（分析化学专业论文）稀土离子药物相互作用的研究及其应用.pdf

独创声明 y 5 9 8 8 0 3 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为 获得 ( 注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空) 或其他教育机构的学 位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 锄铮舻 签字日舭年钾月蟊 毒经俸肴、鲁卿畸嫩 知垒文公柱 l u 东婀】范人学坝i 论义 摘要 本硕士论文工作以分子光谱( 荧光、紫外) 作为研究手段，从以下四个方 面丌展工作： 第一章，主体化合物对客体分子具有高度的分子识别能力。近年来卟啉、冠 醚、环糊精、杯芳烃等新型主体化合物在生物相关物质识别分析方面的应用已逐 渐成为研究的热点。由于c d 分子外围的羟基在一定程度上会阻止通常为非极性的 客体分子进入c d 的非极性空腔形成包合物。本文选择合成了p c d 的一种衍生物 2 ，6 一二乙氧基一0 一环糊精，0 一c d 外围的羟基被乙氧基取代后，会使c d 的极性减 弱，使之易于形成包合物，为客体分子提供了一个具有更强保护性的非极性空腔， 降低了水分子和水中溶解氧对客体分子的荧光熄灭等作用的影响，提高荧光量子 产率。在适当条件下，完成了对药物强力霉素和四环素的测定。 第二章，核酸的研究在生物化学、生物技术及药物研究等方面都有着非常重 要的意义。近来以荧光探针作为研究手段，对核酸的研究取得了蓬勃发展。根据 洛美沙星与稀土金属离子铽络合后，存在分子能量转移，发射出铽的特征荧光， d n a 独特的疏水性微环境能显著的敏化洛美沙星一铽络合物的荧光，建立了以此 络合物为荧光探针检测d n a 的分析方法，并成功完成合成样、人血清和携带有质 粒p b l u e s c r i p ti is k ( 一) 的大肠杆菌菌落d h 5 a d n a 提取物中d n a 含量的测定。 本文利用荧光光度法和紫外吸收分光光度法研究了核酸对洛美沙星一铽体系的荧 光增强效应的影啊因素和作用机理，还利用此原理，建立了对药物洛美沙星测定 的方法。 第三章，丌发、设计新的特效荧光试剂，研究新的、专一的分析检测方法是分 析化学这门学科的基础工作之一。利用自合成的新型荧光试剂水杨醛缩对甲氧基 苯胺，完成了对样品猪肝、贻贝中钼元素的测定。文中探究了新试剂与钼络合的 最佳条件，考察了多种表面活性剂的影响。由于试剂水杨醛缩对甲氧基苯胺两端 苯环的存在，与钼络合后，增加了分子的共轭程度和刚性平面，在反应体系质中 加入适量环糊精，山于m 同增敏作用使络合物的荧光强度明显增大且提高了体系 山东帅范人学删i 论义 的稳定性，使分析灵敏度有了显著提高，是目前荧光法测定钼最灵敏的方法之一。 第四章超临界流体萃取技术( 简称$ f e ) 是近二十年来发展起来的一项新型 的分离技术，同时也是一种绿色提取手段。目前超临界流体技术已经受到国际科 学技术界的广泛的关注。自由基是指含有一个或一个以上不配对电子的原子、原 子团或分子等。它是一种高能物质，具有顺磁性和高度活性，很易进行氧化反应。 是造成人衰老的重要原因之一。在合适的温度、压力、流速等条件下，应用超临 界c o ：流体摹取技术萃取虎杖、炒白术、大黄、决明子等多种中草药中的黄酮类化 合物。利用邻苯三酚自氧化法和以茜素紫作显色剂的分光光度法在适宜的条件下， 分别测定了虎杖、炒白术、大黄、决明子等黄酮类提取物对超氧阴离子自由基和 c o z + + 0 。体系所产生的羟基自由基的消除作用，比较了各种中药提取物的抗氧活 性，并且对实验条件进行了探讨。 关键词：主体化合物、客体分子、超临界流体萃取技术、超氧阴离子自由基、羟 基自由基、黄酮类化合物、邻苯三酚自氧化法、荧光探针 分类号：0 6 5 7 3 山东帅弛人学坝i 论义 a b s t r a c t t h i sm a s t e rp a p e ri sc a r r i e do u ti nf o u ra s p e c t so fi n v e s t i g a t i o nb yt h em e t h o do f m o l e c u l a rs p e c t r u m ： f i r s th o s t c o m p o u n d sh a v em o l e c u l a rr e c g n i z i t i o na b i l i t yt o w a r d sg u e s t m o l e c u l a r s i nr e c e n ty e a r s ，t h ea p p l i c a t i o n so fn e wh o s tc o m p o u n d s ，s u c ha sp r o p h r i n ， c r o w ne i t h e r , c y c l o d e x t r i n ( c d ) a n dc a l i x a r e n c e ，o nt h er e c g n i t i o na n da n a l y s i so f b i o p e r t i n a n ts u b s t a n c e sh a v eg r a d u a l l yb e c o m gt h ef o c a lp o i n to ft h ep r e s e n tr e s e a r c h w o r k h y d r o x y lg r o u p sont h eo u t s i d eo fb - c ds l i g h t l yp r e v e n tt h eg u e s tm o l e c u l e s ， w h i c ha r e u s u a l l yn o n p o l a rm o l e c u l e s ，f o r m i n ga l li n c l u s i o nc o m p l e x s ow e s y n t h e s i z e dak i n do fr a m i f i c a t i o no f 日一c d ，d e b c d ，i nw h i c h ，t h es u b s t i t u t i o no f t h eh y d r o x y lg r o u p so nb c db ya l k y lg r o u p st or e d u c et os o m ee x t e n tt h ep o l a r i t yo f b c df a c i l i t a t i n gt h ec o m p l e x a t i o np r o c e s s i ta l s o p r o v i d e sm o r ep r o t e c t i o nf o rt h e i n c l u s i o nc o m p l e x i nt h i sp a p e rw es e l e c t e dt c sa st h ea e r i a l m o l e c u l a r ( 1 i g a n d ) f o r e u 3 + i o na b s o r b e de n e r g ya n dt r a n s f e r e di tb ye l e c t r o n i ce n e r g yt r a n s f e rt oe u 计t om a k e i te x c i t e d ，s ot h es e n s i t i z e df l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fe u 3 + i o ni se n h a n c e di nt h es y s t e m ( t c s e u 3 + 1 w es e l e c td e b c dw i t han o p o l a rc a v i t yt op r o v i d eap r o t e c t i v e m i c r o e n v i r o n m e n tf o rg u e s tm o l e c u l e s ( t c s e u 3 + ) t of o r mt h ei n c l u s i o nc o m p l e xt o g a i nt h ef u r t h e re n h a n c e m e n to fs e n s i t i z e df l u o r e s c e n c eo fe u 3 + i o nb yp r e v e n t i n g f l u o r e s c e n c ef r o mq u e n c h i n g e x p e r i m e n t a lr e s u l t si n d i c a t et h a tt h ec h a r a c t e r i s t i cp e a k o f e u 3 + i o na t6 1 2 n mc a l lb em o r eg r e a t l ye n h a n c e di nt c s e u 3 + s y s t e mb yd e 一0 一c d a c c o r d i n gt ot h e s e ，an e wf l u o r e s c e n c em e t h o dw i t hh i g hs e n s i t i v i t ya n ds e l e c t i v i t yi s e s t a b l i s h e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no ft c s ，t h em e t h o di sa p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no f t c si nh u m a ns e r u ma n du r i n es a m p l e sw i t hg o o dr e s u l t si nt h i sp a p e r s e c o n dt h es t u d yo fn u c l e i ca c i di so fg r e a ti m p o r t a n c ei n b i o c h e m i s t r y , b i o t e c h n o l o g y , a n dp h a r m a c o d y n a m i ca n do t h e ra r e a s t o d a y , t h es t u d yo fn u c l e i ca c i d u s i n gf l u o r e s c e n c ep r o b eh a sa t t r a c t e dm o r ea n dm o r ea t t e n t i o n t h e r ei s e n e r g y 1 山东师范人学碳i ：论文 t r a n s f e rb e t w e e no f l a x i na n dt b 3 + a n dt h ec o m p l e xcane m i tt h ec h a r a c t e r i s t i c f l u o r e s c e n c eo ft b h ，s ot h ec o m p l e xc a nb eu s e dt od e t e r m i n ed n aa sak i n do f f l u o r e s c e n tp r o b e i na d d i t i o n ，t h eh y d r o p h o b i ce n v i r o n m e n tc a nd r a m a t i c a l l yi n c r e a s e t h ef l u o r e s c e n ti n t e n s i t yo fc o m p l e x i nt h i sp a r t ，w es t u d i e dt h ef l u o r e s c e n c e i n c r e a s e d e f f e c to fn u c l e i ca c i dont h ec o m p l e xs y s t e m ，e x p l a i n e dt h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s m a n d i t sa p p l i c a t i o n t h i r do n eo ft h ef o u n d a t i o n so ft h ea n a l y t i c a lc h e m i s t r yi se x p l o i t i n g an e w f l u o r e s c e n tr e a g e n t sw i t he s p e t i a le f f e c t i v ea n dw o r k i n go u tn e w , h i g hs e l e c t i v e a n a l y t i c a lm e t h o d i an e wf l u o r e s c e n tr e a g e n th a sb e e ns y n t h e s i z e d t h ef l u o r e s c e n t r e a c t i o nb e t w e e nt h i sr e a g e n ta n dm ow a ss t u d i e d b a s e dont h i s ，w ed e v e l o p e dan e w m e t h o dt od e t e r m i n em oi ns a m p l e s f o r t ha p p l y i n gs u p e r c r i t i c a l c 0 2f l u i de x t r a c t i o nt e c h n o l o g y , f l a v o n o i d sw e r e e x t r a c t e df r o m ec h i n e s et a d i t i o n a lm e d i c i n eh u z h a n g ，c h a o b a i s h u ，d a h u a n g t h e d a m a g eo fr a d i c a l st oh u m a n i st od e s t r o yt h eb i ga n i m am o l e c u l a r , w h i c hi so n eo ft h e r e a s o n so fc o m i n ge i d e r u s i n gt h em e t h o do fp y r o g a l l o ls e l f - o x i d a t i o n ( k n o w na s 3 2 5 n mm e t h o d ) ，t h es u p e r o x i d er a d i c a ls c a n v e n g ee f f e c to ft h ee x t r a c t i o nw a sc a r r i e d o u ti nt h eb u f f e rs o l u t i o no fh c l 一t r i s ( p h = 8 2 ) w i t hs p e t r o p h o t o m e t r y , h y d r o x y l r a d i c a l ，w h i c hc r e a t e di nt h ef e n t o nr e a c t i o n ，w a se l i m i n a t e db ya l i z a r i nv i o l e ta st h e c o l o d e v e l o p i n gr a g e n t r e s u l ti nt h eb u f f e rs o l u t i o nh c l 一t r i s ( p h 2 9 0 ) a n dt h er e a c t i o n c o n d i t i o nw a si n v e s t i g a t e d r e s u l ts h o w e dt h a tt h e s ee x t r a c t i o n sa r ee l i m i n a t i o na g e n t f o rt h e s er a d i c a l s k e yw o r d s ：h o s tc o m p o u n d s 、m o l e c u l a rr e c g n i z i t i o n 、g u e s tm o l e c u l a r s 、 s u p e r c r i t i c a l c 0 2f l u i de x t r a c t i o nt e c h n o l o g y 、s u p e r o x i d er a d i c a l 、h y d r o x y lr a d i c a l 、 f l a v o n o i d s 、p y r o g a l l o ls e l f - o x i d a t i o n 、f l u o r e s c e n tp r o b e c l c ：0 6 5 73 4 山东帅地人学顾i j 论文 中文全文 2 ，6 一二乙氧基一b 一环糊精 铕 强力霉素 四环素 天线分子 超分子包合物 客体分子 主体分子 二氧化碳超临界萃取 黄酮类化合物 超氧阴离子自由基 临苯三酚自氧化 羟基自由基 钼 铽( i l l l 核酸 洛美沙星( l m ) 沟槽式结合方式 中英文对照 英文全文 英文简写 2 , 6 一。一d i e t h y l 一0 一c y c l o d e x t r i n d e 一日一c d e u r o p i u m d o x y c y c l i n e t e t r a c y c l i n e a i r a e lm o l e c u l a r s u p e r m o l e c u l a ri n c l u s i o nc o m p l e x h o s tm o l e c u l a r g u e s tm o l e c u l a r s u p e r c r i t i c a l c 0 2f l u i de x t r a c t i o n f l a v o n o i d s s u p e r o x i d er a d i c a l p y r o g a l l o ls e l f - o x i d a t i o n h y d r o x y lr a d i c a l m o l y b d e n u m t e r b i u m n u c l e i ca c i d l o m e f l o x a c i n g r o o v i n gt y p e 5 e u 3 十 d c t c a m s m i c h m g m s f c f l v s s o r p s 0 h o r m o t e n a l m g t 山东帅旭人学坝l j 论义 第一章2 ，6 一二乙氧基一1 3 一环糊精对铕( i i i ) 一四环素类药 物络合物体系的荧光增强作用及其分析应用 第一节概述 环糊精( c d s ) 是由环糊精葡糖基转移酶( c g t ) 作用于所产生的一组环状低 聚糖。c d 分子均由d a 一( 1 4 ) 糖苷键组成，糖基数目用拉丁字母表示。最常 见的三种环糊精为a c o 、1 3 - c d 、y c d ，分别含有6 、7 、8 个葡萄糖基。其中 以b c d 因其价格相对较低而最为普遍易得。c d 分子形状都是略呈锥形的圆环， 有一个非极性的空腔。相似尺寸的溶液分子可以进入c d 分子的空腔中，与之形成 包合物。 当前人们对环糊精的衍生物的特性的研究表现出极大的热情生成化学修饰 反应产物的化学反应类型住要有：l 取代羟基( 卤代，氨基、脱氧衍生物) 2 置换 羟基氢原子( 醚、酯等) 3 、氧化c 。( c j 一醛、c ；一羧酸等) 4 、高碘酸氧化裂解c ：一 c 。键 二醛或( 及) 氧化或还原产物 5 、交联聚合( c d 聚合物) “1 。 由于c d 及其衍生物能通过对客体形成包合物来改变客体化合物的理化性质， 因此它在食品、医药、烟草和化妆品等工业中具有十分广泛应用前景，但是严格 的管理控制和冗长的实验研究，大大限制了c d 在这些领域中的实际应用。而在分 析化学中应用c d 则无上述问题，从增效效应的发现到实用，可很快完成，所以近 几年来c d 及其衍生物己被成功的应用于分析化学的各个领域，其中主要在色谱分 析、光谱分析和电分析化学三个方面。 本章从荧光的角度来研究c d 及其衍生物对客体分子的增敏作用，由于c d 分 子外围的羟基在一定程度上会阻止通常为非极性分子的客体分子进入c d 的非极性 空腔形成包合物，所以选择了6 一c d 一种衍生物2 ，6 一二乙氧基一b c d 应用于荧光 分光光度法分析中，b c d 外围的羟基被烃基取代会c d 的极性减弱，使之易于形 成包合物，为客体分子提供了一个具有更强保护性的非极性空腔，防止了水分子 和水中溶解氧对客体分子的荧光熄灭作用等的影响，提高荧光量子产率。在适当 6 山东帅扎人学顺i 。论文 条件下，完成了对四坏素类药物的强力霉素和四环素的测定。 参考文献 1 z h i l o n gg o n g ，z h u j u nz h a n ga n a l y t i c ac h i m i c aa c t a3 5 1 ( 1 9 9 7 ) 2 0 5 2 1 0 2 戚文彬，戚志红新分析增效试剂杭州大学出版社 山东师范人学坝i 。论义 第二节2 ，6 - _ - t _ , 氧基一b 一环糊精对铕( i i d 一强力霉素药 物络合物体系的荧光增强作用及其分析应用 摘要在p h = 9 4 的n h c 卜n h h z o 的缓冲条件下，强力霉素( d c ) 能增强铕( i i i ) 位于6 1 2 n m 处的特征荧光，加入2 ，6 - - - 乙氧基一0 一环糊精( d e b c d ) 后，体系 的荧光强度显著增强，据此建立了荧光分光光度法测量d c 的方法。实验表明，存 在2 6 - 二乙氧基一d 一环糊精时，d c 的线性范围是6 1 5 1 0 “1 4 6 x1 0 一m o l l ， 检出限为1 3 5 1 0 m o l l ，并研究了共存物质的影响。该方法成功的用于血样和 尿样中d c 的测定，结果令人满意。 关键词e u 3 + ，强力霉素，2 ，6 - 二乙氧基一1 3 一环糊精 1 引言 强力霉素( 结构见下图) 是由土霉素改造其结构所得的一种四环素类抗生素 药物，其脂溶性比土霉素和四环素明显增大，抗菌作用与机理与四环素相同，但 抗菌作用强于四环素。可广泛用于呼吸、泌尿及生殖系统和胆道感染，并可用于 青霉素过敏的患者。 h c i 。1 ，2c 2 h 5 0 卜卜1 2 h ：0 现阶段，对于强力霉素的研究主要有原子火焰吸收光谱法，液相色谱法”1 ， 薄层色谱法 _ 1 ，n a f i o n m o d i f i e de l e c t r o d e 化学发光法，流动注射法，分 光光度法，高效液相色谱法呲，气相色谱法3 ，但迄今为止，尚未见到荧光分 光光度法研究强力霉素的报道。环糊精( c d ) 分子的形状都是略呈锥形的圆环， 有一个非极性的空腔。相似尺j j 的溶液分子可以进入c d 分子的空腔中，与之形成 l b 东帅旭人学坝i j 论史 超分子包合物1 ，故作为优良的酶模型和分子受体，环糊精在科学和技术的诸多 领域有着广泛的应用“3 1 。 本文从荧光的角度来研究c d 及其衍生物对客体分子的增敏作用，由于c d 分 子外围的羟基在一定程度上会阻止通常为非极性分子的客体分子进入c d 的非极性 空腔形成包合物”3 1 。本文合成了b 一环糊精( b c d ) 的一种衍生物2 ，6 - 二乙氧基一 0 一环糊精( d e b c d ) ，1 3 一c d 外围的羟基被烃基取代后，c d 的极性减弱，使之 易于形成超分子包合物，为客体分子提供了一个具有更强保护性的非极性空腔， 降低了水分子和水中溶解氧对客体分子荧光熄灭作用的影响，提高荧光量子产率。 基于上述原因，应用d e 一1 3 一c d 与强力霉素与e u 。+ 形成包合物的作用，可以进 一步增强e u ”的两个位于5 9 0 0 和6 1 2 o n t o 处分别对应于e u 。+ 的j d - ；f 。和i d i , - t f 。跃 迁特征荧光的发射峰。实验结果表明，加入后修饰的环糊精，使得的体系d c e u l + 的荧光强度明显增强，d c e u 3 + 体系增强的荧光强度与强力霉素的浓度呈现良好 的线性关系，线性范围变宽，灵敏度更高。 2 实验部分 2 1 试剂 b 一环糊精( 中国医药集团上海化学试剂公司) ：保存于真空干燥箱内。 溴乙烷( 分析纯) e u 3 + 储备液的配置：准确称取0 3 5 2 0 9 e u 。0 ( 含量大于9 9 9 9 ，上海跃龙有色 金属有限公司) ，加入少量浓盐酸，加热使其溶解，并挥发近至干，然后用0 1 m o l l 的稀盐酸稀释至l o o m l ，作为储备液，使用时以石英亚沸蒸馏水稀释。 d c 储备液的配置：准确称耿0 0 8 0 2 9 强力霉素( 含量约为8 6 ，中国药品生 物制品检定所) ，以石英亚沸蒸馏水溶解定容至l o o m l ，得1 3 4 x1 0 。= m o l l 的储备 液，使用时以石英亚沸蒸馏水稀释。储备液与工作液均需置于0 4 。c 的生化培养 箱内保存。 0 1 0 m o l ln h ，l c l 一n i t ，i i ：0 缓冲溶液。 称耿自合成的d e 一1 3 一c i ) o 3 9 以石英亚沸蒸馏水溶于2 5 0 m l 的容量) 瓴中。即 9 山东帅池人学坝i j 论义 为工作液。 所有试剂均为分析纯，用压沸二次蒸馏水配制成溶液 2 2 实验仪器 r f 一5 4 0 型荧光分光光度计( 日本岛津公司) ；u v - 2 6 5 型紫外可见分光光度计 ( 开本岛津公司) ；p h s 一3 c 型酸度计( 上海雷磁仪器厂) 2 3 实验部分 2 3 12 ，6 - - - 7 , 氧基一b c d ( d e b - c d ) 的制备 称取1 3 5 9 的0 一环糊精( 0 一c d ) ，在真空干燥箱中干燥过夜后，加入6 7 5 9 的n a o h 粉木与1 9 5 m l 的溴乙烷，在温度为7 0 的条件下反应4 8 小时，得到 d e b c d 。产物水沈后，在温度为7 0 的条件下干燥3 0 分钟。 2 3 2 实验步骤 于l o m l 比色管中依次加入适量的d c 、e u 。+ 、修饰的环糊精和n h 。c 卜n h ph ! o 缓冲溶液，用石英亚沸蒸馏水定容至刻度，振荡，摇匀，放置3 0 m i n ；记录其荧光 光谱。同时在 e x e m = 3 8 5 n m 6 1 2 n m ，测定荧光强度f 。同时测定试剂空白( d c e u 3 + ) 的荧光强度f 。对于d c 缓冲溶液体系，在凡e x e m = 3 7 5 5 2 0 n m 处测定荧 光强度。 3 结果与讨论 3 1 荧光光谱 d c ，d c + d e 一1 3 一c d ，d c + e u 3 + ，d c + d e b c d + e u l + ，d c + 0 一c d + e u 3 + 的荧光光 谱。由可知，在n h ，c 卜n h 。h ：o 介质中单纯e u 3 + 没有e u 3 + 的特征光谱，但在相同条 件下可以观察到d c e u 3 + 和d c 一0 一c d e u 3 + 体系中e u 4 + 的特征光谱，其最大激发波长 e x = 3 8 5 n m ，两个发射峰位于5 9 0 0 和6 1 2 o n m ，分别对应于e u ”的；d r ? f 和j d 广7 r 跃迁。d c d e o c d e u 3 + 体系的荧光光谱与d c e u l + 的荧光光谱非常相似。但荧 光强度明显增大。 o 山东师范人学坝i j 论义 图l 荧光吸收光谱图2 荧光发射光谱 1 d c ，2 d c + d e 一1 3 一c d ，3 d c + e u ，4 d c + d e b c d + e u 。，5 d c + b c d + e u 。 实验条件：浓度：d c ，t 4 6 1 0 j m o l l ；d e b c d6 1 8 x 1 0 g m l ：e u 3 ，2 1 06 m o l l ； p h = 9 4 ， e x = 3 8 5 n m ， e m = 6 1 2 3 2 影响体系荧光强度的因素 3 2 1 酸度对体系的影响 体系酸度对于d c e u l + 配合物的形成以及d e b c d 与d c e u 3 + 的结合能力有 很大影响。酸度对d c + d e 一1 3 一c d + e u 3 + 体系荧光强度的影响见图3 。 图3p h 值对d c - d e - 8 - c d e u = 。体系荧光强度的影响 l 为d c + d e 一日一c i ) + e u 。2 为d c + e u 。 l 自图3 可知，p h 在9 2 l o 2 的范围内，d e b c d 的加入使体系的荧光强度 f 最大。故本文中选择p h = 9 4 的n i c 卜n h f l ：0 ( 0 t m o l i 。) 缓冲溶液做进一步 山东师范人学顺i j 论文 的研究。 3 2 2 缓冲溶液用量的影响 缓冲溶液用量的对d c + d e 一6 一c d + e u 4 + 体系荧光强度的影响见图4 。出图4 可 知，缓冲溶液的用量对d c + d e - 8 一c d + e u = 。+ 体系荧光强度有较大的影响， 0 m o l l n h i c l 一n h rh ：o 缓冲溶液的加入量在0 5 2 5 m l 之间时，荧光强度大且 稳定，故本文选择加入1 5 m l 的缓冲溶液。 图4 缓冲溶液用量对体系荧光强度的影响 3 2 3d e b c d 浓度的影响 d e - 8 - c d 的浓度对d c + d e b c d + e u 4 + 体系荧光强度( f ) 的影响见图5 。由图 可知，在一定范围内，d e b c d 的浓度与体系的荧光强度成正比，当d e 一0 一c d 的浓度为g m l 时，体系的荧光强度最大，大于1 2 x1 0 1 9 m lg m l 时( v = 2 5 m 1 ) ， 荧光强度稳定且数值较大。故本文选择2 5 m ld e 一0 一c d 进行下一步研究。 v ( m l ) 图5d e - b - c d 浓度对体系f 的影响 帕 舶 o f 讣 蚰 拍 如 伯 f 山东! j l 十j 范人学f 6 j i 。论文 3 2 4 反应时间对体系荧光强度的影响 反应时问对体系的荧光值有较大的影响，见图6 实验表明，体系在2 5 m i n 后荧 光值基本达到稳定，放置1 8 0 m i n 后依然稳定。故本文选择3 0 m i n 后丌始测定。 j 。、。- - 一一。 1 t ( m i n ) 图6 反应时间的影响 3 2 5 加入顺序对体系荧光强度的影响 不同的加入顺序对d c - d e - 0 一c d e u 3 + 体系荧光强度f 和f 均有一定的影 响，见表1 。 表1 试剂加入顺序的影响 由表i 可以看出，在同样的浓度条件下，按表中5 的顺序加入，d c d e b c d e u ”体系的荧光强度f ，f 较大，加i 入稳定性也更好，稳定时问更长。故 本文选择按5 的顺序加i 入。即首先加入强力霉素，然后加入e u 。，最后加入d e 一1 3 3 山东 l i j 范人学坝i 论文 共存组分浓度( m o l l ) af 共存组分浓度 f ( m 0 1 l ) 带a 标记的表不浓腰为u g m l 。 3 4 体系d e - 一e u 。+ 与d e 一1 3 一c d 结合的机理的探讨 坏糊精最显著的特征之一是它们能与各种客体化合物( 简称客体) 形成包合 物。形成包合物的条件有：几何形状的匹配性、客体分子的疏水性及其他影响因 素。 各种环糊精空腔孔径各异，分别可容纳不同大小的客体分子，1 3 一c i ) 形成的包 合物并非要求整个客体化合物进入其空腔，只要部分客体化合物的功能团或取代 基被紧密包合便可，因此常可以包合比其自身还要大的多的客体化合物。包合物 的形成及其稳定性与客体分子的极性十分有关。一般来晚亲水性强的分子不被c d 包合，或最多形成很弱的包合物，c d 形成的包合物与客体分予的疏水性成正比。 山东帅范人学坝i 论艾 溶液中c d 与客体分子的包合是一个快速而又可逆的平衡过程任何使得平衡趋向于 解离的因素都会影响包合物的稳定性。比如，高温、溶剂和无机盐的存在等都会 影响包合物的稳定性。 c d 及其衍生物与客体化合物形成包合物的键力有疏水客体与c d 空腔之间非 极性一非极性作用力、客体分子与c d 空腔之间的分子问力、某些客体分子与c d 羟 基之间的氢键作用和形成包合物时，c d 大环张力的释放，即大环从具有张力的状 态向松弛状态的过度，仅在a c d 中起作用“”。 从图l 和图2 中可以看到，体系d e + d e - b c d + e u l + 与d c 一目一c d + e u 。+ 的 荧光光谱与d c - e u = + 相似，最大吸收峰大约为3 8 5 n m 最大发射峰大约为6 1 2 n m ， 其中体系d c + b e b c d + e u 。+ 的荧光强度最大。由于三价镧系阳离子的f f 电子 跃迁相当困难，只有很小的吸收系数，所以在体系e u 3 + 和d e b c d e u 3 + 中却没 有明显的e u 3 寺征荧光峰，而且d e b c d 在3 8 5 n m 附近也没有吸收，所以加入 d e - 1 3 一c i ) 而引起的荧光值的变化不是由d e 一0 一c b 和e u “之间的能量转移引起。 得到三价镧系阳离子特征荧光峰的最简单的方法是引入天线分子“，利用天线化 台物吸收能量通过能量转移到三价镧系阳离子，实现其激发，而得到特征荧光峰， 事实上许多镧系离子的配体都是用作激发中心离子的天线化合物，本实验中的d c 既为b u 3 + 的天线分子，如下图： 接受体 山东师范人学坝i j 论文 当天线分子作为被检测物种进入接受体( 环糊精) 时，它可以用作天线分子 吸收能量从而引起e u 3 + 的强烈发光，达到检测被检测物种的目的。 e u ”的配位数为8 ，在体系d c + d e 一0 一c d + 阻”中d c ：e u 4 为7 3 ：l ，而在 体系中d c + e u l + 为1 3 ：l ，所以在体系d c e u l + 中e u 4 可以与h 形成配合物 d c e u ”一( 0 一h ：) 。加入d e 一- c d 后，c d 和d c e u ”一( o - h ：) 均作为客体分 子进入其相当于有机溶剂的保护性的非极性空腔，形成疏水客体与c d 空腔之问非 极性一非极性作用力和客体分子与c d 空腔之间的分子问力，并且e u 。+ 的配位微环境 发生变化，使得e u “继续与d c 配位，并伴随着与之配位的极性h 1 0 数量减少，减 少了e u l + 与水配位时h ：o 中的o - h 键的伸缩震动而引起的能量损失和h ：0 分子和其 他离子的碰撞淬灭，并且客体分子的旋转自由度和水的松弛效应减少，还有效的 抑制了e u 8 + 的水解，引起的荧光强度的增强。从增大的数值为4 倍e 看，可以看出 在体系d c + d e - 0 一c d + e u l + 中，存在d c 和d c e u 。+ 一( 0 - t t ：) 。进入d e 一1 3 一c i ) 的非 极性内腔的平衡，使e u 3 + 与d c 的配位数介于1 3 7 3 之间。出于d e 一8 一c d 上的 烃基降低了c d 分子外围的羟基会阻止通常为非极性分子的客体分子进入c d 的非 极性空腔形成包合物的作用，并且对包合物提供更大的保护作用。所以d e 6 一c d 对d c e u 3 + 的荧光增强作用较- c d 强，这一点也可以从荧光光谱上看出。 4 分析应用 4 1d c 的线性范围和检测限 在最佳实验条件下，绘制了d c 校准曲线，浚方法的分析参数见表3 。 d c 的浓度对d c + d e 一6 - c d + e u 3 + 体系荧光强度( f ) 的影响见图7 。由图可知， 在0 一1 4 6 1 0 。m o l l 的范围内，d c 的浓度与体系d c + d e 1 3 一c d + e u 4 + 的荧光强 度成证比，当d e 一0 一c d 的浓度为1 4 6 i 0 m o l l 时，体系的荧光强度最大，大 于l4 6x1 0 m o l l 时( v = 3 m 1 ) ，荧光强度达到最大且稳定的数值。故本文选择 d c 的浓度1 4 6 1 0 m o l l 进行下一步研究。 l u 东帅范人学坝i ：论文 图7d c 浓度与体系f 的关系 当体系中只含有d c 时，在 。、 。= 3 7 5 n m 5 2 0 n m ，体系的荧光强度与d c 的 量在一定的范围内成正比，并且具有较低的检测限。在d c e u 。1 + - d e b c d 体系 中，d c 的浓度变化与体系的 。， 。= 3 8 5 n m 6 1 2 n m 处的f ，呈现良好的线性关系， 且具有较低的检测限。与不存在d e 一0 一c d 的d c e u 3 7 体系相比，加入d e b c d 后，d c 的线性范围更宽，并且检出限更低，说明d e 一0 一c d 与d c e u 。+ 探针结合 后能拓宽d c 的线性范围，并且能提高d c 的灵敏度。 表3d c 测定的分析参数 4 2 尿样和血样中d c 的测定 配置尿样和血样样品用来测量d c 的回收率，取健康人的尿液5 m l ，溶于2 5 0 m 1 的容量瓶中，加入定量的d c 溶液，配置成尿样溶液；取健康人的l f i l 清l m l ，溶于 l o o m i 的容量瓶中，加入定量的d c 溶液，配置成血样溶液。由表4 可知，该法的 回收率为1 0 7 ，1 0 8 ，精密度都令人满意。 柏 o f 山东帅池人学顺l 论义 本方法与其他方法的比较本方法具有较高的选择性、灵敏度还有比较宽的线 性范围，如表5 所示， 表5 测定d c 方法比较 5 结论 在d c + e u 3 + + d e 一1 3 一c d 体系中，作为天线分子的d c 浓度与体系的荧光强度呈 现良好的线性。在d c e u 。+ 体系中，由于e u ”是6 8 个配位数的稀土离子，它与 d c 以物质的量l ：1 3 在无d e 一6 - c d 存在的水溶液中配位时远不能达到饱和配位。 加入d e 一0 一c d 后，d c e u = 。+ 一( o 一) 与d c 进入其保护性的非极性的空腔中并伴 山东帅此人学倾l 论立 随着释放出d c - e u l 。( 0 一h ：) 。配合物中的h 2 0 ，从而降低了水分子中o h 键振动 引起的非辐射能量损失，减少了由非辐射能量损失而引起体系荧光强度的降低。 因此，d e 一0 一c d 的；o i a 使配合物的荧光强度增强。使得d c 的检测线性范围变宽 且灵敏度升高。故浚方法可用于d c 的测定。通过回收实验，结果令人满意。 参考文献 【1 】d o n g ，y g ；s h e n ，h j ；g u a n g p u x u ey ug u a n g p uf e n x i a u g ，1 9 9 8 ，1 8 ( 4 ) 4 6 1 4 6 3 【2 c r o u b e l s ，s ；j e ；v a n p e t e g h e n m ，c j c h r o m a t o g r ，b ：b i o m e d a p p l 2 4a p r i1 9 9 8 ，7 0 8 ( 1 2 ) ，1 4 5 - 1 5 2 3 c h o m a , i ；g r e n d a ，d ；m a l i n o w s k a ，i ；s u p r y