血液学一般检验第二节PPT课件.ppt

细胞计数方法 显微镜细胞计数法 血细胞计数仪计数法 直接计数法 间接计数法 比值计数法 1 显微镜细胞直接计数法 将标本作适当稀释 或浓缩 后直接在显微镜下计数一定容积内的细胞 经换算可知单位体积标本中的细胞数 一 原理 二 应用 常用于血细胞计数 尿沉渣定量分析 脑脊液细胞计数 浆膜腔积液细胞计数 精子计数等 1 显微镜 三 器材 2 微量吸管 3 计数板 改良Neubauer计数板 2 2 3 4 骨髓造血干细胞 Epo 红系祖细胞 erythrocyteredbloodcell 5 手工显微镜法 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数 充入计数池中 于显微镜下计数一定体积内的红细胞数 经过换算求得每升血液中的红细胞数量 一 原理 红细胞计数 redbloodcellcount RBC 1 显微镜 二 器材 2 微量吸管 3 计数板 改良Neubauer计数板 6 氯化钠1 0g结晶硫酸钠5 0g氯化高汞0 5g蒸馏水加至200ml 三 试剂 赫姆氏 Hayem 红细胞稀释液 氯化钠 调节渗透压 硫酸钠 提高比密 防止红细胞粘连 氯化高汞 防腐剂 手工显微镜法红细胞计数 RBC 7 四 方法 1 小试管加RBC稀释液1 99ml 2 采血 取血10ul 3 擦去管外的血 轻吹入试管底部 再漱洗吸管2 3次 立即混匀 4 混匀后充入计数室 静置3 5min 高倍镜下计数 手工显微镜法红细胞计数 RBC 8 充液位置 充液位置 9 为红细胞计数区域 10 11 压线细胞的计数原则 数左不数右 数上不数下 12 五 计算 RBC L 5个中方格内RBC数 5 25 10 200 106 5个中方格内RBC数 100 1012 六 报告方式 手工显微镜法红细胞计数 RBC 13 七 参考值 男性 4 0 5 5 1012 L女性 3 5 5 0 1012 L新生儿 6 0 7 0 1012 L 400 550万 ul 350 500万 ul 手工显微镜法红细胞计数 RBC 14 八 注意事项 1 采血时不要过分挤压 2 取血量必须准确 动作要迅速 防止血液凝固 3 血液加入稀释液后 应立即混匀 4 充池前要摇匀 充池时不能产生气泡 5 压线细胞应数上不数下 数左不数右 手工显微镜法红细胞计数 RBC 15 亚铁血红素亚铁血红素珠蛋白亚铁血红素亚铁血红素 血红蛋白结构示意图 原卟啉 Fe2 原卟啉 Fe2 原卟啉 Fe2 原卟啉 Fe2 Hemoglobin Hb或HGB 16 亚铁血红素结构示意图 17 HbA 2 2成人占90 以上 正常血红蛋白的种类 根据珠蛋白肽链的组成 HbA2 2 2成人约占2 3 HbF 胎儿Hb 2 2成人2 以下 18 HbO2 氧合血红蛋白 根据铁原子第六配位键的结合情况 血红蛋白可分为 Hbred 还原血红蛋白 HbCO 碳氧血红蛋白 Hi 高铁血红蛋白 SHb 硫化血红蛋白 主要成分 少量 与氧结合 空着 与CO结合 Fe2 Fe3 与S结合 19 氰化高铁血红蛋白测定法 HiCN法 碱羟高铁血红素法 AHD575法 十二烷基硫酸钠血红蛋白法 SDS Hb法 比色法血红蛋白测定方法 沙利 Sahli 法 县及县以上医院已淘汰 20 一 原理 Hb CN 氧化 HiCN为棕红色 最大吸收峰540nm 根据标本的吸光度可知Hb浓度 HiCN Hi 注 硫化血红蛋白 SHb 不能被转化 21 氰化钾0 05g高铁氰化钾0 2g磷酸二氢钾0 14g非离子表面活性剂1 0ml蒸馏水加至1000ml 二 试剂 HiCN转化液 文齐液 调pH7 0 7 4 置棕色玻璃瓶中密封保存 氧化 调节pH 促溶 防混浊 提供CN 22 三 方法 氰化高铁血红蛋白测定法 4 实际工作中 可用HiCN参考液 按生化方法绘制标准曲线 或求出K值后计算 K Hb g A 1 5 0mlHb转化液 血20ul 混匀 静置5min 2 分光光度计比色 波长540nm 以空白转化液调零 测定吸光度 A 3 如用符合WHO标准的光度计 则可据 A 直接计算Hb浓度 Hb g L A540 44000 64458 251 A 367 7 23 Hb g L A500 1281000 2651500 3852000 523 K Hb A 500 1 301 384 32 Hb KA 氰化高铁血红蛋白测定法 24 1 KCN为剧毒药品 防污染 2 Hb转化液不能存于塑料瓶中 否则CN 下降 结果偏低 3 分光光度计应校正后使用 4 标准曲线或K值应定期校正 四 注意事项 氰化高铁血红蛋白测定法 25 方法学评价 HiCN法 SDS Hb法 优点 操作简单 结果稳定 缺点 氰化钾有剧毒 高白细胞或高球蛋白血症可致浑浊 HbCO转化较慢 推荐方法 优点 操作简单 结果稳定 无公害 缺点 摩尔消光系数未确定 SDS本身质量差异较大 破坏白细胞 次选方法 26 如何采用SDS Hb法进行血红蛋白测定 1 HiCN法标准曲线绘制 2 SDS Hb法标准工作曲线绘制 1 取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法测定吸光度 并求出其Hb浓度 2 再用SDS Hb法测定4份标本的吸光度 3 以4份标本Hb浓度为横坐标 SDS Hb法测得的吸光度为纵坐标 绘制标准工作曲线 3 SDS Hb法测定待测标本 27 成男 120 160g L成女 110 150g L新生儿 170 200g L 血红蛋白参考值 28 RBC和Hb生理性变化 一 年龄与性别的差异 二 精神因素 激动 恐惧 冷水浴使 三 剧烈体力运动和劳动 缺氧 使 四 气压降低 缺氧 使 五 妊娠中 后期 血液稀释 使 6个月 2岁婴幼儿 造血原料不足 使 某些老人 造血功能减退 使 新生儿 母体内相对缺氧 使 29 30 一 相对性增多 二 绝对性增多 2 继发性红细胞增多 1 原发性红细胞增多 RBC和Hb病理性增多 血液浓缩 常见于 心血管疾病 肺部疾病 异常血红蛋白病等 常见于真性红细胞增多症等 31 见于各种贫血 贫血的病因分类 RBC和Hb病理性减少 RBC Hb和Hct低于参考值下限 贫血 1 红细胞生成障碍2 红细胞破坏过多3 红细胞丢失过多 造血原料不足骨髓造血功能减退 见于各种溶贫 见于各种出血 32 贫血时RBC和Hb减少程度可不一致 正色素性贫血 二者成比例减少小细胞低色素性贫血 RBC Hb 大细胞性贫血 RBC Hb 33 红细胞计数与血红蛋白测定值一定能正确反映全身红细胞总量的多少吗 为什么 大量失血尚未补液前 脱水 红细胞总量减少 但RBC和Hb测定值不能反映 红细胞总量未减少 但RBC和Hb测定值显示其增多 如贫血时则可掩盖贫血 34 红细胞形态检查 35 三 红细胞形态改变 正常红细胞呈双凹圆盘形 在血涂片中见到为圆形 大小较一致 直径6 9 m 平均7 5 m 病理情况下外周血中常见的红细胞形态有以下几种 36 1 大小异常 1 小红细胞 microcyte 红细胞直径小于6 m 见于低色素性贫血 如缺铁性贫血 2 大红细胞 macrocyte 直径大于10 m 见于溶血性贫血 急性失血性贫血 也可见于巨幼细胞贫血 37 3 巨红细胞 megalocyte 直径大于15 m 常见于叶酸和 或 维生素B12缺乏所致的巨幼细胞贫血 4 红细胞大小不均 amisocytosis 红细胞大小悬殊 直径可相差一倍以上 这种现象见于病理造血 反映骨髓中红细胞系增生明显旺盛 38 39 2形态异常 较常见的有 1 球形细胞 spherocyte 直径小于6 m 厚度增加大于2 9 m 40 2 椭圆形细胞 elliptocyte 红细胞的横径 长径 0 78 呈卵圆形 或两端钝圆的长柱状 41 2形态异常 3 口形细胞 stomatocyte 红细胞中央淡染区呈扁平裂缝状 宛如微张口的嘴形或鱼口状 4 靶形细胞 targetcell 细胞中央淡染区扩大 中心部位又有部分色素存留而深染 状似射击之靶标 见于珠蛋白生成障碍性贫血 异常血红蛋白病等 42 2形态异常 5 镰形细胞 sicklecell 形如镰刀状 见于镰形细胞性贫血 6 泪滴形细胞 dacrycyte teardropcell 细胞呈泪滴状或手镜状 见于骨髓纤维化 珠蛋白生成障碍性贫血 溶血性贫血 43 镰刀形红细胞 44 7 棘细胞 acanthocyte burrcell 及刺细胞 spurcell 棘细胞外周呈钝锯齿状突起 刺细胞外周呈不规则 不均匀的靴刺状突起 见于 棘形细胞增多症 先天性无 脂蛋白血症 也可见于脾切除后 酒精中毒性肝病 尿毒症等 45 46 2形态异常 8 裂细胞 schistocyte 又称红细胞形态不整 红细胞异形性 指红细胞发生各种明显的形态学异常改变而言 红细胞可呈梨形 泪滴形 新月形等见于 红细胞因机械或物理因素所致的破坏 为微血管病性溶血的表现 如弥漫性血管内凝血 血栓性血小板减少性紫癜 溶血尿毒综合征 恶性高血压以及心血管创伤性溶血性贫血等 47 2形态异常 9 红细胞缗钱状形成 rouleauxformation 涂片中红细胞呈串状叠连似缗钱状 常见于 多发性骨髓瘤 原发性巨球蛋白血症等 48 3 染色反应的异常 1 低色素性 hypochromic 红细胞染色过浅 中央苍白区扩大 提示血红蛋白含量明显减少 最常见于缺铁性贫血 珠蛋白生成障碍性贫血 铁粒幼细胞性贫血 也可见于某些血红蛋白病 49 3 染色反应的异常 2 高色素性 hyperchromic 红细胞染色深 中央浅区消失 见于巨幼红细胞性贫血 球形红细胞增多症 3 嗜多色性 多染色性polychromatic 红细胞呈淡灰色或紫灰色 见于增生性贫血 巨幼红细胞性贫血 50 4 结构的异常 1 嗜碱性点彩 2 染色质小体 3 卡波环 4 有核红细胞 51 4 结构的异常 嗜碱性点彩 basophilicstippling 胞浆内出现深蓝色颗粒 见于增生性贫血 重金属中毒 巨幼红细胞性贫血等 52 4 结构的异常 染色质小体 Howell Jolly小体 胞浆内出现深桔红色颗粒 数量不等 见于增生性贫血 巨幼红细胞性贫血 脾切除后 53 4 结构的异常 卡 波氏环 Cabot 胞浆出现8字形环 见于增生性贫血 巨幼红细胞性贫血 脾切除后 铅中毒等 54 4 结构的异常 有核红细胞 nuclcatederythrocyte 见于增生性贫血 巨幼红细胞性贫血 白血病 骨髓纤维化等 55 临床意义 RBC形态变化表现在以下四方面 1 RBC大小不一 小RBC 大RBC 巨RBC RBC大小不均 2 RBC内血红蛋白含量改变 低色素性 高色素性 嗜多色性 3 RBC形态改变 球形 椭圆形 靶形 口形 镰形 棘形 泪滴形 缗钱状 裂RBC 4 胞内出现异常结构 嗜碱性点彩 染色质小体 卡波环 有核红细胞 56 白细胞计数和白细胞分类计数 57 血液白细胞 中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞单核细胞淋巴细胞 粒细胞 淋巴系干细胞 粒 单系祖细胞 髓系干细胞 58 白细胞的破坏 粒细胞 在肝 脾及淋巴结等处进入组织 进入组织的粒细胞不再进入血液 1 3天被破坏 单核细胞巨噬细胞 具有吞噬能力 淋巴细胞 80 是小淋巴细胞 生存期长 经过刺激后可以进行转化 转化 59 白细胞的种类和功能 中性粒细胞功能 有较高的运动能力 较强的吞噬活力 复杂的杀菌系统 可以清除免疫复合物及坏死组织 嗜酸性粒细胞功能 抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞合成和释放物质 并吞噬 分泌组织胺酶 抗过敏 嗜碱性粒细胞 状态和功能与肥大细胞相似 产生组织胺 导致过敏 单核细胞功能 具有吞噬功能 淋巴细胞 参与体液免疫和细胞免疫 60 白细胞计数 测定血液中白细胞总数1手工计数2用血液分析仪进行计数 61 白细胞计数 参考值成人 4 10 109 L新生儿 15 20 109 L6个月 2岁 11 12 109 L意义白细胞增多 指总数高于正常值高限 10 109 L白细胞减低 指总数低于正常值低限 4 109 L 62 白细胞分类计数 根据白细胞特有的形态进行分类并计算每种的百分比值 1手工分类 把血液制成血膜 然后用Wright然后进行染色 在显微镜下进行人工分类计数 一般计数100 200个白细胞 该方法是目前主要的分类计数方法 2仪器分类计数 63 白细胞的生理变化 年龄之间有差异 婴儿 新生儿 成人不同的身体状态有差异 一天内的不同时期也有变化 64 65 中性粒细胞增多 生理性胎儿及初生儿日间变化疼痛 情绪激动运动和劳动暴热和严寒孕妇妊娠5个月以上 66 中性粒细胞病理性增多 1 急性感染 尤其是化脓性球菌为最常见的原因 在某些极重度感染时 白细胞不但不高 反而减低 2 严重的组织损伤及大量血细胞破坏 严重外伤 手术创伤 大面积烧伤 冻伤 以及血管栓塞所致局部缺血性坏死等使组织严重损伤者及严重的血管内溶血 67 3 急性大出血 白细胞总数常在1 2小时内迅速增高 内出血者如消化道大量出血 内脏破裂如脾破裂或输卵管妊娠破裂等 白细胞增高常较外部出血为显著 因此 白细胞增高可作为早期诊断内出血的参考指标 4 急性中毒 代谢性中毒 急性化学药物中毒 生物毒素中毒 5 白血病 恶性肿瘤 68 类白血病反应 是指机体对某些刺激因素所产生的类似白血病表现的血象反应 周围血中白细胞数大多明显增高 并可有数量不等的幼稚细胞出现 当病因去除后 类白血病反应也逐渐消失 69 引起类白血病反应的病因很多 感染和恶性肿瘤最多见其次是急性中毒 外伤 休克 大面积烧伤等 类型 以中性粒细胞为主 其它还有嗜酸性 淋巴细胞型 单核细胞型等 按周围白细胞总数的多少可分为白细胞增多型和白细胞不增多型 70 中性粒细胞减少 定义 白细胞总数低于4X109 L为白细胞减少 主要是中性粒细胞减少 当中性粒细胞低1 5X109 L为粒细胞减少症 低于0 5X109 L为粒细胞缺乏症 71 感染 特别是革兰阴性杆菌感染 某些病毒感染 某些原虫感染 疟疾 黑热病 在某些严重细菌性感染如脓毒血症 以及晚期恶性肿瘤者严重感染时 白细胞减少 中性粒细胞百分数增高 核左移明显 并有明显的中毒性改变 提示预后较差 血液系统疾病 再生障碍性贫血 恶性组织细胞病理化损伤 放射线 放射性核素 化学物品 及化学药物 氯霉素 抗甲状腺药 免疫抑制剂 抗肿瘤药 退热镇痛药 单核 吞噬细胞系统功能亢进 脾亢 自身免疫性疾病 如SLE 72 嗜酸性粒细胞 0 5 5 形态圆形 直径10 15 m 核为2叶 呈眼镜状 深紫色 胞浆淡红色 充满粗大 均匀而圆的鲜红色颗粒 73 意义 增多减少 过敏性疾病 寄生虫 皮肤病 传染病 猩红热时 肿瘤 HD 肺Ca 慢粒 嗜酸细胞白血病 长期应用激素 急性传染病时期 74 嗜碱性粒细胞 0 1 形态核呈深紫色或不明显 分2 3叶 多不明显 胞浆呈紫红色 有大小不均的黑色颗粒 75 意义 主要见于增多慢粒碱粒细胞白血病转移性癌肿骨纤金属中毒 如铅 锌 铋 76 淋巴细胞 20 40 形态大淋巴细胞直径 10 18 m 小淋巴细胞6 9 m 胞核圆形 椭圆形 深紫色 染色质粗密成块 胞浆 大淋巴细胞呈蔚蓝色 有少量颗粒 小淋巴细胞呈深蓝色 一般无颗粒 77 意义 增多减少 长期接触放射线及长期应用激素 生理性增多 婴儿 50 6 7岁以后接近成人 病理性增多 病毒感染 慢性细菌感染 如结核恢复期 白血病 78 单核细胞 3 8 形态胞体大 直径14 20 m 胞核不规则 呈肾形 S形 马蹄形 淡紫红色 排列较疏松呈网状 胞浆较多 淡灰色 含较多的细小紫红色颗粒 79 意义 主要见于增多血液病 恶组 单核细胞白血病 MDS感染 心内膜炎 疟疾 活动性结核 80 一 外周血常见白细胞的形态 经瑞特染色后外周血中常见各种成熟白细胞形态如下 返回 上一页 下一页 81 一 中性粒细胞 返回 上一页 下一页 胞体呈圆形 直径10 15 约为红细胞的 倍 胞质量丰富染粉红色 含大量细小均匀的紫红色中性颗粒 细胞核染色质粗糙不匀 排列紧密成小块状 染深紫红色 根据核的形状分为中性杆状 带状 核粒细胞和中性分叶核 多节核 粒细胞两种 82 一 中性粒细胞 中性分叶核粒细胞的核分 叶 叶或更多叶 以 叶 叶为常见 叶间以核丝或核桥相连 分叶的大小 形状和排列各不相同 返回 上一页 下一页 83 中性分叶核粒细胞的核 返回 上一页 下一页 84 杆状核和分叶核的划分标准 胞核完全分离或核间以丝状相连 或核叶重叠 使核的轮廓看不清 划分为分叶核粒细胞 胞核细长多样 弯曲盘绕 可呈C型 S型 V型或不规则型 划分为杆状核粒细胞 为不完全成熟细胞 返回 上一页 下一页 85 杆状核粒细胞的核形 返回 上一页 下一页 86 二 嗜酸粒细胞 圆形 直径13 m 15 m 略大于中性粒细胞 胞核常分两叶 似眼镜形 也可见 叶 叶者 核染色质粗 染紫红色 胞质中充满粗大 均匀 整齐 紧密排列的橘红色嗜酸性颗粒 偶见少许淡蓝或无色胞质 嗜酸粒细胞较易碎 破碎后颗粒多散在胞核附近 返回 上一页 下一页 87 三 嗜碱粒细胞 圆形 直径10 m 1 m 较其他粒细胞小 胞核常被颗粒遮盖 核染色质粗着色较浅 分叶常不明显 形态不规则 清楚时可见 叶 叶 胞质量较少 常呈淡红或淡紫红色 含少量粗大 但大小不均 排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒 常盖于核上 嗜碱性颗粒易溶于水 故染色时易被溶解消失 而呈淡红色空穴状 返回 上一页 下一页 88 四 单核细胞 呈不规则的圆或椭圆形 为外周血中最大的细胞 直径15 m 25 m 细胞核大呈不规则圆形 肾形 马蹄形 或不规则分叶有时折叠卷曲 染色质细致疏松如网状 染淡紫红色 胞质量丰富 染淡蓝 灰蓝色不等 常呈毛玻璃样半透明 胞质内含有大量细小灰尘样紫红色嗜天青颗粒 核凹陷处胞质染色较淡 偶见无颗粒胞质是伪足样伸出 返回 上一页 下一页 89 五 淋巴细胞 按其个体可有大小之分 小淋巴细胞 呈圆形 直径6 m 10 m 胞核圆形 偶见凹陷 染色质粗糙紧密 排列均匀 无空隙 常有隐约成块现象 核周常有染色质浓集 核膜明显 有时可见潜在核仁 胞质量极少 仅在核的一侧出现一线天蓝或深蓝色 有的甚至完全不见 胞质中一般无颗粒存在 偶见几颗大小不等的紫红色嗜天青颗粒 返回 上一页 下一页 90 大淋巴细胞 体积较大直径10 m 15 m 胞核染色质比小淋巴细胞疏松 胞质量丰富 呈透明的淡蓝色 常有少量大小不等的嗜天青颗粒 返回 上一页 下一页 91 五种白细胞鉴别要点 返回 上一页 下一页 92 中性粒的毒性变化 在重症传染病 各种化脓性感染 恶性肿瘤 中毒 大面积烧伤 放射性治疗等病理情况下 中性粒细胞可发生毒性变化 具体表现为中毒颗粒 细胞大小不均 空泡 杜氏小体 核棘突 返回 上一页 下一页 93 毒性变化 1 细胞大小不等 指中性粒细胞体积大小悬殊的情况而言 常见于炎症 其发生机理可能是在内毒素的作用下 骨髓内幼稚中性粒细胞发生不规则的分裂增殖所致 返回 上一页 下一页 94 毒性变化 中毒颗粒瑞特染色后 中性粒细胞胞质内出现深紫蓝色或紫黑色的粗大而分布不均匀的颗粒 有时也较小或稀疏散在于中性颗粒中 常见于严重的化脓性感染及大面积烧伤等 返回 上一页 下一页 95 毒性变化 3 空泡细胞受损后胞质发生脂肪变性 染色后脂质溶解后的