血浆微量蛋白的测定及临床意义PPT课件.ppt

血浆微量蛋白的测定及临床意义 1 一 血浆蛋白质测定方法的进展 比色法 如总蛋白的测定方法 双缩脲反应法 白蛋白的测定方法 溴甲酚绿法 电泳法 是进一步分离蛋白质的方法 免疫测定法 是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法 2 二 免疫测定法的特点 特异性好 即某一抗原只与其相应的抗体起反应 敏感性高 可检测出纳克 ng 水平的量 3 免疫测定法包括 1 免疫扩散法 敏感度在ug ml 因此只能用于检测含量较高的蛋白质 且操作繁琐 时间长 需18 48小时 2 免疫电泳法 是区带电泳与免疫扩散相结合的方法 一般不能定量 仅用于检测异常蛋白成分 3 免疫浊度法 基本原理是 当可溶性抗原与相应抗体特异结合 在二者比例合适 并有一定浓度的电解质存在时 可以形成不溶性的免疫复合物 即沉淀反应 4 三 免疫浊度法的分类及原理 透射免疫比浊法散射免疫比浊法 5 透射免疫比浊法的原理 当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时 被形成的免疫复合物反射 遮挡或吸收而减弱 在一定范围内 吸光度 A 与IC量呈正相关 因此当抗体量固定时 根据吸光度可计算出抗原量 要求形成的IC达到一定的数量 而且分子颗粒较大 否则难以精确测定 因此检测灵敏度相对较低 6 散射免疫比浊法的原理 光线通过检测溶液时 被反应形成的抗原抗体复合物折射而部分偏转 产生散射光 散射光强度 I 与样本的IC量 散射夹角 成正比 而与入射光波长成反比 7 滤光器 光源 散射法检测器 透射法检测器 反应杯 8 散射免疫比浊法分为终点散射比浊法和速率散射免疫比浊法 终点散射免疫比浊法 当反应达到平衡时进行检测 通常需10 30min 且灵敏度较低速率散射免疫比浊法 由于抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度在单位时间内时不同的 当反应开始时 进行动力学测定可以发现在某一时间反应速度最快 IC形成最多 散射光强度相应最大 即所谓速率峰 最大反应速率Vmax Vmax与待测抗原量呈正相关而获得测定 主要优点 快速 灵敏 精密度高 检测范围广 9 四 免疫比浊分析的影响因素 抗原抗体的比例 抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素 免疫比浊法的基本条件是在保持抗体过剩的情况下测定加入的抗原 但抗体过剩又必须适量 一般原则是先确定某一被测物的正常值 以 50 作为检测范围 抗体在此范围内应保持过剩 抗体的质量 要求抗体有很强的特异性 有较高的效价 以及有高的亲和力 一般采用R型抗体 反应溶液 一般采用PH在7 0左右的磷酸盐缓冲液 增浊剂的作用 一般使用浓度为3 4 的PEG6000 10 五 Array特定蛋白分析仪的简介 原理 采用速率散射比浊法测定速度 40 80结果 小时 每次可检测40个标本 特点 具有抗原过剩识别功能 11 抗原过剩识别 在抗体量一定的情况下 免疫复合物生成量随着抗原量的增加而增多 但抗原量超过一定域值后 免疫复合物的量却随之减少 影响检测的准确性 12 Array360抗原过剩识别功能工作原理 在检测到抗原抗体反应速率峰之后 在反应溶液中加入能与过剩抗体反应的微量的Ag 若反应溶液中有过剩抗体存在 则与加入的Ag反应 形成一个过剩抗体峰 若反应溶液中无过剩抗体存在 不能检测到过剩抗体峰的存在 当一个反应 有速率峰和过剩抗体峰同时存在时 仪器将确认第一次出现的速率峰有效 并将结果打印出来 而没有过剩抗体峰存在的反应 仪器将重新对标本进行更高稀释度的稀释 然后再测定结果 13 速率峰 过剩抗体峰 ARRAY360的抗原过剩检测 14 六 部分血浆微量蛋白质的临床意义 15 一 防卫蛋白 免疫球蛋白 Ig 包括IgG IgA IgMIgA临床意义 1 低Ig血症 分先天性和获得性 获得性低Ig血症见于大量蛋白质流失的疾病 如肾病综合症 淋巴网状系统肿瘤等 2 高Ig血症 见于感染 自身免疫病 肝脏疾病及M蛋白血症等 慢性活动性肝炎IgG和IgM升高明显 SLE以IgG IgA或IgM升高较多见 类风湿性关节炎则以IgM增高为主 正常参考值 IgG 6 94 16 18g LIgA 0 6 2 63g LIgAIgM 0 68 3 78g L 16 补体 包括C3 C4补体系统是人体抵抗感染甚至肿瘤的多种天然防御机制之一 定量检测各种补体成分有助于诊断免疫功能紊乱临床意义 补体升高 一般见于各种传染病 组织损伤 急性炎症及肿瘤患者 补体降低 多见于自身免疫性疾病 SLE 慢性肝病 肾小球肾炎等 参考值 C30 88 2 01g LC40 16 0 47g L 17 和 轻链 KAP和LAM 用于诊断单克隆 球蛋白病 主要见于多发性骨髓瘤 除IgG IgA升高外 可伴有KAP和LAM的过度分泌 参考值 KAP5 74 12 8g LLAM2 69 6 38g L 18 二 急性时相蛋白 APR 急性时相蛋白是指一组蛋白 它们的浓度在由外科手术 高温 肿瘤 感染或其它原因引起的炎症过程中明显升高 19 C反应蛋白 CRP C反应蛋白 CRP CRP是最敏感的急性时相蛋白之一 在炎症及组织损伤发生6小时内 即升高 恢复时CRP下降 CRP是非特异性指标 主要用于结合临床病史监测疾病 如评估炎症性疾病的活动度 监测系统性红斑狼疮 白血病和外科手术后并发的感染 监测肾移植后的排斥反应 还可用于细菌性感染与病毒性感染的鉴别诊断等 参考值 CRP0 08 0 8mg d 20 结合珠蛋白 HP Hp是由肝脏合成的 其主要功能是能与红细胞中释放出的游离血红蛋白结合 每分子Hp可结合两分子Hp不能被重新被利用 溶血后其含量急剧降低 血浆Hp浓度多在一周内由再生而恢复 临床意义 对溶血的诊断 血管内溶血时 由于HP与血红蛋白结合 其含量明显下降 是反映肝功状态的敏感指标 是一种急性时相蛋白 炎症时增高 参考值 0 5 2 2g L 21 铜兰蛋白 CER 是一种含铜的 2球蛋白 95 的血清铜存在于CER中 抑制炎症时脂氧及自由基形成协助诊断Wilson病 常染色体隐性遗传病 血浆Cp减少 血浆游离铜增加 铜沉积在肝可引起肝硬化 沉积在脑基底节的豆状核则导致豆状核变性 肝豆状核变性 感染 创伤和肿瘤时血浆浓度增加 但在营养不良 严重肝病及肾病综合征时下降参考值 21 53mg dl 22 1 酸性糖蛋白 AAG 在肝脏合成 也由白细胞合成 AAG主要作为急性时相反应的指标 在风湿病 恶性肿瘤及心肌梗死等炎症或组织坏死时一般增加3 4倍随糖皮质激素而增加 包括内源性的库欣综合征和外源性强的松 地塞米松等药物治疗时 在营养不良 严重肝损害 肾病综合征以及胃肠道疾病致蛋白严重丢失等情况下AAG降低 23 1 抗胰蛋白酶 AAT AAT为白血球吞噬异物时所释放的一种可中和溶酶体弹性蛋白酶的蛋白 是血清中主要的蛋白酶抑制剂 占血清中抑制胰蛋白酶活力的91 临床意义 炎症 组织损伤时AAT增高 慢性阻塞性肺气肿及严重肝病时AAT降低 参考值 0 83 1 99g L 24 前白蛋白 PAB PAB由肝脏合成的糖蛋白 由于PAB在电泳时迁移于白蛋白之前 故称之为前白蛋白 PAB的半衰期很短 只有1天左右 临床意义 1 肝病的诊断 PAB在肝脏合成 半衰期很短 因此可作为早期肝功能损伤的特异性指标 2 可用于营养不良的诊断和监测 3 急性时相反应诊断 是一种负急性时相蛋白 炎症等急性时相反应时PAB可迅速降低 如果PAB持续保持低水平或进一步降低 提示预后不良 参考值 250 400mg L 25 转铁蛋白 TRF 由肝脏合成 半衰期8天 主要生理功能为 负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁 以TRF Fe3 的复合物形式进入骨髓 用于Hb合成 小部分则运输到各组织细胞 用于形成铁蛋白 以及合成肌红蛋白 细胞色素等 参考值 2 12 3 6g L 26 转铁蛋白 TRF 的临床意义 1 用于贫血的鉴别诊断 在缺铁性贫血中 TRF代偿性合成增加再生障碍性贫血时 血浆中TRF正常或低下2 负性急性时相反应蛋白 炎症 恶性病变下降 2 营养状态指标 在营养不良及慢性肝脏疾病时下降 27 急性时相反应蛋白升高的速度不同 CRP和 1 抗糜蛋白酶首先升高在12小时内AAG也升高 然后AAT Hp C4和纤维蛋白原升高最后是C3和CER升高 这些APR通常在2 5天内达到最高值 联合检测APR有助于对炎症进程的监测和对治疗反应的判断 28 三 其他