（中西医结合临床专业论文）jakstat信号转导通路在肝纤维化发病机制中作用的实验研究.pdf

目录 | | i i | m i ! ! l l l l l ! 洲：1 1 1 1 川i 1 i y 19 0 0 9 4 6 中文摘要1 英文摘要8 研究论文j a 刚s 仉盯信号转导通路在肝纤维化发病机制中作用的 实验研究 引言1 7 第一部分j 削刚s t a t 信号转导通路在自发逆转肝纤维化模型中的 动态变化 前言“一”“一“l8刖吾”“一”“”一”“”“一”“l 苓 材料与方法1 9 结果“一一”“一”“一“2 4 附图2 7 附表4 3 讨 仑4 5 小结“一一“4 8 参考文献4 8 第二部分扶正化瘀方对肝纤维化大鼠j a 刚s 吖汀信号转导通路的作用 前言“一一”“5 1刚舌”一”一”一一”一”“”“一”“一”“一”一”“) l 材料与方法5 2 结果”一”5 3 附图5 6 附表7 1 讨 仑一“一“”“一”一“7 3 小结一”一“”“”一”一一“一“一“”7 5 参考文献7 6 结 念“一“一”一”一”一”一7 8 综述一7 9 致谢一一”9 1 个人简历9 2 中文摘要 j a l ( s t a t 信号转导通路在肝纤维化发病机制 中作用的实验研究 摘要 肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质( 特别是胶原) 过度沉积它不 是一个独立的疾病，而是许多慢性肝病共同的病理过程，包括酒精性、病毒 性、遗传代谢性、自身免疫性等都能导致肝组织纤维化的形成。目前，大 多数抗肝纤维化药物临床效果不显著，或者药物毒性太大，实际应用受到 限制。j a 科s n 盯信号转导通路是细胞因子信号转导通路之一，参与细胞 的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等很多重要的生物学过程。有研究证实 j a u s t a t 信号转导通路与肝纤维化有极其密切的联系，但具体的分子机 制尚不清楚。因此，本实验研究探讨j 劁刚s t a t 信号转导通路在肝纤维发 病机制中的作用及中成药扶正化瘀方对j a 刚s n 盯信号转导通路在肝纤维 发生的影响。实验分为两部分，第一部分采用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化 模型，探讨肝纤维化造模过程及自发逆转过程中j a 刚s w 汀信号转导通路 的动态变化，以此阐明j a 列s 仉诃信号转导通路在肝纤维化过程中的发病 机制。第二部分采用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，给予扶正化瘀干预， 阐明扶正化瘀对纤维化j a 列s 仉姐信号转导通路的影响，为中药扶正化瘀 的继续研发提供实验依据，为临床抗肝纤维化的治疗寻求更广的途径。 第一部分j a l s t a t 信号转导通路在自发逆转肝纤维化模型的动态变化 目的：肝纤维化( h e p a t i c 助r o s i s ) 是指在不同病因的作用下，造成 肝细胞慢性损伤及某些非实质细胞激活，引起纤维增生和纤维分解的不平 衡，造成纤维结缔组织的过度沉积从而形成肝纤维化，其发展的后果是形 成不可逆转的肝硬化阶段。大量实验研究，肝星状细胞( h e p a t i cs t e l l a t e c e l l ，h s c ) 证实为致肝纤维化的主要细胞，也是各种诱导肝纤维化因素发 生的共同中心环节，h s c 大量合成e c m ，其也为e c m 的主要来源。因 此，h s c 激活与肝纤维化的发生、发展有着极其密切的联系，活化h s c 已被看作抗肝纤维化治疗的主要靶点。目前，有研究表明j a 刚s 吖汀信号 转导通路在肝纤维化过程密切相关，但其作用的分子机制尚不清楚。因此， 我们建立c c l 4 诱导大鼠肝纤维化模型，探讨j a 刚s t a t 信号转导通路在 中文摘要 肝纤维化形成过程及自发逆转过程中j a k l 及s t a t 3 的动态变化，阐明 j 剐“s 豇汀信号转导通路在肝纤维化形成过程及白发逆转中的分子机制， 为抗肝纤维化药物的研发提供理论基础。 方法：选取8 周龄的健康雄性w i s t a r 大鼠6 6 只，体重1 8 0 2 0 0 9 ， 购于河北医科大学实验动物中心。经过适应性喂养一周后，随机分两组： 对照组1 8 只、肝纤维化自发逆转模型组( 简称模型组) 4 8 只。对照组予 生理盐水腹腔注射( o 2 m l 1 0 0 9 ) ，每周2 次，共8 周；模型组予3 0 c c l 4 橄榄油腹腔注射( o 2 m l 1 0 0 9 ) ，每周2 次；至第8 周肝纤维化模型形成， c c l 4 停止给药。开始造模后的第4 、6 、8 、1 0 、1 2 周分别处死8 只大鼠， 对照组于第4 、6 、8 、l o 、1 2 周末随机取处死大鼠3 只，于第1 4 周处死 对照及模型组剩余全部大鼠。留取大鼠血清检测肝功能a l t 、a s t ；留取 部分肝组织置于冻存管放于8 0 冰箱冻存用于检测羟脯氨酸及提取肝组 织总r n a ，逆转录聚合酶链反应法( i m p c r ) 检测大鼠肝组织j a k l 、 s t a t 3 倒 a 表达；留取部分肝组织置于1 0 的中性福尔马林固定，石蜡 包埋，苏木精一伊红( h e ) 染色及m a s s o n 染色观察肝组织病理学改变； 应用免疫组织化学染色法观察肝组织j a k l 、s t a t 3 蛋白的表达； 结果： l 实验大鼠的健康状况：对照组大鼠的活动能力强，食欲旺盛，毛发光泽 且整齐，精神营养状况好，每周体重的增加正常。模型组造模阶段大鼠随 着腹腔注入c c l 4 时间的延长，食欲开始下降，且精神萎靡，营养状况差， 毛发失去色泽，体重增长缓慢，个别易激惹。8 周后停用c c l 4 进入模型 组自发逆转阶段后，大鼠食欲有所增加，精神、营养状态较前好转，体重 有所增加。 2 实验大鼠血清a l t 、a s t 水平检测：模型组大鼠血清第4 、6 、8 、1 0 、 1 2 、1 4 周末血清a l t 水平分别为：7 2 3 8 士4 2 5u l 、1 4 3 6 7 土8 9 7 u l 、 2 6 4 6 l 士1 4 6 3 u l 、1 8 2 4 1 士l o 5 7 u l 、l1 2 6 4 士1 4 。1 5 u l 、5 0 2 7 士2 0 5 u l ， 均高于对照组( 1 6 6 9 士2 0 4 u l ) ，且各时间点之间均有明显差异( 氏o 0 5 ) ； a s t 分别为：1 8 2 3 5 土4 1 2 u l 、3 2 3 5 3 土l1 5 0 u y l 、5 0 1 0 4 士2 4 1 5 u l 、 4 0 1 2 2 土2 1 3 5 u l 、1 4 0 2 0 士1 0 3 3 u l 、9 4 o o 士1 1 2 1u l ，均高于对照组 ( 1 7 2 1 士2 3 4 u l ) ，模型组逆转期大鼠血清a l t 、a s t 水平明显低于造模 期。( t a b l e l ) 中文摘要 3 实验大鼠肝组织中羟脯氨酸( h y p ) 水平测定：模型组大鼠肝组织第4 、 6 、8 、1 0 、1 2 、1 4 周末h y p 水平依次为：1 9 5 9 7 士1 7 9 0 、3 4 6 3 5 士1 5 2 5 、 4 7 8 8 0 士8 1 6 、4 1 4 6 2 士1 0 0 4 、3 6 1 4 2 士1 4 0 6 、2 9 6 5 8 士1 6 5 l ，均高于对照组 ( 1 0 4 5 7 士1 4 7 2 ) ，模型组逆转期大鼠肝组织羟脯氨酸( h y p ) 水平明显低 于造模期。( t a b l e 2 ) 4 实验大鼠肝脏病理学变化：肉眼观察对照组大鼠肝组织呈红褐色，质地 柔软，有光泽，边缘光滑。模型组中肝组织与周围组织粘连，呈暗红色， 体积较正常肝组织小，边缘变钝，表面有质粒感。 5 实验大鼠肝组织j a k l 与s 吼盯3 蛋白表达情况：j a k l 免疫组化染色阳 性细胞为胞浆内表达棕黄色颗粒；s 玑盯3 免疫组化染色阳性细胞为胞核内 表达棕黄色颗粒。对照组肝组织中仅有少量阳性细胞分布。模型组随着造 模时间的延长，肝组织中j a k l 和s t a t 3 阳性表达细胞逐渐增多；8 周末 停用四氯化碳后，随着肝细胞的自我修复，肝细胞炎性及纤维化程度降低， j a k l 和s t a t 3 阳性表达细胞逐渐减少。模型组第4 、6 、8 、1 0 、1 2 、1 4 周末j a k l 、s 卫盯3 阳性光密度值分别为( o 5 5 士o 0 2 、1 2 3 士o 1 5 、2 7 3 士o 1 7 、 2 1 2 士o 11 、1 6 9 土o 18 、1 2 0 士o 1 2 ) 、( o 8 2 士o 0 3 、1 5 3 士o 11 、2 8 9 土o 13 、 2 2 0 士o 1 4 、1 7 3 土o 1 3 、1 2 4 土o 0 3 ) 均显著高于对照组( o 2 1 士o 0 4 ) 、 ( o 2 4 士o 0 6 ) ，尸 o 0 5 ；模型组逆转期大鼠肝组织j a k l 与s 仉盯3 蛋白 表达明显低于造模期。 6 实验大鼠肝组织j a k l 与s t a t 3m i 矾a 表达情况：模型组第4 、6 、8 、 1 0 、1 2 、1 4 周末肝组织中j a k l 和s 仉盯3r n j 心a 表达量分别为( o 7 6 士o 0 4 、 1 5 4 士o 0 6 、2 4 8 士o 0 3 、1 9 9 土o 1 0 、1 5 1 士o 1 1 、1 1 2 士o 1 0 ) 、( o 8 1 士o 0 9 、 1 6 5 士o 0 7 、2 6 6 士o 1 0 、2 0 2 土o 0 4 、1 6 1 土o 1 1 、1 2 0 士o 0 7 ) 均显著高于对 照组( 0 5 2 士o 0 3 ) 、( o 5 6 士o 0 2 ) ，尸 o 0 5 ；模型组逆转期大鼠肝组织 j a k l 与s n 盯3 m r n a 表达明显低于造模期。 7 实验大鼠肝组织j a k l 、s w 盯3i n 】 a 表达与肝组织h y p 水平相关关 系：实验大鼠肝组织j a k l m r n a 表达与肝组织h y p 水平、s 仉盯3m r n a 表达与肝组织h y p 水平之间的关系符合直线回归关系r = o 9 8 6 ，f o 9 9 4 ， p o 0 5 。( f i 9 3 0 、f i 9 3 1 ) 结论： 1 大鼠经四氯化碳腹腔注射8 周可诱导具有典型肝纤维化特征的动物模 中文摘要 型，消除四氯化碳致纤维化因素后，可以部分逆转动物模型肝组织的纤维 化。 2j a u s t a t 信号转导通路在肝纤维化动态进展过程中j a k l 和s t a t 3 蛋白 及训a 表达增多，j a k l 和s w 盯3 训 a 表达水平与h y p 水平存在相关关 系，参与肝纤维化形成过程。 3j a 刚s t a t 信号转导通路在自发逆转肝纤维过程中j a k l 和s 玑盯3 蛋白及 m r n a 表达明显下降，参与大鼠肝纤维化自发逆转过程，提示j a 刈s t a t 信号转导通路在肝纤维发病机制中具有重要作用。 第二部分扶正化瘀方对肝纤维化大鼠j a l s t a t 信号转导通路的作用 目的：各种因素造成肝细胞的炎症及慢性损伤，导致肝星状细胞 ( h 印a t i cs t e l l a t ec e l l ，h s c ) 激活，引起e c m 的大量合成，造成纤维结缔 组织的过度沉积从而形成肝纤维化。因此，h s c 是合成e c m 的主要来源， 也是不同致病因素导致肝纤维化发生的共同中心环节，活化h s c 己被看 作抗肝纤维化治疗的主要靶点。目前，h s c 激活的信号转导通路研究较多 的有n f 1 ( b 通路、t g f p s m a d 通路、m a p k 通路，而j a 刚s t a t 信号转导 通路被许多研究证实在h s c 激活、肝纤维形成过程中具有重要作用。近来， 中药在抗肝纤维化方面作用显著，日益受到人们的重视，中药具有多靶点、 多途径的综合药理作用。扶正化瘀方是由丹参、虫草菌丝、桃仁、五味子 等6 味中药所组成和提取的临床抗肝纤维化治疗药物，它的中医理论基于 “气阴两虚、血瘀阻络 的肝纤维化中医病机。本研究探讨扶正化瘀方对大 鼠肝纤维j a 列s t a t 信号转导通路的作用效果及机制，为抗肝纤维化的药 物提供新的理论依据及阐明机制。 方法：选取8 周龄的健康雄性w i s t a r 大鼠5 7 只，体重1 8 0 2 0 0 9 ，购于 河北医科大学实验动物中心。经过适应性喂养一周后，随机分三组：对照 组9 只、模型组2 4 只、扶正化瘀胶囊干预组2 4 只。对照组给予生理盐水腹 腔注射( o 2 m 1 1o o g ) ，每周2 次，共8 周；模型组给予3 0 c c l 4 橄榄油腹 腔注射( o 2 m 1 1 0 0 9 ) ，每周2 次，共8 周；扶正化瘀胶囊干预组从造模开始 起按o 2 m l l o o g 体重( 含扶正化瘀胶囊生药o 0 4 6 m 1 ) 给予扶正化瘀胶囊 药液灌胃，每日1 次，共8 周。对照组于第4 、6 、8 周末随机取处死大鼠3 只，其余两组第4 、6 、8 周末随机取处死大鼠8 只。留取实验大鼠血清检测 a l t 、a s t ：留取部分肝组织置于冻存管放于8 0 冰箱冻存用于检测羟脯 中文摘要 氨酸及提取肝组织总r n a ，逆转录聚合酶链反应法( i m p c r ) 检测大鼠 肝组织j a k l 、s 仉盯3 m r n a 表达；留取部分肝组织置于l o 的中性福尔马 林固定，石蜡包埋，苏木精一伊红( h e ) 染色及m a s s o n 染色观察肝组织 病理学改变；应用免疫组织化学染色法观察肝组织j a k l 、s 吼订3 蛋白的 表达。 结果： 1 实验大鼠一般情况：对照组大鼠精神、食欲良好，毛发整齐而有光泽， 活拨好动，每周体重增加正常。模型组大鼠随着造模时间的延长，精神萎 靡，食欲下降，体重增长缓慢，毛色转黄，失去光泽，个别变得易激惹， 甚至个别出现腹腔积液。扶正化瘀方干预组精神、饮食可，毛色有光泽， 较模型组症状轻。 2 扶正化瘀方对实验大鼠肝血清a l t 、a s t 水平影响：模型组大鼠第4 、 6 、8 周末血清a l t 水平分别为：7 2 3 8 士4 2 5u l 、1 4 3 6 7 士8 9 7 u l 、 2 6 4 6 1 士1 4 6 3 u l ，均高于对照组( 1 7 3 7 士5 0 4u l ) ，且各时间点之间均有 明显差异( 尸 o 0 5 ) ；a s t 分别为：1 8 2 3 5 土4 1 2 u l 、3 2 3 5 3 士l1 5 0 u l 、 5 0 1 0 4 土2 4 1 5 u l ，亦均高于对照组( 1 9 2 0 士4 9 3u l ) ，且各时间点之间亦 均有明显差异( p o 0 5 ) 。扶正化瘀方干预组大鼠第4 、6 、8 周末a l t 分 别为：5 8 0 2 士9 0 2u l 、1 0 4 o o 士1 3 1 2u l 、1 4 7 o o 士1 5 7 3 u l ，均高于对照 组( 1 7 3 7 士5 0 4u l ) ，且各时间点之间均有明显差异( p o 0 5 ) ；a s t 分 别为：1 1 8 o o 士1 3 2 3 u l 、2 2 8 4 9 土1 3 0 1 u l 、3 0 2 1 7 士1 7 1 9u l ，均高于对 照组( 1 9 2 0 士4 9 3u l ) ，且各时间点之间亦均有明显差异( p o 0 5 ) 。相 同时间点，与模型组相比，扶正化瘀方干预组a l t 、a s t 水平均较低 ( p o 0 5 ) 。( t a b l e l ) 3 实验大鼠肝组织中h y p 水平检测：模型组第4 、6 、8 周末肝组织中h y p ( 1 9 5 9 7 士1 7 9 0 、3 4 6 3 5 士1 5 2 5 、4 7 8 8 0 士8 1 6 ) 及扶正化瘀方干预组h y p ( 1 3 2 6 7 士1 1 2 4 、2 4 6 3 6 士1 3 1 6 、4 4 4 6 7 士1 3 2 4 u g ) 均高于对照组 ( 1 1 4 2 6 士18 7 2 u g g ) ，p o 0 5 ；扶正化瘀方干预组h y p 水平明显低于模 型组。( t a b l e 2 ) 4 扶正化瘀方对实验大鼠肝组织病理学影响： 肉眼观察：对照组肝脏颜色鲜红，有光泽，表面光滑，边缘锐利，与 周围组织无粘连，质地软而脆，触之易碎。模型组4 和6 周末体积多无明 中文摘要 显改变，部分稍有增大，呈浅黄色，表面有脂肪组织附着，易剥离，肝脏 边缘变钝，质地较韧，不易碎，切面油腻；8 周末体积多无明显改变，部 分稍有减小，颜色暗红，表面有泥沙样结节，多与大网膜粘连，不易分离， 肝脏边缘明显变钝，触之稍硬，不易碎。扶正化瘀方干预组肝脏外观好于 模型组。 h e 及m a s s o n 胶原染色：对照组肝组织肝小叶结构正常，肝索排列 整齐，无炎性坏死及纤维组织增生( f i 9 1 ，f i 9 8 ) 。模型组4 周时肝小叶结 构紊乱，肝细胞出现水样变及脂肪变，可见炎症细胞浸润及纤维组织轻度 的增生，汇管区扩大；干预组可见肝细胞轻度水样变及脂肪变，汇管区有 少量炎症细胞浸润，轻微的纤维组织增生( f i 9 2 ，f i 9 3 ，f i 9 9 ，f i 9 1 0 ) 。6 周时肝细胞呈弥漫性脂肪变性，伴以单核细胞为主的混合性炎细胞浸润， 部分肝小叶结构被破坏，纤维组织增生；干预组部分肝细胞脂肪变性，伴 点、灶状坏死，纤维组织轻度增生，汇管区可见大量混合性炎细胞浸润 ( f i 9 4 ，f i 9 5 ，f i g l l ，f i 9 1 2 ) 。8 周模型组肝小叶结构大部分破坏，炎细胞 浸润广泛浸润，纤维组织广泛增生，有假小叶形成；干预组部分肝小叶结 构破坏，纤维组织增生，炎性细胞浸润，有假小叶形成，汇管区扩大，可 见小胆管增生及炎细胞渗出( f i 9 6 ，f i 9 7 ，f i 9 1 3 ，f i g l 4 ) 。 5 扶正化瘀方对实验大鼠肝组织j a k l 和s 玑盯3 蛋白表达情况的影响： 对照组肝组织中仅有少量阳性细胞分布。模型组随着造模时间的延长，肝 组织中j a k l 和s l 盯3 阳性表达逐渐增多；干预组j a k l 和s 仉盯3 阳性 表达细胞较对照增加，但明显少于同时间段模型组。第4 、6 、8 周末模型 组j a k l 和s 仉订3 阳性光密度值( o 5 5 土o 0 2 、1 2 3 士o 15 、2 7 3 士o 1 7 ) ( o 8 2 土o 0 3 、1 5 3 士o 1 1 、2 8 9 土o 1 3 ) 及干预组j a k l 和s t a t 3 阳性光密 度值( o 4 8 士o 0 6 、o 8 6 土o 1 6 、1 6 5 士0 1 0 ) ( o 5 7 士o 0 4 、1 1 2 士o 1 2 、1 9 0 士o 0 8 ) 均显著高于对照组( o 2 1 士o 0 4 ) 、( o 2 4 士o 0 6 ) ，p o 0 5 ；扶正化瘀方干预 组肝组织j a k l 和s 仉盯3 蛋白表达明显低于模型组。( f i 9 2 2 f i 9 2 8 ) 6 扶正化瘀方对实验大鼠肝组织j a k l 和s 玑盯3m i a 的动态表达的影 响：模型组第4 、6 、8 周末肝组织j a k l 和s t a t 3 训州a 表达量分别为 ( o 7 6 士o 0 4 、1 5 4 士o 0 6 、2 4 8 士o 0 3 ) 、( o 8 1 士o 0 9 、1 6 5 士o 0 7 、2 6 6 士o 1 0 ) ， 扶正化瘀干预组第4 、6 、8 周末肝组织j a k l 和s t a t 3m r n a 表达量分 别为( o 5 2 士o 0 6 、o 9 6 土o 1 2 、1 5 2 士o 1 4 ) 、( o 6 2 士o 0 2 、1 0 5 士o 1 0 、1 6 4 士o 1 】) 中文摘要 均高于对照组( o 3 3 士o 0 8 ) 、( o 4 2 士o 0 2 ) ，p o 0 5 ；且各组相同时间点之 间均有明显差异( p o 0 5 ) ，扶正化瘀干预组肝组织j a k l 和s t a t 3m r n a 的表达明显低于模型组。( f i 9 2 9 ) 结论： l 扶正化瘀可明显改善肝功能、炎症坏死及肝组织纤维程度，具有预防和 治疗肝纤维化的作用。 2 扶正化瘀可明显抑制肝纤维化通路j a k l s t a t 3 1 1 1 】 a 及蛋白的表达， 降低肝组织的炎症坏死，减轻肝纤维化的程度，阻止肝纤维化的进展，提 示其在治疗肝纤维化中存在广阔的前景。 关键词：肝纤维化；发病机制；自发逆转；j a 刈s 可汀信号转导通路； 扶正化瘀：肝星状细胞 英文摘要 ：e x p e r i m e n t a ls t u d yo fj a u s t a ts i g n a l i n gp a t h w a yi n l i v e r f i b r o s i s a b s t r a c t l i v e rf i b r o s i si st h a t d i f 如s el i v e re x t r a c e l l u l a rm a t r i x ( e s p e c i a l l v c o l l a g e n ) e x c e s s i v e l yd 印o s e i ti sn o ta ni n d e p e n d e n td i s e a s e ，b u ti ti st h e c o m m o np a t h o l o g i c a lp r o c e s so f m a n yc h r o n i cl i v e rd i s e a s e ，i n c l u d i n ga l c o h o l ， v i r a li n f e c t i o n s ，g e n e t i cm e t a b o l i c ，s e l f i m m u n i t y ，a n ds oc a nl e a dt ol i v e r 肋r o s i s c u n e n t l y m o s ta n t i - h 印a t i c 舶r o s i sd r u g sh a dn os i g n i f i c a n tc l i n i c a l e f f e c t ，o rd r u gt o x i c i t yi st o ol a 唱e ，t h ea c t u a l 印p l i c a t i o ni sl i m i t e d j a k s t a rs i g n a l i n gp a t h w a yi so n eo fac e hs i g n a l i n gp a t h w a yf a c t o r ，w h i c h i n v o l v si nc e np r o l i f e r a t i o n ，d i f f e r e n t i a t i o n ，a p o p t o s i sa n di m m u n er e g u l a t i o n ， a n dm a n yo t h e ri m p o r t a n t b i o l o g i c a lp r o c e s s e s r e s e a r c hh a ss h o w nt h a tj a k s t a rs i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a y v e 秽c l o s et i e sw i t hl i v e rf i b r o s i s ，b u tt h e s p e c i f i cm o l e c u l a rm e c h a n i s m sr e m a i ni su n c l e a r t h e r e f o r e ，t h i se x p e r i m e n t a l s t u d yi n v e s t i g a t e dt h er o l eo ft h ej a k s t a ts i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a yi n t h ep a t h o g e n e s i so fh e p a t i cf i b r o s i sa n dt h ee x p r e s s i o no fj a k s t a ts i g n a l t 聊1 s d u c t i o n p a t h w a yi nh 印a t i c舶r o s i sp r o c e s sb yc h i n e s em e d i c i n e 一 1 _ 、 一 一 r u z n e n g n u a y u e ) 叩e n m e n tw a sd l v l d e dm t ot w op a r t s ，mt h ef i r s tp a r tw eu s e l i v e rf i b r o s i sm o d e l ，w i t c hc a r b o nt e t r a c h l o n d ei n d u c e d ，s t u d vj a k s t a t s i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a yd y l l a m i c si nt h ep r o c e s so fl i v e rf i b m s i sm o d e l a n ds p o n t a n e o u sr e v e r s a l ，i no r d e rt oc l a r i 母t h em e c h a n i s m so fj a k s 仉气t s i g n a lt m s d u c t i o np a t h w a yi nt h ep a t h o g e n e s i so fh e p a t i cf i b r o s i s i nt h e s e c o n dp a nw eu s et h em o d e lw i t c hi si n d u c e d1 i v e r f i b r o s i s b vc a r b o n t e t r a c h l o r i d e ，t h e yw e r eg i v e nt h ei n t e e n t i o no ff u z h e n g h u a y ut oc l a r i 矽t h e e 日e t i o nt h a tf u z h e n g h u a y uj a k s t a t s i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a ym a d eo f f i b r o s i s ，p r o v i d ee x p e r i m e n t a l b a s i sf o rt r a d i t i o n a l c h i n e s em e d i c i n e f u z h e n g h u a y u ，w i t c hc a nb ec o n t i n u e dr e s e a r c h e da n ds e e kf o rab r o a d e rw a v f o r t h ed e v e l o p m e n to ft h ec l i n i c a l t r e a t m e n to fl i v e rf i b r o s i s p a r tit h ed y n a m i cc h a n g e so fl i v e rf i b r o s i so fj a k s 1 7 a ts i g n a l 8 英文摘要 t r a n s d u c t i o np a t h w a yi nt h es p o n t a n e o u sr e v e r s a l o b i e c t i v e ：l i v e rf i b r o s i sr e f e r st ot h er o l eo fd i f f e r e n tc a u s e s ，t h ec a u s eo f c h r o n i cl i v e rc e l li n j u 拶a n da c t i v a t i o no fc e r t a i nn o n - p a r e n c h y m a lc e l l s ，s u c h a st h ef i b e rf a c t o ri n d u c e db yc y t o l ( i n e sa n da c t i v a t i o n ，c a u s i n gd e c o n l p o s i t i o n o ff i b e ra n df i b e rp r o l i f e r a t i o ni m b a l a n c e ，r e s u l t i n gi nf i b r o u sd 印o s i t i o nt o f o r me x c e s s i v et i s s u ef i b r o s i s ，t h ec o n s e q u e n c e so fi t sd e v e l o p m e n ti st h e f o m a t i o no fi r r e v e r s i b l el i v e rc i r f h o s i ss t a g e l a 唱en u m b e ro fe x p e r i m e n t a l s m d i e sc o n f i m l e dt h a th e p a t i cs t e l l a t ec e l l s ( t h eh 印a t i cs t e l l a t ec e l l ) i st h e m a i o rc a u s eo fl i v e rf ：i b r o s i sc e l l s ，t h ea c t i v a t i o ni st h ec e l l u l a rb a s i so fh 印a t i c f i b r o s i sa n dt h el e a d i n gc a u s eo fl i v e rf i b r o s i si nd i a e r e n tc o m m o nc e n t r a ll i i l l ( a n dt h em a i ns o u r c eo fe c ms y n t h e s i s t h e r e f o r e ，h s ca c t i v a t i o n ，h a s e x t r e m e l yc l o s et i e sw i t ht h ed e v e l o p m e n to fl i v e rf i b r o s i s ，每c t i v a t i o no fh s c h a sb e e nt h et r e a t m e n to fl i v e rf i b r o s i s2 u st h em a i nt a 玛e t c u 盯e n t l y ，s t u d i e s h a v es h o w nt h a tj a k s n 气ts i g n a l i n gp a t h w a yi sc l o s e l yr e l a t e dw i t hl i v e r f i b r o s i s ，b u t i t sm 0 1 e c u l a rm e c h a n i s m sr e m a i nu n c l e a r t h e r e f o r e ，w eh a v e e s t a b l i s h e dt h em o d e lo fh 印a t i cf i b r o s i si n d u c e db yc c l 4 r e v e r s a lt h e d y l l 锄i cc h a n g e so f j a k la n ds t a t 3i nt h ej a k s t a ts i g n a l i n gp a t h w a y c l 撕矽 t h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo ft h ej a k s t a ts i g l l a lt r a n s d u c t i o np a t h w a yi n h 印a t i c 肋r o s i sa n ds p o n t a n e o u sr e v e r s a la n dp r o v i d eat h e o r e t i c a lb a s i sf o r t h ed e v e l o p m e n to fa n t i f i b r o t i cd m g s m e t h o d s ：w 色s e l e c t e dh e a l t h ym a l ew i s t a r6 4r a t so ft h ea g eo f8w e e k s ， w e i g h i n gl8 0 一2 0 0 9 ，t h e y w e r ep u r c h a s e d 舶m e x p e r i m e n t a la n i m a lc e n t e r o fh e b e im e d i c a lu n i v e r s i 妙a r e raw e e ko ft h ef e e d i n ga ( 1 a p t a t i o nt h yw e r e r a n d o m l yd i v i d e di n t ot w og r o u p s ：1 8i nc o n t i o lg r o u p ，4 8i nt h es p o n t a n e o u s r e v e r s a lo fl i v e rf i b r o s i sm o d e lg r o u p ( m o d e lg r o u p ) c o n t r 0 1 黟o u p ：r a t sw e r e i n 如s e dn o m a ls a l i n eb yi n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n ( o 2 m l 1o o g ) ，3t i m e sp e r w e e kf o r8w e e k s ；m o d e l 铲o 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t i o nja k1 ，s t a t 3 m r n ae x p r e s s i o n ；s a c r i f i c i n g p a n o ft h el i v e r i nlo n e u t r a l f o n l l a l i n f i x e d ，p a r a m n e m b e d d e d ， h e m a t o x y l i n - e o s i n ( h e ) s t a i n i n ga n dm a s s o np a t h o l o g i c a lc h a n g e si nl i v e r t i s s u es t a i n i n g ；i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n go fl i v e rt i s s u ej a k 1 ， s t a t 3 e x p r e s s i o n r e s u l t s ： 1t h eh e a l t ho fr a t s ：t h ea c t i v i t i e so fn o n l l a lr a t si sa b i l i t y ，印p e t i t e ，h a i rg l o s s y a n dn e a t ，t h es p i r i ta n dn u t n t i o n a ls t a t u si sg o o d ，w e i g h tg a i np e rw e e ki s n o m a l m o d e l r a t sw i t hi n t r a p 嘶t o n e a li i 】= je c t i o no fc c l 4t i m e ，b e g a nt 0 d e c r e a s e 印p e t i t e ，a n dl i s