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2010年医用设备使用人员业务能力考评1.1 全自动生化分析仪 将生物化学分析过程中的取样、加试剂、去干扰物，混合、保温反应、自动监测、数据处理、打印报告及实验后的清洗等步骤进行自动化连续操作的仪器。1.2变异系数 一组测定结果的标准差与平均值的百分比值，通常用cv%表示。1.3系数k值：称酶活性尝试定量系数（或称常数）,主要用于临床酶活性测定的计算与校正。k=v*106/(*l) v代表反应体系总体积（）ul;l代表比色杯光径（cm）; 代表样本量（ul）;代表摩尔消光系数（cm2.mol-1）。1.4 摩尔消光系数（）在特定条件下，一定波长的光通过光径1.00cm时，所含吸光物质的浓度为1.00mol/l时的光度。1.5 准确度 .是一次测量结果与被测量真值的接近程度。它受正确度和精密度影响，它往往以不准确度来衡量，不准确度的数字表达是不确定度。1.6正确度（真实度）：大量测量的均值与真值的接近程度，用偏倚（均值与真值之差）表示不正确度。1.7 精密度 在规定条件下获得测量结果之间的接近程度。精密度按条件不同可进一步分为行不行性、早间精密度和重现性。重复性是指在相同条件（时间、校准、操作者、仪器等）获得的精密度，即所谓的批内精密度khujopyaj指在一种或几种条件因素发生变化，但在同一实验室内获得的精密度：重现性则是在不同实验室，不同条件下精密度，故又称实验室间精密度。用标准差或变异系数表示不精密度。1.8 测量不确定度 定义：与测量结果关联的一个参数。用于表征合理赋予被测量的值的分散性。用于“不确定度”方式；该参数可以是一个标准偏差(或其给定的倍数)或给定置信度区间的半宽度。测量不确定度的表达(gum)中定义了获得不确定度的不同方法；测量不确定度常由很多分量组成。有些分量可由一系列测量结果的统计分布进行估计，并用试验标准偏差表示。另外一些分量可基于经验或其他信息的概率分布加以估计，也可用标准偏差表述。1.9 偏倚 测量学中偏倚是指一切测量值对真值的偏离。1.10 结果比对 在同一项应用不同的检测系统按照特定的要求进行测定，按照统计学原理，将不同检测系统的测定结果进行比较的过程。1.11 溯源性：通过一条具有规定不确定度的不同的连接的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与测定的参考标准。通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。1.12标准品(参考物质) 一类充分均匀，并且有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，用以校准仪器设备，评价测量方法，或给其它物质赋值。1.13一级标准品：具有最高计量学特征，用一级参考方法（选定性方法）进行定值，用来校准二级参考方法的标准物质。1.14二级标准品（二级参考物质）由二级参考方法（参考方法）进行定值，用来校准常规标准方法（厂家选定方法）的标准品。1.15决定性方法（一级参考方法）指准确度最高，系统误差最小，经过详细研究未发现产生误差的原因，其测定结果与“真值”最接近，主要用于一级标准品的定值，不直接用于鉴定常规方法的准确性。1.16参考方法（二级参考方法）指准确度与精密度已被充分证实，且被公认的权威机构颁布的方法，其干扰因素少，系统误差小，重复测定中的随机误差可忽略不计，由一级标准品校准，主要用于二级标准品的定值。1.17实验室常规方法：指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、准确度和特异性及适当的分析范围的方法。1.18校准物：用于校准，分度或修正测量值的物质或装置，这种物质和装置必须跟踪国家或国际的标准物质或装置，由常规标准方法（厂家选定的方法）定值，用于终用户实验室常规方法的校准。1.19质控物：用于常规工作中检查分析过程或仪器准确性和精密性的物质。1.20最佳条件下的变异（ocv）：指某一实验室，在理想和恒定条件下。对同一质控物进行反复测定所得出的变异。其目的在于观察用某一方法做某试验的最佳工作质量，是一个实验室能过到的最低变异（最发精密度）1.21常规条件下的变异（rcv）指在实验室常规分析条件下获得的精密度结果，质控随大批病人标本在常规条件下进行测定，所得数据可用于室内质控。1.22质量控制（qc）是质量管理的一部分，致力于满足质量要求，质量控制的目的是满足组织自身和其服务对象的质量要求，是保证检验结果可靠的重要手段。1.23室内质量控制（iqc）指实验室内为达到质量控制要求所采取的操作技术和活动，及实验室工作人员采用一系列统计学方法，评价本实验室测定结果的可靠程度。判断检验报告是否可发出，以及发现质量环节中的影响因素，误差程度，并进一步排除的过程，其目的主要是检测和控制常规工作中的精密度提高常规工作中日内和日间同标本检测的一致性。1.24室间质量评价（eqa）检测准确度，由第三方机构采用一系列的方法，连续地，客观地评价各实验室的实验结果，并发现实验室本身的不易发现的检测结果的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，帮助其校正，使其结果具有可比性，这种评价是一种回顾性评价，旨在那间实验结果室间的可比性。1.25延迟时间：试剂与样品混合后到监测开始之间的时间，一般用于连续监测法。1.26 双波长：双波长由主波长和副波长构成的两个波长，副波长应趋近主波长，但吸光度应为“0”，在计算时用主波长的吸光度减去副波长的吸光度，主波长是指测定某物质时，生成的产物颜色对光吸收的特有波长；副波长是指测定基本物质时，为清除其他干扰物质在主波长造成测定干扰所设定的波长。1.27反应杯空白：在特定波长下，光通过充盈蒸馏水或空气的反应杯所没得的吸光度值。1.28试剂空白 在各特定波长下，光通过以蒸馏水或生理盐水代替样品和测定项目试剂构成的反应体系所测得和吸光度值。1.29样品空白：在各特定波长下，光通过蒸馏水或生理盐水为样品和相应测定项目不含有引起反应的一种或多各成分的试剂构成的反应体系所没得的吸光度值得；或由生物样品和相应测定项目的反应体系产生反应最初时间所测得的吸光度值。 1.30后分光：后分光的光路为光源样品分光元件检测器，将一束白光（混合光）先照到样品杯，然后再用分光元件分光，同时用一列发元二级管排在分光元件后面作为检测器检测任何一个波长的吸光度。1.31终点分析法：终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其吸收强度的大小。对物质进行定量分析的一类方法。1.32连续监测法：又称为速率法，通过适当的仪器，连续测定反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间变化的多点数据，求出反应初速度，间接计算被没物浓度的方法称为连续监测法。1.33线性范围：是批系统最终的输出值与被分析物的浓度成正比的范围，线性范围的测量及测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特性。1.34实验室认证：是指认证机构依据程序对实验室工作或服务是否符合规定的要求给予确认，并给通过者出具合格证书，由认证体系确保认及其证书使用的法规、协议及程序的有效性。1.36可报告范围：在方法学的性能条件下，检测结果的最大范围。1.37方法学性能验证：方法学性能难包括但不限于以下内容：检测限、生物参考区间，干扰物质、可报告范围、精密度、线性范围、准确度（比对实验）及偏差评估等。1.38检验前程序：分析前期，按时间顺序，始于临床医师提出检验申请，止于分析程序启动，其步骤包括检验申请，患者准备、原始样本采集、运送到实验室并在实验室内传递。1.39检验后程序：分析后期，检验后过程包括系统评审，规范格式和解释，授权发布、报告和传送结果，以及保存检验结果。第二单元 全自动生化分析仪的分类2.1根据反应装置的结构分类2.1.1连续流动式：在微机控制下，通过比例泵将标本和试剂注入到连续的管道系统中，在一定的温度下，在管道内完成混合、保温、比色测定、信号放大、运算处理、最后将结果显示并打印出来，由于不同会计师的标本通过同一管道，前一标本不可避免会影响后一个标本的结果，这就是所谓的标本污染，这怀恨在心为制约此系统应用的一个重要因素，在大型仪器上较少使用，这类仪器一般分为空气分段系统式和非分段系统式，所谓空气分段系统是指在吸入管道的第一个样品，试剂以及混合后的反应物之间，均由一小段空气间隔开；而非分段系统更是靠试剂空白或缓冲液来间隔第个样品的反应液，在管道式分析仪中，以空气分段系统最多，且较典型，整套仪器是由样品样品盒、比例泵、混合管、透析器、比色计和记录器几个部件组成。管道内的圆圈表示气泡，气泡可将样品及试剂分割为许多液柱，并起一定的搅拌作用，因气泡影响比色，必须在比色管除去。2.1.2离心式：离心式分析仪是1969年以后发展起来的一种分析仪，由aokcnon设计，先将样品和试剂分别置于相应的凹槽内，当离心机开动后，受离心力的作用，试剂和样品相互混合发生反应，经适当的时间后，各样品最后流入转盘外面的比色凹槽内，通过比色计检测，在整个分析过程中不同样本的分析几乎是同时完成的，故又称“同步分析”；分析特点，第一基于“同步分析”的有原理而设计；第二不是随机任选式，按项目顺序分析；第三比色杯必须人工清洗；第四水平测光a=cl其中为摩尔消光系数，c浓度，l为比色杯光径，和垂直测光a=c(tv/s),tv为反应总体积，s为比色杯底面积，两种方式，离心式分析仪主要由两部分组成，一为加样部分，二为分析部分。加样部分包括样品盘、试剂盘、吸样臂（或管）试剂臂（加液器）和电子控制端倪（键盘和显示器）。加样时转头置于加样部分，加样完毕后将转头移到离心机上，分析部分除安装转头的离心机外还有温控检测系统，并有微机处理和显示系统。2.1.3分立式：目前临床实验室所用的大部分分析仪都属于此类，分立式自动生化分析仪的特点为模拟手工操作的方式设计仪器并编制和程序，以机械臂代替手工，按照程序集资进行有序地操作，完成项目检测及数据分析，其工作流程大致为：加样探针从待测标本管中吸入样品，加入各自的比色杯中，试剂探针按一定的时间要求自动地从试剂盘中吸取试剂，也加入该比色杯中，经搅拌器混匀后，在一定的条件下反应，反应后将反应液吸入流动比色器中进行比色测定，或者直接将特制的反应杯作为比色器进行比色。由微机进行数据处理、结果分析，最后将测试结果显示并打印出来，分立式又可分为：管道分立式、反应杯转盘分立式和袋式仪器，从广义上讲，离心式也属于分立戒指范畴。分立式生化分析仪与管道式生化分析仪在结构上的主要区别为：前都各个样品和试剂在各自的试管中起反应，而后者是在同一管道中起反应，前者采用由采样器和加液吕组成的稀释器来取样和加试剂，而不用比例泵；前者一般没有透析器，如要除蛋白质等干扰，需另行处理，恒温器必须能容纳需保温的试管和试管架，所以比管道式分析仪的体积要大，除此以外，其它部件与管道式的基本相似。2.1.4干片式：干片式生化分析仪是80年代问世的，主要是采用干化学方法，将发生在液相反应物中的反应，转移到一个固相载体上，利用反射光分光检测系统进行检测的一类仪器，这类方法除掉了液体试剂，故称干化学法，测定的折射光。2.2根据自动化程度分类：为全自动生化分析仪和半自动生化分析仪，目前半自动生化分析仪用于标本量很少的医院，全自动生化分析仪由第小时180年测试到时候200个测试不等。2.3根据同时可测定项目分类：单通道和多通道两类。单通道每次只能检测一个项目，但项目可以更换；多通道每次可同时检测多个项目。2.4根据仪器的复杂程度分类：可分为小型、中型和大型三类，小型一般为单通道、半自动及专用分析仪；中型为单通道或多通道；大型均为多通道仪器，同时可测定数十个项目，分析项目可自选或组合，不仅能进行临床生物化学梅和代谢物的检验，而且可进行血中药物浓度检测及多各蛋白的测定。2.5根据分析系统试剂开放程度分类：封闭系统和开放系统。封闭系统主要由自动生化分析仪的计算机系统识别唯一试剂条形码编号。附：半自动生化分析仪（一） 半自动生化仪分析特点：体积小、结构简单，操作方便、普通检查（特定蛋白分析有困难）。peltier控温，石英卤素灯比色、吸光义精确到小数点后3位（全自动生化分析体育锻炼小数点后4位）反应液500ul左右、微量流动比色池（数十ul）、恒温器数秒可平衡、温度波动小于0.1，结果由显示器显示（打印通过接口数据输出）、测定方法（连续监测法、两点法、终点法），编排项目（30-100个）。（二） 使用注意事项1 仪器稳定：电压、温度、湿度。2 规定的清洗液清洗管道，一般情况：去离子水清洗、碱性液清洗、去离子清洗。特殊情况（反应中的镁离子、钙离子等）；去离子水清洗、酸性液清洗、去离子水清洗、3 基于一级反应的动力学法测定项目要严格掌握启动反应即刻和吸样并开始记录吸光度的时间。4 基于零级反应的动力学法测定项目（酶活性）控制启动反应和吸样并开始记录吸光度的时间。5 终点法测定注意显色产物放置时间对测定结果有影响。第三单元 全自动生化分析仪安装及使用前准备3.1全自动生化分析仪工作环境的要求 环境温度：1832，工作中波动小于42、热量11000kju、湿度：4080rh，并无冷凝；若室温不稳定，应安装空调，安装在通风好，分析仪不应暴露在流动空气中。避免阳光直射、远离高频电磁波等3.1.1仪器工作空间：实验室面积足够大，以保证仪器的操作、保养、维修和方便及各种配套设施（如纯水机、upsi间断电源）、电脑控制的安置。3.1.2仪器工作条件：没有阳光直接照射，灰尘非常少，平坦没有震动，地板承重为仪器重量的130%-140%，电源波动范围10%,仪器放置应习题避免化学腐蚀物品，灰尘及电磁辐射的污染。3.1.3仪器工作环境的温度和湿度，温度应控制在18-30，工作时波动小于2。部分仪器内设置了允许湿度范围，当温度超过允许范围时仪器自动停止检测，工作环境湿度通常有严格要求，湿度过高可能引起仪器部件的生锈发霉等情况降低使用寿命或仪器不工作，而过于干燥则可引起静电增加，灰尘吸附增加而干扰逃跑系统的稳定性。3.1.4电源要求：应根据仪器对电源的要求和总负载设计专用电路，要求始终连接符合要求的地线并连接ups不间断电源，最好延时30分钟以上，不正常状态（如停电等）下的关机有可能降低仪器的使用寿命和测定数据的丢失。3.2全自动生化分析仪实验用水要求：全自动生化分析仪对水质有严格要求，水的质量直接影响到实验结果和仪器的使用期限，纯化水制备常用语方法可分为三大类：3.2.1蒸馏水：是最早使用的纯化方法，也是实验室中仍然没用的最古老的方法，其过程包括加热，使水蒸发成水蒸气，然后再使水蒸气通过将信将疑管结成蒸馏水。蒸馏过程将不挥发性的水中杂质留下来，而得以去除。3.2.2去离子水：是另一种纯化水的方法，使水通过离子交换树脂柱，以去除阳离子及阴离子，水通过装有合成的阳离子交换树脂柱时，阳离子与氢离子交换，再通过装有合成阴离子交换树脂柱，阴离子与氢氧根离子交换，被交换出来的氢离子和氢氧根离子互相结合成水，混合装填式离子交换树脂柱，是在柱内同时装填阳离子及阴离子交换树脂的混合物，水通过时，能逐步自动除去阴离子及阳离子。3.2.3反渗透水：（多装在离子柱前）反渗透水是通过加压使水渗透过极微小的渗透膜，使95%-99%的其它溶解或不溶解的物质均无法通过渗透膜，逆渗透膜的孔径仅0.0001um左右（细菌0.4-1.0um），水经过时被除去大量的不纯物质，如无机离子和多数有机化合物，微生物和病毒等，但仍有少量残留，一些更小的离子，如硝酸根及溶解氯不是不能有效地除掉。3.2.4纯水的等级标准及纯度检查：和国对实验用水的事质量有其基本要求，通过国际间的学术交流，1985年美国临床实验室标准物委员会（nccls）所规定的水质等级标准能反映当代对水质纯度的要求，目前医学检验部门多采用这一标准。特性指标一级二级三级微生物含量（最大每ml菌落数）1010-1未定ph未定未定5.06.0电阻率（mq/cm,25）121硅0.0050.11.0微检0.2um微孔膜滤过未定未定有机物质活性炭过滤未定未定临床实验室用水一般选用二级，特殊实验如酶学测定或科研用水就选一级水，三级水则用做仪器、器皿经自来水冲洗后的再冲洗，但使用一级水的实验，其器皿的最后冲洗仍应用一级水。用一级水进行实验不得用次级水稀释标本和配制标准液。酶活性测定应该用一级水，交级水中如含有重金属铅、铜、或锌，将会便酶活性受到影响。目前，用于全自动生化分析的纯水系统多为反渗加离子交换的形式。其组成包括：聚酯纤维过滤柱5um活性炭过滤柱、反渗透器，多级混合离子交换床，悬浮离子膜过滤单元、压力泵等。3.3全自动生化分析仪管理文件的要求：3.3.1质量管理文件可分为三个或四个不同的层次，第一层为质量手册，第二层为程序文件，第三层为作业指导书或标准化（sop）第四层为质量记录（包括表格、报告、记录等）。其中第三层和第四层也可合为一层质量文件，其中全自动生化分析仪可能会涉及到其中的二到四层文件。3.3.2程序文件：全自动生化分析仪涉及到仪器管理程序、培训与继续教育程序、仪器检定和校准程序、试剂管理程序、生物参考区间建立程序、质量保证程序、测量不确定度评定程序、校准品和质控品的管理程序等。所有程序中要增加对全自动生化分析仪的要求。3.3.3作业指导书或规范化操作程序：仪器的操作程序发、项目操作程序、仪器校准程序、质控程序、维护保养程序、lis标准操作程序等。3.3.4质量记录：仪器使用记录、维护休养记录、环境记录、仪器用水记录、仪器校准记录、项目校准记录、实验室间结果比对报告、参考区间验证报告、可报告范围验证报告、精密度验证报告、线性范围验证报告等。3.4全自动生化分析仪操作人员培训的要求：包括基本理论、操作技能、维护保养及出现问题的解决方案等。第四单元 全自动生化分析仪的基本结构及工作原理 全自动生化分析仪主要包括样品系统、试剂系统、条形码识读系统、反应系统、清洗系统、管路系统、比色系统、程序控制系统等几部分。4.1 样品系统：样品包括校准物、质控物和病人样吕，系统一般由样吕装载、输送和分配等装置组成。4.1.1.1样品盘：（样品架）即放置样品的转盘，分单圈或内外多圈，单独安置或与试剂转盘或反应转盘相套合，运行中与样品分配臂配合转动，有的采用更换式样品盘，分工作和待命区，其中放置多个弧形样吕架作转载台，对样品盘上放置的样品杯或度管的、直径和深度均有一定要求，有的需专用样品杯，有的可直接用采血试管，样品盘的装载数，以及校准物、质控物、常规样品和急诊样品的装载数，一般都是固定的。这些应根据工作需要选择。样品架（试管架）将样品放入5或10个为一级的架子上，放入传送带，易于标准化、自动化（样本运输）、操作灵活。4.1.1.2 传动带式或轨道式进样：即试管架不连续，常为5或10个一架，靠步进马达驱动传送，将试管架集资载移，再单架逐管横移至固定位置，由样品分配臂采样。4.1.1.3链式进样：试管固定排开在循环的传动链条上，水平移动到采样位置，有的仪器随后可清洗试管。4.1.2样品分配：多由注射器、步进马达或传动泵、加样臂和样品探针等组成。4.1.2.1根据注射器直径和活塞移动距离的多少，定量吸取样品或试剂，它的精度决定架的精度，一般可1微升，有的加液系统采用容积型注射泵和数控脉冲步进马达，提高架精度。4.1.2.2样品探针：在样品杯或试剂瓶和反应杯之间运动，完成采样和加样，它的运动方式与仪器工作效率及工作寿命有一定关系。4.1.2.3样品探针与加样臂相联，直接吸取样品，探针均没有液面感应器，防止探针损伤；另外样品探针还常具有凝块或气泡检出功能，通过自动报警及自动冲洗避免加样错误；样品针通常配有内壁外壁冲洗系统，以减少携带污染。4.1.2.4电磁阀决定液体流动方向：开关作用及单向流动。4.1.2.5可以对样品进行预稀释，过后稀释或加倍，对标准原液系列稀释等，不同仪器的稀释方式有所差异。4.2 试剂系统：一般由试剂储放加试剂针装置组成。（前进马达）4.2.1试剂仓：常与试剂转盘结合在一起，多数仪器将试剂仓设为冷藏室（有无氟制冷），以提高在线试剂的稳定期。4.2.2加试剂针装置：与样吕系统的类似，加试剂针除了吸取试剂外，还设有液面感应器及气泡检出功能。双试剂系统的试剂1及试剂2的加样量范围是相同的，但是可根据不同的检测项目设定起始的试剂加入量，以便配合不同试剂1试剂2的比例的试剂。4.2.3试剂瓶：有不同的形状及大小规格，应根据工作量的试剂规格，考虑试剂瓶残留死体积和更换频率，合理选用，设计的试剂瓶应尽量满足防蒸发，方便储存等要求。4.2.4条形码：配套试剂常有条形码，仪器设有体型码检查系统，可对试剂的各类、批号、存量、有效期和校准曲线等资料，进行核对校验。4.2.5试剂瓶盖形状系统：试剂瓶盖自动开关系统，更有利于试剂保存，有的仪器可在运行中添加更换试剂，有的则要在已停状态进行。4.3 条形码识读系统：一般由扫描系统、信号整形和译码器三部分组成。扫描系统以光源扫射黑白条相间的条码符号，由于条和空对光的反射不同、不同宽窄的条符反射光持续时间不同，产生强度不同的反射光，再经光电转换元件接收并转换成相应强度的电信号，最后通过信号整形，由译码器翻译。系统自动识别样品架及样品编号，识别试剂、标准器及其批号、失效期、有的并可识别校验校准曲线等信息。实验室常用条形码类型有coce39,code128.2of5 、standiusj/lnterleuvcd2of5等。某些仪器上已开始使用二维条码，以放置更多的信息，要自编样品打开友需准备打开码打印机和相应的管理程序，并与仪器体型码识别系统匹配，已有商品化的全自动试管分配及条形码粘贴准备系统。4.4 反应系统：4.4.1反应盘：装载一系列反应比色杯，多为转盘形式，反应测定过程中按固定程序，在加样臂、加液臂、搅拌棒、光路和清洗装置之间转动。有的仪器在反应杯中完成反应后，再吸入比色杯比色，现在更觉反应和在比色杯中进行，效率更高，尤其适于连续监测法，比色杯多采用硬质石英玻璃、硬盘玻璃、无紫外光吸收的丙烯酸塑料等，使用寿命不一，有的全自动生化分析仪的比色杯在机器内自动制做，自动封口，免冲洗，无污染。流动池式主要在小型分析仪用，容积一般几十微升，但抽液管道占用较多反应液，多样品连续使用，增加交叉污染机会。4.4.2混合装置：如采用多头回旋搅拌棒（二头双清洗式搅拌系统），搅拌棒常具特异书生气不沾涂层，避免附。或采用超声波进行混合，某些袋式分析仪其试剂香浓混匀及反应液的混合在袋中通过气锤的敲击进行。4.4.3温控装置：应定期检测，全自动生化分析仪通过恒温控制装置来保持孵育湿度的稳定，反应混合我的孵育湿度的调控和恒定是由计算机来控制的，到时候的孵育湿度波动应小于0.1，保持恒温的方式有三种，1.空气浴恒温机制即在比色杯与加热器之间隔有空气，空气浴恒温的特点是方便、速度快、不需要特殊材料，但稳定性和均匀与各厂家的设计有关，贝克曼库尔特lx20和强生公司的干化学分析仪是空气浴恒温模式，2。水浴循环恒温式：即在比色杯周围充盈有水，加热器控制水的温度，水水浴恒温的特点是湿度恒定，但需特殊的防腐剂以保证水质的洁净，且要定期更换循环水，日立和罗氏公司的生化分析仪系统采用的是水浴循环恒温式。3.恒温循环间接加热式：结构原理是在比色杯周围流动着一种特殊的恒温液（且无味、无污染、惰性、不等蒸发特点）。比色杯和恒温液之间有极小的空气狭缝，恒温液通过加热狭缝的空气达到恒温，奥林巴斯公司的生化分析仪系统采用恒温液循环间接加热式，其湿度稳定，不需要特殊保养。4.5 清洗系统：探针和式或瀑布式等方式自动冲洗。清洗装置一般由吸液针、液针和擦拭刷组成。清洗工作流程为吸出反应液、吸干、注入洗液和去离子水、吸干、擦干、清洗液有碱性和酸性两种。一般说来，在吸出反应液后，仪器选用碱性液冲洗，再用酸性液冲洗，最后用去离子水冲洗三遍，各生产厂家的仪器使用酸性或碱性洗液的时间不是不同的，具体清洗和保养应按照仪器厂家的要求，擦试刷的功能是吸去杯壁上挂淋的水，刷体内部有负压抽吸装置，使用进程中要注意擦拭刷是否磨损。4.6 管路系统：通常包括向反应体系注入去离子水或洗液的管路、连接注射器与探针的管路、排除废液的管路。管路系统的老化或长期使用后反应废物的沉积阻塞，常常是造成反应结果重复性差的原因，应定期更换或清洁管路。4.7比色系统4.7.1光源：一般采用卤素灯或氢灯，卤素灯的工作波长为300到800nm，使用寿命一般1000小时左右，部分生化采用的是长寿合的氢类，24小时待机可工作数年，工作波长285到750nm，当灯的发光强度不够时，仪器会自动报警，应及时更换。4.7.2比色杯：大部健全自动生化分析仪的比色杯也是反应杯。比色杯的光径0.5-0.7cm不等，通常为石英、硬质玻璃或优质塑料。生化分析仪的比色杯自动冲洗装置完成比色分析后做自动反复冲洗、吸干的事动作，比色杯在自动检查合格后继续循环使用，要及时更换不合格的比色杯，如采用的是石英比色杯，比色杯要定期检查清洗。4.7.3单色器与检测器：各类自动生化分析仪应用的是可见，此外吸收光谱法，即即监测300-800nm光区某特定波长下发色基团吸光度的变化。辅以微机软件系统的计算来完成测定。可见-紫外吸光谱定量的基础是朗白比尔定律。 传统的分光度测定普遍采用前分光，即在光源灯和样品杯之间先要用滤光片、棱镜或光栅分光，通过可调的狭鏠，取得与样品“互补”的单色光之后，照身到样品杯，再用光电池或光电管作为检测器，测定样品对单色光的吸收量（吸光度）。 而现代大多生化分析仪采用后分光测量技术，后分光测定：将一束白光（混合光）先照到样品杯，然后再用分光元件分光，同时用一列发光二极管排在分光元件后面作为检测器检测任何一个波长的吸光度。后分光的优点是不需移动仪器比色系统中的任何部件，可同时选用双波长或多波长进行测定，这样可降低比色的噪声，提高分析的精确度和减少故障率。生化分析仪的单色器即分光装置，有干涉滤光片和光栅两类。干涉沾光片有插入式和可放置的圆盘式两种，插入式就是将需用的滤光片插入滤片槽中，圆盘式是将仪器配备的滤光片都安装在圆盘中，使用时放置到所需滤光片处即可，干涉沾光片便宜，但易变潮霉变，从而影响检测结果的准确性，半自动生化分析仪多采用此种沾光片。 光珊可分为全息反射式光栅和蚀刻式凹面光栅两种。前者是在玻璃上覆盖一层金属膜后制成，有一定程度的相差，易被腐蚀；后者是将所选波长固定地刻制在凹面玻璃上，耐磨损、抗腐蚀、无相差。全自动生化分析仪多采用光栅分光。4.8程序控制系统：计算机是自动生化分析仪的大脑，标本、试剂的流回量和识别，条形码的识别，恒温控制，冲洗控制，结果打印，质控的监控，仪器各种故障的报警等都是由计算机控制完成。自动生化分析仪数据处理功能日趋完善，如：反应进程中吸光度，各种测定的方法，各种校准方法、室内质控结果的统计等，生化仪都可进行处理。计算机还可以调看病人的数据，仪器的性能指标，仪器的运行状态等，自动生化仪中的质控和病人结果还可通过计算机与实验室信息系统的对接进行网络管理，程序控制器是系统的硬件部分，它主要包括微处理器和主机电脑、显示器，系统及配套软件等。4.9携带和交叉污染试验及纠正：需要注意的是，对于有些试验项目仅仅通过常规冲洗并不能清除交叉携带污染。4.9.1引起生化分析仪交叉污染的原因：4.9.1.1共有化：一台仪器测定数十个项目都共用试剂探针，样品探针，搅拌棒和管道。4.9.1.2目前生化分析仪的处理能力提高，在一台仪器上检测的项目和测试的方法学逐渐增加。4.9.1.3技术人员使用生化分析分度或 维护保养仪器不当，使仪器及管道污垢积聚；仪器使用时间过久，仪器部件老化冲洗能力降低。4.9.1.4生化分析仪器的清洗液的使用不当。4.9.1.5由于试剂组成成分会影响前后检测项目的结果，检测项目的排列顺序不合理。4.9.2携带和交叉污染试验方法及计算 高值血清 生理盐水 样本1：1000稀释后携带交叉污染的计算方法：共检测29次：盐水的平均值为a;稀释后样本的平均什为b。交叉污染率m(a/bx1000)x100%; 0.3%为正常。4.9.3觉的携带和交叉污染组合：alt和ast试剂中有ld对-hbdh和ld的测定有污染，通常-hbdh和ld与alt和ast的测定项目要分开排列；磷酸盐缓冲液中含磷，对磷的测定有影响，胆固醇试剂中含胆酸钠对总胆法酸测定有影响；ck的试剂中有葡萄糖对在葡萄糖的测定有污染，通常血葡萄糖的测定不能排在ck项目后面，乳酸测定试剂对乳酸脱氢酶测定有污染；淀粉酶试剂中含钙离子，碱性磷酸酶试剂中含镁离子，这些都对相应的测定项目有污染，尤其镁的测定，受很多因素的干扰，钡酸盐方法测定总胆红素和直接胆红素不能排列在含有碱性试剂测定的项目之后，例如alb、alp、ca、mg、cr（苦味酸法）等。所以知晓各项试剂中的组成成分，正确的排列测定项目的顺序是非常重要的。过氧化物酶反应系统的测定项目不要排列在一起，（基于prindcr反应的高含量测定项目与低含量测定项目之间）有交叉污染，因此，需要将互有影响，可能在试剂探针、反应比色杯、搅拌棒或样品探针发生交叉污染的项目组合，以及规定的解决方法（如变换项目或试剂位置、选用特殊清洗剂、增加清洗次数）予以合理设定。第五单元 全自动生化分析仪常用分析技术 临床生物化学分析技术很多，常用的主要有光谱分析技术、电流技术、离心技术、电化学分析技术等。现将全自动生化分析仪常用的分析技术介绍如下。5.1 光谱分析技术：波长的正确选择有利于提高测定的灵敏度和减少测定误差。光度学方法有单波长和双波长之分，有的仪器可用三波长，甚至多波长，以及两波长比率等，有的仪器可作导数光谱分析。单波长测定易受样品溶血、黄疸、脂浊等因素干扰。双小强长由主波长和副波长构成的两个波长，在计算时用主波长的吸光度减去副波长的吸光度。主波长是指测定某物质时，生成物的产物颜色对光吸收的特有波长;副波长是指测定某物质时，为消除其它干扰物质在主波长造成测定干扰所设定的波长，选择双波长的优点：1.消除噪音干扰，2。减少杂散光影响。3.减少样品本身光吸收的干扰。当样品中存在非化学反应的干扰物如tg、hb、tbl等时，会产生非特异性的光吸收，双波长方式可以减少消除这类光吸收干扰。 测定波长选择有三个主要条件：1.待测物质在该波长下的光吸收最大。2、其吸收峰宜较宽而钝，而不是处于尖峰或陡肩，一般不选光谱中的末端吸收峰，换名话说，该吸收峰处的吸光度随波长变化。3.常见干扰物在波长下的光小，试剂盒说明一般已提供波长参数。实际波长选择需要了解待测物质和干扰组分对不同波长单色光的吸收程度，即以波长为横坐标、吸光度为纵坐标用吸收光谱曲线（光吸收曲线）。常见的双波长选择：血红蛋白在340和380波长吸光度相同，以nadh或nadph作为测定底物或产物的试验常采用340、380或550、660nm ，免疫比浊常选用340/700nm等。光谱分析在方法上，有的定性和结构分析，有的侧重物质的定量测定，这里主要其定量测定方法中能应用于全自动生化分析仪的吸收光谱分析法和散射光谱分析法。5.1.1吸收光谱分析法 吸收光谱分析是临床生物化学检验中应用最广泛的一类分析技术，其特点为方法的灵敏度好，检测浓度在10-510-2 mol/l范围是 操作简便、快速、选择性好和应用广泛；此外分光分析法还无需显色，无论是有色还是无色溶液，只需在紫外光区有吸收特性，即要进行定性和定量分析。 lirnberi-beer定律是光吸收的基本定律，其数学表达式为：a=kbc式中，是与入射光的辐射波长及吸收物质的性质有关的常数；a为吸光度，k为吸光系数，c吸收物质的浓度，b 为液层厚度，单位是cm ，当浓度的单位为mol/l时，k的单位为l/mol.cm称为摩尔吸收系数，表示物质对某一波长的辐射的吸收特性，c愈大，表示物质对基本波长国投的吸收力愈强，测定的灵敏度傲气高，对于某一特定物质来说，吸收不同波长的辐射时，其相应的摩尔吸收系数也不同。不同的物质具有不同的特征吸收曲线，因此，吸收光谱可用做物质的定性鉴定。5.1.2散射光谱分析法主要测定光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的一类定量方法。测定过程与比色法类同，常用法为比浊法。但颗粒的大小和悬液的稳定性对比浊结果有较大的影响，因此不能完全按比色法的规律进行比浊测定，否则就会引起误差，免疫比浊法是传统的临床化学免疫检测技术之一。1959年chultxe等根据抗原抗体结合形成的抗原抗体复合物能引起液体介质出现浊度改变的原理，依据过量抗体存在时抗原量与行使物形成正相关的实验动力学过程，建立起一种液相化学免疫分析方法，此方法称为透射比浊法，1960年ritchic等利用激光照射在液相中抗原抗体复合物微粒上的部分光线发生散射的原理，通过测量散射光的强度来推算待测抗原的量。这种比浊测定方法称散射比浊法。1977年stcrtksbcng建立了速率散射比浊法，使比浊法测定成为一种灵敏度高，重复性好、速度快而且易于自动化的免疫测定方法，近年来，免疫胶乳比浊法和速率抑制免疫比浊法相继建立，大大拓展了免疫比浊测定的应用空间，免疫浊度法测定的基本原理是可溶性抗原、在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射和吸收，测定这种折射和吸收后的透射光或散射光作为计算单位。 由于测定仪器和方法的不同，比浊法又可会为两类，透射比浊法和散射比浊法。前者是在180度角，亦即在直射用度上测定光透射强度，后是是在596度角的方向上测量散身光强度和被测溶液中微粒浓度关系的方法。目前全自动生化分析仪上主要采用的是透射比浊法测定，在免疫比浊分析中，抗原抗体复合物的生成量和颗粒的大小与反应体系中抗原抗体的比例关系极大，当反应体系中抗体过量时，抗原抗体复合物的生成量随抗原量的增加而递增。比浊法的突出问题是颗粒的大小对浊度和法度曲线有较大的影响，因此，在比浊法中必须力求做到：1.混悬液中的分散度应尽可能相同，并易重复，标准管和测定管中颗粒大小应力求一致; 2.混浊液在一定时间内，至少10分钟内应维持稳定，不易相互聚集变粗变大。5.2电化学分析技术：利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位，电流或电量的变化进行分析的方法称为最化学分析，电化学法有多种，如电位法、电导法和电容量分析等，电位分析法是利用电极电位和浓度之间的关系来确定物质含量的分析方法，表示电极电位的基本公式是能斯特（ncnmt）方程。离子选择电极分析法是电位分析法中的发展最为迅速、最活跃的分支。也是大型全自动分析仪上测定钾、钠、氯等离子的常用方法，对某些离子测定的灵敏度可达10-5数量级，在许多情况下不破坏液或不用进行复杂的预处理，对有色、常温溶液都可进行分析。在离子选择电极法中电位测量电路的一侧为测量电极（即离子选择电极），另一侧为参比电极。当被选择离子与lse电极膜接触反应时，电位计电路和中的电动势立即发生变化，产生电位差，电位差的大小，与溶液中离子正比，亦与离子浓度成正比，其关系服从nernst方程，离子选择电极基本上都是薄膜电极，它们是由对基本一种离子具有不同程度的选择性响应的膜所构成，常用的离子选择性电极包括：5.2.1玻璃膜电极：是一种硬质电极，是最早用开ph测定的离子选择性电极。之所以能测定溶液的ph，是因为玻璃膜产生的膜电位与待测溶液的phe关，玻璃膜电极在使用之前，必须在水中浸泡后，玻璃膜层极薄的水化层（百度约为10-310-4mm）；这是电极起作用的主要部分，可以把水化层看成是一层不移动的溶液，这一过程称为玻璃电极的活化。5.2.2晶体膜电极：的薄膜一般是由难深盐晶体经过加压或制成单晶，多晶或混晶的活性膜。由于制膜的方法不同，晶体膜可分为均相膜和非均相膜两类。父亲相膜电极的第三膜是由一种或几种化合物均匀混合的晶体制成，而非均相膜则除了电活性物质以外，还加入了随性材料，如硅橡胶、聚乙烯等，组成多相的第三膜。5.2.3流动载体膜电极：这类电极又称液膜电极，是非晶体膜电极的一种。这种电极的第三膜不是固体而是液体，它是由赏玩有机试剂的金属络合剂，渗透在多孔塑料膜内。形成液体的“离子交换体”，按照的离子交换剂的性质，液膜电极可分为三种：阴性液膜电极、阳性液膜电极和中性载体电极。5.2.4敏化电极：气敏电极是在原电极上覆盖一层疏水性的透气膜，在透气膜与原电极第三膜之间放一簿导中间溶液。透气膜不允许溶液中的离子通过，而只允许被没定的气体通过，直到透气膜内外两边气体分压相等为止。进入透气膜的气体与中间溶液反应，使中间溶液中的一个可测量的量（如ph）发生变化，这种变化由原电极的第三膜反映出来。5.2.5酶电极：与气敏电极相似，酶电极也是一种利用界面反应敏化的离子电极，这里界面反应是酶催化反应，酶被固定在胶层中，胶层包在电极外面，源电极响应反应过程中某一级份的活度变化。第六单元13 全自动生化分析仪检测的质量控制全自动生化分析仪主要涉及的是分析中的质量控制，其内容主要包括以下方面：1.建立各项上报标准操作程序; 实施质量控制需要有一套完整的标准操作规程做保障，例如仪器的定期校准（由生产厂家进行）、规范使用程序、参数的设置及调整、操作维护程序及质控物和校准的正确使用等。2.室内质控和结果分析的；掌握室内质量控制的程序以及出现失控后的处理方法。3.参加全国或地方的室间质量评价的活动，清楚本仪器检测结果的准确性。6.1校准（emlihbrntlom）6.1.1校准方法6.1.1.1用校准物进行校准应注意如下问题：1.选择合适的校准物，以保证检测结果的可溯源性；2.根据试验项目确定校准的频度，校准的频度过高，加重不必要的工作及浪费资源，同时易引入系统偏差，校准的频度过低，不能保证结果的准确性一。3.室内质控出现异常的趋势或者偏移时的工卡应重新校准；仪器更新了重要的部件后应重新校准。注意区别定值质控血清和校准物，决不可用定值质控血清代替校准物进行校准。校准方式可采用两点或多点校准，但对于多数的免疫比浊法应采用多点校准。两点法校准采用一个浓度的校准物和一个试剂空白，标准曲线为直线；多点法校准工作曲线可以为对数、指数、量程法等非线性曲线。6.1.1.2应用实际k值进行校准：在实际工作中特别是用自动生化分析仪测定同一酶，条件固定时，从理论上来讲，反应体系的体积（v）、样品量（）、和比色杯光径（l）均为固定值。摩尔消光系数（）为常数，则可以将酶活性浓度单位的公式一般称k为酶活性浓度系数（或称为常数），主要用于临床酶活性测定的计算与校正，例如连续监测法测定血清中ld活性浓度，已知nadh的为6.22*103cm2.mol-1，血清量为50ul，底物液为1ml，比色杯光径为1cm，则k=10.5*106/6.22*103*0.05*1-3376.系数k值对于酶的测定十分重要，过高虽然测定的线性较宽，但重复性差，反之，虽然精密度好，但检测线性窄。因此，应根据实际情况进行合理的设置与应用，k值的设置应考虑测定酶的参考值上限及测定时间两方面，以保证测定结果的可靠。迄今为止，某些仪器还是用理论k值或者厂家给出的k值进行计算，一个物质的摩尔吸光度是一个定值，而理论k值的计算也物质的摩尔吸光系数、光径、样本及试剂加注量等因素有关，在不同的检测系统，由于仪器的性能不一，特别是仪器的加样系统的误差、分光系统的误差、干涉滤光片或光栅等半波宽度偏大导致的杂光以及多波长同时使用等，使仪器达不到理论上的最佳状态，从而导致该仪器的实际k值与理论k值不一致，因此，不宜直接使用理论k值进行计算，如果使用厂家配套的检测系统，厂家提供的k值实际上是该检测系统的实际k值，在仪器经厂家校准的前提下，可能直接使用，但此k值不能用于其它检测系统。6.1.1.3在公认的酶活性标准品问世前需使用k值进行酶活性的计算。应提倡使用实际k值进行计算。使用实际k值就注意如下问题：1、不同的仪器，实际k值不同。2、同一仪器的不同时期，特别是仪器进行了维修甚至更换了重要的部件时，实际k值不同；3、不同的检测系统，实际k值不同。6.1.2标准品（参考物质）的特征：6.1.2.1均质性好：在使用标准物质时常是取其中一部分，而标准品的标示值是对一批标准品定值的数据，因此均匀性好是标准品使用的重要特征，如冻干血清复溶混匀前飞溅、悬浮性颗粒（如全血细胞校准物和质控物）混匀方法不当，均可造成取样的量值不能代表整体量值。6.1.2.2性能稳定：标准品的稳定性是批标准品长时间贮存时，在外界环境条件的影响下物质特性量值和物理化学性质保持不变的能力，具有良好稳定性的标准品，就在规定的期限内按规定的条件贮存。6.1.2.3量值准确：是标准品的基本特征，标准品作为同一量值的一种计量标准，即凭借该物质特性量值校准仪器测量方法、进行量值传递、保证检测质量，标准哗啦啦 特性量值必须由具有良好仪器设备的实验室组织有经验的技术人员，采用准确、可靠的测量方法定值。6.1.2.4具有与待测物质类似的组成或特征：为消除由于标准品与待测物质两者除了待没物外其他物质及组份的不同，而对分析结果产生的影响，选用标准物质确定待测物质量值时，就选择与待测物质在组成或特性相近似的标准物质，这是使用标准品的一条重要原则。近年来检验医学十分重视基质效应问题，克服基质效应的方法是使标准品和被测标本处于相同的基质环境中，即标准品应使用和被测标本相同的基质配制。测定的是血清，配制标准品也应是血清；测定的是全血，也应用全血配制标准品，以减少基质效应的影响。6.1.2.5批量生产：标准品必须有足够的产量和贮存，以满足需要，特别是二级标准物质和质控物直接用于大量实际工作，需求量大，应分批制备，分别定值，在编号上区别不同批次的标准品。6.1.2.6标准品证书：一、二级标准品必须有国家质量检验检疫总局颁发的证书，标准物质证书是介绍该标准物质的属性和特征的主要技术文件，是向使用者提供的计量保证书，是使用该标准品进行量值检测和进行量值溯源的凭据。6.1.3校准物：一种用于校准、分度或修正测量值的物质或装置，这种物质和和装置必须跟踪国家或国际的标准品或装置，校准物应具有与标准品相同的特征，检测结果既要具有溯源性，又要不同实验室检测结果有可比性，因此校准物又具有本身的特性，校准物由常规标准方法（厂家选定方法）定值，用于终用户实验室常规方法的校准。6.1.3.1基质效应：临床检验的样品基质和检验成分稳定性较差，易受到处界影响而降解，改变形态或结构，为了减少基质效应，应使校准物和标本处于相同的基质