（食品科学专业论文）灰树花的菌种诱变、液体发酵米糠麸皮产多糖及富硒研究.pdf

学位论文版权使用授权书 江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊( 光盘版) 电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩 印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许 论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入中国学位论 文全文数据库并向社会提供查询，授权中国学术期刊( 光盘版) 电子杂志社将本 论文编入中国优秀博硕士学位论文全文数据库并向社会提供查询。论文的公布 ( 包括刊登) 授权江苏大学研究生处办理。 本学位论文属于不保密口。 学位论文作者签名：獭弋臼 m 1 年b 月i j 日 指导刻撇：办1 伟“ 1 1 年6 月i 。日 灰树花的菌种诱变、液体发酵米糠麸皮产多糖 及富硒研究 ( s t u d yo ng r i f o l af r o n d o s a sm u t a g e n e s i s ，l i q u i d f e r m e n t a t i o nf o rp o l y s a c c h a r i d ei nr i c ea n dw h e a tb r a na n d e n r i c h e do r g a n i cs e l e n i u m ) 姓 2 0 1 1 年6 月l0 日 江 苏大 学 硕 士 学位论 文 摘要 灰树花是一种珍稀的食药两用真菌，其多糖具有辅助抗肿瘤治疗、增强人体免疫 功能等作用，在液体培养过程中可将无机硒转化为对人体有益的有机硒。米糠、麸皮 是稻谷、小麦加工过程中的副产品，其营养价值高、产量大且价格低廉，有更广阔 的开发利用空间。本研究通过诱变筛选出了能在米糠、麸皮培养基上快速生长和高产 多糖的优良菌株，探索其较优发酵培养基的组成及活性多糖的提取方法，并研究了灰树 花出发菌株富集硒的能力，为采用新的方法完成科研项目制备多糖和多糖有机硒复合 保健品的任务奠定了基础。 本研究主要内容如下： ( 1 ) 经微波诱变、紫外诱变、原生质体激光诱变和原生质体微波紫外复合诱变， 筛选出菌丝生长速度较快、菌丝多糖产量较高且比较稳定的灰树花变异菌株j s u l 0 1 和j s u l 0 2 。通过电泳图谱分析，推断其与出发菌株g r i f o l as p c g m c c4 1 7 9 相比发 生了遗传上的变化。 ( 2 ) 通过培养基均匀试验的探索，采用s p s s 回归分析得到出发菌株g r i f o l a s p c g m c c4 1 7 9 菌丝干重y 1 田( 1 0 0 i i n l ) 、变异菌株j s u i o 一1 菌丝干重i 1 1 ( g 1 0 0 m l ) 、 变异菌株j s u l 0 - 2 菌丝干重y 1 2 ( g l o o m l ) 与米糠x l ( g l o o m l ) 、麸皮x 2 ( g 1 0 0 m l ) 、 磷酸二氢钾扔( g 1 0 0 m l ) 、硫酸镁x 4 ( g 1 0 0 m l ) 、维生素b 1 玛( m g 1 0 0 m l ) 的回 归方程分别为： k - 0 = 0 0 3 k + 0 0 3 3 恐- 0 0 0 2 x 3 0 0 3 9 一0 0 0 3 黾+ 0 0 5 3 k 1 = 0 0 3 5 x a + 0 0 3 6x 2 - 0 2 6 7 毛- 0 0 7 7 + 0 0 1 3 毛+ 0 0 9 4 k 2 = 0 0 3 + 0 0 4 8 屯一0 2 0 0 x 3 + 0 4 7 9x 4 + 0 0 1 8 毛+ 0 0 3 0 得到g r i f o l as p c g m c c4 1 7 9 菌丝多糖圪旬( m g l o o m l ) 、j s u i o - 1 菌丝多糖玩1 ( m g 1 0 0 m l ) 、j s u i o 一2 菌丝多糖y 2 - 2 ( m g 1 0 0 m l ) 与米糠规( g l o o m l ) 、麸皮x 2 ( g 1 0 0 m l ) 、磷酸二氢钾x 3 ( g 1 0 0 m l ) 、硫酸镁x 4 ( g 1 0 0 m l ) 、维生素b 1 x 巧( m g 1 0 0 m l ) 的回归方程分别为： e _ o = 4 1 1 8 五+ 4 1 3 7 屯+ 1 7 0 1 9 x 3 3 3 0 1 x 4 - 0 9 9 1 x 5 - 3 9 9 3 k - l = 2 6 6 0 毛+ 3 9 6 2x 2 5 2 6 2 6x 3 - 6 6 1 4 1 五+ 8 4 1 3 毛+ 2 7 1 7 6 k - 2 = 4 2 9 8 五十7 8 9 9x 2 2 0 0 1 9x 3 + 8 0 3 7 1 x 4 + 0 3 6 3x 5 2 0 6 1 7 经回归分析，推测出发菌株g r i f o l as p c g m c c4 1 7 9 最优培养基成分为：米糠1 2g 1 0 0 m l ，麸皮1 2g 1 0 0m l ，磷酸二氢钾0 3 5g 1 0 0m l ，硫酸镁0 0 1g l o om l ，维生素 b 1 0 2r a g 1 0 0m l ；变异菌株j s u i o 一1 最优培养基成分为：米糠1 2g 1 0 0m l ，麸皮1 2 g 1 0 0m l ，磷酸二氢钾0 0 2g 1 0 0m l ，硫酸镁0 0 1g 1 0 0m l ，维生素b 1 1 8m g 1 0 0m l ； 灰树花多糖及其有机硒复合物生产新技术研究 变异菌株j s u l 0 2 最优培养基成分为：米糠1 2g 1 0 0m l ，麸皮1 2g 1 0 0m l ，磷酸二 氢钾o 0 2g 1 0 0m l ，硫酸镁0 1 7g 1 0 0m l ，维生素b 1 1 8m g 1 0 0m l 。 ( 3 ) 通过米糠、麸皮纤维素酶酶解单因素试验探索，确定酶添加量为5 0 f p u ( g 米糠) 和4 5 f p u ( g 麸皮) ，酶解时间分别为米糠1 0 h 、麸皮1 0 5 h ；酶解料液比 分别为米糠1 ：2 0 、麸皮1 ：3 0 。 ( 4 ) 通过灰树花菌株在液体发酵培养基b 上发酵菌丝干重变化试验的探索，确 定变异菌株j s u l 0 1 最大菌丝干重为1 0 1 9 9 1 0 0 m l ，最大菌丝多糖量为1 5 6 7 m g 1 0 0 m l ，比同条件下g 厂洳肠s p c g m c c4 1 7 9 分别提高2 1 3 和2 1 8 ，其中发酵 培养基b 】组成为：米糠2g 1 0 0 m l ( 5 0 酶解后取汁) ，麸皮1 2g 1 0 0 m l ( 5 0 酶解 后取汁) ，磷酸二氢钾0 1 1e g l o o m l ，硫酸镁0 0 9g 1 0 0 m l ，维生素b 1 1 4m g 1 0 0 m l 。 j s u l 0 2 最大菌丝干重为0 9 3 5 9 1 0 0 m l ，最大菌丝多糖量为1 6 6 5 m g 1 0 0 m l ，比同条 件下g r i f o l as p c g m c c4 1 7 9 分别提高1 5 4 和4 1 8 ，其中发酵培养基b 2 组成为： 米糠8 9 1 0 0 m l ( 5 0 酶解后取汁) ，麸皮9g 1 0 0 m l ( 5 0 酶解后取汁) ，磷酸二氢 钾o 0 8g 1 0 0 m l ，硫酸镁0 2 3g 1 0 0 m l ，维生素b 1 0 8m g 1 0 0 m l 。 ( 5 ) 通过灰树花菌丝多糖超声提取均匀试验探索，推测出发菌株g ，f 加肠s p c g m c c4 1 7 9 和变异菌株j s u l 0 2 最优超声条件为：超声料液比1 ：1 2 0 、超声功率 2 0 0 w 、超声时间2 3 m i n 、超声发出时间6 s 、超声间隙时间6 s ，此时，其菌丝多糖得 率达到最大，分别为1 5 5 和1 5 3 ；变异菌株j s u l 0 1 最优超声条件为：超声料 液比1 ：2 0 、超声功率2 0 0 w 、超声时间2 3 m i n 、超声发出时间1 s 、超声间隙时间6 s ， 此时其菌丝多糖得率达到最大，为1 0 3 。对不同灰树花菌丝及不同提取方法所得菌 丝多糖清除d p p h 能力探索，确定超声辅助低温低压提取( 7 0 ，0 0 7 a ，2 h + 2 h ) 所得菌丝多糖对d p p h 的清除率相对较高，效果相对较好。 ( 6 ) 通过对g r i f o l as p c g m c c4 1 7 9 液态发酵富硒的探索，当硒添加量为 1 0 m g l 时，富硒菌丝干重为1 2 5 6 9 1 0 0 m l ，其富硒率为4 6 3 ；富硒菌丝多糖为 1 1 4 4 m g 1 0 0 m l ，其富硒率为2 2 。将该富硒菌丝多糖制备成3 0 0 m g 粒的富硒灰树 花粗多糖保健胶囊，每粒胶囊含硒7 1 9 嵋，与成年人体硒的需求量7 6 r t g d 接近，即 正常成年人每日服一粒该富硒多糖保健胶囊便可达到硒的摄入标准。这一结果对制 备灰树花富硒保健食品或药品有一定的参考价值。其中发酵培养基组成：米糠1 0 g 1 0 0 m l ，麸皮1 1g 1 0 0 m l ，磷酸二氢钾0 1 5e g l o o m l ，硫酸镁0 0 7 5g l o o m l ，维生素 b 1 1 0m g 1 0 0 m l ，硒1 0m g 1 0 0 m l 。发酵工艺条件：装样量4 0 ，接种量1 0 ，培养 温度2 8 1 ，搅拌速度1 5 0 r m i n ，培养时间5 d 。 关键词：灰树花，诱变，米糠，麸皮，富硒 江苏大学硕 士 学位论文 g r i o l af r o n d o s ai sa e d i b l ea n dm e d i c i n a lf u n g u s g r i f o l a nf r o mg r i f o l af r o n d o s ah a s t h ef u n c t i o no fa d j u v a n tt h e r a p yo fa n t i t u m o ra n di m m u n i t ye n h a n c e m e n t ，w h i c hc a n c o n v e r ti n o r g a n i cs e l e n i u mi n t ot h eb e n e f i c i a lo r g a n i cs e l e n i u mo no u rh e a l t hd u r i n gi t s l i q u i dc u l t u r e a st h eb y - p r o d u c to ft h ed e em i l l i n gp r o c e s s ，r i c eb r a n i si nah i g h n u t r i t i o n a lv a l u e ，al a r g ey i e l da n dl o wp r i c e ，a n di tn e e dm o r ea p p l i c a t i o nt oi m p r o v ei t s v a l u e s oi sw h e a tb r a n t h eg r i f o l af r o n a o s a sw h i c hc o u l dg r o wf a s t i nt h e c u l t u r e m e d i u mt h a tm o s t l yi n v o l v e dr i c ea n dw h e a tb r a ne x t r a c th a v eb e e nc h o s e na n dw eh a v e i n v e s t i g a t e di t so p t i m u mc o m p o n e n tp r o p o r t i o no fc u l t u r em e d i u m ，t h eb e s te x t r a c t i n g m e t h o do fp o l y s a c c h a r i d ea n dt h es e l e n i u me n r i c h m e n t , a n dt h o s ea r et h eb a s i so ft h e p r e p a r a t i o no fh e a l t hf o o do fp o l y s a c c h a r i d eo rp o l y s a c c h a r i d ew i t ho r g a n i cs e l e n i u m w h i c ha r et h eu l t i m a t eg o a lo ft h i sr e s e a r c h t h er e s e a r c hc o n t e n t e d ： ( 1 ) a f t e rt h eu v - m u t a t i o n ，m i c r o w a v em u t a t i o n ，t h el a s t e rm u t a t i o na n dt h e u - v - m i c r o w a v ei n d u c e dm u t a g e n e s i so ft h eg r i f o l af r o n d o s ap r o t o p l a s mb o d y , w ec h o o s e g r i f o l af r o n d o s a sj s u l 0 - - 1a n dj s u l 0 2w h i c ha r ef a s tg r o w , h i g hy i e l do fp o l y s a c c h a r i d e a n dm o r es t a b l e i d e n t i f y i n ga n da n a l y z i n gb yt h ei s o z y m ee l e c t r o p h o r e s i s ，w eh a v e p r o v e dt h a tt h e r ea r es o m eg e n e t i cm a t e r i a ld i f f e r e n tb e t w e e nt h eo r i g i n a ls t r a i ng r i o l a s p c g m c c4 1 7 9a n dj s u l 0 - 1 ，j s u l 0 2 ( 2 ) a f t e rt h eu n i f o l l l ld e s i g ne x p e r i m e n t s ，w eg o tt h er e g r e s s i o ne q u a t i o n sb ys p s s o nt h ed r yw e i g h to fg r i f o l as p c g m c c4 1 7 9 sm y c e l i u my f o ( g 1 0 ( ) m l ) ，j s u l 0 1 s h 1 ( g l o o m l ) ，j s u l 0 2 si 1 2 ( g 1 0 0 m l ) r e s p e c t i v e l y w i t h q u a n t i t y o fr i c eb r a n x l ( g 1 0 0 m l ) ，w h e a t b r a nx 2 ( g 1 0 0 m l ) ，k h 2 p 0 4x a ( g 1 0 0 m l ) ，m g s 0 4x 4 ( g 1 0 0 m l ) v b l x s ( m g 1 0 0 m l ) a sf o l l o w s ： x - 0 = 0 0 3 k + o 0 3 3 恐0 0 0 2 x 3 - 0 0 3 9x 4 - 0 0 0 3x 5 + o 0 5 3 k - l = 0 0 3 5 x a + 0 0 3 6x 2 0 2 6 7 玛- 0 0 7 7x 4 + 0 0 1 3 x 5 + 0 0 9 4 x 一2 = 0 0 3 9 x a + 0 0 4 8 恐一0 2 0 0 玛+ o 4 7 9x 4 + 0 0 1 8 恐+ 0 0 3 0 a l s o ，w eg o tt h er e g r e s s i o ne q u a t i o n so nt h ei n t r a c e l l u l a rp o l y s a c c h a r i d eo fg r i f o l a s p c g m c c 4 1 7 9 y 2 - o ( m g l o o m l l , j s u l 0 - 1 s1 2 1 ( m g 1 0 0 m l ) d s u l o 2 s y 2 - 2 ( m g 1 0 0 m l ) r e s p e c t i v e l y w i t h q u a n t i t yo fr i c eb r a nx l ( g l o o m l ) ，w h e a tb r a n x 2 ( g 1 0 0 m l ) ，k h 2 p 0 4 x 3 ( g l o o m ) ，m g s 0 4 x 4 ( g 1 0 0 m l ) ，v b lx s ( m g 1 0 0 m l ) a sf o l l o w s ： e _ o = 4 1 1 8x a + 4 1 3 7 屯+ 1 7 0 1 9 黾- 3 3 0 1 x 4 - 0 9 9 1x 5 - 3 9 9 3 k - 1 = 2 6 6 0 五+ 3 9 6 2x 2 5 2 6 2 6 玛- 6 6 1 4 1x 4 + 8 4 1 3x 5 + 2 7 1 7 6 r l l c g m c c4 1 7 9a n dj s u l 0 2a r e1 2 0 ：1r a t i oo ft h ew a t e rt om a t e r i a l 2 0 0 wo fu l t r a s o n i c p o w e r , 2 3 m i no fe x t r a c t i n gt i m e ，6 so fu l t r a s o n i ct i m ea n d6 so fu l t r a s o n i cs t o pt i m ea n d m a tt h eo p t i m a le x t r a c t i n gr a t ei s1 5 5 a n d1 5 3 r e s p e c t i v e l y 硼1 eu l t r a s o n i cc o n d i t i o n s f o rs t r a i nj s u l 0 1a r e1 2 0 ：1r a t i oo ft h ew a t e rt om a t e r i a l 2 0 0 wo fu l t r a s o n i cp o w e r , 2 3 r a i no fe x t r a c t i n gt i m e ，l so fu l t r a s o n i ct i m ea n d6 so fu l t r a s o n i cs t o pt i m ea n dt h a tt h e o p t i m a le x t r a c t i n g r a t ei s1 0 3 a f t e rt h et e s t so fc l e a r i n gd p p hr a d i c a lo ft h e 江苏大学硕 士 学位论 文 i n t r a c e l l u l a rp o l y s a c c h a r i d e so fm y c e l i u mt h a tw e r e f r o md i f f e r e n te x t r a c t i o nm e t h o d sa n d d i f f e r e n ts t r a i n so fg r i f o l a # o n a o s a ，w ef o u n dt h a tt h ei n t r a c e l l u l a rp o l y s a c c h a r i d eo f m y c e l i u mw h i c hw a se x t r a c t e db yt h em e t h o do fu l t r a s o u n d - a s s i s t e de x t r a c t i o no fl o w t e m p e r a t u r ea n dp r e s s u r e ( 7 0 。c ，0 0 7 m p a ，2 h + 2 h ) h a v eah i g h e rr a t eo fc l e a r i n gd p p h ( 6 ) a f t e rt h ee x p e r i m e n t so ft h es e l e n i u me n r i c h m e n td u r i n gg r i f o l as p c g m c c 4 1 7 9 sl i q u i dc u l t u r e ，w h e nt h ea d d i t i o nl e v e lo fs e l e n i u mw a s1 0 m g 化t h ed r ym y c e l i u m w i ms e l e n i u mw a s1 2 6 9 1 0 0 m l , a n di t sr a t i oo ft h es e l e n i u me n r i c h m e n tw a s4 6 3 a t t h es a m et i m e ，t h ei n t r a c e l l u l a rp o l y s a c c h a r i d eo fm y c e l i u mw a s1 1 4 4 m g 1 0 0 m l , a n di t s r a t i oo ft h es e l e n i u me n r i c h m e n tw a s2 2 0 w eh a v ep r e p a m dt h eh e a l t hc a p s u l e sw i t h i n t r a c e l l u l a rp o l y s a c c h a r i d eo fe n r i c h e ds e l e n i u m ，w h i c hc o n t a i n3 0 0 m gp o l y s a c c h a r i d e a n d7 1 9 嵋s e l e n i u mp e rc a p s u l e ，a n dt h a ti sc l o s et o7 6 1 t g dr e q u i r e ds t a n d a r di n t a k ef o r a d u l tb o d y a n dt h er e s u l th a ss o m er e f e r e n c ev a l u ef o rt h ep r e p a r a t i o no fh e a l t hf o o do f p o l y s a c c h a r i d eo rm e d i c i n ew i t ho r g a n i cs e l e n i u m t h ec o m p o s i t i o no fm e d i u ma r ed e e l o g l o o m l , w h e a t b r a n 1 1 9 l o o m l , k h 2 p 0 4 0 1 5 9 1 0 0 m l , m g s 0 4 0 0 7 5 9 1 0 0 m l , v b l 1 0 m g 1 0 0 m la n ds e l e n i u m1 0m e , 1 0 0 m la n dt h ec o n d i t i o n so ff e r m e n t a t i o na r el o a d i n g v o l u m e4 0 ，i n o c u l a t i o nv o l u m e1 0 ，t e m p e r a t u r e2 8 + 1 ，r o t a t i o ns p e e d1 5 0 r m i na n d c u l t u r et i m e5 d k e yw o r d s ：g r i f o l af r o n d o s a ，m u t a t i o n ，r i c eb r a n ，w h e a tb r a n ，s e l e n i u m v 灰树花多糖及其有机硒复合物生产新技术研究 v i 第一章 1 1 1 3 1 4 3 硒的研究进展9 1 5 本课题的研究目的、意义及内容1 0 1 5 1 研究目的、意义”1 0 1 5 2 研究内容1 1 第二章灰树花高产菌丝及多糖菌株的选育 2 1 引言1 2 2 2 材料与方法1 3 2 2 1 试验材料及仪器设备1 3 2 2 2 培养基的配制1 3 2 2 3 培养方法”1 4 2 2 4 测定方法1 5 2 2 5 微波诱变1 5 2 2 6 紫外诱变。1 6 2 2 7 原生质体激光诱变1 7 2 2 8 原生质体微波紫外复合诱变1 8 v 灰树花多糖及其有机硒复合物生产新技术研究 2 2 9 诱变菌株二次筛选1 9 2 2 1 0 变异菌株拮抗性试验“1 9 2 2 n 变异菌株的电泳分析”1 9 结果与讨论2 5 2 3 1 微波诱变2 5 2 3 2 紫外诱变”2 6 2 3 3 原生质体激光诱变2 8 2 3 4 原生质体微波紫外复合诱变”3 0 2 3 5 诱变菌株二次筛选”3 2 2 3 6 变异菌株拮抗性试验“3 5 2 3 7 变异菌株电泳分析“3 6 本章小结3 8 诱变菌株的米糠麸皮培养基研究3 9 引言3 9 材料与方法3 9 3 2 1 试验材料及仪器设备3 9 3 2 2 培养基的配制方法4 0 3 2 3 培养方法4 1 3 2 4 测定方法4 1 3 2 5 灰树花在液体发酵培养基a 上液态发酵均匀试验4 3 3 2 6 米糠、麸皮纤维素酶酶解的单因素试验”4 4 3 2 7 灰树花菌株在液体发酵培养基b 上发酵菌丝干重变化4 4 3 2 8 灰树花菌株在液体发酵培养基b 上发酵菌丝多糖变化4 4 3 2 9 灰树花菌株在液体发酵培养基c 上发酵菌丝混合物干重变化4 5 结果与讨论。4 5 3 3 1 灰树花在液体发酵培养基a 上液态发酵均匀试验4 5 3 3 2 米糠、麸皮纤维素酶酶解的单因素试验结果5 0 3 3 3 灰树花菌株在液体发酵培养基b 上发酵菌丝干重变化5 2 3 3 4 灰树花菌株在液体发酵培养基b 上发酵菌丝多糖变化5 4 3 3 5 灰树花菌株在液体发酵培养基c 上发酵菌丝混合物干重变化5 5 本章小结5 7 江 苏大学硕 士学位论文 第四章灰树花菌丝多糖的提取方法研究 4 1 引言6 0 4 2 材料与方法6 0 4 2 1 试验材料及仪器设备”6 0 4 2 2 试验方法6 1 4 3 试验结果6 4 4 3 1 灰树花菌丝多糖超声提取均匀试验6 4 4 3 2 灰树花菌丝多糖超声提取结果6 9 4 3 3 灰树花菌丝多糖超声辅助热水浸提试验结果6 9 4 3 4 灰树花菌丝多糖超声辅助低温低压浸提试验结果6 9 4 3 5 不同灰树花菌丝及不同提取方法所得菌丝多糖清除d p p h 的测 定试验结果”6 9 4 4 本章小结7 1 第五章灰树花在米糠麸皮为主的培养基中液体培养富集有机硒的研究一”7 2 5 1 引言7 2 5 2 材料与方法7 3 5 2 1 材料7 3 5 2 2 试验方法7 3 5 3 结果与讨论7 6 5 3 1 菌丝干重7 6 5 3 2 菌丝多糖7 7 5 3 3 菌丝及菌丝多糖硒含量和富硒率7 7 5 4 本章小结”7 8 第六章结论及存在问题和建议一一一”一一一一一一一一”一”一7 9 6 1 结论”7 9 6 2 存在问题及建议二8 1 重参考文甫定一一一”一一”“”一一”一“一一一一一一一一8 2 致谢”一一”一一一一一”一“一”一一一一”一一一一一一“一一一8 9 攻读硕士期间发表的论文和参加的科研一一一一一一一一如 江 苏大 学 硕士 学位论文 1 1 概述 第一章绪论 1 1 1 灰树花简介 灰树花( g r i f o l af r o n d o s a ) 为担子菌亚门，层菌纲，非褶菌目，多孔菌科，树花 属，是一种珍稀的食药两用真菌。灰树花子实体肉质，外观形似菊，气味清香四溢， 肉质脆嫩可口。野生灰树花分布于日本、欧洲等，在我国黑龙江、吉林、广西、河 北、四川、云南、福建等省区也有分布。近几年来，灰树花作为一种高级保健食品， 已经风行于日本、新加坡等市场。 1 1 2 灰树花的营养及药理作用 灰树花所含氨基酸、蛋白质比香菇高出一倍，其营养十分丰富。每1 0 呛灰树花 干品中含蛋白质3 1 5 9 ( 其中含1 8 种氨基酸，必需氨基酸占4 5 5 ) ，脂肪1 7 9 ，粗 纤维1 0 7 9 ，碳水化合物4 9 6 蹭，灰分6 4 1 9 ：富含多种有益矿物质，其中钾1 6 3 7 9 m g ， 磷7 2 1 m g ，铁5 2 6 m g ，锌1 7 5 m g ，钙1 7 6 2 m g ，硒0 0 4 m g 等；维生素含量丰富， 其中维生素e1 0 9 7 m g ，维生素b 1 1 4 7 m g ，维生素b 2 7 2 m g ，维生素c1 0 m g ，胡萝 卜素0 0 4 m g ! 蚴。香港中文大学的张树庭教授如此评价灰树花：“无叶无芽无花自身 结果，可食可补可药周身是宝。” 1 8 3 4 年，日本的菌谱中记载了灰树花“味甘、平、无毒、可治痔疮”的药用 价值。我国中医认为灰树花具有“扶正固本”之功效。研究表明，灰树花中含有包括 d 组分、g r i f o l a n 、x - 组分、m t - 2 和l e l f d 等具有显著生理活性的多糖活性成分1 3 1 。 药理研究表明，灰树花多糖具有下列药理作用： 免疫调节作用灰树花多糖是一种有效的生物免疫调节剂，其不同组分都含有 1 3 - 1 ，3 和肛1 ，6 葡聚糖的结构，可以提高机体的免疫力 3 1 。灰树花多糖d 组分可调 节t 淋巴细胞亚群t h 1 t h 2 ，诱导脾和淋巴结细胞分泌丫干扰素、白细胞介素 ( i l ) 1 2 p 7 0 和i l - 8 ，同时抑制i l 广4 的产生【4 】。n a n b a 5 。7 】等研究灰树花多糖d 组分对 各种免疫细胞的激活结果表明其对免疫细胞具有明显的激活作用。在研究其对胶原 诱导的关节炎模型的影响时发现，灰树花多糖d 组分与对照组相比，脾脏中的巨噬 细胞数量、巨噬细胞迁移能力均有不同程度的增加，且细胞中的i l - l b 、粒细胞巨噬 细胞集落刺激因子和a 肿瘤坏死因子分别增至2 0 倍、4 7 倍和1 9 倍。 抗肿瘤作用灰树花多糖抗肿瘤抑制作用机理与其它真菌多糖相似，即其通过激 灰树花多糖及其有机硒复合物生产新技术研究 活机体免疫系统来防止正常细胞癌变。对不同真菌多糖的抗癌活性进行比较研究表 明【7 1 3 1 ，灰树花多糖d 组分是所有实验的真菌多糖中作用最强的。预防甲基胆葸对 小鼠致癌作用的研究表明灰树花d 组分能有效阻断甲基胆葸诱导的癌变。此外， k o d m a 的临床研究表明，灰树花多糖的m d 组分通过刺激免疫细胞的活性，呈现出 很强的抗癌作用【3 1 。 抗h i v 作用灰树花多糖具有直接抑制艾滋病病毒f f i i v ) 、刺激机体免疫系统抵 抗h i v 、并增强机体抵御续发疾病的能力眇，o l 。国际癌症协会进行的体外研究表明 硫酸化灰树花多糖的抗病毒活性具有明显的量效关系。n a n b a 采用m d 组分治疗艾 滋病患者效果良好1 7 , 1 4 1 ，给h i v 感染者每日口服灰树花多糖，可增加或使辅助t 淋 巴细胞数量下降。 治疗肝炎，抑制高血压和肥胖症作用研究发现，无论口服还是注射，灰树花均 具显著的肝炎治疗作用1 6 1 0 ，1 5 1 。灰树花多糖x 组分可以激活被抑制的t 细胞活性，抑 制细胞毒t 细胞活性，逐渐减轻肝炎病症【6 ，7 ，1 孙6 1 。日本研究者发现灰树花可使血压 稳定，阻止肥胖者体重增加，改善脂肪代谢，灰树花中的钾盐含量明显高于其他食 品，有助于调节人体组织中的水分含量，对于治疗心脏衰弱和高血压等有重要作用 【l o ，1 7 9 1 。 对内分泌与心血管系统的作用许多研究证明，灰树花多糖具有调节血糖、血脂 水平，改善脂肪代谢的作用【”7 1 。口服灰树花子实体可以使遗传型糖尿病小鼠的血糖 降低，同时还能降低小鼠血浆中胰岛素和甘油三酯的水平 6 , 2 0 l 。灰树花粉末对高血脂 症的治疗作用研究表明灰树花具有明显的降血脂与增加脂肪代射的功效【1 2 1 。另外 n a n b a 等的研究证实灰树花多糖具有明显的降血压作用1 2 1 1 。 美容、延缓衰老功能1 2 , 2 2 , 2 3 1 灰树花中含有丰富的维生素e ，维生素e 和硒、锗 等物质结合，通过食用进入机体后能相互作用，可促进皮肤光滑红润，增强记忆力 和灵敏度，延缓衰老。 1 1 3 灰树花的研究现状 ( 1 ) 灰树花培养 固体栽培法生产灰树花是一条传统的途径，日本于1 9 7 4 年栽培驯化成功，8 0 年 代至今有较大规模的生产。我国在8 0 年代初有研究灰树花栽培的报道。卜庆梅等【冽 对灰树花固体栽培配方进行了初步的研究。但固体栽培法生产灰树花生产周期长， 劳动强度大，且受到病虫害的侵害。研究发现液体深层发酵得到的灰树花菌丝体不 但具有固体栽培子实体相当的营养及药用效果【1 0 , z s ，还可得到胞外多糖【1 0 , 2 6 1 等子实体 2 江 苏 大学硕 士 学位论 文 所不具备的营养保健成分，因此，人们渐渐转向用现代生物科技以液体发酵的方法 来生产灰树花。 灰树花液体深层培养技术的研究始于上世纪8 0 年代后期。其中日本研究最早， 报道较多。1 9 8 6 年o h n on 等【2 7 捌首次报道了灰树花液体培养情况。接着s u z u k i l 等 【冽也用类似的方法成功培养出灰树花菌丝体。1 9 9 2 年z h u a n gc 等【刈研制出一套液 体培养装置，可同时收获菌丝体及发酵液多糖。目前，每升发酵液可收获干菌丝1 3 克、胞外多糖1 克左右。国内对灰树花的深层培养研究起步较晚，但发展迅速。陈 石良【3 l 】的研究表明，灰树花发酵菌丝体中的粗多糖含量大大高于子实体多糖，同时 发酵液的胞外多糖也是活性多糖，因此可用液体发酵法生产灰树花多糖。近十几年 来江南大学1 3 1 翊、江苏大学【2 ，2 7 3 3 - m l 、扬州大学【3 7 ，3 8 l 等单位对灰树花液体深层培养进 行了较深入的研究。 ( 2 ) 灰树花育种 菌种优劣是影响发酵过程及代谢产物最核心的因素。要达到经济效益的最大化， 在选择天然优良菌种的同时，还需要有目的、定向地进行菌种的改造。目前育种的 方法很多，包括自然选育、人工诱变、杂交、基因重组等。但是从自然界分离出的 菌种有其自身的局限性，不能完全满足人们的需要。因此，现在多采用人工诱变的 方法定向选择所需要的优良菌种。 近年来，许多研究者致力于诱变选育优良食药用真菌菌种。主要有紫外诱变、微 波诱变、原生质体紫外诱变和化学诱变等诱变方法。朱芬【3 9 】、张卉m 对灵芝、姬松 茸等食用真菌原生质体进行紫外诱变处理筛选出较优良的变异菌株。徐志祥等1 4 1 】应 用原生质体紫外诱变技术，对灰树花菌株g r l 进行了处理，最终选出两株多糖含量 和产量明显优于原始菌株的突变株g r l a 和g r l g 。张贺迎等1 4 2 1 采用微波诱变糖化酶 生产菌株a s p g i l l u sn i g e r3 4 3 0 9 ，用s d s 双层梯度平板进行筛选最终得到比出发菌株 糖化酶耐热性提高1 5 - - 一2 0 。c 的突变株9 - 1 。祝子坪等【4 3 】对桑黄菌原生质体进行h e n e 激光与紫外复合诱变处理，筛选出了5 株变异株s 1 s 5 。陈宏伟掣删以冬虫夏草菌 丝体为材料，经原生质体诱变获得了生物量和富硒能力均高于出发菌株的无性型菌 株。陈石良等【1 0 4 5 】( 2 0 0 0 ) 以灰树花g r 9 8 0 1 为出发菌，采用紫外线连续诱变、分离纯 化、驯化等方法筛选出一株遗传上相对稳定并适宜液体培养的灰树花菌株 g r u 0 4 ，该菌株在综合p d a 上生长速度快，长势旺盛，菌丝体浓厚纯白。为今 后基因工程研究及新品种的选育奠定了基础。 同工酶是指催化化学反应相同而结构及理化性质不同的一组酶，它广泛存在于 生物体中，反映了编码蛋白质的d n a 序列信息【4 6 l 。同工酶分析技术能揭示群间或居 3 3 3 - - 5 3 、水分7 - - - , 1 4 、灰分8 1 2 【3 5 ，6 1 1 。研究表明，米糠中各类营养素的含量 较精白米要高得多，被联合国工业发展组织称为“一种未充分利用的原料，”2 , 6 2 。我国 是以稻谷为主的产粮大国，米糠来源丰富，但长期以来，大部分地区将米糠作为饲 料喂养畜禽，其营养价值和资源效益未得到充分发挥和利用，造成了资源的浪费。 4 江 苏 大学硕 士 学位论文 近年来，科研工作者致力于米糠精制及综合利用，取得了较大的成果和良好的效益 6 3 - 6 7 1 o