安捷伦超高效液相色谱-三重四级杆质谱仪器讲解.doc

液质联用仪本实验室使用的液质联用仪是安捷伦公司6400系列的一款产品，包括超高效液相色谱1290和质谱主机G6460，以及与其配套的计算机和打印机，他们之间通过网络协议通讯，并通过网络交换机连接在一起。本仪器于2014年年初安装使用，价值两百多万元。物质只要能溶于液体，均可以被检测。本实验室主要用于农产品样品的农药残留定性检测，超高效液相色谱1290是整个系统的分离和进样装置，样品在色谱柱中经初步分离，通过接口进入质谱。质谱以离子源、质量分析器和检测器为核心。离子源是将分析物中的中性化合物离子化，并将产生的离子在电场的作用下进入离子传输毛细管。离子传输毛细管是离子的导入通道，它将离子源产生的离子传输进入质谱，同时，隔绝了外部的常压与质谱内部的高真空。离子通过毛细管后，进入离子光学组件，它包括skimmer1，八极杆以及lens1和lens2，进一步除去了溶剂以及中性分子，也是一个高效的离子传输组件，并聚焦随机运动的离子进入三重四极杆质量分析器。 G6460的质量分析器是三重四级杆，是由三组四极杆空间串联而成，一个质谱就是一个四级杆，所以三重四级杆质谱是空间串联的多级质谱分析，也叫做QQQ质谱。第一个四级杆根据设定的质合比范围扫描和选择所需的离子。第二个四级杆，也称碰撞池，用于聚集和传送离子。在选择离子飞行的途中，引入碰撞气体氮气，第三个四级杆用于分析在碰撞池中产生的碎片离子。实际上，碰撞池采用了六极杆的设计，拥有更好的聚焦及传输功能，四级杆就被淘汰了，但还沿用三重四级杆的名称。G6460质谱的检测器包括高能打拿极和电子倍增器，此外，质谱需要在真空环境下工作，它的真空系统由前级真空泵和分子涡轮泵组成，前级真空一般在1.8-2.5Torr之间，高真空在1.9-2.3*10-5Torr之间。原理：它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。样品检测步骤：准备样品液质调谐即检测仪器各项参数，如达标，则调谐通过，-调谐通过后准备UPLC（准备流动相，含挥发性酸，碱或盐；排气；编辑参数；平衡色谱柱）编辑QQQ参数(选择三重四级杆的工作方式，扫描范围，毛细管出口处碎裂电压等参数）保存采集方法，输入样品信息样品检测在定性分析软件中查看数据数据处理，打印报告根据GB/T 20769-2008 水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法、GB/T 20770-2008 粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法规定：在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致，则可判断样品中存在这种农药。然后采用色谱来定量。由于液质没有谱库可对比，只能自己摸索合适的检测条件，所以下面我给大家讲解一下我们摸索物质检测条件常用的几种工作方式：全扫描scan，确认/得到化合物离子质量数SIM，优化毛细管出口碎裂电压（fragmentor），保证母离子的传输效率子离子扫描，使用已优化好的fragmentor，选择定量离子，优化碰撞气能量（collision energy），得到优化子离子的响应多反应监测MRM定量，使用已优化好的裂解电压（fragmentor）和碰撞气能量（collision energy）上述每一个工作方式都是前后衔接的，通过上述方式的依次工作，各项参数设置合适，才能找到每一个农药的合适检测条件，在此基础上进行条件的进一步优化，形成成熟的条件，在样品定性检测中提供参考对比。在质谱应用领域里，三重四级杆质谱是最灵敏和定量重现性最好的仪器，对于液/质/质来说是权威的分析工具。使用三重四级杆质谱仪有以下优势：样品不需进行衍生化；在单个分析中实现确认定量；在复杂很脏的基体中的低检测限，提高实验室效率、产出率；获得更可靠和可值得信赖的测试结果。此外，液质质对流动相的级别要求比较高，有机试剂都是国外进口的高纯色谱级试剂，水也使用的是屈臣氏的去离子水，而且需每天更换以防止长菌等造成质谱污染。质谱放置一段时间后需进行调谐，以保证各项性能参数均处于最佳状态，获得高品质、准确的