（茶学专业论文）茉莉花干综合开发技术研究.pdf

摘要 茉莉花干，系茉莉植物的风干花朵，可入药，可配菜。药典记载其性辛、甘、 凉，清热解表，利湿，民问应用历史悠久。现代花茶产业带来数量可观的茉莉花渣， 的人虽对其丌发利用作过一些研究，但实际效果并不理想，难于推广。本实验较全 面的分析了荣莉花干的生化成分，研究了以茉莉花干为原料的速溶产品提制工艺， 探讨了茉莉黄酮提取纯化条件的优化，并初步探索了茉莉黄酮的检测技术，实验结 果如下： 本研究建立了茉莉黄酮的分光光度测定方法。研究确定了最佳检测波长为 5 0 0 n m ，以芦丁为标准品，在1 0 0 8 0 0ug m l 范围内，浓度和吸光度呈良好的线性 关系，回归方程为a = o o 0 0 8 c + o 0 2 4 8 ，相关系数r = o 9 9 9 9 ，回收率在9 6 5 1 0 5 之间。此法操作简单，重现性好，设备要求低，是茉莉花干原料及其制品质量控制 的有效检测手段。 在茉莉花干速溶产品提制工艺研究中，以茉莉花干水浸出率为考察对象，通过 水温、浸提时间及固液比的单因素实验和正交实验，对提取条件进行优化，结合实 际生产情况，确定了茉莉速溶产品最佳提取工艺为水温8 5 ，固液比为l ：3 5 ，浸提 时间为4 0 m i n 。 在茉莉花干黄酮的提取工艺研究中，以乙醇水溶液为溶剂，考察了不同乙醇浓 度浸提液、不同浸提时间，不同浸提温度和不同料液比对茉莉黄酮提取效果的影响， 通过f 交实验确定了茉莉黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度7 0 ，温度7 5 ，提取时 间为4 h ，固液比为1 ：1 5 。 所制取的茉莉黄酮粗制品以大孔树脂进行纯化。通过大孔树脂静态吸附与解吸 实验筛取a b 一8 树脂进行动态吸附一解吸实验。通过动态各单因素实验确定了茉莉 黄酮纯化的最佳工艺为上柱速率l b v ，h ，料液浓度3 5 m g ，m l ，料液p h 值为5 ，最 佳沈脱条件为乙醇浓度7 0 ，沈脱速率为2 b v m ，沈脱液p h 值为8 ，沈脱体积4 b v 。 纯化工艺放大实验能达到预期效果，纯化产品总黄酮含量为1 1 6 3 1 3 0 2 ，比原 料中总黄酮含量提高了近1 0 倍。 对茉莉黄酮纯化产品进行了h p l c 和t l c 分离，分离效果较好，对各组分的 定性有待进一步研究。 关键词：茉莉速溶产品茉莉黄酮分光光度法大孔树脂分离纯化h p l c t l c a b s t r a c t t h ef l o w e r o f 研加“聊s 口垅6 口c 爿疗，w i mai o n gh i s t o r yo fu t i “z a t i o n i nf o l k ，c a nb eu s e da sd o s a g e a n dd e l i c a c i e s m o d e mi n d u s t r yo f s c e n t e dt e a b r m g sa b o u tal 鹕ea m o u n to f 日o w e rd r e g s t i j ln o w s o m ee x p e r i m e m s n a v eb e e nc o n d u c t e dt op r o m o t ei t s c o m p r e h e n s i v eu t i l i z a t i o n ，t h er e s u l ti s n o ti d e a l t h e s t u d i e st o o ka i n v e s t i g a t i o n i n t om em a i nb i o c h e m i c a l c o n s t l t u e mo ft h e p l a n t ，a n d as e to f q u a l l t i t a t i v ea n a l y s i sm e t h o dt o j a s m i n u mn a v o n o i d sw a s e s t a b l i s h e d f u r t l e rm o r e ，t h es t u d i e sd e v e l o d e da w a t e re x t r a c t p r o c e s s ，a n dam e t h o dt oi s o i a t ea 1 1 d p u r i f i c a t ej a s m i n u m f l a v o n o i d s t h e p r e s e n ts t u d i e sd e v e l o p e dam e t h o do fs p e c t r o p h o t o m e t r yf o r q u a n t i t a t i v ed e t e m l i n a t i o no ft h et o t a ic o n c e n t r a t i o no fj a s m i n u mn a v o n o i d s t h er e s u i ts h o w e dt h eo p t i m a ld e t e n l l i n a t i o nw a v e l e n g mw a s5 0 0 啪t h e r e w a sa g o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i pw i m 严o 9 9 9 9b e t w e e n t h ea b s o r b a n c ea i l dt h e c o n c e n t r a t i o no ff l a v o n o i d sw i m i nm e r 锄g ef b mo 耻咖lt o8 0 0 倒札 t h e a v e r a g er e c o v e d r r a t e sw e r e 行o m9 6 5 t ol0 5 d u r i n gt h ei n v e s t i g a t i o n o fw a t e re x t r a c t i o n p m c e s s ，t h e e x t r a c t i o n c o n d i t i o n sw e r es t u d i e d t h e o p t i m a l c o n d i t i o nw a sd e t e m i n e d ，w i 廿1 t e m p e r a t u r e8 5 ，t h er a t i oo f w a t e rt ol i q u i d1 ：3 5 ，a n de x t r a c t i o nt i m e4 0 】1 1 i n t oi s o l a t ej a s m i n u m f l a v o n o i d s ，i tt o o ka ni n v e s t i g a t i o nt ot h ee 廊c to f v a r i o u sc o n d i t i o n sl ne x 仃a c t i o n i h er e s u l tw a sw i t he t o hc o n c e n t r a t i o n 7 0 ，t e m p e r a t u r e7 5 ，e x 廿a c t i o nt i m e4 h a 1 1 dm er a t i oo f s o l u t i o nt ol i q u i d 1 ：1 5 t h es t u d i e s i m p l e m e m e dm a c r o p o m u s r e s i nt oe n r i c hj a s m i n u m n a v o n o i d s a c c o r d i n g t om er e s u l to fs t a t i c a b s o r p t i o n a n ds t a t i c d e - a b s o r p t i o nt e s t ，a b - 8 w a st h e r i g h t o n e t h e o p t i m a la b s o r p t i o n c o n d i t i o n sw e r ew i t hf e e d i n gr a t e2b v h ，c o n c e n t r a t i o no ff e e d3 5m g m l ， p h v a l u e5 a n dt l e o p t i m a ld e - a b s o r p t i o n c o n d i t i o n sw e r ee t 0 h c o n c e n t r a t i o n7 0 ，s 0 1 u t i o nr a t e2b v m ，p hv a l u e8 ，s o l u t i o nv o l u m e 4b v t h e a m p l i f i c a t i o ne x p e r i m e n ts h o w e das a m er e s u l tt om em i n i a t u r e e x p e r i m e m t h ec o n c e m r a t i o no fj a s m i n u mn a v o n o i d si nt l ed r o d u c tw a s l1 6 3 l 3 0 2 ，w i t l ld e v e l o p e dn e a r l yl0t i m e sw h e nc o m p a r e dw i t ht h a t o f r a wm a t e r i a l t h er e s u l to fa n a l y s i so ff l a v o n o i d sb yh p l ca n dt l cw a sm o s t l y c o n t e n t e a c hc o m p o n e n ti nt 1 1 ef l a v o n o i d sn e e d saf u r m e ri s 0 1 a t i o n a n d d e t e n n i n a t i o n k e y w o r d s：j a s m i n u ms a m b a c a i t n a v o n o i d s c o l o r i m e n ym a c r o p o r o u s t l c e ) ( 仃a c t i o n p r o c e s s j a s m i n 啪 i s o l a t i o n & p u r i f i c a t i o n h p l c 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 入已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 彩菱 时间：删年占月占日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或 扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可以用不同方式在不同 媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 导师签名： 谚荑 时间：沪们驴年6 月6 日 时间： 劲午年6 月8 日 d 了 呷 列 t 上- j 一 刖吾 1 茉莉资源研究概况 茉莉花，被子植物门、木犀科、素馨属( 或茉莉属) 植物，学名觑m 加姗2j 口肌6 彳打，原产波斯湾附近的伊朗，为常绿或落叶灌木，适宜温暖湿润气候，夏末开 白色花。汉代就已从亚洲西南部传入我国。云南一带最先引种，以后向广东、广 西、福建等地传播。我国南部各省区，埃及、印度、土耳其等地中海沿岸国家都 有大面积的栽培。 1 1 荣莉的生物学特性【1 】 目前我国生产上栽培的茉莉属于木樨科茉莉属，共有三种类型，即单瓣茉莉、 双瓣荣莉以及多瓣茉莉。以栽培上面积最广的双瓣茉莉为例，将其生物学特性概 括如下。茉莉属常绿灌木，高o 5 3 m 。单叶对生，阔卵形或椭圆形，有时近倒 卵形，茉莉开花期很长从初夏( 5 月) 一直到晚秋( 1 0 月) ，花开络绎不绝。 茉莉属亚热带植物，生长喜光怕阴，喜温怕寒，喜气怕闷，喜酸怕碱，喜肥怕瘦， 喜湿怕涝。 1 2 茉莉的应用1 2 3 】 太古时期起，从茉莉花中提取的荣莉花油就是最重要和精致的天然油之一。 茉莉花油的新鲜、极具扩散性的香气是高级香水中一种完美的不可缺少的组分。 茉莉净油也用于食品用香精的配方中，特别是用于甜酒、糕点、调味品及焙烤食 品用的香精中。 自1 7 0 0 多年前茉莉移入中国，很长一段时间来都主要作为庭院观赏植物。 茉莉虽然形色并不艳美，但其芳香却胜过百花。从明代起，茉莉开始作为药用植 物。著名药物学家李时珍在本草纲目中，曾对茉莉的性状、栽培和利用，作 了较为详细的描述，指出茉莉花“辛热无毒”，可“蒸油取液，作面脂头泽，长 发润燥香肌”，茉莉根，苦、凉、有毒，麻醉、镇痛，捣碎酒炒包缚患处治跌打 损伤、筋骨疼痛，磨水服治失眠。荣莉叶，辛。 应用茉莉花窨制花茶是从公元十五世纪开始的。明代朱柜茶谱( 1 4 4 0 年) 载：“熏香茶法，百花有香者即可”。明钱椿年编( 1 5 3 9 年) 的茶谱中具体 记述了花茶的加工方法。但是，一直到十九世纪五十年代才大量加工茉莉花茶， 作为商品供应市场。 1 3 化学成分【4 也1 】 茉莉花的香精油是其利用的主要部分。随着中外学者对其研究的不断深入， 其化学成分也变得愈加复杂起来。1 8 9 9 年，v e r l e y 、h e s s e 和m u l l e r 首次报道 了从茉莉香精油中鉴定的几种主要组分，包括乙酸苯甲酯、芳樟醇、苯甲醇、吲 哚、邻氨基苯甲酸甲酯和茉莉酮。到二十世纪6 0 年代中期，香料工业生产的精 油、净油中的大部分香气组分得到鉴定，7 0 年代初已鉴定的香气成分已达3 0 种 左右，8 0 年代鉴定的香气组分增至9 7 种：其中烃类化合物3 3 种，醇类化合物 2 7 种，醛类化合物2 种，酯类化合物2 7 种，酮类化合物1 0 种，其他化合物2 种。 莱莉精油中含量较高的组分有：苯甲酸顺一3 一乙烯酯、芳樟醇、石竹烯、乙 酸苯甲酯、苯甲醇、1 l 一二十三烯、吲哚、乙酸顺一3 一乙烯酯、苯甲酸甲酯。具有 茉莉型香气特征的主要组分有：乙酸苯甲酯、茉莉酮和茉莉内酯，具有茉莉清香 的组分有：乙酸顺一3 一乙烯酯、顺一3 一己烯醇、苯甲醇、苯甲酸顺一3 一乙烯酯。a 一 萜品醇对香型有较大的影响。吴承顺、郭友嘉、张丽霞等人的研究证明不同来源 的茉莉香精油与不同制备方法得到的茉莉香精油，其香气组成存在一定的差异。 除香气物质外，茉莉的其他化学成分国内外也作过一些研究。r o s ss a 等 1 9 8 2 分别从单瓣荣莉和双瓣茉莉中分离出了一种新的环烯醚萜甙，同时也分离 出了迎春花素、槲皮甙、异槲皮甙、芦丁、槲皮素一3 一双鼠李糖甙、山奈酚一3 一 鼠李糖甙、甘露醇、“香树素、卢谷甾醇和蔗糖。d a n s 等从茉莉茎叶中分离 出了三萜。t a k a ot a n a h a s it 等从茉莉叶中分离出一种新的木质素裂环环烯醚 萜，同时还分离出7 种新的寡聚环烯醚萜甙和1 l 一甲酯。t a n a h a s h it 等从茉 莉的叶中分离出了3 个四聚体环烯醚萜甙。z h a n gy j 等从茉莉的花中分离出了 一种s a m b a c o s i d ea 和5 种新的寡聚环烯醚萜甙，命名为茉莉花甙a e ，其中 a 、c 、d 、e 是新的二聚环烯醚萜甙，而b 是一种新的三聚环烯醚萜甙。n a g a r a j a g s 等研究了不同种类茉莉的生化成分，认为j g r a n d i f l o r u m 和j s 锄b a c 枝条 一般比j a u r i c u l a t u r 多酚、总糖含量要稍高，且c n 比较高，而n 含量较低。 1 4 功能研究口2 嗡】 尽管茉莉作为药用植物由来已久花辛、凉、和中，根可麻醉、镇痛一古籍 对此多有记载。但是真正对其功能机理作研究的，国内外报道不多。有实验证明 茉莉根醇提浸膏对多种动物具有中枢神经抑制作用，其与当归、人参、五加皮等 合用具有戒毒作用，脱瘾率达7 0 。李红等人也作了茉莉根醇浸膏戒毒作用的研 究，他们以冰醋酸扭体法观察药物的镇痛作用；三个浸膏剂量组给药以自主活动 记数法观察药物的镇静作用，用对戊巴比妥钠阈上、阈下剂量观察药物的催眠作 用，结果表明其对小鼠具有减少自主活动、抑制扭体反应以及延长戊巴比妥钠阈 上剂量睡眠时间的作用，而对阈下剂量催眠作用不明显，提示该药对中枢的抑制 作用以镇静为主，以对抗吸毒成瘾者戒毒过程中的某些戒断症状。 潘英明等人研究了茉莉花等六种植物的抗氧化活性，以过氧化值为指标证明 了这六种植物的乙酸乙酯提取物对花生油均具有一定的抗氧化作用。从效果来 看，茉莉的抗氧化效果仅次于知母，而与维生素e 的抗氧化效果相似。 任蕾等选用普通绿茶、茉莉花茶和乌龙茶等6 种茶叶的水浸液对龋齿致病菌 和牙周炎可疑致病菌变形链球菌( s m ) 、牙龈卟啉单胞菌( p g ) 、中间普氏菌 ( p i ) 、具核梭杆菌( f n ) 进行抑菌研究，探讨其防龋的作用及防牙周病的可能性。 结果显示，茉莉花茶水浸液虽不及普通绿茶在低浓度下有较好的抗菌性，但是在 高浓度下( 2 4 m g m l ) ，对s m 和p g 的抑菌作用在六种茶叶中是最强的。由此可 以推断，茉莉花某些成分的介入使得普通绿茶的抑菌效果有所增强。 周晓蓉等研究了绿茶和花茶体外脂质过氧化的作用，证明两种茶叶都具有良 好的抗氧化效果，相同计量下绿茶优于花茶。 1 5 茉莉的开发现状2 9 】 茉莉香精油是香料工业的重要原料，它与其他香质调和，给众多类型的香料 提供了幽雅润泽的品质。随着荣莉香精油分析方法的不断完善，许多重要的香气 组分得到分离鉴定，而且被合成，作为香料单体广泛用于调配各种高级香料。在 中国，茉莉花与茶叶拼和加工成茉莉花茶，深受消费者喜爱。因而作为茶用香花， 人们对茉莉的开花吐香习性、香气形成挥发的影响因素作了深入探讨。 饮料工业的推陈出新带来了花茶行业的新局面。花茶已不仅仅是传统意义上 的香花害茶，花干直接作为泡茶原料已成为一种时尚；新的花茶窨制技术也开始 向传统花茶窨制工艺挑战。传统花茶窨制工艺费时费力，窨制工艺在不断改进。 有入以茉莉香精油直接对茶坯进行窨制，效果尚可。也有人以茉莉花单独压力浸 提的方案生产速溶茉莉花茶，产品质量好，较好的解决了速溶绿茶香气保持与强 化的问题。 2 研究目的和意义 我国是世界上最大的香花生产国，据不完全统计，全国茉莉栽培面积( 除台 湾省外) 已经达到3 3 3 3 h m 2 ，约占世界栽培面积的2 3 ，年产量占世界荣莉花总产 量的5 0 以上。我国已成为世界上茉莉花产量最大的国家。全国茉莉花茶年产量 近1 0 万吨，用花量在5 万吨左右。窨制后的茉莉花，是加工生产茉莉花茶过程 中的主要下脚料。其风干样品呈黄褐色，仍然带有浓厚的茉莉香。随着茉莉花茶 产量的不断提高，带来了数量可观的荣莉花渣。仅福建省每年就有四千吨左右。 然而近年来花茶消费群体在缩小，花区种植面积过大，造成了全国主要产花区普 遍出现鲜花供过于求。花价的下跌直接影响到的是花农的收益。不管是窨制还是 未窨制的茉莉花，成为急需开发利用的资源。 近年来花卉食品以其特有的芳香气味，丰富的营养价值和保健作用雨为人们 所喜爱。以茉莉花为食品配料，能赋予食品一定的香气，改善风味，提高食品的 价值。 由此可见，以茉莉花为原料，开发系列食品和饮料，是顺应市场需求的，开 发价值很高。 根据目前的茉莉花生产利用情况和科研进展来看，将茉莉花开发为一种新型 的功能性饮料，更进一步发挥其药用功能是非常有必要的。本研究拟用常规手段， 从茉莉花干基础生化成分定性定量分析入手，建立相应的检测方法；探讨生产茉 莉速溶产品最佳工艺条件；对茉莉功能成分提取分离最佳技术参数进行探讨，并 对其进行初步分析。 4 实验材料与主要药品、仪器 1 实验材料 茉莉花干由云南玉溪提供 2 主要仪器设备 高效液相色谱仪( 日本s h i m a d z u ) 。紫外可见分光光度计( 日本s h i m a d z u ) 薄层色谱仪( 德国c a i l l a )真空冷冻干燥机( 德国c s t ) 索氏抽提器( 长沙玻仪厂)旋转蒸发仪( 瑞士e l 1 3 1 b u c h i ) 电子p h 计( 上海m e t t l e t o l e d o ) 微型植物试样粉碎机( 天津泰斯特) 超纯水机( 重庆艾科甫) ， 高速离心机( 北京医用离心机厂) 低温烘箱( 上海精宏)真空泵( 河南予华) 箱型电阻炉( 长沙远东)恒温水浴锅( 北京国华) 超声波清洗器( 上海比能信)振荡器( 江苏中大) 电子天平( 瑞士s t 咖r i l l s )恒流泵( b t 0 0 3 0 0 m ) 层析柱( 长沙玻仪厂) 3 主要化学药品 芦丁、槲皮素、山奈素标样( 购自中国药品生物制品检定所) 乙醇 甲醇亚硝酸钠硝酸铝氢氧化钠氯化钠水合茚三酮蒽酮 镁粉盐酸浓硫酸磷酸醋酸正丁醇乙酸乙酯甲酸硅胶 以上试剂除色谱用试剂为色谱纯外，其余均为分析纯 4 大孑l 树脂 n k aa b - 8d 1 0 1d 2 0 1n k a - 9h 1 0 3d 1 4s _ 8 x d a 1 购于南开大学化工厂 实验内容及方法 1 生化成分检测阳们 1 1 定性检测 糖类、有机酸、酚类、鞣质、氨基酸、蛋白质、甙类、皂甙、生物碱、黄酮 类、葸醌、挥发油 1 2 定量检测 总灰分、水不溶性灰分、水浸出率、粗脂肪、总糖、游离氨基酸 2 茉莉花干总黄酮检测方法的研列3 1 、3 7 “2 2 1 反应原理 黄酮类化合物与铝离子在碱性溶液中生成红色络合物，在5 0 0 m 左右的波 长下有最大吸收，在一定浓度范围内，其浓度与吸光度符合比耳定律。 2 2 对照品的配制 精密称取干燥恒重的芦丁2 0 m g ，置于1 0 0 i i l l 容量瓶中，加甲醇适量，完全 溶解后定容至刻度，摇匀备用。所得即2 0 0 u g m l 的芦丁标准工作液。 2 ，3 样品溶液的制备 称取烘干磨碎样品3 9 ，经石油醚脱脂后，加7 0 乙醇水溶液8 0 回流提取 三次，每次1 0 0 m l ，合并提取液，过滤并减压浓缩除去乙醇。浓缩液趁热过滤， 并定容至5 0 0 m l ，摇匀，待测。 2 4 测定方法 精密吸取一定浓度的标准溶液或待测样品溶液，置于1 0 m 1 试管中，各加甲 醇至5 m 1 ，加5 n a n 0 ：溶液o 5 m 1 ，摇匀放置5 m i n ，加1 0 a l ( n 0 。) 。溶液0 5 m l ， 再摇匀放置5 m i n ，加4 n a o h 溶液4 m l ，放置1 0 2 0 m i n 后在5 0 0 n m 波长下比色， 记录吸光值。同时吸取相同剂量的样品溶液，加甲醇至5 m l 再加水1 m l ，4 n a o h 溶液4 m l ，作样品空白。 2 5 检测条件的优化 2 5 1 检测波长的选择 6 分别吸取一定浓度的标准溶液和待测样品溶液按照2 4 方法进行实验，在 4 0 0 啪6 0 0 r 皿波长范围内进行扫描。 2 5 ，2 试剂浓度的选择 ( 1 ) 亚硝酸钠浓度的选择 吸取标准工作液2 o m l ，6 份，分别加入2 ，4 ，6 ，8 ，1 0 亚硝酸钠 溶液o 5 m 1 ，接下来的工作按2 4 方法完成。 ( 2 ) 硝酸铝浓度的选择 吸取标准工作液2 0 m l ，5 份，分别加入2 5 ，5 ，7 5 ，1 0 ，1 2 5 浓 度的硝酸铝溶液，按2 4 方法进行。 ( 3 ) 氢氧化钠的选择 吸取标准工作液2 o m l ，5 份，按实验方法分别加入亚硝酸钠溶液和硝酸铝 溶液各0 5 m 1 ，再分别加入1 ，3 ，5 ，7 ，9 氢氧化钠溶液4 m l 。 2 6 标准曲线的建立 精密吸取芦丁标准溶液( 2 0 0 “g m 1 ) q ，0 。5 ，1 o ，2 o ，3 o ，4 o l l l l ，分 别置于1 0 m l 试管中，按照2 5 确定的最佳方法进行检测，所得数据计算标准曲 线的回归方程，并绘制以对照品的浓度为纵坐标，吸光度为横坐标的标准曲线图。 2 7 样品测定方法 精确吸取待测样品溶液l l l 于1 0 m l 试管中，加甲醇至5 m l ，在1 5 确定 的最优检测条件下测定样品溶液吸光度，由标准曲线查出样品溶液的浓度c ，按 以下公式计算出茉莉花干总黄酮的含量 总黄酮含量= ! 王堕整煦q m 式中：c 一样品提取液中黄酮的含量( 以芦丁计) u 一样品稀释倍数 m 一样品干萤 3 荣莉花干速溶产品加工工艺的研究 3 1 加工工艺 风干的茉莉花瓣作一定程度碎后，用定体积的水在一定温度下浸提一定时 问，滤液减压浓缩，冷冻干燥得茉莉花干速溶产品。 3 2 速溶产品加工工艺评价内容及方法2 1 水浸出物含量称重法 氨基酸总量茚三酮比色法 总糖含量硫酸一苯酚显色法 黄酮含量越3 + 显色法 可溶性蛋白含量考马司亮兰比色法 透光率 t 6 0 0 分光光度法 3 3 速溶产品提取工艺单因素实验 3 3 1 浸提温度选择实验 固液比为1 ：2 0 的条件下，分别在6 0 、7 0 、8 0 、9 0 条件下浸提3 0 1 1 1 i n ，考 察温度对浸提效果的影响。 3 3 2 浸提时间选择实验 固液比为1 ：2 0 的条件下，浸提温度由3 3 1 确定，选择浸提时间分别为l o 、 2 0 、3 0 、4 0 、5 0 、6 0 m i n ，考察浸提时间对提制效果的影响，确定最佳浸提时间。 3 3 3 固液比选择实验 在浸提温度与漫提时间确定的基础上。以1 ：l o 、1 ：1 2 、1 ：1 5 、1 ：2 0 、1 ：3 0 、l ： 4 0 的固液比进行浸提，考察固液比对茉莉速溶产品提制效果的影响，确定最佳 固液比。 3 4 浸提条件正交实验 根据单因素实验确定的范围，考察浸提温度、浸提时间和固液比3 因素，每 因素3 水平，以水浸出物含量为指标，用l 9 正交表安排实验，得出最佳加工工艺。 4 茉莉花干黄酮提取与纯化工艺的研究口4 、3 5 、3 6 3 9 14 。、4 3 14 鄹 4 1 提取工艺的研究 41 1 提取工艺 取干燥的茉莉花瓣碾碎，用一定体积的乙醇水溶液，在一定温度下回流提取， 过滤，滤液减压回收乙醇，冷冻干燥得荣莉花干醇提物。 4 1 2 黄酮提取单因素实验 ( 1 ) 溶剂乙醇浓度 在固液比1 ：2 0 的条件下，浸提温度设为6 0 ，浸提时间定为4 h 不变的情况 下，比较2 0 、3 0 、4 0 、5 0 、6 0 、7 0 、8 0 、9 5 乙醇浓度对浸出物中 茉莉黄酮含量的影响。 ( 2 ) 浸提温度 固液比和浸提时间与( 1 ) 相同，醇浓度由( 1 ) 确定，分别在3 0 、4 0 、5 0 、6 0 、 7 0 、8 0 、9 0 下浸提，比较不同温度对浸提效果的影响。 ( 3 ) 浸提时间 在( 1 ) 和( 2 ) 的基础上，确定l 、2 、3 、4 、5 、6 、7 、8 h 的浸提时间与浸出物 中茉莉黄酮含量的关系。 ( 4 ) 固液比 在醇浓度、浸提温度、回流时间都确定的前提下，考察固液比对茉莉黄酮提 取效果的影响，水平设定为1 ：5 、1 ：1 0 、1 ：1 5 、l ：2 0 、1 ：3 0 、l ：5 0 。 4 1 3 黄酮提取正交实验 根据单因素实验确定的最佳醇浓度、浸提温度、提取时间和固液比，以此4 因素为考察对象，在各因素最佳水平附近设定3 个水平，以l 9 正交表设计实验， 以提取物黄酮含量为指标，得出最佳组合。 4 1 4 提取物黄酮含量的测定 取提取物l o m g 定容至1 0 0 m l ，按照2 7 方法测定黄酮含量。 4 2 茉莉黄酮纯化工艺的研究 4 ，2 1 纯化工艺路线 茉莉花干醇提液冷却过滤后，减压回收乙醇，浓缩水溶液上柱吸附，在以一 定浓度的乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后冷冻干燥，即得纯化产品。 4 2 2 上柱及洗脱液中茉莉黄酮浓度的检测 取一定待测液，稀释一定倍数，再按照2 7 的方法测定黄酮浓度。 4 2 3 定- 生检测 黄酮定性检测a j c l 3 乙醇喷雾显色法 多糖定性检测硫酸一蒽酮法 9 可溶性蛋白质定性检测考马司亮兰比色法 4 ，2 4 树脂预处理方法 工业级新树脂使用前必须进行预处理，以除去所含的少量低聚物、有机物和 有害离子，预处理流程如下： ( 1 ) 以0 5 b v 的9 5 乙醇浸泡新树脂2 4 h 。( 1 b v 为1 个树脂床体积) 。 ( 2 ) 用2 b v 的9 5 乙醇以2 b v m 的流速通过树脂柱，并浸泡4 5 h 。 ( 3 ) 用9 5 乙醇以2 b v m 的流速洗涤树脂，至流出液加水不呈白色浑浊为j e ， 再用水以同样的流速洗净乙醇。 ( 4 ) 用2 b v 的5 h c l 溶液以“b v m 的流速通过树脂层，并浸泡树脂2 4 h ， 而后用水以同样的流速洗至水口h 中性。 ( s ) 用2 b n 的钞玳的h 溶液以蛳b v ，l l 的流速通过树脂层，并浸泡树脂 2 4 h ，而后用水以同样的流速洗至水p h 中性。 4 2 5 装柱方法 本实验装柱步骤如下： ( 1 ) 将玻璃层析柱垂直固定在实验架上，关闭柱底活塞，在柱中加入3 c m 左 右深的蒸馏水。 ( 2 ) 树脂带水缓缓倒入层析柱中，边加树脂边搅拌。 ( 3 ) 保持层析柱中水面高于树脂层面3 c m 以上，把过多的水通过活塞放出。 4 2 6 树脂静态吸附实验 取经预处理并除去表面水的各种树脂5 m l ，放置于具塞三角烧瓶中，分别 移入浓度为5 m g l n l 的茉莉醇提浓缩水溶液1 0 0 m l ，将三角瓶放置在转速为 6 0 r m i n 的摇床( 2 5 ) 中振荡，使树脂充分吸附，2 4 h 后从上清夜中取样检测 黄酮含量，计算吸附量。将吸附后的水溶液滤除，树脂水洗后加入l o o m l 9 5 乙 醇振荡解吸，测定解吸液中黄酮的含量，换算成黄酮干重，计算解吸率。 4 2 7 树脂动态吸附实验 在静态吸附实验的基础上选择a b - 8 进行动态吸附实验。 取5 0 m l 预处理好的树脂进行湿法装柱( m 2 0 3 0 0 m m ) ，待柱体平衡后， 加入浓度为5 m g m l 的茉莉醇提物水溶液，流速为2 b v m ，吸附开始后收集馏分， 共收集1 0 个，每个馏分体积为5 0 i i 儿。吸附完毕，用蒸馏水以2 3 b v l l 的流速 1 0 淋洗柱体，至多糖与可溶性蛋白质检测呈阴性为止。再用9 5 乙醇洗脱树脂吸附 物，洗脱速率为2 b v m ，收集洗脱液，每5 0 r n l 为一个收集单位。对吸附流出馏 分和洗脱流出馏分茉莉黄酮含量进行检测，研究动态吸附过程中黄酮含量变化规 律，计算动态吸附量与解吸率。计算公式如下： a =饕i l e ： v 一。 w ， 、一w 1 一w 2 1 0 0 式中：a 一吸附量( m g m l ) 毽w o 一上柱液黄酮含量( m g ) w 1 一吸附馏分中黄酮含量( m 曲 w 2 一水洗液中黄酮含量( m g ) w 3 9 5 乙醇洗脱馏分中黄酮含量( m 曲v 一树脂体积( m l ) e 一解吸率 4 2 7 1 动态吸附条件选择 ( 1 ) 上柱速率选择 取7 份树脂湿法装柱，每份2 0 n l l ，以5 m n l l 的料液分别以o 5 、1 、2 、3 、 4 、5 、6 b v m 的流速上柱，分部收集流出液，检测其黄酮含量，考察流速对动态 吸附量的影响。 ( 2 ) 料液浓度选择 5 份2 0 m l 的树脂湿法装柱，分别以2 b v m 的速率上不同浓度的料液，考察 不同的上柱液浓度对动态吸附量的影响。 ( 3 ) 料液p h 选择 6 份2 0 n 1 l 的树脂湿法添柱，以氨水和醋酸调节料液p h 值，选择最佳p h 值的料液。 4 2 7 2 动态洗脱条件选择 ( 1 ) 洗脱液醇浓度的选择 取5 份2 0 m l 已按最佳条件吸附的树脂填柱，比较不同醇浓度洗脱液的解吸效果。 ( 2 ) 洗脱流速选择 以3 b v 7 0 的乙醇分别以不同的速率洗脱，比较洗脱速度对解吸率的影响。 ( 3 ) 洗脱液p h 选择 以3 b v 不同p h 值的洗脱液以2 b v 的速率进行洗脱，比较各p h 条件下的 树脂解吸程度。 ( 4 ) 洗脱体积选择 分别以一定体积7 5 乙醇对2 0 m l 已吸附好的树脂进行洗脱，比较各洗脱体 积下的洗脱效果。 4 2 8 纯化工艺放大实验 以1 0 0 0 m l 已预处理好的树脂填柱，按照优化的纯化工艺进行动态吸附、洗 脱，计算动态吸附量与解吸率，测定制品中茉莉黄酮含量。 5 茉莉黄酮薄层分析与h p l c 检测方法的研究 4 印 5 1 黄酮类化合物的制备 以5 m g 茉莉黄酮纯化制品溶于甲醇中，定容到1 0 0 n 1 l ，摇匀，备用。 5 2 黄酮类化合物的薄层层析鉴定 层析用硅胶g 薄板，展开系统为乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水( 5 ：3 ：1 ：1 ) ，层析后晾 干，喷上1 a l c l 3 乙醇溶液，显色后用3 6 6 n m 紫外光照射检测r f 值。 5 。3h p l c 法分析茉莉黄酮类化合物 以黄酮制备液1 0 m l ，加甲醇2 0 m l ，加入浓度为2 5 的h c l 溶液于9 0 下 回流1 5 h ，甲醇定容至5 0 m l ，o 4 5 岫1 微滤。进样1 0 l l l ，检测波长为3 6 8 n i n 。 色谱条件： 色谱柱( c o l 眦n ) ：n o v a p a l 【c 1 8 ( 3 9 1 5 0 r m ) 流速( f 1 0 wr a t e ) ：o 8 m l m i n 柱温( t e m p e r a t u r e ) ：3 0 检测波长( w a v e l e n g t l l ) ：3 6 8 吣 进样量( i n j e c t i o n 、b l 衄e ) ：1 0 u l 流动相( m o b i l e p h a s e ) ：a 泵( p 啪pa ) 一一o 4 磷酸( h 3 p 0 4 ) b 泵口u m pb ) 一一甲醇( 色谱纯) 梯度洗脱( g r a d i e n te l u t i o n ) 等梯度洗脱 o t 5 m i n ，b 为4 5 ，2 5 1 m i l l 结束。 1 2 结果与分析：口：7 k 。：j7 】1 7 i 1 生化成分分析 茉莉花干基础生化成分定性与定量检测结果如表l 和表2 所示。从定性检测 的结果可知茉莉花干的化学成分十分复杂，尚待对其各成分有效性作进一步的研 究。茉莉花干的水溶性物质含量相当高，达到4 9 ( 茶叶一般为3 0 4 0 ) 。作 为一种饮料原料，无论是做原味型饮料还是做拼配型饮料，高水浸出率就意味着 相同的原料产出率高，成本低。而且茉莉花干总糖和游离氨基酸的含量分别约为 茶叶的1 0 倍和3 倍，这将使茉莉饮料的口感更加厚重和鲜爽。这也是用茉莉花 干开发饮料的一大优势。 表l 定性检测 t a b 1q u a l i 乜t i v e 锄a l y s i s 分析项目检测结果 糖类 有机酸 酚类 鞣质 氨基酸 蛋白质 甙类 皂甙 生物碱 黄酮类 葸醌 挥发油 表2 定量检测 ! 垫：兰垒型鳖竺坐坐 检测项目含量 总灰分 水不溶性灰分 水浸出率 粗脂肪 总糖 游离氨基酸 可溶性蛋白 总黄酮 6 8 3 0 4 9 4 o 1 3 4 3 5 4 1 - 8 2 茉莉花总黄酮检测方法的建立 2 1 检测波长的选择 在碱性溶液中，黄酮类化合物与a 1 3 + 生成红色络合物，在4 0 0 “0 0 n m 之间 有吸收。将一定浓度样品和标准品反应溶液在4 0 6 0 0 啪波长之间进行扫描， 得到图1 。 0 6 0 5 0 4 0 3 o 2 o 1 0 4 0 04 5 05 0 05 5 06 0 0 m 图l 反应液扫描图谱 f i g 1n l es p e c t r l l lp h c l t oo f 血e a c t e ds 锄p l ea n ds 胁d 盯ds o l u t i o n 由图1 可知，茉莉黄酮类化合物与对照品芦丁有相似的理化性质，反应吸收 光谱基本一致，都在5 0 0 脚波长处有最大吸收峰。 2 2 试剂浓度的选择 o 6 0 g 怕o 4 盘o s 0 2 o 。l 0 o5 e ( 胛 图2 试剂浓度的选择 f 追2 ，r h er e s 心o f d i 氐嫩吐c o n c e 嫩a t i o n o f 也es o l u t i o n 实验结果表明，吸光度随n a n 0 2 浓度在5 到8 范围内，相对稳定：随 a l ( n 0 3 ) 3 浓度的增加呈上升趋势，当浓度在5 1 0 时，相对稳定；当n a o h 1 4 浓度大于4 ，吸光度变化幅度很小。故本实验选择n a n 0 2 、a l ( n 0 3 ) 3 、n a 0 h 三种溶剂的浓度分蹦为5 、5 、4 。 2 3 标准曲线的建立 对表3 中的数据进行分析得到标准曲线的回归方程，为y = o o 0 0 8 x + o 0 2 4 8 ， r ：0 9 9 9 9 ，表明在l o o 8 0 0 u 咖l 浓度范围内。浓度与吸光度有良好的线形关系。 表3 标准曲线数据 1 曲3n 赡r e s u l to fs t 8 n d a r ds o l 丽o n 编号浓度( 芦丁)吸光度 n o c o n c 钮吐a t i o n ( 峙，m l ) a b s o r b a n c e 1l o oo 1 0 5 22 0 0o 1 8 5 34 0 003 4 4 6 0 0o 5 0 0 58 0 00 6 6 3 0 7 o 6 0 5 o 4 d o 3 0 2 o 1 o o2 0 04 6 0 98 0 口i o u g m l 图3 标准曲线 f 毽31 k 咖耐a f d e u r v e 2 4 显色时间稳定性评价 表4 稳定性实验 ! ! ! ：! ! 壁墅! ! 监! 翌! 皇竺坐 编号5 m i n l o m m1 5 m m2 0 m i n3 0 m i n4 0 1 1 1 i n6 0 i i l i n9 0 m i n1 2 0 m i n 1 5 取一定浓度的标准品溶液，按照确定的实验条件进行检测，在2 5 下观察 不同放置时间对吸光度稳定性的影响，结果见表4 。实验结果显示，随时间的延 长，反应液吸光值会有所下降，但是下降幅度不大，2 h 内下降均低于2 6 ，表 明2 h 内络合物颜色是稳定的。本实验选择1 0 2 0 m i n 进行检测。 2 5 方法回收率和精密度分析 在样品溶液中加入一定量的标准液，按实验方法测定其回收率，结果见表5 。 从测定结果可看出该方法的回收率在9 6 5 1 0 5 之间，变异系数在 o 9 7 2 4 1 之间，表明该方法准确可靠，精密度好。 表5 回收率、精密度测定 ! 垫：i ! 些丝璧! ! 堡! 竺! 翌! 塑堡! i ! ! ! 呈 样品 测定值本底值加入量回收率变异系数 “m gm gm g 10 2 2 3o 1 1 8o 11 0 5 01 3 6 2o 4 4 3o 2 5 0o 29 6 5 2 4 1 3o 6 2 5o 3 2 lo f 31 0 1 30 9 7 2 6 花干不同部位黄酮含量的检测 依照样品制备方法测定了茉莉花干中花瓣和花柄的黄酮含量，结果见表6 。 所得数据可以看出花干不同部位的黄酮含量不一样，花瓣含量稍高，达到1 8 2 。 此结果与黄酮在植物体中的一般分布规律相同。 表6 茉莉花瓣与花柄黄酮含量的测定 f i g 61 1 1 ed e t e l m i n a t i 蚰o f n a v o n o i d sc o n t e n t i nm e p e t a la i l dt h cs t e mo f 也en o w e ro f j 锄加如wj 硎6 口c 一打 壁曼垄窭型出垄塑f 幽 1o 0 1 7 7 0 0 1 1 4 2 0 0 1 7 40 0 1 1 7 30 0 1 8 2 0 o l l 6 4 0 0 1 7 90 0 1 2 0 50 0 1 7 0 o 0 1 1 9 3 茉莉速溶产品加工工艺的优化 将2 0 9 茉莉花干作一定程度粉碎，装填在一根保温柱中。以9 0 的蒸馏水 连续淋洗，淋出液每2 5 0 m l 为一个收集单位，检测各单位的固形物含量、黄酮 含量、游离氨基酸含量和总糖含量，计算各项指标的溶出效率，得图