复方烟酸缓释片动物药代动力学及体内外相关性的分析研究.pdf

中文摘要 目的：通过评价复方烟酸缓释片的动物药代动力学及生物等效性，考察其体 外释放度和体内吸收度的相关性，建立该品种的质量评价体系。 方法：采用高效液相色谱紫外检测法测定b e a g l e 犬双交叉试验单剂量1 2 1 服复 方烟酸缓释片与烟酸普通片后血浆中烟酸的浓度，采用方差分析和双向单侧f 检 验进行等效性检验。对烟酸的血药浓度时间数据用3 p 9 7 药物动力学程序进行模 拟，选择合适的房室模型自动计算相关参数。用释放度测定法研究复方烟酸缓释 片的体外释放行为，采用相似因子法评价缓释片与普通片释放度的相似程度，并 按, 照w a g n e r - n e l s o n 方程计算各个时间点的药物体内累积吸收率，以试验品体外 释放百分率对体内吸收百分率在相应的时间点进行体内外相关性的研究。 结果：单次给药后主要药物动力学参数表明，缓释片和普通片中烟酸的t m a x 分别为( 2 5 8 o 9 2 ) h 和( 1 o o 0 1 7 ) h ：c m a x 分别为( 1 0 7 8 1 0 1 2 ) 嵋m l 以和 ( 2 0 5 91 2 8 6 4 ) i g m l ；a u c ( o 1 0 h ) 分别为( 4 6 9 3 - t - 7 5 4 5 ) p g h m l 和( 5 0 7 31 4 7 5 6 ) p g h m l ：m l 玎分别为( 1 8 8 + 0 8 4 ) h 和( 1 0 6 - t - _ 0 2 6 ) h 。试验品与参比品中 烟酸单次给药的相对生物利用度为9 1 1 6 。两种制剂的相似因子为2 4 0 3 ，经3 p 9 7 拟合，复方烟酸缓释片中烟酸体内过程符合一室模型，试验品体外释放百分率与 体内吸收百分率相关系数为0 9 9 2 2 。 结论：单次给药试验所获得的缓释片与普通片中烟酸的a u c ( o - l o h 、c m a x 经 双向单侧t 检验，t m a x 和m r t 用配对t 检验分析，结果显示，两种制剂a u c ( o - l o h ) 无 显著性差异，证明二者吸收程度相等复方烟酸缓释片的t m a x 和m r t 长于普通片， c m a x 低于普通片，说明缓释片无突释现象，有一定的缓释效果。两种制剂的体 外释放行为不同，复方烟酸缓释片的体内吸收分数与体外释放度具有相关性。 关键词：烟酸缓释生物等效性体内外相关性 a b s t r a c t a i mt h i ss t u d yw a st oc o m p a r et h eb i o a v a i l a b i l i t yo fn i o t i n i ca c i ds u s t a i n e d r e l e a s et a b l e t sa n dn i o t i n i ca c i dc o m m o nt a b l e t sa n dt oi n v e s t i g a t et h ec o r r e l a t i o n b e t w e e ni nv i t r or e l e a s ea n di nv i v oa b s o r p t i o no ft w ot a b l e t s m e t h o d st h ec o n c e n t r a t i o no fn i o t i n i ca c i di np l a s m aw a sd e t e r m i n e db y r p h p l cm e t h o dw i t hu v - d e t e c t i o na f t e rs i n g l ea n dm u l t i p l eo r a ld o s e so ft a b l e t st o 6b e a g l ed o g t h es t u d yw a sd e s i g n e di nac r o s s o v e r , r a n d o m ，t w o t r e a t m e n t ， t w o p e r i o dt e s t ，t h eb i o e q u i v a l e n e eo ft h et w o f o r m u l a t i o n sw a se v a l u a t e db y a n o n aa n dt w oo n e s i d e tt e s t a l ld a t aw e r et r e a t e db yt h e p r a c t i c a l p h a n n a c o k i n e t i cp r o g r a mv e r s i o n9 7 ( 3 p 9 7 ) a n dp h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sw e r e c a l c u l a t e d t h ei nv i t r or e l e a s ec h a r a c t e r i s t i c so ft w of o r m u l a t i o n sw e r es t u d i e db y d e t e r m i n i n gt h e i rd i s s o l u t i o n a n de v a l u a t e dw i t hs i m i l a r i t yf a c t o rm e t h o d t h e a b s o r b e df r a c t i o n sw e r ec a l c u l a t e db yw a g n e r - n e l s o n sf o r m u l a ，a n d al i n e a r c o r r e l a t i o nw a se v a l u a t e db yu s i n gp e r c e n td i s s o l u t e dd a t aa n dp e r c e n ta b s o r b e dd a t a f r o mt w of o r m u l a t i o n sa tt h ec o r r e s p o n d i n gt i m e s r e s u l t st h e p h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r s o b t a i n e d a l t e r s i n g l e o r a l a d m i n i s t r a t i o no ft h et w on i o f i n i ca c i ds u s t a i n e dr e l e a s et a b l e t sw e r ea sf o l l o w i n g ： t h et m a xw e r e ( 2 5 8 0 9 2 ) ha n d ( 1 0 04 - 0 1 7 ) h ，c m a xw e r e ( 1 0 7 8 1 0 1 2 ) p g m l a n d ( 2 0 5 9 1 - + - 2 8 6 4 ) l a g m l 一，a u c ( 0 1 0 s h ) w e r e ( 4 6 9 34 - 7 5 4 5 ) p g h 。m l qa n d ( 5 0 7 3 14 - 4 7 5 6 ) l a g h m l q , m r tw e r e ( 1 8 8 4 - 0 8 4 ) ha n d ( 1 0 6 4 - 0 2 6 ) hf o rt e s ta n d r e f e r e n c et a b l e t s ，r e s p e c t i v e l y t h er e l a t i v eb i o a v a i l a b i l i t yo ft h et e s tt a b l e tw a s 91 16 t h es i m i l a rf a c t o rw a s2 4 0 3 a f t e rc a l c u l a t e db y3 p 9 7s o f t w a r e ，t h e p h a r m a c o k i n e t i cp r o c e s so fn i o t i n i c a c i d s u s t a i n e dr e l e a s et a b l e t sa c c o r dw i t h o n e c o m p a r t m e n tm o d e l ，t h ec o r r e l a t i o nc o e f f c i e n t sa r e0 9 9 2 2f o rt e s tt a b l e t s c o n c l u s i o nt h ep h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r s o b t a i n e da f t e r s i n g l e o r a l a d m i n i s t r a t i o no ft h ec o m p o u n dn i o t i n i ca c i ds u s t a i n e dr e l e a s et a b l e t sa n dn i c o t i n i c a c i dc o m m o nt a b l e ts h o w e dt h a tt h e r ew e r en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt w o f o r m u l a t i o n si na u c o 1 0 ，a n dt h e r et h e r ew e r es i g n i f i g a n td i f f e r e n c ei nc m a x ，t m a x a n dm r t t h es u s t a i n e dr e l e a s et a b l e tw a sb i o e q u i v a l e n tt o r ta n dc o m p o u n d n i o t i n i ca c i ds u s t a i n e dr e l e a s et a b l e t sp o s s e s s e dg o o ds u s t a i n e dr e l e a s ep r o p e r t y t h e d i s s o l u t i o nr a t e sb e t w e e nt w of o r m u l a t i o n sw e r ed i f f e r e n ta n dt h ed i s s o l u t i o nw a s s i m i l a r t h er e s u l t so fc o r r e l a t i o nt e s ts h o w e dt h ec o m p o u m dn i c o t i n i ca c i ds u s t a i n e d r e l e a s et a b l e t sh a das a t i s f a c t o r yc o r r e l a t i o nb e t w e e nd i s s o l u t i o ni nv i t r oa n d a b s o r p t i o ni nv i v o k e yw o r d s ：n i o t i n i ca c i d ，b i o a v a i l a b i l i t y , s u s t a i n e dr e l e a s e ，i nv i t r o i nv i v o c o r r e l a t i o n ；s i m i l a rf a c t e r 天津大学硕士学位论文缩略语 缩略语 生物半衰期 血药浓度时间曲线下面积 从给药开始到给药2 4 d 时的面积 从给药开始到给药时间的面积 平均驻留时间 峰浓度 达峰时间 消除常数 生物利用度 体内吸收分数 相似因子 试验品与参比品平均溶出度的方差和 不同时间点的累积释放度 某一时间点的平均释放度 舰舭 蛳蛳肿 一 k f 川f q m 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导1 ：进行的研究工作和取得的 研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得墨鲞苤茎或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。 躲岛、唿一一竹，月 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解苤壅盘堂有关保留、使用学位论文的规定。 特授权墨鲞盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权说明) 学位论文作者签名： 签7 几期：? 矿口计 | 易哆约，哆 月彩几 导师签名： 咤阽 厶 l 签字只期：z 彻7 年，月z 厶闩 天津大学硕士学位论文第一章绪论 第一章绪论 心血管疾病是一类严重危害人类健康的疾病，近年来，在世界范围内其发病 率和死亡率始终居高不下，是目前人类健康的头号杀手。而高血脂是冠心病的主 要危险因素，原发性高胆固醇血症与混合血脂异常是一种临床常见病，在血清胆 固醇浓度、冠心病等心血管疾病的严重程度之间有显著相关性。当血清胆固醇浓 度升高时，动脉粥样硬化的发生也大幅度提高。据1 9 9 1 年动脉粥样硬化全国流行 病学调查显示，我国现有动脉粥样硬化患者约1 2 亿人。冠心病的治疗已成为世 界性难题，其发病率和死亡率均为首位，每年在全球夺走1 2 0 0 万人的生命，接近 世界人口总死亡数的1 4 。因此人们把血脂调节药物的开发作为治疗心血管疾病 的重点。 动脉粥样硬化有四种危险因素：吸烟、体重指数、血压及血脂。临床治疗中 也主要是针对上述四种危险因素进行的。以往医药界防治心血管疾病侧重在降压 上，但是随着医药科学技术的不断发展，人们认识到高胆固醇、高脂肪等是发生 心血管疾病的基本病因，高血脂是发生冠心病及高血压的主要危险因素。因此， 人们把血脂调节作为防治心血管疾病的重点，取得了令人瞩目的效果，也掀起了 全球性的心血管调脂治疗的高潮。【l 】 临床研究已经证明，总胆固醇( t c ) 、低密度脂蛋白胆固醇( l d l c ) 和载脂脂 蛋白b 1 0 0 ( a p ob ) 水平升高可以促进人类动脉硬化症的发生，同样，高密度 脂蛋白胆固醇( h d l c ) 降低也与动脉硬化症的发展有关。流行病学研究证实， 冠心病的发病率和死亡率与t c 、l d l c 和h d l c 的水平直接相关。 富含胆固醇和甘油三酯的脂蛋白，包括极低密度脂蛋白( v l d l ) 、中密度脂 蛋白( i d l ) 也可以促进动脉硬化的形成。在冠心病患者血浆中可见甘油三酯水 平升高，同时伴有h d l c 降低、l d l d x 颗粒和非脂代谢因子的出现。所以，血浆 总胆固醇水平的升高并不是冠心病的独立的损伤因素。 洛伐他汀，一种h m g c o a 还原酶抑制剂，由默克公司开发，可用于延缓冠 心病和高脂血症病人动脉粥样硬化的进程，还可用于总胆固醇署i l d l 胆固醇水平 处于平均值或中度升高，但h d l 胆固醇水平低于平均值的健康人。l l j 烟酸，又名尼古丁酸，一种复合维生素b ，在体内能迅速吸收并转化为烟酰 胺，后者为辅酶i 和辅酶i i 的组成部分。烟酸类调脂药物是最早用于降低心血管 天津大学硕士学位论文 第一章绪论 总病死率的调脂药物之一，也是应用历史最长的调脂药物。烟酸是最常用的烟酸 类调脂药，该药于1 8 6 7 年由德国化学家h u b e r 首次用烟草中提取的尼古丁制得， 其药效最为突出的特点是仅于大剂量应用时方才具备调整血脂的作用。烟酸主要 作用是减少肝内极低密度脂蛋白的合成与释放，由于v l d l 是中间密度脂蛋白 i d l 和低密度脂蛋l d l 的前体，所以经适量、适时的烟酸治疗后血液中i d l 和 l d l 的浓度得以降低。【2 一】此外，烟酸还能减少脂肪细胞释放游离脂肪酸的数量， 从而减少甘油三脂合成的物质，使肝脏合成t g 水平降低。但烟酸使血液中高密 度脂蛋白升高的机理不明。烟酸的最大不足是副作用较大，从而限制了其临床应 用。【4 】鉴于烟酸具有肯定的调脂作用，而副作用限制其临床应用的现状，近年来， 国外加快了对烟酸缓释剂型的研究以及烟酸与其他几种调脂药物的联合应用。烟 酸及洛伐他汀均为血脂调节剂。均可降低血清低密度脂蛋白胆固醇，总胆固醇量 和甘油三酯水平：增加高密度脂蛋白胆固醇水平。烟酸和洛伐他汀合并用药不同 于任何其他单一的降血脂药，可以总体改善血脂脂肪状况。洛伐他汀对降低l d l 具有显著效果，但对增加h d l 作用较弱。烟酸的作用正相反，有很强的增加h d l 作用，但降低l d l 作用较弱。两者都能降低血清甘油三酯水平。【5 “】 临床研究证明，联合使用烟酸和洛伐他汀的作用是相加的，使用此复方制剂 治疗一年后，该复方片可增力n h d l 4 1 ，降低l d l 4 5 ，减少甘油三酯4 2 。有 关研究已经证实，同时服用这两种药物所具有的缓解高胆固醇血症疗效明显优于 仅服用任一单方制剂。 7 1 洛伐他汀口服吸收良好，2 - 4 小时血药浓度达到峰值，t l ，2 为3 d , 时。洛伐他 汀口服每次1 0 2 0 m g ，每天一次。烟酸e l 服后经胃肠道吸收，3 0 6 0 分钟血药浓度 达到峰值，t l 2 为4 5 分钟。烟酸在临床用于高血脂适应症时每次口服1 0 0 m g ，每 日三次，4 - 7 日后可增加至每次1 2 9 ，每日三次。由于大剂量的烟酸可能会产生 皮肤瘙痒和胃肠道不适等不良反应，造成了患者持续治疗的困难。针对烟酸的上 述问题，我们设计开发了由烟酸缓释部分和洛伐他汀普通释放部分组成的复方烟 酸缓释片。二者组成的复方制剂通过协同作用可以达到降低血液中的低密度脂蛋 白胆固醇( l d l c ) 、甘油三酯( t g ) 和总胆固醇水平，同时增加高密度脂蛋白 胆固醇( h d l c ) 水平的目的，进而应用于原发性高胆固醇血症和混合血脂异常 的病人。 2 0 0 1 年1 2 月f d a 批准了k o s $ 1 1 药公司a d v i c o r ( 烟酸缓释洛伐他汀) 片剂投 放市场。a d v i c o r 片剂有三种缓释烟酸配方，每种含有2 0 r a g 洛伐他汀： 5 0 0 m g 2 0 m g ，7 5 0 m g 2 0 m g ，10 0 0 m g 2 0 m g 。a d v i c o r 的最大推荐剂量是 2 0 0 0 m g 4 0 m g ( 1 0 0 0 m g 2 0 m g 两片) 。药物的适应症为治疗原发性高胆固醇血症 和混合血脂异常病人，这些病人以前使用其中种药物组分治疗过，但还需要进 天津大学硕士学位论文第一章绪论 一步的调节l d l 或h d l 胆固醇以及甘油三脂。 缓释片是一种新剂型，采用独特的缓释技术，制成每天只需服用一次的缓释 片，可使烟酸在体内缓慢释放，延缓药物在体内的滞留时间，血药浓度平稳，维 持有效血药浓度时间长，更具长效性，从而减少了用药的次数，同时降低由于药 物浓度过高带来的副作用，从而使不良反应的发生率降低，治疗成本也大幅下降。 缓释片的应用可以减少给药次数和剂量，有利于提高患者服药的依从性，可以维 持稳定治疗，使药物浓度在适合的范围波动。 本课题以复方烟酸缓释片为研究对象，通过动物体内药动学研究，与普通剂 型进行动物体内生物等效性研究与体内外相关性的评价几方面的工作，建立了该 药的质量评价体系。 对于缓释制剂质量评价，释放度研究是必不可少的内容。制剂释放度测定的 目的就是在体外建立一种简单、操作性强的方法让研究者对药物的体内释放过程 进行最大限度的预测，从而对其内在质量进行有效的控制。鉴于这种预测的可靠 性需要科学的释放度测定方法和体内外相关性显著结论这两方面作为保证，因此 释放度测定方法的优劣和动物体内药动学研究对评价缓释制剂就显得尤为重要。 【8 9 】 本实验的研究目的一是为了研究该制剂在b e a g l e 犬体内的药物动力学行 为，考察其是否具有缓释特征，并与已上市的普通片进行比较，评价两者的生物 等效性。二是研究复方烟酸缓释片的体内吸收度和体外释放相关性以及用体外的 释放度预测体内过程的可能性。 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 2 1 材料 第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 2 1 1 药品与试剂 试验品：复方烟酸缓释片，天津市现代医药开发研究所生产并提供。规格：每 片含烟酸5 0 0 m g ，洛伐他汀2 0 m g ，批号0 3 0 1 ：。 参比品：烟酸片，天津力生制药股份有限公司生产。规格：每片含烟酸5 0 m g ， 批号：0 4 0 4 0 0 5 。 内标物：替硝唑，中国生物制品检定所提供。批号：1 0 3 3 6 - - 0 0 0 1 。 烟酸标准品：中国生物制品检定所提供。批号：1 0 0 4 3 4 - - 2 0 0 3 0 1 。 试剂： 1 ) 乙腈：色谱纯，天津康科德科技有限公司产品。 2 ) 磷酸二氢铵：分析纯，天津市化学试剂六厂产品。 3 ) 四丁基氢氧化铵：分析纯，天津市天河化学试剂厂产品。 4 ) 氨水：分析纯，天津市天河化学试剂厂产品。 5 ) 磷酸：分析纯，天津市天河化学试剂厂产品。 6 ) 纯水：实验室自制。 2 1 2 仪器 高效液相色谱仪：日本岛津l c 一2 0 1 0 c 全自动液相色谱系统，包括接i s i d 7 0 0 0 ， 泵l 一7 1 0 0 ，程序化自动进样器l 一7 2 5 0 ，柱温箱l 7 3 0 0 ，紫外检测器l 7 4 0 0 。 超纯水器：m i l l qi i 型，口本m i l l i p o r e 出品( 制备超纯水) 。 旋涡混合器：k h 8 5 1 型，上海环宇仪器厂出品。 低速自动平衡离心机：b 6 0 0 型，白洋离心机厂出品。 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 2 1 3 试验对象 b e a g l e 狗六只。雌雄各半，体重1 3 5 1 5 0 k g ，由广东省高要市康达实验动物 科技有限公司提供。 2 2 方法 2 2 4 试验设计 单次给药 b e a g l e 犬6 只，随机分成二组，采用自身对照，进行单剂量、双周期、双交 叉给药试验，试验周期为一周，中间清洗期为一周。受试狗服药前禁食过夜，于 次日早晨空腹分别给予试验药物( 试验品2 片或参比品2 0 片) 。于给药前( 0 h ) 、 服药后0 5 、l 、1 5 、2 、3 、4 、5 、6 、7 、8 、1 0 各采静脉血3m l ，6 0 0 0 r r a i n 1 离 心，分离出血浆，2 0 。c 冷冻保存，供测定血浆中的药物浓度用。 2 2 5 血药浓度分析 色谱条件 色谱柱：d i k m ao d s 色谱住，51 tm ，2 0 0 4 6 m m 柱温：4 0 流动相：乙腈：含0 0 2 m o l l 磷酸二氢铵和四丁基氢氧化铵的水溶液( 用氨 水或磷酸调p h 值为7 7 - 7 8 ) ( 1 7 ：8 3 ) 流速：1 0 m l m i n 内 标：2 0 0 9 m l 。替硝唑乙腈溶液 检测波长：u v2 6 2 n m 进样体积：5ul 血浆处理方法 取血浆( 空白、含药、服药后) 0 5 m l ，精密加入内标( 替硝唑2 0 p g m l j 乙腈溶 液) 2 0ul ，置涡旋混合器上混合lr a i n 后，加入乙腈0 5 m l ，振荡混匀3 m i n ， 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 8 0 0 0 r m i n 。离，1 二, 2 0 m i n ，取上清液，微孔滤膜过滤后5ul 进样。 2 2 6 方法学验证 复方烟酸储备液及工作液的制备 烟酸标准品贮备液：精密称取烟酸标准品2 5 0 0 m g ，置于2 5 m l 容量瓶中，加 水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 烟酸标准品工作液系列浓度：精密量取一定体积烟酸贮备液置于不同容量瓶 中，加水稀释至刻度，制成l o 、5 、2 、0 4 、0 2 、0 0 4 、0 0 1 、0 0 0 2 m g m l j 系列 标准工作液。 标准曲线的制备 取8 支1 0 m l 离心管，分别加入不同浓度的烟酸标准工作液1 0 u l 及空白血浆 0 4 9 m 1 和2 0 0 p g m l 。1 替硝唑乙腈溶液2 0 ul ，置漩涡混和器上混和1 分钟，加0 5 m l 乙腈振荡溶解，使成为烟酸浓度分别为0 0 4 、0 2 、0 8 、4 、8 、4 0 、1 0 0 、2 0 0 肛g m l j 的溶液，振荡混匀3 m i n ，8 0 0 0 r m i n 。1 离，6 , 2 0 r a i n ，取上清液，微孔滤膜过滤后5 ul 进样。以峰面积比为纵坐标，浓度c ( p g m l 。1 ) 为横坐标，计算回归方程即 标准曲线。 标准曲线的质控，r e 可接受的范围一般要求在1 5 一2 0 之间，在低限附近可 适当放宽。 r e = i 曲线计算浓度实际浓度i 实际浓度1 0 0 精密度与准确度 准确度是指分析方法的偏差程度，精密度为方法的重现性，二者用来验证方 法的质量。精密度为同一样品浓度测定一组数据( n 5 ) 的测定值的变异性，通 常用质控样品的批内和批问相对标准差( r s d ) 来考察。一般r s d 应小于1 5 。 准确度以相对百分误差来表示，以理论量的士1 5 为限度。每一浓度各测定5 个样 品，并至少连续测定3 个分析批。 回收率 从生物样本中回收得到的分析物质的响应值除以纯标准品产生的响应值即 为分析物的提取回收率。考察0 5 ，1 0 ，1 0 0 p g m l 1 三个浓度的提取回收率，一般应 高于5 0 。 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 稳定性 按血浆中复方烟酸的测定方法，进行1 0 i i g m l 。1 浓度在室温存放8h 、2 4 h 、冻 融1 次和冻融3 次的稳定性分析。每一浓度各做5 个样品来进行稳定性考察。 质控样品的制备 质控是将己知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控制。 在进行样品的分析过程中，不间断仪器的使用，按血浆中烟酸的测定方法，进行 0 5 、1 0 、1 0 0 p g n 1 l 。1 三种不同浓度样品的质量控制测定试验。每约1 0 0 个试验样 品，测定3 个浓度6 个质量控制样品，每一浓度各做2 个样品。测定结果的偏差应 小于2 0 。 2 2 7 数据分析 由6 只b e a g l e 犬不同时间的血药浓度数据求出其均值及标准差。采用3 p 9 7 程 序计算出每只犬的主要药代动力学参数( t m a x 和c m a ) 【采用实测值，其它参数 a u c ( o 1 0 h ) ，a u c ( 岫) ，m r t 用非房室模型统计矩法算得，k e ，“力采用3 p 9 7 软件拟 合后得到) 。根据每只犬双交叉服用试验品和参比品的血药浓度时间曲线下面 积( a u c o l o h ) 计算出每只受试狗口服复方烟酸缓释片的相对生物利用度。 f r = a u c 试验品a u c 参比品10 0 根据f d a 和w h o 有关生物等效性试验指导原则，对a u c o l o h 、c m a x 采用双 向单侧t 检验和方差分析；t m a ) 【和m r t 采用配对t 检验进行统计分析。 2 3 结果 2 3 8 方法学验证 色谱学行为 在本试验色谱条件下，烟酸与内标能较好分离，基线噪音小，血浆中无内源性 物质干扰，它们的保留时间分别为8 5 m i n 和4 8 m i n ，分离度为5 ，对称因子为1 0 3 ， 理论塔板数为1 8 l ，峰形和柱效都较好。( 见图1 ) 天津大学硕士学位论文 第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 ； 孽o x ： 西 c ： 三0 t i m e ( r a i n ) c ； 9 0 x ： 时 c m u 置0 l l ，出 l j f i s s i 一”o vu 。 d 图l 烟酸色谱图 ( a ) s t a n d a r ds o l u t i o nc o n t a i n i n gn i o t i n i ca c i d2 0 i t g 。m l q( b ) b l a n kp l a s m a ( c ) b l a n kp l a s m as p i k e dw i t hn i o t i n i ca c i d2 0 i - t g m l 1 ( d ) p l a s m af r o mb e a g l ed o g6 h a f t e ras i n g l eo r a ld o s eo fn i o t i n i ca c i d p e a k s ：sn i o t i n i ca c i dt r ：8 5 m i n i st i n i d a z o l et r ：4 8 m i n 标准曲线 标准曲线为y = 0 0 5 4 x + 0 0 0 41( n = 8 间9 9 9 9 ) 校正曲线在血药浓度0 0 5 2 0 0 0 p g m l j 范围内具有良好的线性关系，且回归曲线 基本通过原点。 标准曲线的质控，通过计算r e ，除低限点超出1 5 2 0 的范围，其他在可 接受限度内。结果见表a 。 8 o o 一 宅一 xp一毋c啦pch o o ，们 huf竹c。pch 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 表a ：标准曲线的r e 值 实际浓度比值( y )曲线计算浓度( x ) r e l0 0 4 0 20 0 0 7 30 0 5 9 34 7 5 20 2 0 0 8o 0 1 7 20 2 4 2 62 0 8 30 8 0 3 20 0 4 5 30 7 6 3 05 o 44 0 1 6 00 2 8 1 25 1 3 1 52 1 8 58 0 3 2 00 4 7 4 18 7 0 4 08 3 6 64 0 1 6 02 1 3 8 l3 9 5 1 91 6 0 7 1 0 0 4 0 5 3 0 4 l 9 8 1 4 82 2 4 82 0 0 8 01 0 9 2 02 0 2 1 5 o 6 7 精密度和准确度 烟酸测定精密度和准确度数据见表1 。结果表明，三个浓度三批的 相对误差( r s d ) 均小于6 6 ，偏差在( - 4 6 - - - 0 2 ) 之间，表明测定精密度及准确度 高，符合化学药品制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则的质量 控制要求。 表1 烟酸精密度和准确度( n = 5 ) ，浓度1 、批1 ( p g m l 叫) 二 批2批3 0 5 1 0 l o o 0 4 9 o o l 9 8 9 0 2 5 9 9 5 4 1 7 9 2 02 o0 5 o 0 24 00 90 4 8 0 0 02 7- 4 0 2 5 1 1 9 器6 6 1 51 警 1 84 6 1 篙4 ”o 59 譬 3 50 2 0 61 3 回收率 烟酸在血浆中提取的绝对回收率平均为9 4 7 4 - 5 0 ，结果见表2 。 一9 - 天津大学硕士学位论文 第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 表2 烟酸血浆测定的绝对回收率( n ：5 ) 稳定性 烟酸血浆中所示稳定性如表3 ，实验结果表明烟酸在血浆中室温 放置2 4 h ，冻融1 次和冻融3 次条件下稳定。 表3 烟酸血浆中稳定性考察( n = 5 ) 质控试验 结果见表4 ，相对误差( r s d ) 均小于1 1 4 ，偏差在1 0 1 2 8 之间，符合化 学药品制剂生物利用度和生物等效性研究技术指导原则的质量控制要求。 天津大学硕士学位论文 第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 表4 烟酸血浆的质量控制结果 理论浓度测定浓度 m e a n s d r s di 冱 ! 竖兰2 坐：兰2唑：兰2蚴蚴 0 50 4 60 5 l0 4 9 0 0 37 32 0 4 质控l 1 01 0 2 19 0 39 0 3 0 8 38 69 7 1 0 01 0 2 3 51 0 3 6 81 0 3 0 1 0 9 40 93 0 1 灵敏度 本法测定烟酸的定量下限为0 0 4 0 2 p g i n l 。 2 3 9 单次给药试验 血浆药物浓度 将复方烟酸缓释片( 试验品) 与烟酸普通片( 参比品) 的平均血浆药物浓度测定 结果列于表5 和表6 。可以得出，试验品和参比品血药浓度平均值分别在服药2 5 8 h 和l h 后达到最高，其最高浓度分别为( 1 0 7 8 11 0 1 2 ) g g i n l 。和( 2 0 5 9 1 2 8 6 4 ) g g i n l ，到服药1 0 h 后降至最低，分别为( 5 4 2 1 8 ) g g m l 1 和( 1 8 2 1 0 9 9 9 ) g i n l ，两种药物的血药浓度- 时间曲线( c - t 曲线) 比较见图2 。 表5 6 只b e a g l e 犬单次给药交叉口服复方烟酸缓释片 不同时间烟酸的血浆药物浓度 天律大学硬七学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 ”二 * 毫 呈 图26 只b e a g l e 犬单次服用试验品和参比品后血浆中烟酸 平均药物浓度时间曲线( c - t ) l l 较 药物动力学参数 6 只b e a g l e 火受叉服片j 试验品和参比品后，血浆中烟酸峰浓度c m a x ，达峰时 b - 日i t m a x 均山实验数据直接读h a u c 崩非房室模型统计矩计算其他主要药物动 鲞津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 _-_一一 力学参数用中国药理学会数学药理学会编写的3 p 9 7 程序对血药浓度时间数据拟 合计算得到，其平均值见表7 。两种制剂的a u c ( i o h 。c a u c ( o - ) 之比平均值分别为 5 1 2 和2 0 4 ，表明采样终点适宜，所得血药浓度及药代参数能反映两种制剂的 体内过程。 表7 6 只b e a g l e 犬口服烟酸试验品与参比品的主要药代动力学参数 c m a x t m a x m l 玎 t l ，2 k e a u c o 1 0 1 0 7 8 1 0 1 2 2 5 8 0 9 2 1 8 8 0 8 4 1 5 2 o 1 0 0 4 5 0 0 3 4 6 9 3 7 5 4 5 2 0 5 9 1 2 8 6 4 1 0 0 0 1 7 1 0 6 0 2 6 0 7 3 0 1 8 1 1 1 0 1 2 5 0 7 3 l 4 7 5 6 a u c o 。4 9 5 7 - 6 7 5 9 5 1 7 3 3 6 8 1 6 - _ _ - i l l _ - i _ _ - - - l _ l - - - l - - - - _ _ _ _ i _ _ _ i l _ l i _ 一 试验品与参比品的相对生物利用度 由每只b e a g l e 犬交叉服用试验品与参比品的血药浓度时间曲线下面积 ( a u c o - 1 0 h ) 计算出每只b e a g l e 犬烟酸的相对生物利用度见表8 ，结果表明试验品与 参比品中烟酸的相对生物利用度为9 1 1 6 。 一 表8 试验品复方烟酸缓释片的相对生物利用度 _ _ i l _ - _ - _ _ _ _ _ i _ _ _ i _ _ _ _ l - _ _ _ _ _ _ _ - - - 一 受试狗 a u c o - l o ( 参比品)a u c o 1 0 ( 试验品)f 竺兰 一一( p g h m l - 1 ) ( p g h m l - i ) ( ) 一 。- _ - _ _ - - _ _ _ - i - - _ - _ - _ - _ _ _ _ _ 一 14 9 1 4 2 4 0 3 2 8 2 0 5 2 5 0 3 1 6 4 3 7 5 2 8 6 9 5 34 6 5 6 4 5 1 7 5 1 1 1 1 4 4 4 7 8 6 7 4 1 1 9 8 6 0 6 5 5 0 5 5 9 4 4 6 7 18 8 3 5 66 4 8 4 2 5 9 9 4 9 2 4 4 m e a n5 15 4 8 4 6 9 3 9 1 1 6 s d6 6 8 4 7 5 4 5 10 3 5 r s d ( ) 1 2 9 7 1 6 1 1 1 3 5 试验品与参比品单次给药的生物等效性分析 - 1 3 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 a u c 的统计分析 将试验品和参比品的a u c 0 1 0 h 数据进行方差分析和双向单f l i j t 检验，结果如 表9 和l o 所示。试验品与参比品的方差分析表明药间和周期间无明显差异，双向 单侧t 检验结果表明试验品与参比品中烟酸的a u c 0 1 0 h 等效。 表9 试验品和参比品的a u c 0 1 0 h 方差分析 生物利用度自动计算 a u c 算法 l n 交叉数2 等效标准 n 数据= 4 d 溺 总变异 药剂间 周期间 个体间 误差 1 2 s s 0 2 1 6 2 0 0 2 8 5 0 0 0 7 5 0 o 1 5 9 3 0 0 2 1 0 8 0 f 1 1 n 例数= m s o 0 1 9 7 0 0 2 8 5 0 0 0 7 5 0 o 0 3 1 9 0 0 0 5 2 1 2 5 6 ffo 0 5p 5 4 37 6 2 o 0 5 1 4 3 0 97 6 2 0 0 5 6 0 84 6 8 0 0 5 误差 1 0 5 1 5 5 1 0 42 6 2 8 8 7 7 表1 2 试验品和参比品的c m a x 双向单侧t 检验 t m a x 的统计分析 试验品和参比品的t m a ) 【分别为( 2 5 8 + 0 9 2 ) h 和( 1 0 0 + 0 1 7 ) h ，对t m a x 数据直 接用配对样本的f 检验法进行统计分析，t = 3 9 8 ，查t 界值表双侧概率得p 0 0 5 ，表明 试验品与参比品的达峰时问有显著性差异，即复方烟酸缓释片的达峰时间长于普 通片。 m r t 的统计分析 试验品和参比品的m r t 分别为( 1 8 8 o 8 4 ) h 和( 1 0 6 + 0 2 6 ) h ，对m r t 采用配 天津大学硕士学位论文第二章复方烟酸缓释片动物药代动力学研究 对样本的t 检验法进行统计分析，t = - 2 8 3 ，查t 界值表双侧概率得p 0 0 5 ，表明试验品 与参比品的m r t 有显著性差异，即复方烟酸缓释片的m r t 长于普通片。 2 4 结论 通过对单次给药试验品和参比品试验烟酸的a u c o - 1 0 h 药代参数的统计分析， 表明试验品与参比品是吸收程度等效。但t m a x 和c m a x 存在显著性差异，受试缓 释片的t m a x 和m r t 长于参比普通片，c m a x 低于普通片，说明受试缓释片无突释 现象