尿中亚硫基二乙酸测定的气相色谱质谱法.docx

474生堡董塑里生墼些痘苤查!q!至!旦笙!鲞筮鱼塑业!鲤旦埋q!些p垡!塑!：!型!：!监测与检验技术尿中亚硫基二乙酸测定的气相色谱一质谱法肖庆锋付志华孟成名 轩月兰秦文华【摘要】 目的建立氯乙烯(vcm)生物标志物亚硫基二乙酸(tdga)的气质联用仪(gcms)快速 检测方法。方法以温和新型甲酯化反应替代剧毒重氮甲酯化反应，并建立高灵敏度检测方法。结果 该方法标准曲线回归线性方程：y=8 4605石一47582，线性系数为0999 7，最低定量浓度20斗g，l，精密度 为081238，平均加标回收率为9901029。结论该方法降低了传统甲酯化反应的风险，较 气相色谱一火焰光度检测器(gcfpd)法提高了检测灵敏度，满足亚硫基二乙酸的检测要求。【关键词】氯乙烯；生物标志物；亚硫基二乙酸；色谱法，气相一质谱deteriiiination of thiodiglycolic acid in urine、vith g嬲chromatography-ma鼯spectrometer xi qin驴几94，凡劢抗u，胁增饥e，缈i晦x螂t l，妣z勰，q讥彤肌“o 4帆帆凰舭把矿0cc叩越i帆 胁d泌i，m，z危e懈ou 45dd52。cin口co，spondi，lg cho rqin形enun(em反f：g训6668j卯co，n)【abstract】 objective to establish a rapid deternlination meihod wiih gas chromatogmphymass spectmmeter(gcms)for thiodiglycolic acid(tdga)，a vinyl chloride(vcm)biomarkermethods a high sensjtivitv dete册inafjon method was establjshed using a moderate methyl esteficatjon jnsead of mefhylesteri6cation of highlv toxic diazo reactionreslllts the standard cune regression 1inear equation of the method was：y=84605戈一47582，the linear coemcient was 0999 7，the minimum quantity concentration was 20l， the range of precision value was 08 1238，and the average icovery of standard addition was 990 1029 concli坞ion this method reduces the risk of tmditional methvl esteri6cation， improves the detemlination sensitivitv comdared with the gcfpd method，and meets the deternlination requirement of tdga【key words】 vinyl chloride；biomarke r；thiodiglycolic acid；gas chromatography；mass spectmmeter氯乙烯(vcm)在常温下为无色挥发性气体，是一种重要 一、材料与方法 的化工原料，主要用于聚氯乙烯(pvc)生产。vcm可以对 1仪器：clams 500型气相色谱一质谱联用仪(美国perkin 心、肺、脑、血液等多个器官系统产生毒性，其主要靶器官是 elmer)。气相色谱仪带有自动进样器(50l微量进样针，进 肝脏。1982年国际癌症研究所(iarc)将vcm列为人类肯定 样体积1o斗1)，pssi进样口；质谱仪配备ei电离源。re一 的致癌物，属a组。相应卫生标准也大幅度降低，时间加权平52aa型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。载气为高纯氦 均容许浓度(pc一7rwa)为10 mm，但体内生物标志物尚无气(he99999)，购自北京普莱克斯实用气体有限公司。 限值。目前认为vcm在体内的代谢转化与其浓度有关，浓度2试剂：tdga购自百灵威化学试剂公司，纯度9826；较低时(259 mg，m3)，主要通过肝乙醇脱氢酶(adh2)代谢 tbde购自氟化学试剂公司，纯度99；甲醇、乙醚均采用色转化，最终以羟乙基半胱氨酸、氯乙酸、亚硫基二乙酸谱纯试剂(均购自美国天地公司)，按2：1比例制成甲醇一乙 (tdga)等形式排出体外；浓度较高时，主要经肝微粒体细醚混合液。质量分数为37(约12 moll)浓盐酸(分析纯，洛胞色素p450酶氧化形成vcm环氧化物(ce0)，一部分ceo 阳市化学试剂)，稀释成6 mo儿盐酸溶液。又在谷胱甘肽转移酶(gst)作用下失活，以羟乙基半胱氨酸、 3气相色谱一质谱条件：将elite_5ms毛细管柱(30 m 氯乙酸、亚硫基二乙酸等形式经肾脏排出体外 。我们参考文 025 mm025“m)装入气相色谱仪，进样口温度220；柱温 献【2l和国外学者建立的尿中tdca的气相色谱检测方法【3l将 160，保持35 min；载气流量10 mlmin，分流比10：l。质谱 尿中tdga作为接触vcm的生物标志物，将其甲酯化，衍生 仪模式为电子轰击质谱(ei+)；溶剂延迟时间30 min；扫描时 化为亚硫基二乙酸二甲酯(tbde)，利用气相色谱一质谱联用 间02 s，扫描间隔01 s；电子能量70 ev；离子源温度260， (gcmc)法进行定性、定量检测。 传输线温度180；扫描范围10500 amu；倍增电压386 v。4实验方法：(1)配制标准溶液：配制溶剂为乙醚的100doi：103760，cmajissn100l-9391201506024基金项目：国家重点临床专科建设科研项目(财社【201l】170)斗ml tdga标准应用液，取10 m1人尿于蒸发皿内，加入01作者单位：450052郑州，河南省职业病防治研究院(肖庆锋、孟m1盐酸溶液酸化处理。分别加入00、02、06、10斗l tdga成名、轩月兰、秦文华)；郑州大学化学与分子工程学院(付志华) 标准应用液，置于电炉上加热使标准尿液蒸至湿结晶状态，通信作者：秦文华，e-mail：qwh6668163_com万方数据475用混合液洗脱至比色管中，并用乙醚定容至1o ml，配制浓度 中、低3个浓度精密度分散程度较好，相对标准偏差(rjsd) 为oo、20、60、100g，rnl的标准溶液系列。(2)甲酯衍生化：为081238，均10。 由于tdga为酸性白色晶体粉末，不适宜直接进气相色谱仪检测，而将其衍生化得到甲酯化产物，降低沸点，便于气化利 于色谱检测，根据文献知产率为89嘲。(3)反应条件：取50 rnl圆底烧瓶，将标准溶液分别溶于25 illl无水甲醇内，浓h2s0。(05 lill)滴入反应体系，反应物回流24 h。蒸去多余甲越醇，剩余物用乙酸乙酯溶解；用饱和nahc0，洗涤水层至中魑性；有机层用无水na：s04除水，过滤，旋干，得亮黄色液体。 二、结果 1定性分析：标准溶液经气相色谱仪分离后进人质谱仪，得总离子流图(图1)，衍生物的保留时间为309 min，主要定性离子片段峰的质荷比(r毗值)为45、91、119、146、178。时问(min)与标准图库(nis2000)比对，该物质为tdga甲酯化产物a：o0斗g，l；b：20斗g，l；c：6o斗g几；d：lo0斗g，ijtbde，匹配度结果为987。同时与图2中tbde标准品特图3标准溶液总离子流图叠加图征离子片段峰图谱比较确定为该化合物。4准确度试验及加标回收率：将几份vcm职业接触者 的新鲜尿液混匀制成混合样品。分成4组样品，其中1组为 空白组，其余3组每组6个样品，分别加入浓度为100、60、 20斗giill的标准溶液，混合均匀后将18个样品衍生化，各测 定3次，结果平均加标回收率为9901029。5稳定性试验：配制60斗咖l溶液并分成4组，每组6个样品，4冰箱冷藏室存放，分别在第1、3、7、14天甲酯衍 生化后测定，每次取12管。从表l稳定性试验数据结果发现302 307 312 317 322 327 332 337 342 347 352溶液含量在第1、3、7天几乎无变化，下降率10；第14天时间(min)样品浓度下降率为1557，超出范围，因此，在冰箱冷藏室图1 tbde总离子流图谱(4)条件下可存放保存7 d。表l稳定性试验数据三、小结 本实验通过对尿中tdga进行甲酯化衍生反应生成产物rrbde，以温和新型甲酯化反应替代剧毒重氮甲酯化反应，图2 tbde标准品特征离子片段峰图谱重氮甲烷甲酯化反应近乎完全反应，虽然新型甲酯化89的产率稍低，但是降低了实验操作人员职业危害。 2标准曲线线性系数及最低定量浓度：按检测分析条质谱数据定性分析甲酯化衍生物，匹配度为987，并件，分别将各标准溶液衍生物系列平行测定3次，得每个浓与标准品比较，确定为tbde。对质谱数据定量分析得标准曲度的总离子流图，叠加后如图3所示。绘制的标准曲线，回归线，线性系数为0999 7，最低定量浓度为20斗g几，相对原卫 线性方程为，=84605戈一47582，线性系数0999 7，最低定量生行业标准(025 m异刖q)提高了125倍。浓度为20斗gl，用3倍噪声值代入回归线性方程计算检出限为04lg，l。参考文献3精密度试验：制备高、中、低浓度(100、60、20斗1111)1王爱红接触氯乙烯的生物标志物，国外医学卫生学分册，的tdga标准应用液，密闭放置过夜。将3个浓度应用液甲20032：8791酯衍生化24h后测定，3 d内进行6次重复测定。结果高、【2】ws厂r 63一1996尿中亚硫基二乙酸的气相色谱法【s】万方数据476史堡董垫里生墼些塑苤查；q!至!旦筮!鲞箜!塑垦!鱼!鲤旦理q!业望!竺!q!：!堕!：!31 omzhurbaan alekseenkogaschromatographic determination of dialkoxy一21一monothiaporphyrinsjtetrahedron，2004，60(47)thiodiglycolic acid in urine using derivatization and liquid1067l一10680microextractionfj】j anal chem，2013，68(9)：809814【4】ws厂r 348201 1尿液标本的收集及处理指南s (收稿日期：20141024)f51 agarwal n，hung ch，ravikanth m，et a1synthesis and crystal (本文编辑：杨德一)stmctures of 2，31213-tetraalkoxy2123一dithiaporphyrins and 2,3工作场所空气中三种有机氟化物的便携式气一质联用同时检测法张锋夏超一朱宝立【摘要】目的建立便携式气一质联用法快速测定某氟化工企业工作场所空气中有机氟类物质。 方法采用静态配气法，以高纯氮气为稀释气配制不同质量浓度的二氟一氯甲烷、四氟乙烯、六氟丙烯 标准气体，采用便携式气一质联用仪手持探头直接采样检测，以保留时间和特征离子定性，选择离子峰面 积定量，建立标准曲线，对3种有机氟化物进行定量分析。结果该方法对二氟一氯甲烷、四氟乙烯、 六氟丙烯的线性范围分别为039772、045884、0611220mgm3，低、中、高3种浓度的平均回收率分别为1028、960、1065，平均精密度为21、51、24。结论便携式气一质联用法可用于同时定性、定量分析工作场所空气中二氟一氯甲烷、四氟乙烯、六氟丙烯，方法简单，快速，准确度高。【关键词】工作场所；便携式；气一质联用；有机氟化物simultaneous determination of three organic fluorides in workplace air by portable gas chromatography-mass spectrometer zhang feng,xia chaoyi，zhu baoli 五o,ugsu provincial cente咖r disease prevention and control,nanjing 210009，chinacorrespondingauthor：zhu baoli(e-mail：zhubljscdccn)【abstract】0bjective to establish a method for rapid determination of organic fuorides in the air of a fluorine chemical plant using portable gas chromatographymass spectrometer(gc-ms)methods standard samples of monochlorodifluoromethanetetrafuoroethyleneand hexafluoropropylene of difierent concentrationswere prepared by static volumetric method with high-purity nitrogen as the diluent gas，nle samples were injected into the gcms by a handheld proberetention time and characteristic ion were used for qualitative analysisand the area of selected ion peak was used for quantitative analysisthe standard curves were then created for quantitative determination of the three organic fluoridesresults the linear ranges formonochlorodifluoromethanetetrafluoroethyleneand hexafluoropropylene by the method were 039772045 884and 0611220 mgm3respectively。the average recovery rates for the three concentrations were 1028 960，and 1065，respectively，and the average deviations were 21，51，and 24，respectively conclusion the portable gcms can be used for the simultaneous qualitative and quantitative analysis of monochlorodifluoromethane，tetrafluoroethylene，and hexafluoropropylene in the