（外科学专业论文）胃癌中hif1α、bcl2和bax的表达及临床意义.pdf

目录 ! y 1 7 6 9 0 4 9 i p l l l l f lj i f l l f r i i r l l ri i jl i l t i l l l l l l l l l l l 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要2 二、英文缩略语3 三、论文 前言4 4日u 舌 实验材料5 实验方法6 实验结果8 讨论1 4 结论1 6 四、本研究创新性的自我评价1 7 五、参考文献1 8 六、附录 综述( 含参考文献) 2 0 在学期间科研成绩2 7 致谢2 8 个人简介2 9 h i f 1 a 在胃癌中的表达率( 7 4 0 7 ) 明显高于正常胃组织( 0 ) ，p 0 0 1 ； h i f 1 a 的表达与胃癌t n m 分期、肿瘤浸润深度和淋巴结转移显著相关，p 0 0 5 。 胃癌中b c l 2 高表达( 6 4 8 ) ，且组织学分级高( p = 0 0 3 5 ) 、无淋巴转移( p = 0 0 3 2 ) 和临床分期高( p = 0 0 0 9 ) 时升高。b a x 在正常胃组织中表达率( 6 0 ) 明显高于胃癌 组织( 4 0 7 ) 。胃癌组织中h i f 1 a 阳性组的细胞凋亡率明显低于阴性组，p 0 0 5 。胃 癌组织中h i f 1 a 与b c l - 2 的表达呈正相关( r = 0 2 6 6 ，p 0 0 5 ) ，而与b a x 的表达呈负相 关( r = 0 2 5 3 ，p 0 0 5 ) 。 结论 h i f 1 a 和b c l 2 、b a x 在胃癌的发生发展中起重要作用，联合检测可能作为 判断胃癌恶性程度和预后的指标。 关键词 h i f 1 a ；b c l 2 ；b a ) 【；胃癌：凋亡 英文 e x p r e s s i o na n ds i g n i f i c a n c e “h i f 1 a 、b c l2a n dbol d c i - za n1 5 a ，xh l 一、 ，x j 1jj1 l ni j a s t r l cla n c e r o b j e c t i v e t os t u d yt h ee x p r e s s i o no fh i f la 、b d - 2a n db a xi ng a s t r i cc a n c e ra n dn l e i r r e l a t i o n s h i pw i t ht u m o ra n g i o g e n e s i s ，c l i n i c o p a t h o l o g i cf e a t u r ea n dp r o g n o s i s m e t h o d i m m u n o h i s t o c h e m i c a lt e c h n i q u ew a su s e dt od e t e c tt h ee x p r e s s i o no fh i f - l a 、 b c l 一2a n db a xi n5 4c a s e so fg a s t r i cc a n c e r t u n e l p o s i t i v ec e l l sw e r ec o u n t e di n t h e s es a m p l e sa sa p o p t o s i si n d e x ( a d r e s u l t t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t eo fh i f - la i ng a s t r i cc a n c e r ( 7 4 0 7 ) w a ss i g n i f i c a n t l y h i g h e rt h a nt h a ti nn o r m a lg a s t r i ct i s s u e ( 0 ) ，p 0 01 ；t h ee x p r e s s i o no fh i f - l a i n g a s t r i c c a n c e l w a ss i g n i f i c a n t l ya s s o c i a t e d 丽mt n ms t a g e ，i n v a s i v ed e p t ha n d l y m p h - n o d em e t a s t a s i s ，p 0 0 5 ；t h ee x p r e s s i o no fb c l - 2i ng a s t r i cc a n c e r sw a sh i g h ( 6 4 8 ) ，a n di n c r e a s e dw i t hh i s t o l o g i c a lc l a s s ( p = o 0 3 5 ) ，c l i n i c a ls t a g e s ( p ：o 0 0 9 ) a n d o c c u r r i n go fl y m p h a t i c ( p = 0 0 3 2 ) t h ea ii nh i f - 1 a ( + ) t u m o r sw a ss i g n i f i c a n t l yl o w e r t h a nt h a ti nh i f - l a ( 一) ( p o 0 5 ) t h e r ew a sap o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e ne x p r e s s i o no f h i f - 1a a n db c l 一2 ( r = 0 2 6 6 ，p o 0 5 ) a n dan e g a t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e ne x p r e s s i o no f h i f 1 a a n db a x ( r = 0 2 5 3 ，p 0 0 5 ) co n c l u s i o n h i f - la 、b c l 一2a n db a xp l a yt h ev e r yi m p o r t a n tr o l ei n t h ed e v e l o p m e n ti ng a s t r i c c a n c e r ，c o u l db eaf a c t o ri nd i a g n o s i so fg a s t r i cc a n c e ra n de s t i m a t i o no f p r o g n o s i s k e y w o r d s h i f - l a ；b c l 一2 ；b a x ；g a s t r i cc a n c e r ；a p o p t o s i s 2 英文缩略语 缩略语英文全称 中文全称 h i f 1 h y p o x i a - i n d u e i b l ef - a c t o r - 1 缺氧诱导因子 h r e h y p o x i ar e s p o n s ee l e m e n t 低氧反应元件 a i a p o p t o s i si n d e x 凋亡指数 a i f a p o p t o s i s i n d u c i b l ef a c t o r 凋亡诱导因子 b n i p 3b c l 2 a d e n o v i r u se 1b19 k d a i n t e r a c t i n gp r o t e i n 3b c l - 2 腺病毒e i b 1 9 k d 结合蛋白3 3 论文 胃癌中h i f 1 a 、b c l 2 和b a x 的表达及临床意义 刖罱 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，虽然综合治疗使得胃癌的五年生存率有所改 善，但其预后仍不理想，五年生存率总体来说仍徘徊在2 0 - 3 0 之间。肿瘤侵 袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因。细胞凋亡异常在人体恶性肿瘤的发病学上占 非常重要的地位。 细胞凋亡是一种受基因控制的、单一的细胞自灭过程，是有别于细胞坏死的细 胞死亡类型。在肿瘤的发生过程中，正常的细胞凋亡过程受到抑制，细胞发生异 常增殖，从而导致肿瘤的发生。恶性肿瘤生长过程中，其快速的生长和局部血管 结构的不完整，常导致局部组织反复出现低氧。组织内氧分压和低氧标志物碳酸 酐酶i x ( c a i x ) t 1 】的检测，均已证实肿瘤内部存在着低氧。缺氧一方面抑制了细胞 分裂甚至导致细胞死亡，另一方面诱导细胞产生适应性反应以帮助细胞继续生存。 缺氧诱导因子一l a ( h y p o x i a - i n d u c i b l ef a c t o r - 1 h i f la ) 是新近发现的一种转录因 子，研究发现它在多种恶性肿瘤中可表达、并与肿瘤血管生成、肿瘤细胞的增殖、 凋亡等过程密切相关。 h i f 1 是由h 1 a 和h i f 1 p 两个亚基组成的异二聚体转录因子，两者都属于碱 性螺旋环螺旋( b a s i ch e l i x 1 0 0 p h e l i x ，b h l h ) p e r - 芳烃受体核转运蛋( a r y l h y d r o c a r b o nr e c e p t o rn u c l e a rt r a n s l o c a t o r ，a r n t ) s i m ( p a s ) 转录因子家族成员。 h i f 1 a 是h i f 1 所特有的，h i f 1 p 与a r n t 同源【2 1 。h i f 1 是氧感受和缺氧信号转导 通路中的一个关键成分，在缺氧适应性应答中，h i f 1 发挥了重要的转录调节功 能。h i f 1 a 氨基末端有b h l h 和p a s 同源区，是h i f 1 a 与其靶基因上特异d n a 的 结合区。h i f 1 a 羧基端有两个相对独立的反式激活域( t r a n s a c t i v a t i o nd o m a i n ，t a d ) 分别称为位于氨基酸残基5 3 7 - - 5 7 5n 端反式 激活域俏t e r m i n a lt r a n s a c t i v a t i o nd o m a i n ，n t a d ) 及位于氨基酸残基7 8 6 - 8 2 6 的c 端反式激活域( c t e r m i n a lt r a n s a c t i v a t i o nd o m a i n ，c t a d ) 。c t a d 和 4 n t a d 之间( 氨基酸残基5 7 6 7 8 5 ) 有一个抑制结构域( i n h i b i t o 叫d o m a i n ，i d ) ，抑 制常氧下h i f 1 a 的转录激活。功能分析显示，经缺氧处理后，n t a d 和c t a d 的 活性均可以增强，但由于n t a d 和o d d 有重叠，其转录活性的增强很大程度上归 因于h i f l a 蛋白的稳定性的增加。因此，h i f 1 a 对缺氧更具有敏感性。h i f 1 a 肽链由8 2 6 个氨基酸残基组成，是唯一的氧调节亚单位，决定h i f 1 的活性。 b c l 2 基因家族是凋亡信号下游调节的主要目标。目前普遍认为，b c l 2 高表达 可以抑制细胞凋亡，它可通过抵抗多种形式的细胞死亡，延长细胞寿命，导致细 胞数目增加。在某些肿瘤细胞中，b d 2 基因表达上调，使肿瘤细胞逃逸死亡或寿 命延长【3 ，4 】，表明b c l 2 基因与肿瘤的发生密切相关。b a x 是b c l 2 家族成员之一， 它不但可以拮抗b c l 2 的凋亡抑制作用，而且还可直接促进细胞的凋亡。b a x 大量 表达时一方面与b c l - 2 蛋白形成异二聚体而加速细胞死亡，另一方面b a x 形成的二 聚体有促进细胞凋亡作用【5 1 。抗凋亡基因b c l 2 与促凋亡基因b a ) 【之间的失衡是肿 瘤发生的机制之一嘲 已有学者证实h i f 1 a 在肝癌、乳腺癌、脑肿瘤等多种肿瘤组织中表达并调节 其生物学行为【刀。但h i f 1 a 在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系却 鲜有报道，胃癌中缺氧与凋亡的相互关系还不是很清楚。因此，本研究采用免疫 组织化学法，检测h i f 1 a 、b c l 2 和b 瓢在胃癌中的表达，探讨它们与胃癌肿瘤 生物学行为的关系及三者之间的相关性，为临床上进一步了解胃癌的生物学行为、 判断预后提供帮助。 实验材料 一、研究对象 2 0 0 8 年1 0 月至2 0 0 9 年1 0 月手术切除，病理证实为腺癌，临床病理及随访 资料齐全的胃癌蜡块标本5 4 例，术前均未行化疗或放疗。男3 7 例，女1 7 例；年 龄3 8 7 8 岁；肿瘤的原发灶大小、深度( t ) 、淋巴结转移( n ) 由病理确定，远 处转移( m ) 由病理学和临床确定。其中肿瘤直径 5 c m3 7 例，芝5 c m1 7 例；肿 瘤浸润深度在浆膜下者1 5 例，浸透浆膜者3 9 例；组织学分型：高分化1 9 例，中 分化1 7 例，低分化1 8 例；局部淋巴结无转移2 9 例，有转移2 5 例；远隔无转移 5 4 2 例，有转移1 2 例。根椐1 9 9 7 年国际抗癌联盟( i u c c ) 制定的t n m 分期标准 进行临床分期，i 期1 2 例，i i 期1 4 例，i i i 期1 6 例，1 2 例。另取正常胃组织 1 5 例作对照，标本取自胃溃疡或十二指肠溃疡手术标本中正常的胃组织，并经病 理观察证实且排除重度不典型增生。男1 0 例，女5 例，年龄4 4 - 7 7 岁。 二、相关分子生物学试剂 浓缩型兔抗人h i f 1 a 单克隆抗体( 北京中山生物制品有限公司) 浓缩型b d 2 鼠抗人单克隆抗体( 福州市迈新生物技术开发公司) b a x 鼠抗人单克隆抗体( 福州市迈新生物技术开发公司) s p 试剂盒( 福州市迈新生物技术开发公司) d a b 显色试剂盒( 福州市迈新生物技术开发公司) 细胞凋亡检测试剂盒( 福州市迈新生物技术开发公司) 免疫组织化学染色所需的常规试剂：枸橼酸盐缓冲液( 0 0 1 m o l 1p h 6 0 ) 、磷 酸氢二钠、氯化钠、二甲苯、乙醇、过氧化氢、苏木素等由中国医科大学盛京医 院病理科提供。 三、主要仪器 显微镜( o l y m p u sb x 4 1 ) 显微数码照相机( o l y m p u sb x 4 0 f 4 ) 普通实验室冰箱、切片机、烤片机、高压锅、温育箱、湿盒、恒温振荡器等 由中国医科大学盛京医院病理科提供。 实验方法 一、标本的处理 所有的标本都经1 0 福尔马林固定，常规石蜡包埋，制成标蜡块。按4 微米切 片，选三张无缺损的进行免疫组化染色。 二、免疫组织化学法 采用s p 法： ( 一) 载玻片用a p e s 进行防脱片处理 6 ( 二) 将4 微米厚的切片放在6 0 _ _ 6 5 摄氏度的温箱中烤片3 肛巧0 分钟 ( 三) 切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，流水洗1 0 分钟，p b s 洗3 次( 每 次3 分钟) ( 四) 3 h 2 0 2 溶液1 0 分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性，p b s 液洗3 次( 每次3 分钟) ( 五) 切片置入0 0 1 m ，p h 6 0 枸橼酸盐修复液中9 2 摄氏度以上热处理1 5 分 钟自然冷却至室温，p b s 洗3 次( 每次3 分钟) 擦干 ( 六) 用1 0 山羊血清封闭液封闭2 0 分钟，以减少非特异性染色 ( 七) 清除多余的血清，一抗( h i f 1 a 、b c l 2 和b a x ) 4 摄氏度冰箱过夜后 p b s 冲洗3 次( 每次3 分钟) ( k ) 加入生物素化二抗，室温下放置2 0 分钟，p b s 洗3 次( 每次3 分钟) ( 九) 室温下放置2 0 分钟，p b s 洗3 次( 每次3 分钟) ( - t - ) d a b 显色3 8 分钟，水流冲洗1 0 分钟后苏木素复染细胞核 ( 十一) 常规脱水，透明，中性树胶封片。所用p b s 为0 1 m p h 7 4 ( 十二) 用已知阳性的乳腺癌切片作为阳性对照，p b s 缓冲液代替一抗作阴性对 照。 三、凋亡的检测 凋亡细胞的t u n e l 检测及判断：细胞核中有棕黄色颗粒显示者为阳性细胞， 即凋亡细胞。每张切片选取1 0 个高倍视野( x 4 0 0 ) ，计数1 0 0 0 个细胞中的阳性细 胞数，计算凋亡指数( 即每1 0 0 个细胞中t u n e l 阳性细胞所占的百分比) 。 四、结果判断 h i f 1 a 阳性表达部位主要在胞核，而b c l 2 和b a x 表达阳性染色主要定位于 胃癌细胞胞浆中，为粗细不一的棕黄色颗粒。先于低倍镜下观察，排除肿瘤坏死 出血区及边缘反应区，于肿瘤内染色相对密集区选取5 个视野分别进行细胞记数， 高倍镜下进行观察，以阳性细胞数占同类记数细胞的百分比为阳性细胞率。阴性 ( ) ：阳性细胞率 5 0 。 7 五统计学分析 采用s p s s1 3 0 软件包进行统计分析。两组率的比较用f 检验，均数间比较 用t 检验，各指标间的相关性研究采用k e n d m l 等级相关检验分析。各检验方法皆 以p 0 0 5 为差异显著标准。 实验结果 一、h i f 1 仅在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系 h i f 1 a 阳性表达的黄色颗粒或棕黄色颗粒见于细胞核及胞浆中，但大多数位 于细胞核，正常胃组织中未见h i f 1 a 的阳性表达( 图1 ) 。本组5 4 例胃癌患者中 ( 一) 1 4 例，( + ) 8 例，( + + ) 1 1 例，( + + + ) 2 1 例，总阳性表达率为7 4 0 7 ( 4 0 5 4 ) 。h i f 1 a 在胃癌中的表达明显高于胃正常组织，差别有统计学意义 o o o 。h i f 1 a 在胃癌不同分期( p o 0 5 ) ，不同的浸润深度( p o 0 1 ) ，及是否有 淋巴结转移( p o 0 5 ) ，详见表l 。 8 表1 ，h t f 1 a 在胃癌中的表达与临床病理因素的关系。a ：p 0 0 5 ；b - p 0 0 1 9 a b 图l ，h i f l a 在胃癌组织及正常胃组织中的表达( 幸1 0 0 ) ：a 在胃癌组织中呈 阳性表达：b 在胃正常组织中呈阴性表达。 l o 二、b c l 2 在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系 b c l 2 阳性产物主要定位于胃癌细胞胞浆中，为棕黄色颗粒，在胃癌组织中高 表达，而在正常胃组织中低表达( 1 52 ) 。b c l 2 在5 4 例胃癌组织中有3 5 例呈阳性 表达，其中( + ) 1 8 例，( + + ) 1 0 例，( + + + ) 7 例，阳性率为6 4 8 。正常 胃组织b e l 2 阳性表达率为2 6 7 。b c l 。2 在胃癌中的表达明显高于正常胃组织，二 者差别有显著的统计学意义，且表达率在组织学分级高( p = o 0 3 5 ) 、无淋巴转移 ( p = 0 0 3 2 ) 和临床分期高( p = o 0 0 9 ) 时升高，差异具有显著的统计学意义，见表 2 。 表2 ，b c l 2 在胃癌中的表达与临床病理因素的关系 a b 图2 ，b c l 一2 在胃癌组织及正常胃组织中的表达( * 1 0 0 ) - a 在胃癌组织中呈阳 性表达；b 正常胃组织中呈阴性表达。 1 2 三、b a x 在胃癌组织中的表达 b a x 阳性产物主要定位于细胞胞浆中( 图3 ) 。5 4 例胃癌组织中有2 2 例b a x 呈 阳性表达，表达率为4 0 7 ，正常胃组织中有9 例b a x 阳性表达，表达率为6 0 ， 明显高于胃癌组织中b a x 的阳性率，二者相比有统计学意义( p o 0 5 ) 四、h i f 1 a 与b c l 2 ，b a x 在胃癌组织中表达的相互关系 经k e n d a l l 等级相关检验显示，胃癌组织中h i f 1 a 与b c l 2 的表达呈正相关( r = 0 2 6 6 ，p 0 0 5 ) ，而h i f 1 a 与b a x 的表达呈负相关( r = 一0 2 5 3 ，p 0 0 5 ) 。详见表3 。 五、凋亡指数( a i ) 胃癌组织中h i f 1 a 阳性者凋亡指数小于h i f 1 a 阴性者，二者相比有统计学 意义( p 0 0 1 ) ，见表4 。 表3h i f 1a 与b c l - 2 ( r = 0 2 6 6p 0 0 5 ) 及其与b a x ( r = 0 2 5 3p 0 0 5 ) 在胃癌组织 中的表达及相关性 1 3 表4 ，h i f - l a 对胃癌组织细胞凋亡的影响( a i 以平均数4 - 标准差表示) 图3 ，b a x 在胃癌组织中的表达( * 1 0 0 ) 讨论 细胞凋亡是一种受基因控制的、有别于细胞坏死的细胞死亡类型。在肿瘤的 发生过程中，正常的细胞凋亡过程受到抑制，细胞发生异常增殖，其快速的生长 和局部血管结构的不完整，常导致局部组织反复出现低氧。缺氧一方面抑制了细 胞分裂甚至导致细胞死亡，另一方面诱导细胞产生适应性反应以帮助细胞继续生 存。缺氧诱导因子1 ( h y p o x i a i n d u c i b l ef a c t o r - 1 ，h i f 1 ) 是一种转录激活因子，是 由h i f 1 a 及h i f 1 b 亚单位构成的异二聚体【3 】，h i f 1 a 对缺氧更具有敏感性。 h i f 1 a 肽链由8 2 6 个氨基酸残基组成，是唯一的氧调节亚单位，决定h i f 1 的活 性。h i f 1 a 的n 末端，包括b h l h 结构域和p a s 结构域，二者共同提供了与亚 1 4 单位( h i f 1 d ) 形成二倍化蛋白的功能界面，同时两个亚单位p a s 区域的结合完成 了d n a 连接区，称为低氧反应元件( h y p o x i ar e s p o n s ee l e m e n t ，h r e ) ，与d n a 的 结合、转录及激活有判9 1 。有研究表明h i f 1 a 表达水平与肿瘤患者的预后呈负相 关【1 0 1 。b c l 2 基因家族是凋亡信号下游调节的主要目标。在某些肿瘤细胞中，b c l 2 基因表达上调，使肿瘤细胞逃逸死亡或寿命延长【1 1 , 1 2 】。b a x 是b c l 2 家族成员之一， 它不但可以拮抗b c l 2 的凋亡抑制作用，而且还可直接促进细胞的凋亡。b a x 大量 表达时一方面与b c l 2 蛋白形成异二聚体而加速细胞死亡，另一方面b a x 形成的 二聚体有促进细胞凋亡作用。因此人们认为在凋亡刺激物作用后，抗凋亡基因b c l 2 与促凋亡基因b a x 之间的失衡是肿瘤发生的机制之一【”】 肿瘤的发生与控制细胞增殖的癌基因的过度表达有关，也与抑制凋亡的基因 高表达及诱导细胞凋亡的抗癌基因变异失活有关【1 4 1 。h i f 1 a 能通过结合下游基因 的低氧反应元件增加下游基因的表达，在调节机体或者细胞对缺氧的反应中起关 键作用。h i f 1 a 的下游基因有促细胞增殖凋亡基因、促血管生成基因、促能量代 谢基因和血管生成基因等【l5 1 。b c l 2 腺病毒e 1 b1 9 k d 结合蛋白3 ( b c l 2 a d e n o v i r u s e 1 b1 9k d a - i n t e r a c t i n gp r o t e i n3 ，b n i p 3 ) 是b c l 2 凋亡家族的前凋亡成员，它在启 动子部分包含了一个h r e ，在慢性低氧状态下b n i p 3 表达活跃，并依赖于h i f 1 。 因此当癌细胞内因缺氧导致h i f 1 增加时，b n i p 3 表达水平增高，其下调b a x 等 促凋亡蛋白，使得b a x b c l 2 值降低，这将导致线粒体内细胞色素c 以及凋亡诱导 因子( a p o p t o s i s i n d u c i b l ef a c t o r ，a i f ) 等的释放减少，凋亡蛋白酶c a s p a s e s 的激活 受到抑制而抑制凋亡【1 6 1 ；h i f 1 的过表达还可能上调b c l 2 ，并且在b d 2 的下游阻 断半胱氨酸蛋白酶c a s p a s e - 3 和c a s p a s e - 7 凋亡调节途径，从而抑制癌细胞凋亡。 基因研究表明对于敲除了h i f 1 a 的胚胎干细胞不能发展为实体瘤。对人胰腺癌细 胞的凋亡研究发现，高表达h i f 1 a 的肿瘤细胞的凋亡率明显低于不表达h i f 1 a 的细胞株，h i f 1 a 可能与抑制细胞的凋亡，促进肿瘤的增长有判r 7 1 。本组实验证 实h i f 1 a 主要表达于胞核，胞浆也有表达，肿瘤坏死明显的区域和肿瘤浸润的边 缘h i f 1 a 表达明显增多，周围正常组织无h i f 1 a 的表达，且随着h i f 1 a 增加， 胃癌细胞的凋亡率降低( p o 0 1 ) ，b c l 2 表达强度增强( p 0 0 5 ) ，b a x 表达强 度降低( p o 0 5 ) ，提示h i f 1 a 的抑制肿瘤细胞凋亡的机制可能与其能够上调b c l 1 5 2 基因及下调促凋亡基因b a x 表达有关。这与上述结论相符。 也有一些学者发现h i f 1 同样可以通过上调促凋亡蛋白b a x 的转录水平，使 其活化【1 8 】，降低细胞增殖活性，促进凋亡1 1 9 】。可见h i f 1 a 在细胞凋亡过程中的作 用十分复杂。为了解释这一现象，s u z u k i t 2 0 】指出h i f 1 a 在抑制或促进凋亡过程中 表现出两种不同的形式：磷酸化的h i f 1 a 和去磷酸化的h i f 1 a 。当缺氧程度并不 十分严重、时间不是很长时，h i f 1 a 蛋白变得稳定并磷酸化，与h i f 1 p 形成异二 聚体。转录调节其下游基因如血管内皮生长因子、糖酵解酶、糖转运蛋白等，这 些产物增强了组织细胞生存能力，减少了低氧刺激的细胞凋亡作用。然而在缺氧 情况加重并时间延长时h i f 1 a 则以去磷酸化的形式出现，与p 5 3 结合，稳定p 5 3 的表达。p 5 3 则可提高b c l 2 家族中促凋亡蛋白b a x 的表达。然而人类肿瘤中约有 5 0 存在突变的p 5 3 基因，在突变的p 5 3 基因细胞中h i f 1 a 并不能和其结合发挥 促凋亡特性，因此h i f 1 a 与p 5 3 结合发挥促凋亡作用是有限的。 结论 h i f 1 a 主要表达于胞核，胞浆也有表达，肿瘤坏死明显的区域和肿瘤浸润的 边缘h i f 1 a 表达明显增多，周围正常组织无h i f 1 a 的表达。随着h i f 1 a 增加， 胃癌细胞的凋亡率降低( p o 0 1 ) ，b e l 2 表达强度增强( p 0 0 5 ) ，b a x 表达强 度降低( p o 0 5 ) ，且与胃癌的发生，发展及生物学行为有关，提示h i f 1 a 的抑 制肿瘤细胞凋亡的机制可能与其能够上调b e l 2 基因及下调促凋亡基因b a x 表达 有关。揭示了癌基因蛋白与胃癌的内在联系。对以上三种指标的检测可能有助于 胃癌的诊断，预测疗效，预后等特征，同时为胃癌的治疗指出新的方向。 1 6 本研究创新性的自我评价 1 、既往的关于h i f 1 的研究中，大多数集中于结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌 等恶性肿瘤，且结论基本一致，而h i f 1 在胃癌的形成、侵袭和转移以及和预后 的关系，国内外文献报道并不一致。 2 、国内h i f 1 a 在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系鲜有报道， 胃癌中缺氧与凋亡的相互关系还不是很清楚 3 、实验以胃癌蜡块标本为对象，对胃癌基因治疗有一定指导意义。 1 7 参考文献 1s e m e n z ag l h i f - 1a n dh u m a nd i s e a s e ；o n eh i g h l yi n v o l v e df a c t o r g e n e sd e v ，2 0 0 0 ，1 4 ( 1 6 ) ； 1 9 8 3 1 9 9 1 2 w e l s hs j ，p o w i sg h y p o x i ai n d u c i b l ef a c t o ra 8ac a n c e rd r u gt a r g e t j 】c u r rc a n c e rd r u g t a r g e t s ，2 0 0 3 ，3 ( 6 ) ；3 9 1 4 0 5 3 c o r ys ，h u a n gd c ，a d a mj m t h eb c l - 2f a m i l y ；, r o l e si nc e l ls u r v i v a la n do n c o g e n e s i s j o n c o g e n e ，2 0 0 3 ，2 4 ( 8 ) ；8 5 4p a c k h a mgc l e v e l a n d 儿c m y ca n da p o t o s i s 【j 】b i o c h e m i c ae tb i o p h y s i c aa c t a , 1 9 9 5 ， 1 2 4 2 ( 1 ) ；1 1 5l a u r e n tm ，d ej e a n s o n i a m a r t i n e z - c a b a l l e r o ，e ta 1 o l i g o m e f i cb a xi sac o m p o n e n to ft h e p u t a t i v ec y t o c h r o m ec r e l e a s ec h a n n e lm a c ，m i t o c h o n d r i a la p o p t o s i s - i n d u c e dc h a n n e l 【j 】m o lbi o lc e l l2 0 0 5 ，1 6 ；2 4 2 4 - 2 4 3 2 6 徐佶，张一楚，孙久运，等b e l - 2 ，b a x , k i - 6 7 在胃癌中的表达及意义【j 】肿瘤，2 0 0 1 ，2 l ( 3 ) ； 2 1 1 - 2 1 2 7 g i a t r o m a n o l a k i 八h a r r i sa l t u m o rh y p o x i a , h y p o x i as i g n a l i n gp a t h w a y sa n dh y p o x i a i n d u c i b l ef a c t o re x p r e s s i o ni nh u m a nc a n c e r 阴a n f i c a n c e rr e s ，2 0 0 1 ，2 1 ( 6 b ) ；4 3 1 7 4 3 2 4 8 宗建春h 1 f - 1 的生物学机制及在肿瘤研究中的进展阴重庆医学，2 0 0 4 ，3 3 ( 5 ) ；7 8 0 7 8 3 9 m o t t e t d ，m i c h e lg ，r e n a r dp ，e ta lr o l eo fe r ka n dc a l c i u mi nt h eh y p o x i a i n d u c e d a c t i v a t i o no f h i f - l 【j 】c e l lp h y s i o l ，2 0 0 2 ；1 9 4 ( i ) ；3 0 - 4 4 1 0 郭克勤，于如同，高文昌h i f - i a 、v e g f 表达与脑胶质瘤预后的相关性【j 】徐州医学院学 报，2 0 0 3 ，2 3 ( 3 ) ；2 2 8 - 2 3 2 1 l c o r ys ，h u a n gd c ，a d a mj m t h eb c l - 2f a m i l y ；r o l e si nc e l ls u r v i v a la n do n e o g e n e s i s j o n c o g e n e ，2 0 0 3 ，2 4 ( 8 ) ；8 5 12p a c l d a a mgc l e v e l a n d 见c - m y ca n da p o t o s i s 【j 】b i o c h e m i c ae tb i o p h y s i c aa c t a ，19 9 5 ， 1 2 4 2 ( 1 ) ；1 1 1 3 徐估，张一楚，孙久运，等b c l - 2 ，b a x ，k i 一6 7 在胃癌中的表达及意义阴肿瘤，2 0 0 1 ，2 l ( 3 ) ； 2 1 1 2 1 2 1 4h a l d a rs ，n e g e i n im ，m o n n em ，e ta 1 d o w n - r e g u l a t i o no fb c l - 2b yp 5 3i nb r e a s tc a l l c e r c e l l s j c a n c e rr e s1 9 9 4 ，5 4 ( 1 2 ) ：2 0 9 5 2 0 9 7 1 5p o t t e rch a h y p o x i ai n d u c i b l ec a r b o n i ca n h y d r a s ei x ，m a r k e ro ft u m o u rh y p o x i a ，s u r v i v a l p a t h w a ya n dt h e r a p yt a r g e t 【j 】c e l lc y c l e 2 0 0 4 ，3 ( 2 ) ：1 6 4 - 1 6 7 1 6 杨菊红低氧诱导因子1 与恶性肿瘤的研究进展【j 】国外医学生理病理科学与临床分册， 2 0 0 2 ，2 2 ( 1 ) ；1 7 - 1 9 1 7s u nh o n g - e h e n g ，q r t jz h e n g - j u n ，c a oj t m h i f - la l p h ae x p r e s s i o ni np a n c r e a t i cc a n c b - l t t i s s u ea n di t se f f e c to nc e l la p o p t o s i s 【j 】c h i njp a n c r e a t o l ，2 0 0 7 ，7 ( 2 ) ；8 7 - 8 9 18 s t e p a nh ，l e oc ，p u r zs ，e ta 1 p l a c e n t a ll o c a l i z a t i o na n de x p r e s s i o no ft h ec e l ld e a t hf a c t o r s b n i p 3a n dn i np r c e e l a m p c i a i n t r a u t e r i n e g r o w t h r e t a r d a t i o na n dh e l l p s y n d r o m e j o b s t e r t r i c s & g y n e c o l o g y , 2 0 0 5 ；1 2 2 ( 2 ) ；1 7 2 1 7 6 1 9 z h a n ghm ，c h e u n gp ，y a n a g a w sb ，e ta 1 b n i p s ；ag r o u po fp r o - a p o p t o t i cp r o t e i n si nt h e b c l 一2f a m i l y j a p o p t o s i s ，2 0 0 3 ；8 ( 3 ) ；2 2 9 - 2 3 6 2 0s u z u k ih ，t o m i d a 气t s u r u ot d e p h o s p h o r y l a t e dh y p o x a - i n d u c i b l ef a c t o rla l p h aa sa m e d i a t o ro f p 5 3 - d e p e n d e n ta p o p t o s i sd u r i n gh y p o x i a 【j 】o n c o g e n e ，2 0 0 1 ；2 0 ( 4 1 ) ；5 7 7 9 - 5 7 8 8 综述 缺氧诱导因子1 伍在恶性肿瘤凋亡过程中的作用 缺氧诱导因子1 0 t ( h y p o x i a - i n d u c i b l ef a c t o r - ia ，h i f - l a ) 是人体重要的氧平衡调 节转录因子，目前已确定的h i f 1 e t 的靶基因有1 3 0 多种，涉及细胞能量代谢、离子 代谢、血管形成、红细胞生成、细胞凋亡和增生、细胞黏附及炎症等多个方面， 在肿瘤的发生发展中起着举足轻重的作用【l 】。近年来，对h i f 1 a 的研究已经成为 抗肿瘤研究的热点之一。本文综述有关h i f 1 a 在肿瘤凋亡中的作用机制的研究进 展。 肿瘤的发生发展是一个多因素多步骤过程，随着肿瘤学研究的深入，人们对 其中部分机制有了一定程度的了解，并逐渐认识到缺氧诱导因子1 q 在肿瘤凋亡中 有着重要作用。对h i f 1 a 的研究已成为肿瘤学基础和临床的重点所在。本文就 h i f 1 a 在肿瘤凋亡中的作用机制作一综述。 一、缺氧诱导因子1 的结构 h i f 1 是e h h i f 1 a 和h i f 1 b 两个亚基组成的异二聚体转录因子，两者都属于碱 性螺旋- 环一螺旋( b a s i ch e l i x l o o p - h e l i x ，b h l h ) p * 芳烃受体核转运蛋白( a r y l h y d r o c a r b o nr e c e p t o rn u c l e a rt r a n s l o c a t o r ，a r n t ) - s i m ( p a s ) 转录因子家族成员。 h i f 1 a 是h i f 1 所特有的，h i f 1 b 与a r n t 同源【2 1 。h i f 1 是氧感受和缺氧信号转导 通路中的一个关键成分，在缺氧适应性应答中，h i f 1 发挥了重要的转录调节功能。 h i f 1 a 氨基末端有b h l h 和p a s 同源区，是h i f 1 a 与其靶基因上特异d n a 的结合 区，h i f 1 a 中部是氧依赖降解区( o x y g e n - d e p e n d e n td e g r a d a t i o nd o m a i n ，o d d ) 。 o d d 有3 个独立的调控元件，分别是氨基酸残基4 0 1 4 9 6 ，4 9 7 5 2 9 和5 3 1 , - - 一6 0 1 。 o d d 羧基端有两个p e s t 样序列，富含p r o ，g l u ，s e r 和t h r 残基，分别位于氨基酸 残基4 9 9 - - 5 1 8 和5 3 1 - - - 6 0 1 ，与胞h i f 1 快速降解密切相关。h i f 1 a 羧基端有两 个相对独立的反式激活域( t r a n s a c t i v a t i o nd o m a i n ，t a d ) 分别称为位于氨基酸残基 5 3 7 - - 5 7 5 n 端反式激活域m t e r m i n a lt r a n s a c t i v a t i o nd o m a i n ，n t a d ) 及位于氨基酸 残基7 8 6 8 2 6 的c 端反式激活域( c t e r m i n a lt r a n s a c t i v a t i o nd o m