i d e ( c t m a b ) ，d n a s i n c l u d i n gc a l ft h y m u sd n a ( c t d n a ) a n d f i s hs p e r m d n a ( f s d n a ) ，a r e a d s o r b e dt ot h e i m e r f a c i a l r e g i o na n da g g r e g a t et h e r e ，r e s u l t i n g i n s i g n i f i c a n t l ye n h a n c e dt i r r l s s p e c t r aw i t ht h em a x i m u mp e a l ( 1 0 c a t e da t3 6 8 0d _ r f l t h ee n h a n c e dt i r - r l si n t e n s i t y a t3 6 8 0n mi s p r o p o r t i o n a l t ot h ec o n c e n t r a t i o no fc t d n aa n df s d n ai nt h e r a n g e o 0 0 3 22 0 p gm l qa n do 0 0 2 5 2 4 “gm l 一，r e s p e c t i v e l y a n dt h el i m i t so f d e t e r m i n a t i o n ( 3 a ) a r e o 3 2 n gm l “a n d0 2 5n gm l ，c o r r e s p o n d i n g l y a r t i f i c i a l s a m p l e s 、“mh i g h l yi n t e r f e r i n gb a c k g r o u n d sh a v e b e e na n a l y z e ds a t i s f a c t o r i l y a tp h3 2 9a n di o n i cs t r e n g t ho 0 0 3 t h ec o a d s o r p t i o no ft h i a m i n ew i t ha n i o n i c s u r f a c t a n t s ，s u c h a ss o d i u m d o d e c y l b e n z e n e s u l f o n a t e ( s d b s ) ，s o d i u m d o d e c y l s u l f o n a t e ( s d s ) a n ds o d i u m l a u r y ls u l f a t e ( s l s ) ， o c c u r sa tt h e w a t e r t e t r a c h l o r o m e t h a n e ( h 2 0 c c h ) i n t e r f a c e ，g i v i n g r i s et o g r e a t l y e n h a n c e d t i r - r l ss i g n a l sc h a r a c t e r i z e da t3 7 5 0n l t l t h ee n h a n c e dt i r - r l si n t e n s i t ya t3 7 5 0 n r ni si np r o p o r t i o nt ot h ec o n c e n t r a t i o no f t h i a m i n ei nt h e r a n g eo f 0 1 2 - 8 5 0n g m l 。1a n d i t sl i m i to fd e t e c t i o n ( 3 t r li s12p gm l a r t i f i c i a l s a m p l e sw i t l lb i g f l yi n t e r f e r i n g b a c k g r o u n d s r e a ls a m p l e sh a v eb e e n a n a l y z e ds a t i s f a c t o r i l y k e y w o r d s ：r e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n g ( i l l s ) t e c h n i q u e ；i n t e r r a c i a ll i g h ts c a t t e r i n g t e c h n i q u e ；t o