（农药学专业论文）血红牛肝菌与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究.pdf

山东农业犬学硕士学位论文 摘要 高等真菌是“创造系数”很高的生物资源，它们所含的次生代谢产物化 学结构多样且新颖。这种化学结构的多样性对于现代医药和农药先导化合 物的发现至关重要。为了筛选具有生物活性的先导化合物和先导结构，本 论文对血红牛肝菌( b o l e t u sr u b e l l u sk r o m b h ) 币n 褐圆孔牛肝菌( g y r o p o u s c a s t a n e u ) 两种高等真菌的化学成分进行了研究。 酚氧化酶( p h e n o l o x i d a s e ，p o ) 又称酪氨酸酶( t y r o s i n a s e ) ，是结 构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶。它广泛存在于动物、植物和微生物等 生物体内，与人体的衰老、伤口愈合、果蔬的褐变等有密切关系。在昆虫 体内，它是一种非常重要的酶类，在昆虫的变态发育和免疫系统中起着极 其重要的作用。由于酚氧化酶具有重要的理论意义和发展前景，大量的研 究工作集中在此领域。 本文研究了两种高等真菌的化学成分，同时采用本人及课题组其他成 员所自主分离鉴定的8 种化合物为效应物，测定了它们对甜菜夜蛾酚氧化 酶的抑制作用，具体研究结果如下： 1 利用现代提取分离、波谱技术( m s 、1 d & 2 d n m r 、i r 和u v ) 及化学方法共分离1 5 个化合物，其中已鉴定了5 个，包括2 个甾体，1 个神经酰胺类化合物，3 吡啶甲酸和d 阿洛醇，正在结构鉴定中的两个 三萜类化合物有望为新颖结构。 2 对本人及课题组分离鉴定的8 个化合物进行了酚氧化酶抑制活性 研究，8 个化合物分别为：甾体类化合物i 和i i ，倍半萜化合物i i i 、和 v ，芳香族化合物、黄酮苷类化合物和三萜类化合物类化合物，活 性测试结果显示8 个化合物均表现出不同程度的酚氧化酶抑制活性，化合 物i 的i c 5 0 依次为4 5m m o l l 、4 3m m o l l 、3 0 8m m o l l 、o 5 5m m o l l 、 3 8 8m m o l l 、2 0 4m m o l l 、0 8 3m m o f l 和0 3 2m m o l l 。 关键词：血红牛肝菌褐圆孔牛肝菌次生代谢产物酚氧化酶 血红牛肝菌与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究 a b s t r a c t h i g h e rf u n g ii st h ev e r yp r o d u c t i v eb i o l o g i c a l l ys o u r c ew h i c hp r o d u c e sa l a r g ea n dd i v e r s ev a r i t yo fs e c o n d a r ym e t a b o l i t e s ，a n dt h e s ea r ev e r y i m p o t a n t f o rt h es e a r c h i n gw o r ko fs o m em e d i c i n ea n da g r i c u l t u r ec h e m i c a ll e a d i n g c o m p o u n d s i no r d e rt of i n ds o m el e a d i n gc o m p o u n d sa n ds t r u c t u r e sw i t h b i o a c t i v i t i e s t h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so ft w oh i g h e rf u n g is p e c i e so fb o 彪t u s r u b e l l u sk r o m b ha n dg y r o p o u sc a s t a n e uh a v eb e e ni n v e s t i g a t e d a n da r e v i e wo nt h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so fh i g h e rf u n g ii nt h el a s td e c a d ei s p r e s e n t e di nt h et h e s i s p h e n o l o x i d a s e ( p o ) ( e c 1 1 4 1 8 1 ) a l s o k n o w na s t y r o s i n a s e ，i sa s t r u c t u r e c o m p l e x a n dm u l t i f u n c t i o n a l c o p p e r - c o n t a i n i n ge n z y m e ，w h i c h w i d e l yd i s t r i b u t e da m o n ga n i m a l s ，p l a n t s ，f u n g i ，a n dp r o k a r y o t e s p o i s t h o u g h tt ob ei n v o l v e di nm a n yb i o l o g i c a lp r o c e s s e so fi n v e r t e b r a t e s ，s u c ha s c o n s e n e s c e n c eo fh u m a nb o d y , w o u n dh e a l i n g ，f r u i t sa n dv e g e t a b l e sb r o w n i n g a n dp i g m e n tf o r m a t i o n i ti so n eo ft h ek e ye n z y m e si nt h ed e v e l o p m e n t p r o c e s s o fi n s e c t s ，t h ee n z y m e p o s s e s s e s a n i m p o r t a n t f u n c t i o ni n m e t a m o r p h i s md e v e l o p i n ga n di m m u n i t ys y s t e m c u r r e n t l y , m a n ys t u d i e s f o c u s e do nt 1 1 i sf i e l d b a s e do nt h ep r e s e n tp a p e r , t h ew r i t e rs t u d i e dt h ec h e m i c a lc o n s t i t u t e so f t w ok i n d so fh i g hf u n g i ，a n de i g h tc o m p o u n d st h a ti s o l a t e di no u rl a b o r a t o r y w e r es e l e c t e da st h ep oi n h i b i t o r st od e t e r m i n et h ei n h i b i t o r ye f f e c t sa g a i n s t t h ee n z y m eo fs p o d o t e r ae x i g u a t h ec o n t e n t sa n dr e s u l t sw e r es u m m a r i z e da s f o l l o w s ： 1 f r o mt h ee t h a n o le x t r a c to ft h et w oh i g h e rf u n g i ，f i f t e e nc o m p o u n d s h a v eb e e ni s o l a t e db ym e a n so fc h r o m a t o g r a p h i cm e t h o d s f i v ec o m p o u n d s a r ee l u c i d a t e do nb a s i so fs p e c t r a l ( m s ，i d & 2 d n m r ，乙u v ) a n dc h e m i c a l m e t h o d s ，i n c l u d i n gt w os t e r o i d s ，o n ec e r a m i d ec o m p o u n d s ，3 - p y r i d i n e c a r b o - x y l i ca c i da n d d a l l i t 0 1 2 s e l e c te i g h tc o m p o u n d st h a ti s o l a t e di no b rl a b o r a t o r y , a n dt e s t e dt h e i r i n h i b i t o r y e f f e c t s a g a i n s tt h ee n z y m e o fs p o d o t e r a e x i g u a t h ee i g h t c o m p o u n d sa r e ：t w os t e r o i d sia n di i ，t h r e es e s q u i t e r p e n e s i i i 、a n dv a r o m a t i cc o m p o u n dv i ，f l a v o n eg l y c o s i d e sv i ia n dt r i t e r p e n o i d s t h e e f f e c t so ft h ee i g h tc o m p o u n d so i lp h e n o l o x i d a s e ( p o ) o fs p o d o t e r ae x i g u a 2 山东农业大学硕士学位论文 w e r ea l s oi n v e s t i g a t e d t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h ee i g h tc o m p o u n d ss h o w e d d i f f e r e n ti n h i b i t o r ye f f e c t so nt h ep o ，a n dt h ei n h i b i t o rc o n c e n t r a t i o n sl e a d i n g t o5 0 ( i c 5 0 ) a c t i v i t yl o s to fc o m p o u n d sit o w e r ee s t i m a t e dt ob e4 5 m m o 儿、4 3i l m o 儿、3 0 8m m o l l 、0 5 5m m o 儿、3 8 8m m o l l 、2 0 4 m m o f l 、0 8 3m m o l la n d0 3 2m m o l lo n eb yo n e k e y w o r d s ：b o l e t u sr u b e l l u sk r o m b h ， g y r o p o u sc a s t a n e u , s e c o n d a vm e t a b o l l t e s ，p h e n o l o x i d a s e 3 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学 研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出 重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责 任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规 定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸 质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学 位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录 到中国学位论文全文数据库，并向社会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导师签名： 日期： 山东农业大学硕上学位论文 第一章综述 1 1 高等真菌化学成分及活性研究进展 我国发现的真菌约有1 8 万种，9 0 以上还没有认识，是很重要的国 家战略生物资源 刘吉开等2 0 0 7 】。真菌在维护人类健康方面发挥着非常重 要的作用。在国际上，从有限的真菌资源中先后发现了一系列治疗人类重 大疾病的药物或先导化合物，目前，此类研究正处于一个上升的发现高峰 期。 我国云南地区孕育着丰富的高等真菌资源，高等真菌物种多样性及生 物量之高举世公认，分布在该地区的子囊菌和担子菌种类约占我国高等真 菌的8 0 以上 刘吉开等2 0 0 7 】，同时该地区还存有大量的特有、特殊及珍 稀濒危物种。此外，该地区环境与真菌演化发展关系复杂，在青藏高原和 横断山脉形成和抬升过程中，许多高等真菌和植物间的协同进化关系有待 人们去认识。 真菌生物合成的“创新指数”( c r e a t i v ei n d e x ，c b 高，从真菌中发现的化 学成分结构新颖。一系列非常有用的药物或先导化合物从真菌中先后被发 现( 如p e n i c i l l i n ，c y c l o s p o r i n ，a c a r b o s e ，m e r i n o l i n ) ，使人们对真菌刮目相 看。 近些年来，高等真菌在制药工业界愈来愈引起人们的重视。一方面是 因为从高等真菌中不断发现结构新颖和具有显著生物活性的化合物，且结 构变化大。这种化学分子的结构多样性对于药物( 或农药) 的发现具有重要 意义。另一方面高等真菌不仅可以直接用子实体作为研究材料，而且可以 收藏菌种，很多种类可以较方便地发酵培养，一旦发现有应用价值的化合 物，就有可能通过发酵解决工业化生产的资源来源问题。利用西南地区丰 富的高等真菌资源，从中寻找和发现新的药物和先导化合物具有重要的现 实价值和战略意义。 1 1 1 倍半萜类化合物及活性研究进展 波兰学者d a n i e w s k i 等 d a n i e w s k i 等1 9 9 5 ，s t e r n e r 等1 9 9 2 1 9 9 5 年 以仓储害虫杂拟谷盗( t r i b o l i u mc o n f u s u m ) 、谷斑皮蠹( t r o g o d e r m a g r a n a r i u m ) 及谷象( s i t o p h i l u sg r a n a r i u s ) 为试虫，对来源于乳菇属真菌 中5 3 个倍半萜类化合物进行了拒食活性与结构关系的考察。发现乳菇烷 血红牛肝茵与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究 ( 1 a c t a r a n e ) 和小皮伞烷( m a r a s m a n e ) 骨架类型化合物要比异乳菇烷 ( i s o l a c t a r a n e ) 的活性强，此外，其活性随着分子中羟基数目的增加而降低。 一般来说，除含羰基的衍生物外，天然化合物比其经结构改造的类似物具 有更强活性。 小皮伞烷型类似物是在酶作用下直接由醛( v e l u t i n a l ) 衍生的倍半 萜化合物，并且保持碳骨架不变。如具有强抑菌和致突变作用的二醛 ( i s o v e l l e r a l ) 仅对t c o n f u s u m 有极强的选择性 d a n i e w s k i 等1 9 9 5 1 。 乳菇烷型倍半萜类化合物包括呋喃型及内酯型 d a n i e w s k i 等 1 9 9 5 。其中呋喃醚( f u r a n e t h e r ) 为优良拒食剂。呋喃醇( f u r a n 0 1 ) 对 t c o n f u s u m 和s g r a n a r i u s 有显著拒食活性，且是t g r a n a r i u m 的引诱剂。 c 3 和c - 8 位含有羟基的如呋喃二醇( f u r a n d i 0 1 ) 仅有中等强度活性。c 8 和c 一9 立体化学改变不影响活性，c 1 4 位引入第3 个羟基如呋哺三醇 ( f u r a n t r i 0 1 ) 拒食活性略降低。 乳菇烷内酯型化合物的形成是通过酶氧化呋喃实现的，并在苦乳菇化 学防卸中起重要作用 d a n i e w s k i 等1 9 9 5 ，s t e r n e r 等1 9 9 2 】。对l a c t a r o r u f i n a 而言，c 1 4 位引入羟基活性则降低；c 8 构型改变所生成的 8 - e p i l a c t a r o r u f i na 活性丧失；6 ，7 位双键氢化得到的衍生物则活性大大降 低。 异乳菇烷型倍半萜类衍生物，如i s o l a c t a r o r u f i n 一般有微弱拒食活性， 仅对t c o n f u s u m 成虫表现强活性。另外，化学转化如乙酰化、脱水、c 8 位差向异构化均不能提高拒食活性 d a n i e w s k i 等1 9 9 5 ，s t e r n e r 等1 9 9 2 。 ms t a d l e r 等从担子菌c h e i m o n o p h y i l u mc a n d i d i s s i m u m 的液体培养物中分 离鉴定了6 个没药烷( b i s a b o l a n e ) 倍半萜衍生物( 化合物名称基本上都查不 到中文对照) c h e i m o n o p h y l l a l 和c h e i m o n o p h y l l o na e ，其中化合物 c h e i m o n o p h y l l o na d 显示出杀c a e n o r h a b d i t i se l e g a n s ( e d 5 0 = 1 0 - 5 0 # g m l ) 作用 s t a d l e r 等，1 9 9 4 1 。 1 9 9 5 年，研究发现小皮伞烷型化合物i s o v e l l e r a l 和小皮伞酸m a r a s m i c a c i d 对根结线虫( m e l o i d o g y n es p p ) 表现出弱的活性 s t e m e r 等19 8 5 1 。 原伊鲁烷型倍半萜芳香酸酯普遍具有抗菌作用。o b u c h it 等 1 9 9 0 从 蜜环菌菌丝体中分离鉴定出原伊鲁烷型倍半萜芳香酸酯化合物a r m i l l a r i c 6 山东农业大学硕士学位论文 a c i d ，药理实验显示该化合物对革兰氏阳性菌和干酵母具有较强的抑制作 用。d o r m e l l yd 等 1 9 8 2 分离鉴定出具有抗细菌和真菌的化合物o r s e l l i n a t e o fa r m i l l o l 。m i d l a n ds l 等 1 9 8 2 1 也分离鉴定出抗菌化合物r n e l l e o l i d e 。 a r n o n ea 等 1 9 8 6 从蜜环菌中分离鉴定出抗细菌化合物m e l l e o l i d eb ， m e l l e o l i d ec ，m e l l e o l i d e d 。m o m o s ei 等 2 0 0 0 从蜜环菌培养液中分离出3 个该类型的抗菌化合物，分别为m e l l e o l i d e sk 、la n dm ，其中化合物 m e l l e o l i d e sk 有抑制革兰氏阳性菌、酵母和真菌的作用。 1 1 2 二萜类化合物及活性研究进展 二萜类化合物( d i t e r p e n o i d s ) 广泛分布于植物界，植物分泌的乳汁、树 脂等均以二萜类衍生物为主。除植物外，高等真菌代谢产物中也存在有二 萜类化合物。这一类化合物大都具有较强的抗菌、消炎、杀虫、抗肿瘤等 生物活性【高锦明等1 9 9 9 。 加拿大学者b r o d i e 首次发现鸟巢菌科黑蛋巢菌属c y a t h u s 真菌 c h e l e n a 培养发酵液有显著抗菌活性 a y e rw a 等，1 9 8 1 。此后，a y e r 等 研究证实该属的活性成分是新的独特二菇骨架c y a t h a n e 类型化合物 a y e r wa 等 。5 0 年代初期，从担子菌纲侧耳属p l e u r o t u sm u t i l i s ， p p a s s e c k e r i a n u s 和d r o s o p h i l as u b a t r a 细中分到过对革兰氏阳性菌具抗菌 作用的一新骨架化合物p l e u r o m u t i l i n ，从c l i p t o p i l u sp s e u d o - p i n s i t u s 中也 获得它的2 个新类似物的抗生素，另从粗环射脉菌p h l e b i as t r i g o s o z o n a t a 中发现2 个高度氧化的贝壳杉烷( k a u r a n e ) 型抗菌代谢产物 ( p h l e b i a k a u r a n o l 、p h l e b i a n o r k a u r a n 0 1 ) a y e rwa 等，19 81 。 2 0 0 6 年，m a r c o t u l l i o 等人从肉齿菌属真菌s a r c o d o nc y r n e u s 子实体甲 醇提取物中分离得到4 个新的二萜类化合物c y r n e i n e a d 。实验结果表明， c y r n e i n ea 和c y r n e i n eb 具有神经营养活性，可显著促进轴突向外生长 m a r c o t u l l i om 。c 等2 0 0 6 。在随后的研究中，y u t a r oo b a r a 阐明了c y r n e i n e a 诱导神经轴突生长的分子机理【y u t 踟o b a r a 等2 0 0 7 。 t o y o t a 等从牛肝菌科小牛肝菌b o l e t i n u sc a v i p e s 子实体中首次分到5 个由1 6 羟基香叶基香叶醇与甲基富马酸或富马酸形成新抗真菌的链状二 枯酯类化合物，其中c a v i p e t i na 对瓜枝抱c l a d o s p o r i u mc u c u m e r i n u m 孢子 形成显示最强的抑制活性( 按一定比例混合，于酸度计( p hs j - - 4 a ) 测定其p h 值， 至达到p h 6 。9 。 ( 2 ) 5m m o l l 的l d o p a 溶液 取0 0 0 9 8 6 9l d o p a ，用去离子水溶解并定容到1 0m l 。 3 4 2 酶液制备 参照王树栋的方法 王树栋等2 0 0 4 ，取甜菜夜蛾5 龄幼虫4 9 ，按照每 克虫重加入5 m l0 2m o l l 、p h6 5 的磷酸缓冲液，置于预冷的匀浆器中， 冰浴匀浆，转移匀浆液至离心管中，于4 c 、80 0 0r m i n 条件下离，1 二, 3 0m i n ， 除去液面上的脂类和色素，取上清液作为粗酶源。加入固体硫酸铵使其饱 和度为4 0 ，冰浴下静置3 0m i n ，再于4 、80 0 0r m i n 下离, b 3 0 m i n 。收 集所得沉淀，并将其溶解在少量磷酸缓冲液中，然后在0 0 1m o l lp h6 5 磷酸缓冲液中透析，期间多次更换透析液，直至无8 0 4 2 - 检出，得酶液。 3 4 3 酶活性测定 将待测样品用d m s o 配成一定浓度的抑制剂母液。 酶活性测定参照b e n j a m i n b e n j a m i nnd 等19 7 3 的方法并略有改进。 采用2 0 0 9 l 的反应体系，即4 0 p ll 一多巴+ 2 0 r l 酶液+ 1 0 0 9 lp h 6 5 的磷酸 缓冲液+ 4 0 9 l ( 抑制剂母液+ 水) 的反应体系，通过改变反应体系中抑制 剂母液的体积实现抑制剂浓度梯度，重复3 次。以对照组的酶活力为参比 求得各梯度的酚氧化酶相对活力，得出酚氧化酶相对活力抑制剂浓度曲 线如下列各表： 3 3 血红牛肝菌与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究 1 0 0 r 舳 ! i g 叶= 鉴6 0 墨t o 廊 窿2 0 o o23 45 抑制物浓度( r e t o o l l ) 图3 1 化合物i 对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 1e f f e c to f c o m p o u n dio nt h ea c t i v i t yo f p h e n o i o x i d a s e 1 0 0 r8 0 1 i g 盔6 0 谧 尊4 0 噼 密2 0 0 02 345 抑制物浓度( r e t o o l l ) 图3 2 化合物i i 对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 2e f f e c to f c o m p o u n di io l lt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 1 0 0 r8 0 蜒 量6 0 鋈4 0 琢 鑫2 0 o 0 抑制物浓度( 衄o l l ) 图3 3 化合物i i i 对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 3e f f e c to f c o m p o u n di i io nt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 山东农业大学硕士学位论文 0o 10 20 30 40 50 60 7 抑制物浓度( r e t o o l l ) 图3 4 化合物对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 4e f f e c to f c o r n p o u n di v o nt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 0234 5 抑制物浓度( m m o l l ) 图3 5 化合物v 对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 5e f f e c to f c o m p o u n dvo nt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 0 0 61 2 1 82 43 抑制物浓度( m m 0 1 l ) 图3 6 化合物对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 6e f f e c to f c o m p o u n dv 1o nt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 3 5 加 0 r蜒靛罂嚣睾1骞盆 印 如 加 0 r烬靛娶避基1毒蛊 鼬 如 o r蜒茛霉溢摹1毒密 血红牛肝菌与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究 r ! g 靛 罂 落 s 球 鑫 图3 7 化合物对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 7e f f e c to f c o m p o u n d o i lt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 图3 8 化合物对酚氧化酶活力的影响 f i g 3 8e f f e c to f c o m p o u n d o nt h ea c t i v i t yo f p h e n o l o x i d a s e 3 5 结论与讨论 通过对8 个提取物的活性测试得以下结论： 化合物i 和i i 为作者从血红牛肝菌中提取鉴定的化合物，为麦角甾醇 类物质，对甜菜夜蛾酚氧化酶的i c 5 0 依次为4 5m m o l l 、4 3m m o l l ，数 值非常接近，这可能与两化合物在结构上的高度相似有关。 化合物i i i v 为倍半萜类物质，i i i 为一个内酯环构成的四环倍半萜， 和v 均为高度氧化的l a c t a r a n e s 型倍半萜，对于倍半萜类物质对酚氧化 酶的抑制活性未见报道，倍半萜类物质是一类生物活性比较广泛的物质， 通过本实验可以看出倍半萜类物质对甜菜夜蛾酚氧化酶有比较好的抑制 活性，化合物i i i v 对甜菜夜蛾酚氧化酶的i c 5 0 依次为3 0 8m m o l l 、0 5 5 r挈靛罂嚣s。)毒鑫 山东农业大学硕士学位论文 m m o l l 、3 8 8m m o v l ，可以看出化合物的抑制活性比较理想。 化合物为同课题组从短瓣金莲花中提取鉴定的化合物，其中化 合物为苯甲酸酯类，化合物为黄酮类，为三萜类化合物。本实验发 现3 种化合物对甜菜夜蛾酚氧化酶具有一定抑制活性，其i c 5 0 值依次为 2 0 4m m o l l 、0 8 3m m o l l 和0 3 2 m m o v l 。本实验室的前期研究己发现 苯甲酸及其衍生物对酚氧化酶具有较强的抑制活性【高兴祥等2 0 0 4 】，本研 究发现3 ，4 二羟基苯甲酸甲酯对酚氧化酶也存在抑制活性。黄酮类化合物 的生理作用很久以来就受到人们的关注，早在2 0 世纪三十年代就发现了 该类化合物具有与维生素c 一样的活性，本研究发现黄酮类化合物 2 0 ( 2 - m e t h y l b u t y r y l ) v i t e x i n 对甜菜夜蛾酚氧化酶具有一定程度的抑制活 性，这为在此类化合物中继续发现高活性的酚氧化酶抑制剂提供了新的线 索。三萜类化合物在医学上的活性研究已经比较深入，但有关其是否具有 农药活性研究，查阅众多文献后未见报道，本研究发现三萜类化合物乌苏 酸对甜菜夜蛾酚氧化酶存在抑制活性。 根据本研究的结果，可以以这些化合物或其类似物为骨架结构为模 板，用定量结构活性相关( q s a r ) 技术研究抑制剂的主要理化参数与酚 氧化酶活性的关系，可以指导酶抑制剂的分子设计，是寻找新型害虫控制 剂的重要途径。 3 7 血红牛肝菌与褐圆孔牛肝菌次生物质对酚氧化酶的活性研究 参考文献 1 】am o n ea ，c a r d i l l or ，n a s i n ig s t r u c t u r e so fm e l l e o l i d e sb - d ，t h r e e a n t i b a c t e r i a ls e s q u i t e r p e n o i d sf r o ma r m i l l a r i am e l l e a j p h y t o c h e m i s t r y ， 1 9 8 6 ，2 5 ( 2 ) ：4 7 1 2 a s t a f t ，c c c h e n j 1 ia n db m c h r i s t e n s e n m o l e c u l a rc l o n go ft w o p r o p h e - n o l o x i d a s eg e n e sf r o mt h em o s q u i t oa e d e sa e g y p t i i n s e c t m o l e c u l a rb i o l o g y2 0 0 1 ，1 0 ( 1 ) ：9 7 - 1 0 3 3 a l v a r os h n c h e z f e r r e r ，j o s 6n e p t u n o r o d r i g u e z l 6 p e z ，f r a n c i s c o g a r c i a c i n o v a s ，f r a n c i s c og a r c i a - c a r m o n a t y r o s i n a s e ：ac o m p r e h e n s i v e r e v i e wo fi t s m e c h a n i s m j b i o c h i m i c s e t b i o p h y s i c aa c t a ，1 9 9 5 ， 1 2 4 7 ：1 1 1 4 a n d e r s s o n ，k ，s u n s 。c 。，b o m a n ，h 。g ，s t e i n e r ，h ，1 9 8 9 。p u r i f i c a t i o no ft h e p r o p h - e n o l o x i d a s ef r o mh y a l o p h o r ac e c r o p i aa n df o u rp r o t e i n si n v o l v e d i ni t sa c t i v a t i o n i n s e c tb i o c h e m i s t r y19 ，6 2 9 6 3 7 【5 a s h i d am ，y o s h i d ah i n s e c t b i o c h e m ，1 9 8 8 ，1 8 ：11 1 9 6 a s h i d am ，o c h i a im ，n 埘t i m m u n l o c a l i z a t i o no fp r o p h e n o l o x i d a s e a m o n gh e m o c y t e so ft h es i l k w o r m ，b o m b y xm o r i t i s s u ec e l l ，19 9 8 ，2 0 ： 5 9 9 6 1 0 7 a s h i d am p u r i f i c a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no fp r o p h e n o l o x i d a s ef r o m h e m o l y m - p ho ft h es i l k w o r m ，b o m b y xm o r i a r c h b i o c h e m b i o p h y s ， 1 9 7 1 ，1 4 4 ：7 4 9 7 6 2 【8 a s h i d a , m ，k i n o s h i t a , k a n db r a e y ，p ，t ( 19 9 0 ) s t u d i e so n p h e n o l o x i d a s e a c t i v a t i o ni nm o s q u i t oa e d e sa e g y p t il eu rj b i o c h e m18 8 ：5 0 7 51 5 9 a s h i d a , m 。a n dy a m a z a k i ，h ( 1 9 9 0 ) b i o c h e m i s t r yo ft h ep h e n o l o x i d a s e s y s t e mi n i n s e c t s ：w i t h s p e c i a l r e f e r e n c et oa c t i v a t i o n m o l t i n ga n d m e t a m o r p h e o s i s ( o h n i s h i ，e a n di s h i z a k i ，h ，e d s ) p p 2 3 9 2 6 5 j a p a n e s e s c i e n c es o c i e t yp r e s s ，t o k y o 1o a s h i d a , m a n db r e y ，p t ( 19 9 7 ) r e c e n ta d v a n c e si nt h er e s e a r c ho f t h ei n s e c tp r o p h e n o l o x i d a s ec a s c a d e m o l e c u l a rm e c h a n i s m so f n m u n e r e s p o n s e s i n i n s e c t s ( b r e y ，p t a n dh u l t i m a r k ，d e ，e d s ) ，p p 13 5 - 17 2 c h a p m a n & h a l l ，l o n d o n 3 8 山东农业大学硕上学位论文 【11 a s h i d a , m a n db r e y , p ( 19 9 5 ) r o l eo ft h e i n t e g u m e n t i ni n s e c t d e f e n s e ：p r o p h e n o l o x i d a s ec a s c a d ei nt h ec u t i c u l a rm a t r i x p r o cn a t l a c a ds c iu s a9 2 ：1 0 6 9 8 1 0 7 0 0 【12 a s h i d a , m ，19 71 p u r i f i c a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no fp r e p h e n o l o x i d a s e f r o m h e m o l y m p h o ft h es i l k w o r m b o m b y xm o r i a r c h i v e so f b i o c h e m i s t r ya n db i o p h y s i c s14 4 7 4 9 7 6 2 【1 3 a s h i d a , m & o h n i s h i ，e ( 1 9 7 6 ) ：i b i d ，1 2 2 ，4 11 - 4 1 6 【14 a s o ，y ，k r a m e r , k jh o p k i n s ，t l ，l o o k h a r t ，g l ，19 8 5 c h a r a c t e r i z a t i o n o fh e m o l y m p hp r o t y r o s i n a s ea n dac u t i c u l a ra c t i v a t o rf r o m ( l ) i n s e c t b i o c h e m i s t r y15 ，9 17 【15 a s p a na ，h u a n gt s ，c e r n i u sl ，s o d e r h a l lk c d n ac l o n i n go f p r o p h e n o l o x i d a s ef r o mt h ef r e s h w a t e rc r a y f i s hp a c i f a s t a c u sl e n i u s c u l u sa n di t s a c t i v a t i o n p r o c n a t l a c a d s c i u ，s a 1 9 9 5 9 2 ：9 3 9 9 4 3 1 6 a s p a na ，s o d e r h a l lk i n s e c t b i o c h e m b i o c h e r n ，1 9 9 1 ，2 1 ：3 6 3 3 7 3 1 7 a y e rwa ，e ta 1 t e t r a h e d r o n ，1 9 8 1 ，3 7 ：2 1 9 9 【1 8 a y e rw a ，e ta 1 c a njc h e m ，1 9 7 3 ，5 1 ：3 1 5 7 1 9 a y e rw a ，e ta 1 c a njc h e m ，1 9 7 8 ，5 6 ：2 1 1 3 2 0 l a y e rw a ，e ta 1 c a njc h e m ，1 9 7 8 ，5 6 ：7 1 7 【2 1 a y e rw a ，e ta 1 t e t r a h e d r o ml e t t ，1 9 7 2 ，1 3 ：1 9 1 7 f 2 2 a y e r w a ，e ta 1 c a njc h e m ，1 9 7 9 ，5 7 ：3 3 3 2 2 3 b e l o f s k y g n ，g l o e rk b ，g l o e rj b ，e t a 1 n e w p - t e r p h e n y l a n d p o l y k e t i d e sm e t a b o l i t e sf r o mt h e s c l e r o t i ao