（水产养殖专业论文）六种经济鱼类生长激素基因cDNA的克隆和原核表达.pdf

摘要 根据鲤形目和鲇形目生长激素( g r o hh o 肿o n e ，0 1 1 ) 基因n - 末端和c 一末端碱綦序列的 绦守性设司对麓势弓 谚；麸藏垂薅中餐取惑r 奠a ，鬟释p e r 方法扩增著壳隧嚣了大鳞 副潍鳅( 黜扭g w m m 幽6 巧m ) 、泥鲰( a 靠，g 珊7 7 醛檬俐溯豫”拗淞) 、滕l 善鱼( 酾聊哆矽f 甜 娜f d f 缸螂) 、鲇煎( ，耵姗舢o f 瓣) 、黄河鼹( c ：矽r 砌拈c 盘巾f oi nh u a n 曲er i v e r ) 和淇河鲫 ( e 套i 辩& h 瑚f 淞法0 谂。蛀v e 疗s 静羹鬟经济鱼类黢g 珏藻函e 黼a ，劳详细分糖了筵序列 特兹。彦别弱源瞧检索袭萌，颞尧隆豹c d n a 片段为这6 稃鱼酌g 联蒸溜，蕊g 鹂8 娃注 册母分别为d q 3 5 0 4 3 2 、d q 3 5 0 4 3 3 、d q 3 5 0 4 3 4 、d q 3 5 0 4 3 5 、d q 3 5 0 4 3 6 和d q 3 5 0 4 3 7 。其 中大鳞副溅皴帮艚脂鱼懿g l 基因序列系第一次克隧。分幸厅其核潜蔽岸列和推测熬畿基酸 枣舞，维栗擞示：本磺究露隆至l 静站鱼照长激素基戮瓣开羧滔读程( 0 r f ) 包括6 0 3 个孩营酸， 编硒2 个氨藻酸，其中包括2 2 个懿基酸的信号肢和1 7 8 个爨撼酸的成熟敝；其它五种 焦魄o r f 均为6 3 3 幻，缡碣2 l o 个氨旗酸，其中包掭2 2 个氨基酸灼信号肽秘1 8 8 个氨基 数懿戒熬簸；淀鳃帮大鳞黧漉蘸残熟默氨蒺疆痔疑的游深毪巍l 。这6 个蛋文浚熬簸 序列和其它融知的鱼类g h 都有较嵩的同源性，特涮是与相同露的惫类序列糯比，但与嵩 等脊椎动物g 王 的同源性较低。通过比对，在这些爨囱廖列内鉴定了许多保守的熬基酸残 蒸，葵审熬大多羧蒙集悉戏5 令绦守域。基予这6 静惫类与其它惫类嚣高等脊穰动秘鹃赋 成熟肽氨基黢序列进行分予系统学分卡厅，结莱( m p 树嗣m 辩) 与根据形态特缎嚣建的系统 发育树基本致。 爰6 葶串焦懿饕雾弓 物( 主游弓| 秘鸯霸入藏象 酶切镶点，下游萼| 戆鞠入照旌酶韬霞纛) 分 掰扩增了大鳞黧淀鳅、站籀、瘸艏惫、黄湃簿和淇湾鳎豹g 成熟救，褥其瓮肉播入到融 台表达载体p e l 二2 8 a 质粮中，转化大脑杆菌b l 2 1 ( d e 3 ) ，用质粒p c r 方法筛选阳性克隆， 震藏蟊l 移髂d l 薅落鍪定嚣娥矮粒。以 玎g 诱导融合装囊表达，s d s p & g 藏分耩表露蕤 导重缰度粒寝运了融合鬓自，主要为不滚髓的包含髂，鲢鱼分子鬃约为2 2 。5 鼢，其它4 静约 为2 3 5 k d ，与实验预期的分子量一致。5 种融合蛋囱表达量均超过礞自总量的5 0 。融台 蛋螽n 末麓謦毒缀氨酸撂签，粟薅爨定纯金鼹配霉攀亲帮鬟辑，获褥电泳缝懿薰缀蛋鑫。 奉疆究巍陵到了8 瓣煎熬g h 基阁c 脒a 枣剜，并成功梅建了原核表达栽休，实凌了 5 种熏组g l 蛋白的高效表达，为进一步开展其应鲻和生物活性检测分析及研制新型鱼类 生长促进剡夔定了基础。 关键稍：泥鳅，大鳞剐泥鳅，鲇鱼，胭脂鱼，黄河鳃，淇河鲫，生长激豢，序列分析 原棱表达 a b s t r a c t a p a i ro fc o n s e n s l l sd e g e n e r a t ep r i m e r sw a sd e s i g n e db a s i n go nn t e r n l i n a la n dc - t e n n i n a l c o n s e r v a t i v ea m i n oa c i d ( 嘲o fg r o 、v t hh o m l o n e ( g 娜i nc y p r i n i f o 彻e sa n ds i l u r i f o n n e sf i s h e s u s i n g 勰零e r 晒d ，潮e d n a sw e 瑶黝p l 主鑫e d 艄疆e l 。n e d 辆瑚t o 缓r n ai s 。1 a 燃橛b p i t u i 协r yg 】a n d o fs i x i m p o n a n te c o n o m cn s h e s ，p d 黼h 姆母w 驸妇幻伽蚶，倒文塔“m 淞 戮豁疆i c 癌娃矗8 l 就s ，麓蕊e c y 矽 勰s 窳鑫娃l i 积s ，黼榭镑s8 s 。l 栏嚣，q 秽i 狂黼c 掰p l o 诹掩砼避聚如程蕊 c 囊郴螽捧群甜镍如描i nq 热e 蠢v e s e q 黼n c ec o m 辫r i s o nw 确t kc x i 嘏硅gg 疆g 鞠ee o n 嚣黼e d 也a 主 畦瓣e 丑心a 蠡毓g 瓣e m sw e 瓣g 疆露e n e so f 畦拉鲢x 蠡囊e s 硅e 鑫e c e 巅。珏珏髓l 酶耩遮( b 媾彝呔a f e d q 3 5 0 4 3 2 ，d q 3 5 0 4 3 3 ，d q 3 5 0 4 3 4 ，d q 3 5 0 4 3 5 ，d q 3 5 0 4 3 6a n dd q 3 5 0 4 3 7r e s p e c t i v e l y i ti s t h e 薮r s t 蛀m e 协c l o n et 歉eg hs e q 毡e b e e so f 执l 黻辫i 踞槲；瓣幽妇y 测琳a 聪蜘母罗抽粥掰酗爵积曼 t 糯0 p e nr e a d i n g 矗a f n e ( o r f ) o f 辩z “r 淞础o f 蝴g hc o n t a i n s6 0 3b pw h i c he n c o d e sap r o c u r s o r o f2 0 0a ac o l 砷r i s i n ga2 2 勰s i 辨a lp e p t i d ea n da1 7 8 a am 熊撇辫口t 融，e a c ho f 搬ea t h e r s e q 蜮l c e si n c l u d e s 躲o 鼯。f6 3 3b pw h i e he n c 藤e s 箍p r e c 搬s o r o f2 1 0 姐e 跚峄蠡b ga2 2 魏 s 培n 越p e p t i d ea n dal8 8 扭am a t i 】r ep r o t e i n 1 h ei d e n t i t yo f t h em a t u g hb 武w e e np 口r 档脚姆g 舯甜 如挣，锄淞鞠d 毒套妇g 掰黼瓣档聒掰f 露妇 辩i sl o o t h 黼d 醴a i l e ds e q u 冁e ea n a 重y s i so f 畦掂s i x g _ 差穗谢斑m 拥yo 搬e r 蠡s l a n da d v a n c e dv e 臻e b r a t es e q u e i l sw e r ep e 撮) 肺e d 骶l es 呈x s 键黼n c c s 蠢l 斑。w e d 毯磅h o 撙o l o g y oo 氆牲鑫囊s e q u e n c e s ，e s p e c i a l l yt os 锶粥粒e s 蝴 毯n 氆e s a | 劬eo r d e r ，b u t l o wi d e n t i t yw ：1 1a d v a n c e dv e r t e b r a t es o q u e n c e s a n dm 蝴yc o n s e e dr e s i d u e s w e 糟i d 强蛀曩砖，蝴s l 蠢i 戚弧蠡孺d o 撼8 溉s 强ep 姆k g e 粥蛀。赶铭s m p 熟矗n l 氇e m a n l r cg h “2 6v e r t e b r a t e s p e c i e sw e r er e c o n s m l c t e da 1 1 d1 a r g e l yc o n g m e n tw i mm e m o 琏 h o l o g y b a s e dt r e e m 魄嘴g 辩固醚a 礅p 钟。m 妇辨粥“s 勘b w 渊峨 奄辑o c 渺i 煳sq s i 积c 髓s ，翮删s “s o l l 王s ， ( j 妒r 栩淞c d ，p 沁i nl u a n g h er i v e ra n dc 缸4 球黜f “s8 拼m f 材s 漉q i h er i v e r 、v e r 。c l o n e du s i n g 幽e 最 s p 。c i a l 面m e r s 确e n f b ec i ) n af 堍m e n t sw e r ei n s e r t e di n 协p e 量2 融t oc o n s 批u c t 氐 e 印心s s i o np l a s m i da n de ，ib l 2 l ( d e 3 ) w a st h eh o s t s 撇i nf o rn 猢s f o 蛳a t i o n 强e 球c 。煳b 趣a n t 翻a s m i dw 秘sd i g e s 佬db y 蜀螽i 矗n d 鼢挣it oi d e n 矗f y 壤。r c c o m k n a n tp l a s 珂i d 。 1 1 1 er e c o m b i n 锺n tp r o t e i n sw e r ee 燃c i e n t l ye x p r e s s e di nb l 2 l ( d e 3 ) c e l l su p o ni n d u c 矗o nw i 勘 l f f 娃s d s 一鹣g 譬曲o w e d 蠡e 糯。l e e 堪嚣w e i 痨t 醯珏蝌嬲d 硝渺l e i n s 辩r ec o 玎s i 盎瓢蛾氇氇a t o ft h ef i v eg 科s t h er e c o m b i n a n tp r o t e i n sw e r ec o m p o s e do fm o r et h a n5 0 o ft kt o t a l 1 l b a c t e a 1p r o t e i 】1 sr 蚰dc o n t a i n e dw i t h i nt h ei n c l u s i o nb o d yt h et a 嘴e tp r o t e i n sw e r ef u r t h e r p u r 溻醐b yi m m o b i l i z e dm e t a ja 孀n i t yc h f o m a t o g m p b y ( 1 m a c ) u n d e rd 翎觚越n ge o n d i t i o n 州t 1 1 u r e 嚣d 诅et ol h e 电s 酣n - e n 鞋i n a l 瓤i s l a g g 联i so 秸e 醺两eb e s u 越$ dp i 珏i t a r yh 。黼。棘。s 檬越瘿a y sa p i v o t a l 瀚l e 迅p r o m o t i n g 鞠d m 赫n 搬i n 协gs o m 鼬i cg 沁w 扭a n db o n em a u f a l i o n ，。s m o r e g 羽a t i o 王l ，r 嗡舶娃u e t i o na l l di m 糊u n i 曰， t h ec l o n ea n de x p r e s s i o no ft h es i xe c o n o m i cf i s h e sw i nf a c i l i t a t e 孙r t h e rd e v e l o pan a v o l 掣o w t k 黼g u l a t i n gr e a g e n t st op r o 搬o t e 也eh e a l t hd e v e l o p m e n to f s h e r y ， 较啄1 瞩钺籼：p 甜翻傩魄鞋舛祷臻稿确攀。n 粥，醚i 踺钟黼sn n g l l i n e 娃稚函撖s ，m 辩o c y 矽巍醛潞i 甜e 鸺 所，甜r 触黜。凇，( 劬打h 淞c 唧f o i nh u a l l 曲er i v e r r d 州姗删删郴i nq i h er i v e r 豺) w t l l h o 蹦o n e ( 翎苟，s e q u c n c ea 芏1 a l y s i s ，p f o l 【a f y o t i ce x p s 斑喀 1 h b 0 吾 嚣囊吾 鱼类怒自然界数量蠛雾，种类最为丰富的脊椎幼物，同时照臻鬣自己经成为人类重要 的璐物蛋自漂之一。鱼类戆波塘蒡戆艨史可以运溯爨2 5 0 0 年兹静鸯致战蓬辩代莲蠡震饕 豹莠鱼疑。我篷是 鼗器水产大窝，承产渡是我瀚舀瑟经济的霾要组成郡分。馕是抟绞 的粗放型自然放养模式无法实现养殖惫类的高产与穗产，不能满足人类的需求。远几十年 来，隧整惫类人工繁殖按术懿突酸秘莽戆援拳懿发震，蓁殖产爨实蜒了矮瓣飞跃，嚣裁， 我落是整界上雅一静鱼类莽整产量超过德耢产量懿溺家。蘧羞现代入瓣数量的增热，趣 的减少，水质的污染，生态条件的破坏，必然要求集约化、工厂溅养殖模式米取代粗放型 舞臻模式。俊葭莠建瑟耱懿培弯蟊意效镶糕夔磅铡楚实联莠建横袋转讫熬重簧基礁。 玺类粒抉这生长帮熊震虢馥良，本质上是特定劝麓慕因帮基瓣缀表达产物按诞露翔豹 结果。生长激索( 强州h h o m o n e ，g h ) 是包括鱼类猩内的所有脊椎动物脑下鬃体分泌的一 葶申攀链多黢激素。它其蠢广泛懿生理绣戆，燕镬爨增逶食效、撵寒键糖转换搴、蜓送生长 ( d o 嬲霹s o 魅，样口z 。，1 9 7 9 ) 、谰节海涎溷游性鲑群鱼类渗透弧( b o l 托嗽，盯口z ，1 9 8 7 ；h 诬翻o ，甜碱， 1 9 9 0 ；s a k a m o t o ，“口，1 9 9 0 ；s a k 锄o t o ，盯耐，1 9 9 l ，1 9 9 3 ) ，提高鱼炎抗病毒能力等，这些使 褥它在鱼类农产葵建韭中共煮鋈大熬俘鲻，羁纛霉裂越来蘧广泛熬蘩撬。弱秘燹磐逮发撵 鱼类蠹派生长激豢翡生理作用藏将岁 澈生长激素f 绒糖丽) 弓| 入鱼体，叛健进生长、提高抗 性，己成为当前鱼类生长激素成用于水产养殖研究的霞大课题。擞擞g h 研究不仅鼹有重要 瓣臻论意义，瑟量其蠢蘩大懿瘟耀价德。 1 鱼类生长激素及箕家族成员 生长激素( g 锹h 酗黼鳓e ，g 礤裁s 鳆斌蹬咧n ) 楚瑟煮脊蠢葫物惫捶鱼类缭挎蓬零黪生 长和发育掰努鬣豹一种攀链多肽激豢( o l l y ，群撑，1 9 8 9 ) 。生长激素帮催巍索( p r o l a c t 咄 p r l ) 、胎盘催乳素( p l a c e n t a ll a c t o g e n ，p l ) 及后来发现的生长乳索( s o m a t o l a c t i n ，s l ) 属于 g 嚣鬏型s 毛家族( s 印幽i l 力，宅都楚凌黉援动貔戆藏蘧髂产玺麴多黢激素，嶷有鞠敲茨绥 橱和交叉酌动能( a g d s t s s o n ，倒甜，2 0 0 3 ) ，掭测它稍趣深予一个共瓣的穰先基鞭( c h e n ，群穰。， l9 9 4 ；m o o r e ，甜d ，19 8 2 ； m i l l e r p f 以，l9 8 3 ；r a n d w b a v e r ，“以，19 9 1 ；s a l c a l n o t o ，酣甜， 2 0 黼) 。在脊楼凌穆孛，宅翻其畜调节黛长、发育葶强健渗懿生蓬雩饕羹l 。在垒类，p r 王毒：要参 与生建和渗透调节国e m ，l 髂3 ；p n 玎1 e t ，盯群，傍9 0 ；s o a l e ，“拼，2 0 0 6 ) ，s l 嚣前发现仅存在予 鱼类中，除了参与渗透鹾和离子平衡的调节外( r a i l d ，w e a v e r ，酣d ? ，1 9 9 3 ：k a k i z a w a 、e ，n ， 1 9 9 3 ，1 9 9 5 b ，1 9 9 6 ，1 9 9 7 ；k a n e k o ，“h ，1 9 9 3 ) ，还能在生殖活动中起熏要调节作用( p l a l l a s ，p f 口，1 9 9 2 ；r a n d w e a v e r ，g f 盘，1 9 9 2 ； 江k i z a w a ，g ，甜，1 9 9 5 a ) 。在g w p r 工s l 家族中，人们对 g l 的研究最为全菌和深入( b j m s s o n ，1 9 9 7 ；p r e z s 矗1 1 c h o z ，2 0 0 0 ) 。 2 鱼类生长激素的分泌和调节 鱼类生长激豢由垂俸的生长激素细胞( s o m a t o 扛o p s ) 合成和分泌。生长激素的分泌主要 受下丘脑两种激素调控，生长激素释放激繁( g m 州hh o r n l o n er e l e a s i n gh o m o n e ，g h r h ) 和生长激素释放抑制激素( g r 0 州lh o 锄o n er e l e a s ei n l l i b m n gh o 助o n e ，s r j h ) ，前者是生长 激索释放的正调节因子，促谶g h 的合成粕分泌，后者是生长激素释放的负调节因予，挪 制g h 的分泌( m i c h 胡，1 9 9 9 ) 。除了g h r h ，7 0 年代又发现一类新的化合物，称为促生长激 素分泌肽( g h - r e k a s i n gp e p t i d e s ，g h r p 或删s e c r e t a g o g u e s ) ，也具存专一促进g 珏分泌的 作阁，但g 和g h r p 具有不同的作溺机制。在鱼类，g 瑚t h 促进g h 分泌作用很小， g h r p 是鱼g h 分泌的主要促进因子，如腺箭酸环化酶激活多肽( a d e n y l a t ec y d a s e a c t i v 商n g p o i y p e p t i d e ，p a c a p ) 就属于g h r p 的一种，能够强烈刺激鱼类e 臣 的分泌( m o m e ，2 0 0 0 ；肖 东簿，2 0 0 2 ) 。近年来，在对鱼类的生长和生殖活动神经内分泌调节的相互作用研究中，发 现促性腺激素释放激素( g n i 州) 、促甲状腺激素释放激索( t r h ) 、促黄体素释放激素类似物 ( l h 烈- a ) 、神缀肽y ( n e u r o p e p t i d ey ，n p y ) 、艟囊收缩索( c h o l e c y s t o d i n i n ，c c 酗期多巴黩 都能和脑垂体生长激素细胞的特异性受体结合而刺激生长激素释放，并能提高生长速率 ( l i n ，“a z ，1 9 9 3 ；m e l a r n e d ，甜口z ，1 9 9 5 ；王黎等，1 9 9 7 ；肖东等，1 9 9 9 ；徐斌等，1 9 9 7 ；林信伟 等，1 9 9 3 ，1 9 9 4 ) 。褴类国醇激紊( 1 7 一雌二醇、肇酮等) 具有调节脑垂体对剿激g h 分泌的享申经 内分泌因子的反应性的作用，从而调节膝垂体生长激素豹分泌活动( 林浩然，2 0 0 0 ) ，在鲤科 鱼类中这种调节作用具有季节性变化的特点，与鱼体的性腺发育状态有关，也与参与协同作 用的享申经内分泌因子有关( 李文笙等，2 0 0 3 ) 。最近，人们又在鱼类体内发现调节冀g h 分泌 和藻因表达的反馈调节通路( w o n g ，“口，2 0 0 6 ) 。 3 鱼类生长激素的结构与功能 3 1 鱼类生长激素的结构 李卓浩等( 1 9 4 4 ) 第一次从牛的垂体中分离出牛生长激素( b g h ) ，1 9 5 6 年又从人垂体中 分离出入生长激素( h g h ) 。隧蔚技术静不新进步，分离氆的生长激素豹纯度褥以不版提高， 为以后的进一步研究工作奠定了基础。李卓浩等人( 1 9 6 9 ) 报道了h g h 的氨摹酸序列， 菊言 r o s k a m 等( 1 9 7 9 ) 发表了h o h 制的c d n a 序则，p a v i a l ( i s 等( 1 9 8 1 ) 发现了h g h v 基因，g e o 喀e 等( 1 9 8 1 ) 将a 生长激素基阂( 包括h g h 璜j 穰h g v 基因) 定位子染色体1 7 q 2 2 2 4 。之螽， a 磁e m e g 皤d 等( 】9 8 7 ) 完成了猪生长激豢( p ( 疆) 的x 射线菇体衍射实验错究，确定了生长 激素的三维空间结构。首次分离鱼类g h 的工作始于7 0 年代中期( f a 舢e r “a ，1 9 7 6 ) ，在 葵桑比克罗菲盈( 6 眩o c 自煳脚括辨阳掰6 f 嘲中酋次提纯出熊生长激素。现农，多耱赢等脊椎 囊穆窥鱼类熬生长激素虽酝先嚣技分离筑纯并溱暖了纯学绦梅，对其生爨馋震器箨臻撬遴 以及g h 分泌的调节也有了一个较为全面的认识。 近年来，采用免疫缎臌亿学和亚显微瀚察，穆鱼类g h 细胞准确定像予垂体远端鄣分 的曦酸性缀艨。多数鱼类g 艇懿分离纯豫，一般采霞将惫的藏垂俸匈浆域蒸体乡 培舞懿分 泌液在碱瞧条件下p 壬 = 9 1 0 ) ，经凝驳过滤，离子交换瑟季厅翱反相离效液榻德谱分离，可褥 到嵩纯度的g h 。迄今，融谢蓝鲨( 玲幻对疗始嚣瑚) 、罗# 熟( 帆d c 是阳卅鼢蚪如f f c 榔) 、鑫懿 c 黯印厅琳g 触甚厶心、缝( o 加甜彻p f o ) 、犬麻啥鱼( a 帆哟棚“s 托妇) 、鲠鲡a 卿f f 酗 妇玲、镊太纛睃垒( 国嚣。啷糍矗辫撼耙国、黄姥金捻垒( z 融翮淞矗酝e 群嘲、大鳞丈褰蹬 鱼( 0 嘶棚哟懈。矗姗艇触琊壤辩触) 、大磋洋鲮( 踟砌。硼、蜒鳟( d 眦甜砂c 矗瓣邺璃鼢) 、红犬 麻哈鱼( 0 咖c o 哟嘶c 厅淞腓砌) 、施鲈n 耙d 胁6 ，舰细o ”f c 淞) 、斑点叉尾蛔 m 彬枷p “”c m 觚) 、 弓蘸鱼留埘撅础如固、牙鲆( 脚尊粒自f 盎黟。z 妇摊# ) 、金头甥国 秽淞口封掰汹、缀鲣s 蕊彘s 程疏) 、 孳纛( c 跨蚪够施秽移面弹勰露辫) 、鲈鱼位蹴。觑6 蕊却渊妇女) 辩大西洋鳕8 积酶m 纾精瓣) 等惫 的g h 被分离纯化，这就为研究鱼类g h 的结构与功能赞定了基础( m a g l l c l l i ，“甜，1 9 8 7 ； w a g e r ，“耐，1 9 8 5 ；k a 、a u c h i ，酲耐，1 9 8 6 ；k a 、张z o e ，州口t ，1 9 8 6 ；n o s o ，“口f 。，1 9 8 8 ； 廷赫d 虢a 凇b 甜支，1 9 8 9 ；踩稔转等，1 粥2 ， 9 争5 ；徐斌等，1 9 9 秘。我霄程本镁域醣究中稳黯落 后，仅见陈松林等分离了大鳞大麻哈鱼和荤鱼的g h ，海水趣类也仅见镍斌进行了鲈鱼g h 的分离纯化( 陈松林等，1 9 9 2 ，1 9 9 5 ；徐斌等，1 9 9 8 ) 。 来髫螓孥i 类、鸟类、怒韬：类、两授类、鱼类各个张j | | 嚣多个秘耱静g 王缀结檐已被溺 骥。鱼类生长激素在分子熬釉氨基酸组成上与其它赢等脊椎动物生长激素有较离的同源 性，分子质疑在2 2 k d 左右，由1 7 3 1 9 0 个氨基酸残基组成，亮氨酸、豁氨酸和天冬氨酸 的含量较蕊，色氨酸和鬣甄酸魏含量较骶。一缓结构中含4 个或5 个半胱懿酸，分子内形 残嚣令二酸键，筏或骛，疰链豹一个太环霸个小环。在空麓稳鍪中，a 一螺旋占5 0 ，貉 叠成4 个反向平行的螺旋段，即a ，b ，c ，d 段，在每一区敬之间至少商一个脯氨酸存在。 序列比较裁璃，在生长激索骚囱的羧基端缀旋d 区，氨鏊酸的保守性眈葵它位置熨强，这 一区域的硪求氨基酸埋在灏自蔟内部，作为受体结合位点，同时在维持鬣露质霹级结构中 起熏要作用( d e v l i n ，“口z ，1 9 9 3 ；王伟等，2 0 0 2 ) 。在对镳类g h 进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( a g e ) 分离分析的同辩，发璐数种鱼类存在两种g 形态，翔k a w a 址c 辆等( 1 9 8 6 ) 发骥魏释 大酶嗡鱼g h 分子，g 1 秘g h 1 1 二蠢的分子量部戈2 2 ，0 0 0 k d ，等魄点分鄹为5 ，6 秘6 。o ， 且具有不同的铽基酸缀成和n 一末端残綦，推测可能存在两种编码恭凶。随精，在缝鲡、 大露洋鳝、罗裴叠、甄鳟、澎鲈、自褥、大嚣洋鲤鱼、缝鱼魏瓣鱼等焦中惫歉瑷鸯掰秘形 式的g h i 和i i 的存在( l a w ，“口f ，1 9 9 6 ：f o r b e s ，“日，1 9 9 4 ；r a n d - w e a v e r ，酣以，1 9 9 l ；d u ，甜 藤。，1 9 9 3 ；c l e 撇黼s ，甜藤。，2 0 0 4 ；劳海华等，2 0 0 4 ) 。鸯缀遂试为，缝鳟篷类中g 珏纂鬻疆两 种彤式存在，是在2 5 1 0 0 馘万年前，由溅始褪先中发生凝倍体化事件掰导致豹结果 ( a i l e n d o 嘎硝球，1 9 8 4 ) 。 3 ，2 鱼类生长激素熬翡能 8 0 年代以来，对惫类g 堇生理功髓研究遴震较快。趣类雠最基零蛉生瑕功楚促进 鱼体生长和参与多种健合成代谢作用( 融硒，甜缸，1 9 9 2 ) ；此外，还参与鲑科镦类( c o l l i e ，盯 矗，1 9 8 9 ) 和罗非叠的蠛渗调控并筵进冀海求适应过程；戮及其蠢程滋鱼类冀黪分艇，褒| 激 性腺娄固醇激索的合成及周边代谢中转化为t 3 ，参与应激反应镣多种生理作用( 徐斌 等，1 9 9 7 ) 。 3 。2 。l 促生长裕耀 3 2 1 1 生长激察促进嫩长 赫人研究诞实，将簪、猪葶f 1 人静g h 逶遗腹蓬或飘舞注射、埋攮躐高渗浸泡麓手段给 入惫髂，具有鼹薯的生长促遴作用。壹 i g g s 等( 1 9 7 s ) 爆牛生长激素注射和蠼檀两种方法 对锻大麻哈鱼进行处理，结聚鼹体鱼生长要地对照鱼快得多。人生长激素亦可促进鲫鱼的 生长( 诲竟圣等，】9 9 1 ) 。蠢且，外濠的惫类g h 泻襻其焱诞进鱼类生长瀚传爰。迓每采，基 因工程技术的发髅使得重组a l 的生产变为现实。现己证实，基因工程重组脊椎动物g h 与提缝豹天然g l 吴有弱撰稳送鱼类生长瓣生锈活性；髓垒类蠡骞g h 雳子鱼类生长键进， 具有同源性强、剂量低有利于克服人蜘对照澈噙乳类g h l 入鱼体产生食用凝虑等优点。 强金稔鱼强艄硎s 渤，船旧生长激素滢翱了鲷鱼鞠扩淞瑚淞) 豹生长率( s 戤o ，甜醴， 1 9 8 8 ) 。重组鲑趣生长激素促进了罗非馥的生长( 简清等，1 9 9 9 ) 。重组虫e 鳟生长激素倪避了鲻 鱼 嬲酶弹印自盘z “s ) 的生长率( ，r s a i ，d 蕊，i 9 9 4 ) 。霾缀金枪惫生长激素通过注射、投袋都湿着 促避了革鱼的生长( l 溉靠8 ，1 9 9 5 ) 。不同泉源的生长激素或不同种矮瓣生长激素餐奁不霹 程度上促进了髓类生长。促生长效应依生长激索类别、施用方法和受体鱼种类不同量现一 驰吾 寇蔫异。 动耪生长激素是密脑纛体分泌，潺过激话靶潮腿黢上的受侮来实现箕生物学效应。生 长激素受体主要分布在肝脏细胞膜上，后来在肾脏、心脏和肌肉等缀织的细臌膜上也有发 褒，意味羲生长激素除了蠹接 乍用予骶缨赡的膜受体外，也可嶷接嚣用予其它缀织细胞 ( o l l o w a 弘拼矗，1 9 9 8 ) 。糖滁整钵靛熟生长发育与体肉黉鑫爱的台藏箍鞠箨史，当注射筑 化的生长激索后，去除箍体的鱼又恢复生长，外源生长激素的接缡对鱼体生长表现出补偿 效藏( p i e k 稻f d ，1 9 5 4 ) 。在篷斑液中生长激素含量的变化在l 承l o 铀g ，m l ，注懿终源生长激素导 致受体鱼生长速凌如恢豹潦丽可筢基邋第情况下，煎体内生长激索豹董并没餐达赘| 饱和， 所阻外来的艇长激素就可以继续发挥作佣( d o n a l d s o n ，甜耐，1 9 7 9 ) 。 3 0 + l 。2 生长激素键进鱼炎生长鲍生联爨裁 在硬骨鱼孛，生长激素瓣促生长绍稻主要楚作为灏藩代谢鹃调控子缀佟( h o l l o w 嘞 1 9 9 8 ) ，促进月旨肪更多的分解以作为能源，而使吸收的氨基酸更多的用于生长( j o h n s s o n ，甜猷， 1 9 梦4 ) ；掇麓键辩中蛋鑫旗豹转纯效攀秘纛紧氨基毅熬东乎，键遴黉是曩戆会戏0 渤瘩e 嚣 讲，i 9 7 d ；纛接竣润接懿影韵胰岛素瓣合成耜释赦。生长激素瓣耱炎代落的影确表现在它 可促进鱼类对肝糖原的消耗( l e u l l g ，“脚，1 9 9 1 ) ，如a h s a n 等( 1 9 8 4 ) 报道生长激索倪进胡鲇 动建蕤元贮锯，并箍溅生长激豢诞遴惫类对碳拳讫翕鐾戆秘魇熊力。 关于生长激素提进熬炎生长的生遐穰涮一般认为；( 1 ) 接受生长激索豹鱼食欲增强帮有 更高的食物消耗；( 2 ) 提离了食物转化效率( d o n a l d s o n ，雕据，1 9 7 9 ) 。在食欲增强的情况下， 霉褰釜秘瀵倦搴决定食物吸浚。食皱粒食物羧敢是密臻稳关豹。褰磷究表黉_ 生长激素增杰鬟 了鱼类酶食欲( j o h n s s o n ，酹d z ，1 9 9 4 ) 。馁l s h i 文1 9 9 2 ) 掇道耋组羹苇鲷生长激豢罐稠了菱羊 鲷幼鱼的生长率，而没肖增加食物的消耗。m a c a r i 簿( 1 9 9 4 ) 研究了食物和生长激索两方面 对蕊茨影瘸，续粱表甥接受蓥缝大生长激豢楚瑾戆惫劳没骞蘧藤食蘩漕耗。麓蔫簧逶一致 豹鼹点认为生长激素教誉了鱼类鲍食物转纯效率，瓣低了缮糕系数( 崔宗斌等，1 9 9 5 ；f l l “ 灯f ， 9 9 8 ；浇蹶平等，2 0 0 1 ) 。如i s h i o k a 簿( 1 9 9 2 ) 报道煎组夔羊鲷生长激素处理的蒺羊鲷幼鱼 蠢燮裹懿食糖转豫效率势疆蔫麴量懿增蕊瑟壤霆襄。獬a c 癜等( 1 9 辨) 焱遘接受黧缀天熏长激 豢处理豹实验鱼鲍对照壁有曼蓉赢的食物转化效率鞠蚤自质转化效率，并随着夯4 薰的增艇 而增加。食物的丰度被认为是限制鱼类生酶的主要园子，故在有限的食物下，生长激素对 食蘩转纯效率黪撵豢在繁终讫、工厂纯莽疆中畜罄褥瘸薰要静意义。 g 促遴生长通过直接鞠间接蜀秘方式进行作胬。赢接作露精o h 盎接作鼹予靶缁臆上 的g h 受体，通过g h 相关的信号转导途径来刺激细胞的分化；间接作用指通过诱导产生“促 稚吾 缨臌分裂原”、类胰岛豢生长因子一l ( 1 g f ，l 殊发挥促生长的作用。 豫g h 麓激器始鞍臀缀藏馥有丝分裂燕蕊予蠹接 乍瘸羚，g 鲸大量弱部效应都是出 l g f i 介导的( d a u 曲a d a y ，2 0 0 0 ) 。i g f l 作为g h 的中介体，在调节生长中起核心作用。g h 通 过基分泌旁分泌的方式诱导l g f 】的液达。血清中的l g f i 通过作用予下丘脑和艟藤体，对 g 硎强分泌麓受反馈调繁挎鞠。矗溥串i 锈q 友应了露天生长中删豹终霸。邈戴，授瓣盘演 i g f 。i 含量，怒检测g h 正常与否的最销价德的指标。o 受体缺陷同时导致循环罨统中i g f i 禽鳖的显着下降，说明g l 慰l g f - l 的诱导瞧需要g 鞭与其受体的缝台。在硬嚣敷孛，g h 的 生长促进襻耀秘渗透调节俸蠲在一定猩度上氇是邋遵i g 卜| 发挥髂瘸的。蔡食的镊天马硷鱼 趣浆中尽管 g h 水平提高，但怒，肝脏中的i g f im r n a 水平降低，。导致鱼的擞长受到抑制 蹦昀黝冬娃娃，1 9 9 4 ) e g h 键擞长效应表聪为键避缨胞代谢( 质) 窝键避缓藤分忧( 爨) 。穰藐够潮带缩您肉骚 豢、糖类、鼹白恭】矿物质等的代谢。g h 增加蛋白合成，并延缓鬻自降解，表现出间断的促 遴簧鑫合成佟屠( b r e i e 毛1 9 9 鳓。g 王 刺激多静髓体细藏黪分化，分能黪绷麓受到l 翎w 浆作用， 进行有丝分裂，譬致缨藏数量豹增殖( g o n ，靠群z ，l 粥5 ) 。蠲g h 她理大西洋鲑及虹鳟，箕黎 舰耗氧量( m 0 2 ) 水平明显比未处理的商( s o d d i k i ，p f 髓z ，1 9 9 5 ，1 9 9 6 ) ；转g h 基因的大西洋鲑也 较 转基因大嚣洋鲑鲍鬻矮糕氡量为舞( c o 娃，靠蕊，2 0 0 0 ) 。g h # 挺避掌甄糕簸爨夔蟥热， 瑟嚣静壹裁甄薰，反应了g h 诞遘垒活力盼提高。 3 。2 ，2 渗遴调节作用 耐盐惶盼获褥对于，“簸牲鱼类，酶尉燕对予溯海产拜熬溷辩瞧鱼类，楚一个卡分重簧 的发育条件。近年来，随糟对镌类生长激索研究的深入，人们发现生长激素不仅能加快受 侮叠的生长，藤且对海溺洄游性鲑科镰类渗透压调节鸯重要终耀( s 熊a m 。t o ，档藤，1 9 9 3 ； b j 6 m s s o n ，1 9 9 7 ) 。这种论断寒源予生长激素键避了缝秘爱类对海永的逶瘟能力。茭主要豹 生理机制是生长激素能提高n a + k + a t p 酶的活性和氯化物细胞( c h l o r i d ec e l l ) 的数日，同时抑 割鲢科鱼类扶淡东至海水迂移时辑引怒戆焱浆渗透瞧秘裹子浓艘戆摄篱( b o e 蜢甜掰，1 9 9 0 ； 璜s 执l ，掰，1 9 9 j ；m c c o 舶i c k ，1 9 ”，1 9 9 6 ) 。勇努，畜可能生长激素逶道提避巍浆巾受质蜉 和l g f i 含爨的增加而德进鲣科鱼类对海水的适应( s a k 籼o ，“n ，1 9 9 3 ) 。在幼鲑向两岁鲑 焦转交期，镶环系统中瓣诲多激素水平会发生变讫，健大量款磷究裘明，冀燕霜鲢鱼海承 适纛褴有关熬激素仅包括：g 辩、站p 、皮质醇以及译状腺激豢( s 8 l a m 啦o ，p 醺，1 9 9 3 ) 。这 四种激素的捆互作用对洞游健鱼类耐盐性的获得起决定作用，其中g h i g f 轴起核心作用。 s # i 磊 觋已证明，猪g h 绘入鱼体可增加鳟和大鹣洋鲑幼熊在海水中的存漓率。g h 熊增强红大黪 蹬鱼稻镊大麻哈鱼在海东中静低渗调控力。m a d s e n ( 1 争粥) 爱羊生长激素、友廉酶、羊生 长激素和皮质醵混台分别处理鳟类，发现在淡水中这三缱处理都提高了n a + k + a 1 p 酶的活 慷秘氧化物细胞的数蜀和体积，其中以羊生长激豢觏皮质醇混合缀效果最为鼹蓑；在转移 剜海东螽，掰骞激素照瑷缀敷浆渗遗憾和离子调节熊力臻显着撼离，来处理的对然缢部分 个体死亡，瓶羊生长激豢、羊生长激素和皮质醇混合处瑾组没发生个体死亡。c l a r k e 等( 1 9 7 7 ) 磅兖了罗非氇生长激素对大麻路鱼幼惫运应海水的佟照，将幼焦放入人工海农中，注射生 长激素叠载斑浆镪离子浓度袭照低子未注射缀，瓣拜尊述观察饕镦大繇洽鱼袭视次入海酒游 过程中，其生长激素细胞增生、肥大、分泌活动徽旺盛。在淡水中，羊生长激索提高了鳞 n 矗 一k + a t p 鹣的活性( s e 耐i 魅，靠g f 。，1 9 9 6 ；m a d s e 琢1 9 9 0 ；b o e 娃鲋蘸，1 9 9 4 ) 。转鞋燃( 1 9 9 4 ) 擐遵重组甄鳟生长激素掩离了鲑n 矿联+ 斛p 骜戆活性和盐的辩受饿。萁效率魄苹生长激豢 商出l o 倍。对于鳗鲡科和鲑科鱼类，从淡水转入海水的逐渐邋应过程中会弓f 起高水平 n 矿- k + 甜p 瓣滤性提衰( s a 塔峨群辟疋1 9 7 5 ；f o l m 甄彩菔，l 卯9 ) 。 在渗透愿调节方莨，黛故激素秘骥魏素互相接拣。催襞素蠢璐予淡痰遣疯，减少膜鹣 可渗透性( h i r a n o ，1 9 9 1 ) 。低渗调节能力越强时，血浆生长激素和皮质醇水平就越高，而胤 浆蕊嚣索煲越低( 均u n 蹦耐，】9 8 黟。m 8 拳始窝b 雌( 1 9 9 动舅生陡激豢、镤嚣素、生长激 素酾催乳豢混合分剐室壤鳟类，发现蕊乳素臻显限锱了生长激素霉l 起薛n 玉贮a 转酶活魏 的提高。 嚣藤，生长激素霹鬣类渗透调节戆影韵霞袋予鼹鲮醛鱼类夔磷炎，它楚黉黠羹宅鱼类 有炎 疆影响，有待迸一疹研究。 3 2 3g h 同兔疫系统的关系 翔等人酌磷究表弱，g 鲢移j 潜0 熊够裁激螓乳动物臻中性粒纲脆蕊分泌，并且链够增 强吞噬细胞的褥噬作用( f u ，订d ，1 9 9 1 ) 。可见g h 对哺乳动物的免痰系统有一定的调节作用。 在曦墨i 动貔中，燕抵拭压力襄系统疾瘸的过程中，瓣缝内分泌系绞舔兔疫系绕阕懿交互馋 掰是逐要熬，联 歪是这两大系统茇生联系的中奔麓。 吞噬细胞在髓类的免疫殿答中起煎要作用。体外培弊的乌颊海鲷( s 却r 淞日“m m ) 中， g l 超羞吞噬纲髓激活霹予戆传餍。g 辩剩激器噬缨黢产生大量分支冀状赞是、膜皱褪，堰 翻了缓麓分布暑蛩缨脆大小，疆饲镁裁键赢棒卦培莠的吞糕缨骢豹吞噬指数裁熊力g o s e p ，蹦 n ，1 9 9 7 ) 。在揭鳟( 鼢加。护 f 嘲从淡水转移到海水的过程中，血浆中的g h 水平同岙噬细胞 的吞噬活性存在不确定的楣关性( m a 挖，“娃f ，1 9 9 5 ) 。在鸟颊海鳞波类红鳃煦、髓穗细胞以 及漭墨鲡稳中都发袋了g 受蒋驹存在( e 采d u e h g i n e r ，8 拉；，1 9 9 5 ) 。 大量的研究表明，姆别鼹建立了切除腻垂体的动物模型作为辅助研究工鼷屠，g h 在哺 乳动物和鱼类憋兔疫系绫中均起着熏簧l 乍爆。但是，仍然缺乏g 嶷拔作用于熊疫系统的极 铡翁磅究。霾蓠耧囱予认为g l 作菇合成饯落和压力调节索佟礤予免疫继藏，黼不建矗菝调 节免疫系绕( d o r s h k i n d ，“打，2 0 0 0 ) 。 3 2 4g 联鬻垒类生麓生理戆关系 c m 同惫类生殖生璞的关系犬体包牾以下几个方面；俘随鱼的性成熟，血浆中g h 水平 有较明显的提高；性腺类固醵激素处瑷可擎l 起鱼血浆中g h 水平的提鼹；e 酲够刺激性腺 类霹醇激豢豹分泌( 王树瘘等，2 0 0 匐。 以不简种类的鱼为磺究对象，发现它们在性成熟过程中，血浆中c 黼的水平都肖显着提 高，造成这幂孛现象的原因，捺测可能怒盎予性腺类阑酶激素的分泌壹接的绒闻接的影嫡 盘浆孛g 糍搀瘩乎。跨嚣动物中，往骤炭黉簿溺肉雯的生长调节因子( 毽括g 薹| ， g f 国发生 栩互作用，从而产生影响生长的效应。雌激索可抑制切除卵巢的大鼠的生长，同时降低血 浆中i g f 1 的瘩平耱肝脏中l a 事一lm r n a 的术平，脑蘩体中酶g 含撼也+ 下降，褥艇袋中的g | 承乎提高。雄褴囊激素磷增热大氯豹体熏，弱辩增耀纛浆中豹i q f 零；l 联琏中l g 孓lm 鼢淑 的水平，另外，学致血浆中g h 水平降低而脑垂体中g h 水平提离。这些结果液明在雄性中 g 戮e 漤- l 辘受至i 正讽控，露在雌性中，g 班g f - l 辘剿受戮受调控国。漱i ，拼盛，1 9 9 国。硬萤 鱼中没有发糯犍羽对g 辩释簸翡影嫡，但怒，牲豫装溷薛激素奁内分泌永乎辩g 强殓释敲邋 行调节。经过甲麟睾酮( m t ) 预处理的罗非鱼，能增强垂体g h 细胞对生长激索释放激素 ( g h 羟h ) 以及程姨艨驿放激素( 娃璎) 鼹痰签( m e l a m e d ，甜藤，l9 9 s ) 。髑e 2 灌喂蛏鳟，发现生 长季窜素失去了对g 静赫潮作爰( h o l o w a y ，甜耐，1 9 9 乃。巍杂交罗菲鱼( 0 掰孙出琳 x 0 口“r p 黼) 中，a h r h 对o h 释放的刺激作用，仅在嗣m t 进行前处理之后才其有( m e l 锄e d ， 矗越。，l9 9 5 ) 。 u g g a r d 等人( k g g a r d ，穰搿，l9 9 鲍安验发明，肇蕊等雄性激索对金惫藏耋 髂分泌g 差瓣影螭发生在潦嚣表达永平。羟i i e y 等( 戳l c v ，“耐，2 0 0 2 ) 瘸m 对罗菲鱼进行1 4 7 d 的处理，提高了脑垂体a hm r n a ，黼不是血浆中g i 的水平。遮似乎可以对“为什么m t 葶露二氢睾翳圆 1 ) 酶处璞没有$ 起甄鳟囊装g 并瘩警瓣鬟藏”进嚣解器：m t 耪渊在基髫 表达求平德遴霉传中g 差m r n a 豹转秉，两纛浆中g 水平没骞疆怒最强力g 辩潦除率静褪应 提高。 嗣襻，g 嚣对磺嚣蕊毫至激豢戆分泌遣有一定翁枣j 激 掌麓。爱重缀融投壤甄鳟，哥弓l 超 循环中1 7 $ 一雌二二簿( e 2 ) 水平的提高( d a n z m a n n ，鲋烈，j 9 9 0 ) 。g h 和往往稼激素母t h ) 的联台 作用能加速体辨培养的金鱼( ( 冶r 矾s f m 鲥m ，淞) 帮斑点海缝( c 咖c 如雌船8 6 “协淞) 卵巢f j 勺e 2 的合成( v a i ld e r 鼢a a k ，e rn ，1 9 9 0 ；s i n 曲，甜口，1 9 9 3 ) 。在雌性马苏大马哈鱼( o c o ， ”c 础 揪塔。封) 的卵黄生成避糕中，血清中g h 水平在e 2 秘卵鼹缀自愿水平提菇前迅速提黼两倍两 达到最高点，暗示g 通过e 2 刺激露黄蛋自漾静生成( f u k a d 8 ，甜耐，2