鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验

Ames试验 Ames试验 即污染物致突变性检测 也称为鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验污染物对人体的潜在危害 引起人们的普遍关注 世界上已发展了百余种短期快速测试法 检测污染物的遗传毒性效应 B N Ames等经十余年努力 于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验 亦称Ames试验 已被世界各国广为采用 原理 检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株 his 回复突变成野生型 his 的能力 即组氨酸突变菌 his 在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长 回复突变成野生型 his 可在不含组氨酸的最低营养平皿上生长 是应用最广泛的检测基因突变的体外试验 Ames试验 标准试验菌株 配套菌株 有四种TA98 TA97 检测移码突变TA100 检测碱基置换突变TA102 对醛 过氧化物及DNA交联剂较敏感这四个试验菌株除了含有his 突变 还有一些附加突变 以提高敏感性 Ames试验 不加S9混合液得到阳性结果 说明受试物是直接致突变物 加S9混合液才得到阳性结果 说明该受试物是间接致突变物 Ames试验 Ames试验 常规方法 斑点试验 平板掺入试验 Ames试验 斑点试验 1 吸取测试菌增菌培养后的菌液0 1ml 注入融化并保温45 左右的上层软琼脂中 需S9活化的再加0 3ml 0 4mlS9混合液 立即混匀 倾于底平板上 铺平冷凝 2 用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘 纸片浸湿受试物溶液 或直接取固态受试物 贴放于上层培养基的表面 同时做溶剂对照和阳性对照 分别贴放于平板上相应位置 3 平皿倒置于37 温箱培养48h 在纸片外围长出密集菌落圈 为阳性 菌落散布 密度与自发回变相似 为阴性 Ames试验 平板掺入试验 1 将一定量样液和0 1ml测试菌液均加入上层软琼脂中 需代谢活化的再加0 3ml 0 4mlS9混合液 混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝 2 同时做阴性和阳性对照 每种处理做3个平行 试样通常设4个 5个剂量 选择剂量范围开始应大些 有阳性或可疑阳性结果时 再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系 培养同上 3 同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比 为致变比 MR MR值 2 且有剂量 反应关系 背景正常 则判为致突变阳性 鼠伤寒沙门氏菌野生型 his 鼠伤寒沙门氏菌突变型 his 受试物试验菌种 his S9 试验菌种 his S9 Ames试验原理 结果判断 只要在一种试验菌株得到阳性结果 即认为受试物是致突变物 仅当四种试验菌株均得到阴性结果 才认为受试物是非致突变物 Ames试验 Ames试验 应用1 斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质 大多数多环芳烃和难溶于水的化学物质均不适宜用此法 此法敏感性较差 主要是一种定性试验 适用于快速筛选大量受试化合物 2 平板掺入试验可定量测试样品致突变性的强弱 此法较斑点试验敏感 获阳性结果所需的剂量较低 点试获阳性结果的浓度用于掺入试验 每皿0 1ml 往往出现抑 杀 菌作用 3 致变作用迟缓或有抑菌作用的试样 培养时间延长至72h Ames试验 应用4 挥发性的液体和气体试样 可用干燥器内试验法进行测试 5 目前 Ames试验作为检测环境诱变剂的一组试验中的首选试验 广泛应用于致突变化学物的