（食品科学专业论文）杨梅非果部位有效成分的抗氧化活性和减肥功效研究.pdf

浙江大学硕士学位论文摘要 摘要 杨梅( m y r i c a r u b r as i e b e tz u c e ) 为杨梅科( m y r i c a e ) 杨梅属( m y r i c a ) 植 物，为国产杨梅属的六个种之一，在我国资源十分丰富。虽然杨梅在我国的栽培 和使用历史十分悠久，但对该传统植物资源的利用和开发尚属粗浅，尤其是对其 非果部位( 叶、枝、皮) 的研究相当欠缺。本课题选用浙江余姚荸荠种杨梅的非 果部分为研究对象，采用7 0 乙醇进行热回流提取，提取物经石油醚脱脂后，依 次用乙酸乙酯和正丁醇进行分级萃取，分别得到杨梅叶、枝，皮醇取物的乙酸乙 酯相、正丁醇相和水分级相( y y 、y z 、y s ；z y 、z z 、z s ；p y 、p z 、p s ) 。 采用d p p h 法、a b t s 法、r a n c i m a t 法及全血抗氧化体系总抗氧化法等四个 不同的抗氧化评价体系评价杨梅叶、枝和皮醇提物及各分级相的抗氧化能力；采 用高效液相色谱法测定杨梅叶、枝和皮乙酸乙酯相中杨梅素鼠李糖苷和槲皮素鼠 李糖苷的含量。同时，采用脂肪酸合酶( f a s ) 快失活抑制能力的体外评价试验， 筛选杨梅非果部位醇提物中f a s 抑制的有效部位；并通过整体动物实验，对目标 物的f a s 抑制活性和减肥功效进行验证，表明杨梅树皮醇提物的水分级相是一个 极具潜力的调节脂代谢和控制体重的有效部位，具有作为降脂减肥功能因子开发 的潜力。现将主要研究结果归纳如下： ( 1 ) 杨梅树的叶、枝、皮醇取物的各分级相( 乙酸乙酯相、正丁醇相、水分 级相) 在不同的抗氧化评价体系中均表现出良好的自由基清除活性和抗油脂氧化 能力。在清除d p p h + 、a b t s 十时，各分级相之间的活性强弱表现为乙酸乙酯相 正丁醇相 水相。三个非果部位醇提物的正丁醇相和水分级相清除d p p h 和 a b t s + 的能力大小分别为：p z z z y z ，p s z s y s 。在各部位的乙酸乙酯相中， 清除d p p h 能力大小依次为：z y y y p y ；清除a b t s + 能力大小依次为： y y z y p y 。杨梅非果部位醇取物的乙酸乙酯相具有很强的抗山茶油氧化的能力， 0 0 3 添加量时的抗氧能力与0 0 2 的t b h q 相当。杨梅非果部位醇取物及其分级 相的总酚含量- 9 其清除d p p h 和a b t s + 作用间存在显著的正相关性( p 叶 皮，槲皮素鼠李糖苷 含量高低依次为叶 枝 皮，二者的含量在皮中均是最低的。 i i 浙江大学硕士学位论文 摘要 ( 3 ) 杨梅非果部位醇取物体外f a s 抑制活性的研究结果表明，杨梅树皮水分 级相( p s ) 活性最强，其i c 5 0 为0 4l a g m l 。在小鼠预防型动物试验模型中，p s 能显著地降低试验小鼠的体重和体脂，并显著降低血液中t g 、t c 和l d l c 水平， 抑制肝脏f a s 的活性。同时，从肝脏切片和脂肪切片中可以看到，p s 能显著地减 少小鼠肝脏脂肪细胞的数量，并使脂肪细胞的体积明显变小。 研究结果表明，目前尚未得到有效开发利用的杨梅非果部位是植物多酚的优 质资源，具有良好的清除自由基和抗氧化活性，有望开发成一种天然、安全、高 效的生物抗氧化剂；同时，杨梅树皮中的有效成分具有良好的降脂减肥、控制体 重的功效，具有作为食品功能因子和膳食补充剂开发的潜力。 关键词：杨梅；非果部位提取物；抗自由基；抗氧化；脂肪酸合酶抑制剂；体重 控制；食品功能因子 i i i 浙江大学硕士学位论文 a b s t r a c t m y r i c ar u b r as i e b e tz u c c b e l o n g st oo n eo ft h es i xs p e c i e so fm y r i c a c e a ef a m i l y , g e n u sm y r i c al i n n i ti so fa b u n d a n tr e s o u r c e sa n dh a sal o n gh i s t o r yo fc u l t i v a t i n g ，b u t t h er e s e a r c ha n dd e v e l o p m e n to ft h i st r a d i t i o n a lp l a n tr e s o u r c e ，e s p e c i a l l yf o rt h e n o n f r u i tp a r t s ，i se x t r e m e l ys h o r t a g e i nt h ep r e s e n ts t u d y , t h el e a v e s ，b r a n c h e sa n d b a r k so fm y r i c ar u b r aw e r ee x t r a c t e dw i t he t h a n o l w a t e r ( 7 0 ：3 0 ，v v ) s o l u t i o na tf i r s t s t e p ，d e f a t t e db yp e t r o l e u me t h e ra n dt h e nf r a c t i o n a le x t r a c t e dw i t he t h y la c e t a t ea n d n b u t a n o l ，a n df i n a l l yn i n ee x t r a c t sw e r eg i v e no u ta n dw r i t t e na sy yy z ，y s ；z y , z z ， z s ；p y , p z ，p s ，r e s p e c t i v e l y d p p hm e t h o d ，a b t sm e t h o d ，r a n c i m a tm e t h o da n dw h o l eb l o o da n t i o x i d a n t m e t h o dw e r ea d o p t e dt oe v a l u a t et h ea n t i o x i d a n ta b i l i t yo ft h ee x t r a c t s h p l cm e t h o d w a su s e dt od e t e c tt h ec o n t e n t so fm y r i c i t f i na n dq u e r c i t r i ni nt h ee t h y la c e t a t ef r a c t i o n s a f t e rt h e r e ，t h ef a s td e a c t i v e dc a p a c i t yo nf a t t ya c i ds y n t h a s e ( f a s ) a b o u ta l lo f s a m p l e sw e r ed e t e c t e di no r d e rt od i s c o v e rt h em o s te f f e c t i v ef r a c t i o no ff a si n h i b i t i o n 。 f i n a l l y , am o u s ea n i m a lt e s tw a sf i g u r e do u tt ov e r i f yt h ee f f e c to ft h i sf r a c t i o n r e s u l t s s h o w e dt h a tt h ew a t e r - p h a s ef r a c t i o nm a d eo ft h eb a r k so fm y r i c ar u b r ad i s p l a y e d s i g n i f i c a n tb i o a c t i v i t i e sb o t ho nr e d u c i n gb l o o d - l i p i da n dc o n t r o l l i n gb o d yw e i g h ti n v i v o t h em a i nr e s u l t sw e r es u m m a r i z e da sf o l l o w s ： n i n em y r i c ar u b r ae x t r a c t s ( y yy z ，y s ；z yz z ，z s ；p y , p z ，p s ) d e m o n s t r a t e d f a v o r a b l ea c t i v i t yi ns c a v e n g i n gf r e er a d i c a l sa n da n t i o x i d a n ta b i l i t yt oo i li nv a r i o u s a n t i o x i d a n ta s s a ys y s t e m s d p p h 。a n da b t s 十s c a v e n g i n gc a p a c i t yo fm y r i c ar u b r a e x t r a c t se x h i b i t e dt h ed e s c e n d i n go r d e r ：e t h y la c e t a t ef r a c t i o n n b u t a n o lf r a c t i o n w a t e rf r a c t i o n a m o n gt h es a m p l e so fn - b u t a n o la n dw a t e rf r a c t i o n ，t h es c a v e n g i n g c a p a c i t y o nd p p h a n da b t s 斗e x h i b i t e dt h e d e s c e n d i n go r d e r ：p z z z y z ， p s z s y s a m o n gt h es a m p l e so fe t h y la c e t a t ef r a c t i o n ，t h es c a v e n g i n gc a p a c i t yo n d p p h l i n e du pa sz y y y p y , a n do na b t s + a sy y z y p y a st ot h ea b i l i t yo f r e d u c i n go x i d a t i o no fc a m e l l i ao i l ，t h ee t h y la c e t a t ef r a c t i o ns h o w e dt h eg r e a t e s t a c t i v i t ya t0 0 3 d o s a g el e v e l ，w h i c hw a sc o m p a r a b l ew i t h0 0 2 t b h q m o r e o v e r , 、 t v 浙江大学硕士学位论文 a b s t r a c t t h e r ew a ss i g n i f i c a n t l yp o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e nt h et o t a lp h e n o lc o n t e n t sa n d s c a v e n g i n gc a p a c i t yo l ld p p h a n da b t s + ( 庐o 0 5 ) h p l cm e t h o dw a su s e df o rq u a n t i t a t i v e l ya n a l y s i st w or e p r e s e n t a t i v ef l a v o n o l g l y c o s i d e si nt h ee t h y la c e t a t ef r a c t i o no fn o n f r u i t e x t r a c t s t h em y r i c i t r i na n d q u e r c i t r i n c o n t e n t se x h i b i t e dt h ed e s c e n d i n go r d e r ：b r a n c h e s l e a v e s b a r k sa n d l e a v e s b r a n c h e s b a r k s ，i n d i v i d u a l l y b o t ho ft h e ma r et h el o w e s ti nt h eb a r k s e x t r a c t n l et e s to ff a si n h i b i t i o n nv i t r oe l u c i d a t e dt h a tt h ew a t e rf r a c t i o nm a d eo f m y r i c ar u b r ab a r k s ( p s ) w a so ft h es t r o n g e s td e a c t i v e da b i l i t yt of a t t ya c i ds y n t h a s e 埘ma ni c 5 0v a l u ea t0 4 t g m l i nt h ea n i m a lm o d e lo fp r e v e n t i n go b e s i t yf r o mm i c e ， p ss i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dt h el e v e lo fb o d yw e i g h t ，b o d yl i p i d ，t g , t ca n dl d l c ， a n di n h i b i t e dt h ef a sa c t i v i t yo fl i v e rt i s s u ei ne x p e r i m e n t a la n i m a l s a tt h es a m e t i m e ，p ss t i l lr e d u c e dt h eq u a n t i t yo ff a tc e l l si nm i c el i v e ra n dd e c r e a s e dt h ec e l l v o l u m ei nt h ea d i p o s et i s s u e s a c c o r d i n gt oo u rr e s e a r c h ，i tc o u l db ec o n c l u d e dt h a tt h en o n - f r u i tp a r t so f m y r i c ar u b r a , tp 1 e a v e s ，b r a n c h e sa n db a r k s ，a r ei m p o r t a n tp l a n tr e s o u r c e so f p o l y p h e n o l sd u et ot h e i rg o o dc h a r a c t e r i s t i c so na n t i o x i d a n ta b i l i t ya n db o d yw e i g h t c o n t r o le f f e c t p a r t i c u l a r l y ，w i t he x c e l l e c tf a si n h i b i t i o na n da n t i o b e s i t yc a p a c i t i e s ， t h ew a t e rf r a c t i o no fb a r k se x t r a c th a sag r e a tp o t e n t i a l i t yt ob ed e v e l o p m e n t e da s f u n c t i o n a lf o o df a c t o ra n dd i e t a r ys u p p l e m e n ti nt h ef u t u r e k e y w o r d s ：m y r i c ar u b r a ；n o n - f r u i tp a r te x t r a c t s ；a n t i - - f r e er a d i c a l s ；a n t i o x i d a n t ；f a t t y a c i ds y n t h a s ei n h i b i t o r ；b o d y w e i g h tc o n t r o l ；f u n c t i o n a lf o o df a c t o r v 浙江大学硕士学位论文缩略词表 缩略词表 i 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝垄盘堂或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：签字日期： 年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝姿盘堂 有权保留并向国家有关部门或机构 送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期：年月日签字日期：年月日 浙江大学硕士学位论文致谢 致谢 光阴荏苒，转眼两年半的研究生学业即将结束，回想起在华家池畔生活的点 点滴滴，感慨万千。我不仅在学业和科研水平上获得进步，综合素质也得到了很 大的提升。 期间最令我难忘的是导师张英教授和吴晓琴副教授在学业和生活上所给予 我的指导、关怀和照顾。两位老师渊博的学识、严谨的治学态度、以及注重学生 个性发展和自主学习能力培养的理念让我受益非浅。通过两位老师对我的悉心指 导和言传身教，让我具备了从事科学研究工作的基本能力，更学会了用一种积极 进取的态度去面对工作和生活。在此谨向导师致以崇高的敬意和衷心的感谢! 感谢师兄陆柏益、章宇、龚金炎、夏道宗、张建友、刘杰尔、刘宏程、刘连 亮和师姐石嘉怿、焦晶晶、牛丽影、陈秋萍、龚凌霄、徐容容、倪勤学等在试验 研究过程中对我的指导和帮助；感谢郑小微、罗晓伟、戴甜甜、刘烨烽等师妹在 这两年多的学习生活中给我提供的帮助。 感谢同窗李栋、鲍建峰、陈亚琪、康海权等同学通过各种形式对我做课题提 供的帮助。特别感谢跟我一路走来的室友徐庭巧、周赐琴、刘芬同学，非常感谢 你们的友情。 感谢两年多来所有关心、支持和理解我的朋友，正是你们的存在使我一路走 来并不孤单。 感谢我的父母及家人为我的成长所倾注的心血和无私的爱，使我在遇到困难 与挫折时能够坚定信心、勇敢面对，在人生的道路上不断前进。 最后，向论文评阅人和答辩委员会的所有专家、教授致以最衷心的感谢! 傅燕玲 2 0 1 0 - 1 - 1 8 于浙江大学 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 1 1 我国的杨梅资源 第一章绪论 杨梅( m y r i c ar u b r as i e b e tz u c c ) 是原产于我国的一种亚热带果树，系杨梅科 ( m y r i c a e ) 杨梅属( m y r i c a ) 多年生常绿乔木。杨梅树冠球形，小枝粗糙，皮孔 明显，叶厚革质，倒披针形，表面深绿色有光泽，背面色稍淡，具菌根，为雌雄 异株植物。杨梅的栽培历史悠久，浙江余姚境内发掘的新石器时代的河姆渡遗址 中就发现了杨梅属花粉，说明该地区的杨梅野生种生长史已有7 0 0 0 多年( 缪松林 和王定祥，1 9 8 7 ) 。南方草木状最早记载了杨梅栽培和制酒的情况，这说明我 国杨梅的人工栽培可以追溯到2 0 0 0 多年前( 缪松林等，1 9 9 5 ) 。到了宋代，人工 栽培较多，逐渐成为江浙、两广的特产水果。 杨梅广泛分布于中国大陆、台湾、日本和韩国，全世界杨梅科植物有2 个属 5 0 多种，中国有6 个种，分别为杨梅( m y r i c ar u b r as i e be tz u c c ) 、毛杨梅( m y r i c a e s c u l e n t ab u c h h a m ) 、青杨梅( m y r i c aa d e n o p h o r ah a n c e ) 、矮杨梅( m y r i c an a n a c h e v a l ) 、全缘叶杨梅( m y r i c ai n t e g r i f o l i ar o x b ) 和大杨梅( m y r i c aa r b o r e s c e u sl i e th u ) ( 何新华等，2 0 0 4 ) ，我们通常所说的杨梅是指杨梅种，经济栽培主要也是 杨梅。我国杨梅主要分布在长江以南、海南岛以北，即东经9 7 0 1 2 2 0 和北纬1 8 0 3 3 0 之间( 缪松林等，1 9 8 7 ；缪松林等，1 9 9 5 ) 。据不完全统计，2 0 0 1 年底我国杨梅栽 培总面积约为2 1 3 3 万公顷，约占全国水果栽培总面积的2 6 ( 李三玉，2 0 0 2 ) 栽培面积、产量及品质均以浙江为最，主要产地在慈溪及余姚。截至2 0 0 6 年，浙 江省杨梅栽培面积达到6 7 1 万公顷，产量为3 1 3 6 万吨，目前杨梅已成为浙江省 的第二大宗水果( 浙江省桑茶果生产工作年报，2 0 0 7 ) 。 杨梅是药食两用的芳香植物，具有多种药用价值。宋代的食疗本草和明 代的本草纲目对杨梅的药用功效均有记载，杨梅有“生津，止渴，调五脏，涤 肠胃，除烦愦恶气”的功效。在贵州毕节、水城一带的舞族、布依族、苗族乡寨除 以矮杨梅的根、茎、果入药有治疗肠炎、止血、关节痛等药用功效外，还有用叶 治烫伤、臃肿、腹痛等疾病的习俗( 中药大辞典，1 9 7 9 ) 。 杨梅果实具有消食、消暑、止泻、利尿等功效( 李三玉，2 0 0 2 ) 。杨梅种子可 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 治疗汗脚、牙龈发炎、红肿痛和各种损伤的止血生肌，可作为医疗上的收敛剂。 杨梅核仁含有维生素b 1 7 ( 1 a e t r i l e ) ，是一种抗癌物质，杨梅核仁提取液对胃癌细 胞有杀伤抑制作用( 刘川1 等，1 9 9 8 ) 。杨梅叶中含多种酚类化合物，主要由黄酮 类及原花青素类化合物组成，具有显著的生理活性，杨梅叶提取物具有显著的抗 氧化作用( 邹耀洪等，1 9 9 8 ) 和抑菌作用( 胡静丽，2 0 0 2 ) 。在日本，杨梅枝叶 和根皮常用作收敛剂、解毒剂和肠胃止泻剂等传统中药成分( h i s a s h i ，2 0 0 2 ) 。杨 梅树皮味苦、生温，具有散瘀止血、止痛之功效，民间用于治疗跌打损伤、骨折、 痢疾、胃和十二指肠溃疡、牙痛等( 中药大辞典，2 0 0 0 ) 。杨梅树皮的化学成分 前人已有过报道，迄今已从杨梅树皮中分离得到黄酮类( n o n a k ag ，1 9 8 3 ) 、单 宁类( n o n a k ag ，1 9 8 3 ) 、三萜类( s a k u r a in ，1 9 8 7 ) 、二芳基庚烷类( s a k u r a in ， 1 9 9 1 ) 等化合物。近年来的研究发现，二芳基庚烷类等化合物由于其独特的化学 结构，具有多种生物活性，除可用作食品调味剂外，还有抗肿瘤、抗肝毒、抗氧 化、消炎、排胆汁、杀虫等方面的生物活性。从杨梅根皮中提取的杨梅多酚类物 质具有抗氧化作用，能维持生物膜的稳定性，对大、小鼠血细胞与造血组织损伤、 血小板损伤有保护作用，保护骨髓干细胞，使血小板增加，具有较好的防治溶血 作用和保护血液功能( 迟文等，2 0 0 2 ；迟文等，2 0 0 0 ) 。 1 2 抗氧化原理和方法 1 2 1 自由基的性质 自由基( f r e er a d i c a l ) 是人体进行生命活动时所产生的一种具有非配对电子的 活性基团或分子，是正常生化过程的中间产物，在机体正常及病理过程中都存在。 生物体内多种物质均可产生自由基，医学中占有重要地位的是氧所产生的自由基， 称为氧自由基。正常人一昼夜需氧5 0 0l ，其中2 的氧可获得电子而生成超氧阴 离子自由基( 0 2 ) 、羟自由基( o h ) 、脂质过氧化自由基( r o o ) 等，自由基产 生的具体途径如图1 1 所示。在正常代谢过程中，自由基具有调节细胞间的信号传 递和细胞生长、抑制病毒和细菌的作用。即使自由基稍有增加，亦不致导致疾病， 因为机体存在灭活自由基的一些酶，如超氧化物岐化酶( s o d ) 可灭活超氧阴离 子( 0 2 。) ，过氧化氢酶可灭活h 2 0 2 ，还有一些溶解在胞浆内的水溶性抗氧化物， 如维生素c 和谷胱甘肽，脂溶性的维生素e 和类胡萝卜素等均具有对抗氧自由基 2 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 的作用，只有当氧自由基产生过多或机体内灭活氧自由基的酶系统生成过少时， 将导致细胞和组织器官损伤，并诱发各种疾病，加速机体衰老。 q 卫。! ；型匕k 即 影响人体自由基的来源有两个方面，分别为：一是环境因素如高温、辐射、 光解、化学物质等导致共价键均裂产生的外源性自由基；二是体内各种代谢反应 产生的内源性自由基。内源性自由基是人体自由基的主要来源，其产生的途径主 要是经线粒体呼吸链电子泄漏产生线粒体内自由基和经微粒体混合功能氧化酶等 催化底物羟化产生的线粒体外自由基。此外，机体血红蛋白、肌红蛋白中还可以 通过非酶促反应产生自由基。 1 2 2 自由基对机体的作用 由于自由基高度的活泼性与极强的氧化还原能力，它通过氧化作用来攻击所 遇到的生物分子，使机体内大分子物质产生氧化反应，从而引起细胞结构和机能 的破坏，导致组织损伤，产生炎症和引起多种疾病，如对脂质的损伤能导致动脉 粥样硬化，对蛋白质的损伤能减弱免疫反应，对核酸的损害能导致遗传突变。 多余的自由基会对人体产生巨大的危害，主要表现在： ( 1 ) 自由基可使核酸结构发生种种破坏，包括氨基、羟基的脱除；碱基与核 糖的连接键断裂；磷酸脂键的断裂；d n a 或其主链的断裂。自由基可使核酸及其 组分之间进一步进行连锁反应而产生共价连接键，导致核酸损伤，或导致遗传突 变，导致d n a 永久性损伤，产生染色体破坏和细胞死亡等严重后果。 ( 2 ) 自由基对蛋白质的损伤可使蛋白质肽键断裂；使蛋白质分子发生交联聚 合而生成变性高聚物；使氨基酸发生氧化脱氨；同时，当自由基攻击酶蛋白时会 改变酶的结构而导致酶的活力丧失。自由基对蛋白质的损伤可破坏组织结构，加 速衰老过程。 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 ( 3 ) 所有的生物膜都含有多种磷脂和不饱和脂肪酸，自由基能够从不饱和脂 肪酸的双键中提取氢原子，使其成为脂类自由基，然后进一步氧化成过氧化自由 基，后再与未氧化脂类形成氢过氧化物和脂类自由基，如此连锁反应，使脂类不 断氧化。所形成的过氧化物是不稳定的，经过许多复杂的分裂和相互作用，最终 可以形成醛、酮、醇、碳氢化物、环氧化物之类的低分子化合物，也可生成有毒 聚合物，其中比较典型的分解产物为丙二醛( m d a ) 。 ( 4 ) 导致脂褐素的累积。脂质，尤其是线粒体中的脂质，在自由基、氧、酶、 金属离子等作用下进行过氧化，脂质过氧化物与蛋白质反应，形成不溶于水的共 聚体。此共聚体不能被机体分解吸收，在细胞内逐渐堆积，形成脂褐素，沉积在 皮肤表面和内脏组织中。脂褐素将影响r n a 代谢，使细胞萎缩、死亡。 迄今已发现许多与自由基有关的疾病( h i s a s h i ，2 0 0 2 ；m u r a m a t s u ，1 9 9 5 ； s t e i n b e r g ，1 9 8 9 ；d a s ，1 9 9 7 ；i s a b e l l e ，1 9 9 5 ) ，天然药物对人体疾病的预防和治 疗作用，大部分归咎于其含有能清除人体过量自由基的抗氧化成分。因此如何利 用天然抗氧化物来消除机体内多余自由基是一个很重要的研究方向。 1 2 3 体外抗氧化活性评价方法 体外抗氧化活性的检测模式主要有：( 1 ) 测量底物( 标记底物) 或产物的量 的变化；( 2 ) 测量氧化反应的速率；( 3 ) 测量特征自由基变化的速度或程度；( 4 ) 测量被测物的抑制率，i c 5 0 和t e c 5 0 ；( 5 ) 测量被测物产生与标准抗氧化剂同等作 用的浓度( w a n g ，2 0 0 6 ) 。评价抗氧化能力的方法很多，文献报道常见的方法有清 除d p p h 自由基法、清除a b t s 自由基法、化学发光法、f e 3 十还原法以及有氧自 由基俘获法。 1 2 3 1d p p h ( 2 , 2 - d i p h e n y l - i p i c r y l h y d r a z y lr a d i c a l ) 法 d p p h 法是一种简单快速的评价方法。d p p h 的乙醇溶液呈紫色、在5 1 7n m 处 有强吸收，当有自由基清除剂存在时，吸收消失或减弱，因此可以通过测定抗氧 化物质与d p p h 反应的吸光值变化来评价其抗氧化能力的强弱。该法的主要缺陷 是d p p h 会与其他自由基( 如烷氧自由基) 发生反应，且自由基反应达到稳定状 态的时间与抗氧化剂和d p p h 的浓度比不成线性关系( z h a n g ，2 0 0 4 ) 。而且由于 天然提取物本身会带有一定的颜色，所以采用该法评价天然提取物的抗氧化能力 时可能会受到样品本身颜色的干扰。 4 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 1 2 3 2a b t s + ( 2 2 a z i n o b i s ( 3 e t h y l b e n z o t h i a z o l i n e 6 s u l f o n a t e ) ) 法 a b t s 法为m i l l e r 等( m i l l e r ，1 9 9 3 ) 首次报道，其反应过程如下图所示，是 利用a b t s 被氧化剂过硫酸钾氧化成蓝绿色的自由基( a b t s + ) ，通过测定7 3 4 n m 波长下抗氧化物与a b t s + 反应而导致吸光值变小的程度来评价其抗氧化能力。为 了便于比较不同抗氧化剂的活性，采用t e a c ( t r o l o xe q u i v a l e n ta n t i o x i d a n t c a p a c i t y ) 为活性单位，定义为lm m o l l 某种抗氧化剂相当于t r o l o x 的浓度 ( m m o l l ) 。该法简便，快速，适合于大量样品的检测。但该法的一个缺陷是a b t s + 在与氢原子供体的反应中选择性较差，它可与任何羟基化的芳香族化合物反应， 这与它们的实际抗氧化能力有一定的差距。因此，t e a c 值也包括对抗氧化不起 作用的羟基。 h 2 0 _ + o h + h e 磊+ n 2o + h 2 0 一o h + n 2 + o 壬 n i + o h n 3 + o h 。 n l + a b t 分蛸b 碍一+ n ； a bt s 一+ s c a v e n g e r s c a v e n g e r 一+ a bt s 。 图1 2 清除a b t s + 的反应过程 f i g u r e1 2t h er e a c t i o np r o c e s so fs c a v e n g i n ga b t s 十 1 2 3 3f r a p ( f e r r i ci o nr e d u c i n ga n t i o x i d a n tp a r a m a t e r ) 法 f r a p 法是由b e n z i e 等于1 9 9 9 年首先报道的，属于电子转移型的测定方法， 主要用于评价样品的还原能力。其原理是f e 3 + 三吡啶三吖嗪( f e 3 + - t p t z ) 的复合 物在低p h 值下可被样品中的还原物质还原为f c 2 + t p t z ，溶液也由黄色变成明显 的蓝色，并在5 9 3 n m 处有最大吸收。样品还原力越强，吸光值越大。f r a p 法具 有快速、简便、重复性好等优点。该法不仅用于检测食物及饮料的抗氧化活性， 也可用于评价抗氧化剂的活性( m u r a m a t s u ，1 9 9 5 ) 。该方法的局限性在于，并非 所有能降低f e 3 + 的还原剂都是抗氧化剂，而能有效降低促氧化剂的抗氧化剂不一 定都能有效降低f e ”。 1 2 3 4r a n c i m a t 法 基本原理是在一定温度下，向油样中以恒定速率通入一定流量干燥空气，使 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 油样加速氧化，油脂中易氧化的物质被氧化成易挥发的小分子物质，如醛、酮、 酸等。挥发的小分子物质被空气带入盛有蒸馏水的电导率测定池中，在线测定测 量池中水的电导率，记录电导率对反应时间的氧化曲线，对曲线求二阶导数，从 而测出诱导时间。诱导时间越长，表明油样抗氧化稳定性越好。该法一般用于评 价在油脂体系下的抗氧化能力。 此外，全血体系总抗氧化能力测试法较为全面、但仍属初步地评价样品在生 物体系中的抗氧化作用强弱。 1 3 肥胖 1 3 1 肥胖现状及危害 肥胖是体内脂肪、尤其是甘油三酯堆积过多或分布异常而导致的一种病理状 态。按其病因不同，肥胖可分为原发性和继发性。原发性肥胖可能与遗传、饮食 和生活习惯有关，而继发性肥胖是由于其他健康问题导致的，是有因可查的。绝 大多数肥胖人群属于前者。 肥胖是现代社会中最常见的营养性障碍疾病。随着社会经济的发展，人们生 活水平的提高，生活方式的改变，肥胖已成为全球最大的慢性代谢异常疾病。世 界卫生组织在( ( 2 0 0 2 年世界健康报告中，将肥胖列为慢性非传染性疾病的主要 危险因素。肥胖已成为发达国家以及部分发展中国家所面临的一个严峻问题。现 在国际上通用的肥胖诊断标准一般是用体重指数( b m i ) 来衡量，该具体标准由 w h o 制定，具体内容见表1 1 ( w h o ，2 0 0 0 ) 。美国肥胖症的流行比例最高，当 前美国6 5 的男性和5 5 的女性超重或者肥胖( r o b e r t ，2 0 0 2o 在澳洲，1 8 岁以 上的人群中有1 9 肥胖和3 6 超重( g r a n d e ，2 0 0 9 ) 。在欧洲，英国的肥胖增长率 约为1 8 ，是增长最快的国家之一，紧接着是法国和德国。我国超重人群估计在 4 8 亿左右，肥胖者则已超过7 0 0 0 万。目前，全世界的肥胖人群在2 5 亿以上，超 重至少有5 亿人。 肥胖不仅影响外表美观还严重危害人类健康。大量的临床试验和观察表明， 肥胖与胰岛素抵抗、i i 型糖尿病、心血管病、高血压、高血脂、冠状动脉粥样硬 化性心脏病等代谢综合症的发生密切相关( 姜淑洁，2 0 0 7 ；y o u n g h e e ，2 0 0 4 ) 。据 统计，有5 7 的i i 型糖尿病、3 0 v o 的胆囊疾病、1 7 的冠心病、1 7 的高血压、1 4 浙江大学硕士学位论文 第一章绪论 的骨关节炎以及1 1 的乳腺、子宫、结肠、直肠癌等疾病是由于肥胖造成的。肥 胖可以增加这些疾病的发病率和死亡率。因而预防和降低肥胖对心血管系统疾病 的远期影响已引起学术界的高度重视并成为研究热点。 表1 1w h o 根据b m i 值大小所划分的体重和肥胖并发症发病率之间的关系 t a b l e1 1w h oc l a s s i f i c a t i o no fw e i g h ta n dt h er i s ko fc o - m o r b i d i t i e sa c c o r d i n gt ob m iv a l u e s ( b m i = w e i g h ti nk g h e i g h t 2i nm e t r e s ) 1 3 2 肥胖产生的原因 最近几年来的研究表明，肥胖的发生与遗传基因、环境因素、膳食结构等多 种因素有关，其中主要的决定因素是基因。通常认为导致肥胖的原因主要是高热 量的饮食和人体的低代谢率，而脂肪摄入过多是促进肥胖形成的重要因素之一。 脂肪组织是体内巨大的能量储存系统，它对于维持机体能量代谢平衡发挥重要作 用。脂肪摄入后，机体主要通过将脂肪氧化供能和通过神经负反馈减少饮食中脂肪 摄取。但脂肪摄入过量时并不能加速脂肪的氧化，因此能量平衡需通过减少脂肪的 摄取来维持。低代谢率是由遗传因素所决定的，如r a c u s s i n 等( r a v u s s i n ，1 9 9 2 ) 研究发现皮马印第安人肥胖者的代谢率明显偏低。基因突变导致的肥胖，包括肥 胖基因突变( z h a n g ，1 9 9 4 ) 、消脂素受体基因突变( t a r t a l a g l i a ，1 9 9 5 ；t a k a y a ，1 9 9 6 ) 、 1 3 3 受体基因突变( h i m m u s ，1 9 8 9 ；w a l s t o n ，1 9 9 5 ；c l e m e n t ，1 9 9 5 ) 、和解偶联蛋 白基因变异( j a c o b s o n ，1 9 8 5 ；a r g y r o p o u l o s ，1 9 9 8 ) 等多种情况。 7 浙江大学硕士学位论文 第一章绪论 1 3 3 肥胖药物治疗的现状及进展 肥胖治疗药物的减肥机制虽然不尽相同，但是基本均涉及几个共同的环节： ( 1 ) 减少摄食和能量摄入；( 2 ) 加强代谢，增加能量消耗；( 3 ) 减少营养物吸收， 促进排泄。当机体经常处于正的能量平衡状态，使能量的获得大于消耗时，就能 促进发胖。体内有许多调节机制可以调节进食和产热，进而调节体脂量，使人们 保持正常体重。 减肥药的种类很多，常用的减肥药如表1 2 所示。多数还处于临床或临床前研 究阶段，按作用机制可分为3 类：( 1 ) 抑制食欲药物，通常作用于中枢神经或外 周神经，通过影响食欲来减少摄食量，其代表药物为西布曲明( s u b u t r a m i n e ) 。( 2 ) 抑制肠道消化吸收药物，主要作用于胃肠道，减少能量吸收，其代表药物为奥利 司他( o r l i s t a t ) ，结构如图1 1 所示。( 3 ) 增加能量消耗药物，作用于代谢过程， 加快能量的消耗。 表1 2 常用减肥药物 t a b l e1 2c o m m o nu s e dw e i g h tr e d u c i n gd r u g s 拟儿茶酚胺类药 拟5 羟色胺类药 同时影响儿茶酚胺和 5 羟色胺类药 中枢兴奋药 激素类 胰岛素增敏剂 脂肪酶抑制剂 葡萄糖甘酶抑制药 其他 右苯丙胺( d e x a m f e t a m i n e ) ，安非拉酮( a m f e p r a m o n e ) ， 苯丁胺( p h e n t e r m i n e ) ，苯丙胺醇( p h e n y l p r o p a n o l a m i n e ) ， 苯二甲吗啡( p h e n d i m e t r a z i n e ) ，苄非他明( b e n z p h e t a m i n e ) ， 对氯苯丁胺( c h l o r p h e n t e r m i n e ) 芬氟拉明( f e n f l u r a m i n e ) ，右芬氟拉明( d e x f e n f l u r a m i n e ) ， 氟西丁( f l u x e t i n e ) 氯苄雷司( c l o b e n z o r e x ) ，芬普雷司( f e n p r o r e x ) ， 美芬雷司( m e f e n o r e x ) 麻黄碱( e p h e d r i n e ) ，咖啡因( c a f f e i n e ) 甲状腺激素，生长激素，i g f 1 二甲双胍( m e t f o r m i n ) 奥利司他( o r l i s t a t ) 阿卡波糖( a c a r b o r s e ) 防风通圣散，白金降脂丸，瑶山减肥茶，三花减肥茶 浙江大学硕士学位论文第一章绪论 1 3 3 1 食欲抑制剂 食欲由下丘脑腹内侧的饱中枢与下丘脑外侧区的摄食中枢调节。神经药理学 研究证明，上述中枢神经系统通路中的儿茶酚胺类如去甲肾上腺素、多巴胺及5 羟色胺等递质变化可以引起摄食行为的改变。因此影响这些递质在下丘脑的合成、 释放与再摄取的药物可以调节食欲、改变摄食行为，从而影响体重。食欲抑制剂 就是通过兴奋肾上腺素能神经或5 羟色胺能神经而达到降低食欲、减少食物摄取 的目的。 西布曲明( s i b u t r a m i n e ) 是由德国b a s f 药物公司( r n o l l ) 研制开发的中 枢性食欲抑制剂，该药于1 9 9 7 年获得f d a 的批准而上市。