利用PLFA方法研究转Bt基因棉花对土壤微生物群落结构变化的影响.pdf

棉 花 学 报co t t o n s c i e n c e 2 0 0 9 2 1 6 5 0 3 5 0 7 利用p l f a方法研究转b t 基因棉花对土壤微生物群落结构变化的影响 李永 山 范巧 兰 陈 耕 柴 永峰 张冬梅 李 燕娥 山西省 农业科 学院棉花 研 究所 运城 0 4 4 0 0 0 摘要 在大 田条件下 用 3个 转 b 基 因棉花 品种和 一个 常规 品种 利用磷 脂 脂肪 酸 p l f a 方 法研 究转 b 基 因棉 花对土壤 微 生物群 落结 构变 化的影 响 试验 结果表 明 转基 因棉 花增加 了 土壤 微 生物 p l f a 的含 量 转基 因棉花 降低 了棉 田土 壤格 兰 氏 阳性 细菌 的 比例 提 高棉 田土 壤 的真核 生物 真 菌和放 线菌的 比例 转基 因棉花在 蕾期提 高 了土 壤原 生 动物 比例 在 吐絮 期 比例反 而降低 转基 因棉花在 蕾期提 高 了棉 田土壤格 兰 氏 阴性细 菌的 比例 吐絮期则 降低 了格 兰 氏阴性细菌 的比例 主成分分析 和聚 类分 析表 明 转 b 基 因棉花对土 壤微 生物群 落结 构变 化有 明显影响 p l f a 方 法可作 为转基 因生态 安全 评价 的一种 方法 关键 词 转 b 基 因棉花 土壤微 生物 群 落结构 磷脂脂 肪酸 中图分类 号 5 6 2 文献标 识码 a 文章编号 1 0 0 2 7 8 0 7 2 0 0 9 0 6 0 5 0 3 0 5 s o i l m i c r o bi a l co mmu n i t y s t r u c t u r e cha ng e an a l y s i s o f tr a n s g e ni c bt co t t o n ba s e d o n ph o s p h o l i p i d fa t t y ac i d m e t h o d li yo n g s h a n f an qi a o l a n li ya n e ge n g chai yo n g f e n g z hang do n g me i li y a n e co t t o n re s e a r c h i n s t i t u t e s h a n xi ac a d e my o f agr i c u l t u r a l s c i e n c e s yu n c h e n g s h a n x i 0 4 4 0 0 0 chi n a ab s t r a c t the e x p e r i me n t wa s c o n du c t e d t o e v a l ua t e t h e e f f e c t s o f t r a n s g e ni c bt c o t t on o n s o i l mi c r o b i a l c o mmun i t y i n 2 00 6 un de r t h e f i e l d b a s e d on ph os p ho l i p i d f a t t y a c i d pfla m e t h od th r e e t r a ns g e n i c bt c o t t o n 1 i n e s j m 2 6 j m4 4 a n d ccri 4 1 a n d o n e n o n b t c o t t o n l i n e we r e u s e d th e r e s u l t s s h o we d t r a n s g e n i c bt c ot t o n i n c r e a s e d a mo un t o f pfla f o r s o i 1 mi c r o be bt c o t t o n s oi l s we r e c ha r a c t e r i z e d b y t h e pr e d omi n a n c e o f a c t i no my c e t e s f u ng i a nd e u k a r y ot e s i n c o m p a r i s o n wi t h n o n bt c ot t o n s o i l i n c o nt r a s t t h e m i c r o bi a l c o mm u ni t y wa s c h a r a c t e r i z e d by t h e pr e d o mi n a nc e of gr a m p os i t i v e ba c t e r i a i n n o n bt c o t t o n s oi l s oi l mi c r ob i a l c ommun i t y we r e c ha r a c t e r i z e d b y t h e pr e d o mi n a nc e o f p r o t o z a a n d gr a m n e g a t i ve b a c t e r i a f or bt c ot t o n s o i l s i n s qu a r e gr o wt h s t a g e a n d f o r n o n bt c o t t o n s o i l i n t h e o pe n b ol l s t a g e pfla a nl y s i s wa s a c c e p t e d a s i nd i c a t o r f o r r i s k e v a l u a t i on o f t r a n s ge ni c bt c o t t on o n s o i l mi c r ob i a l c o mmun i t y ke y wo r d s t r a ns g e n i c bt c o t t o n s oi l mi c r ob e c o mmun i t y s t r u c t u r e plfa 自从 p e r l a k等口 首次成功地将苏云金杆菌 的杀虫基 因 b t 转 入 棉 花获 得抗 虫 植株 以后 抗 虫 棉进入应 用 阶段 转 b t基 因抗 虫 棉是 我 国批 准 进行大规 模商 品化种植 的转 基 因植 物 2 0 0 4年 全 国转基 因抗 虫棉种植 面积达 3 1 o 4 万 h m 占棉 花 总面积一半 以上 而 国产转 基 因抗 虫 棉种 植 面 积 占 7 0 左 右 随 着转 基 因植 物 商 品化 进 程 的 加 快 转 基 因 植 物 的风 险评 价 倍 受 人 们 的关 注l 3 j 转 基 因 的 评 价 主 要 集 中在 地 上 生 态 系 统l 6 而对 土壤 微 生 物 的 影 响还 未 引 起 足够 的 重视 国 内外 对转 b t 基 因抗 虫棉 土 壤微 生 物 的 数量与 种类研 究 甚 少l 1 而 且采 用 传统 的微 生 收稿 日期 2 0 0 9 0 1 1 9 作者简介 李永 山 1 9 6 5 一 男 博士 研究员 s x y s l i 1 2 6 c o rn 基金项 目 国家 自然基金 3 0 8 7 1 6 0 1 山西省 自然科学基金 2 0 0 7 0 1 1 0 9 2 和山西省农业科学院博士基金 y b s j j o 6 o 2 5 0 4 棉花学报 物 的培养 方法 这 些 传 统 方法 培 养 的微 生 物 只 占 总数 的0 1 1 0 不 能全 面反映 土壤微 生物 多 样性 信 息 磷 脂 脂 肪 酸 p h o s p h o l i p i d f a t t y ac i d p l f a 图谱 分析 是 近几 年来 发 展 的研 究 土 壤微 生物群 落结 构 的一 种 新 方 法 它可 定 量 分 析 微生物 群落 的生 物 量 和群 落结 构 能不 通 过 微生 物 的纯培 养 在属 的水平 上鉴 别微生 物种类 是 一 种快速 可靠的检测方法 因此 本研究采用磷脂 脂 肪酸 图谱分析 转 b t 棉 花对 土 壤 微 生物 多 样 性 的影 响 旨在为转 基 因安 全评 价提供 依据 和方法 1 材料和方法 试验 于 2 0 0 6年 在 山西 省农 业 科 学 院 棉 花 研 究所试 验农 场 进行 试验 地 为 黄壤 土 肥 力 中等 偏上 土壤有机质含量为0 8 9 速效氮 磷 钾含 量分别 为 6 5 m g k g 7 mg k g 和 8 6 m g k g 土壤的 p h 值为7 1 2 供试 品种 转 b t 基因抗虫棉晋棉 2 6 号 晋棉 4 4 号 中棉所 4 1和常规棉品种晋棉 7号 4月 1 8日播 种 地膜覆盖 于蕾 期 和吐絮期 在窄行 取o 1 5 c m 耕层土壤进行微生物分析 1 1 p l f a试验方法 1 1 1 p l f a 的提取 参考 f r o s t e g a r d e 等方法 1 1 2 试验方 法 称 2 g冷冻干燥土壤 用单相氯 仿 甲醇一磷酸钾缓冲液 1 2 o 8 v v v 进行总脂 类提取 并将提取液在硅胶上进行磷脂 分离 将 得到 的磷脂进行 甲脂化 然后用气相色普进行分析 p l f a 的命 名一般 采用 以下原 则 x ym z c t 其 中 x表 示 总碳 数 后 面 跟 一 个 y 表 示 双 键 数 表 示 甲基 末 端 z表 示 距离 甲基 端 的距 离 c 表 示顺式 t表 示 反式 a和 i 分 别表 示 支 链 的 反 异 构和异构 1 0 me表 示一 个 甲基 团在 距 分 子 末 端 第 1 0个碳 原 子上 环丙烷脂 肪 酸用 c y表示 1 2统 计分析 所有 数据用 d p s统 计软件 进行 分析 2结果和分析 2 1 转 基 因棉 花对 土 壤微 生 物磷脂 脂 肪 酸 p l f a 含量 的影 响 试验 结果表 明 转 基 因棉 花对 土 壤微 生物 的 p l f a 总 含量 有 明显 影 响 表 1 据 蕾 期 测 定 转基 因棉 花 的晋 棉 2 6号 比具 有 相似 血 缘 的非 转 基因棉花晋棉 7 号 p l f a含量提高1 3 5 6 转基 因 棉 花的晋 棉 4 4号和 中棉所 4 1比非转基 因棉 花晋 棉 7号分别 提高 3 0 1 和 3 2 5 在 吐絮期 晋棉 2 6号 比晋棉 7号 p l f a 含 量 提 高 5 6 4 4 晋 棉 4 4号 和 中棉 所 4 1比晋棉 7号 分 别 提 高 9 8 9 7 和 9 8 1 8 表 1 不 同 时 期 土 壤 微 生 物 p l f a 总 含 量 tab l e 1 co nt e nt s o f p ho s pho l i p i d f a t t y a c i d s o f bt c o t t o n i n s o i l mi c r ob e s n mo l g 2 2 转基 因棉 花对 土 壤微 生物 各 种磷 脂 脂 肪 酸 p l f a 分布 的影 响 在 4 个品种 2 期测定的土壤微生物群落结构成 分中 优 势 种 群 有 a 1 5 0 i 1 5 0 1 6 0 1 0 me 1 6 0 i 1 6 0 1 6 1 j c 1 8 l m7 c 1 8 1 c l 9 c 1 8 2 c 6 9 c c y 1 9 0 m 8 c n7 0 c y l 7 0 a l 7 0 2 o 1 w9 c 1 0 me l 8 0 其 中 1 6 o o为 最 大 的优 势 种 群 占 总 p l f a 含 量 的 1 o 2 9 6 1 5 9 9 6 其 次 为 1 8 1 c 占 8 3 9 6 1 o 7 另外 1 0 me 1 6 0占7 4 1 2 1 1 8 l o o 9 c 占7 1 1 o 4 c y l 9 0 c o 8 c占5 7 7 7 和 1 8 2 o o 6 9 c占3 5 7 2 单链饱和 p i fa占总 p l f a 的1 4 6 3 2 1 2 9 表 2不同转基因棉 花土壤微 生物 p l f a的分布 ta b l e 2 di s t r i b u t i o n o f p h o s p h o l i p i d f a t t y a c i d s o f b t c o t t o n i n s o i l mi c r o b e s 单链饱和 p l f a 单链不饱和 p i f a 单链多不饱和 p l f a 支链 p l f a 环丙烷 p l f a 1 0甲脂 类 p lf a 羟 基 类 plf a l 9 5 9 3 2 2 3 7 9 4 1 0 6 5 8 7 4 1 2 7 3 1 4 7 1 4 6 3 2 9 3 2 5 2 5 1 1 2 5 7 o3 11 25 1 7 o 1 6 8 9 3 3 8 2 4 77 1l 9 3 8 55 1 5 12 1 8 o 1 6 35 3 3 47 5 97 1 0 86 9 04 15 1 5 2 15 1 9 76 3 1 7 4 4 5l 1 2 38 9 9o 1 2 67 2 65 1 5 63 3 4 77 5 91 15 81 8 3 9 1 l 85 l l 85 21 29 3 6 o7 9 16 8 89 7 75 1 o 1 1 l i 27 l 7 95 33 91 7 o9 1 1 1 9 8 11 1 3 4 3 1 4 8 6 期 李永山等 利用 p l f a方法研究转 b t 基 因棉花对土壤微生物群落结构 变化 的影响 5 0 5 表 2 蕾期 4个 品种 的单链 饱和 p l f a 的百分 数依 次为 中棉所 4 1 晋棉 7 晋棉 4 4 晋棉 2 6 吐絮期 依次 为 中棉 所 4 1 晋棉 2 6 晋 棉 7 晋 棉 4 4 单链不饱 和磷 脂脂肪酸 占总 p l f a 2 9 3 2 3 6 o 7 它被认 为是格 兰 氏阴性 细菌 的生 物标记 在蕾期 单链不饱和磷 脂脂肪酸 的百分 数依次 为 中 棉所 4 1 晋棉 2 6 晋棉 4 4 晋 棉 7 说 明转基 因 棉花在蕾期提高 了棉 田土壤 格兰 氏阴性 细菌 的 比 例 在吐絮期 单链 不饱和磷脂 脂肪酸的百分数 依 次为晋棉 7 中棉 所 4 1 晋棉 2 6 晋棉 4 4 说 明 转基 因棉花在 吐絮期 降低 了棉 田土 壤格 兰 氏阴性 细菌 的比例 单链 多 不 饱 和 磷 脂 脂 肪 酸 占总 p i f a 的 4 5 9 1 它被认 为是真 核生物 的生物标 记 在蕾 期 单链 多不 饱 和磷 脂脂 肪 酸 的百 分数 依 次 为 中棉所 4 1 晋 棉 4 4 晋棉 2 6 晋棉 7 在 吐絮 期 单 链多不饱 和磷 脂 脂 肪酸 的百 分 数依 次 为 中 棉所 4 1 晋 棉 2 6 晋 棉 7 晋 棉 4 4 说 明转 基 因棉 花可提高 棉 田土壤 的真核 生物 比例 支链 磷 脂 脂 肪 酸 占总 p l f a 的 8 9 1 5 8 它被认 为是格 兰氏 阳性 细菌的生 物标记 在蕾期 支链磷 脂脂肪 酸的百分 数依次 为晋棉7 晋棉 2 6 晋棉 4 4 中棉 所 4 1 在 吐絮 期 支链 多不饱 和磷脂脂 肪酸 的百分数 依 次为 晋棉 7 晋 棉 4 4 中棉所 4 1 晋棉 2 6 说明转基因棉花降 低 了棉 田土壤格 兰 氏阳性 细菌 的 比例 甲脂类磷脂 脂肪酸 可表示放线 菌特 征的生 物 标 记 甲 脂 类 磷 脂 脂 肪 酸 占 总 p l f a 的 1 0 1 1 5 2 在蕾 期 甲脂 类 磷 脂脂 肪 酸 的 百分数 依 次为 晋棉 2 6 晋 棉 4 4 晋棉 7 中棉 所 4 1 在 吐絮期 晋棉 2 6 中棉所 4 1 晋棉 7 晋棉 4 4 说 明转 基 因的棉花 可提 高棉 田土 壤 放线 菌的 比例 1 8 2 c o 6 c被 认 为 是 真 菌 的 生 物 标 记 占 总 p l f a的 3 4 8 7 2 2 在 蕾 期 1 8 2 6 c所 占 p l f a 的百分数 依次 为 中棉所 4 1 晋 棉 4 4 晋 棉 7 晋棉 2 6 在 吐絮 期 中棉 所 4 1 晋棉 4 4 晋 棉 2 6 晋棉 7 因此可说 明转基 因的棉 花可 提高 棉 田土壤 真菌 的 比例 2 0 4 c o 6 c被认 为 是原 生 动 物 的生 物标 记 占 总 p l f a 的 0 2 3 0 9 4 在 蕾 期 2 o 4 6 c 所 占 p i f a 的百分数 依 次 为 中棉 所 4 1 晋棉 4 4 晋棉 2 6 晋棉 7 在吐 絮期 晋棉 7号 中棉所 4 1 晋棉 2 6 晋 棉 4 4 说 明在 蕾 期转 基 因棉 花 的土壤原 生动物 比例高 在 吐絮期 比例反 而降低 2 3主成 分和聚 类分析 对 4个 品种 两个 时期 的 p l f a 百分 数 进 行 主成 分 分 析 结 果 表 明 前 6个 主 成 分 可 解 释 9 5 4 的 p l f a 变异 第 一 主成 分可解 释 p l f a 3 o 2 的 变 异 第 二 主 成 分 可 解 释p l f a 2 1 7 的变异 第 三 主成 分 可解 释 p l f a 1 7 5 的变异 第 四主 成 分 可 解 释 p l f a 1 3 5 的变 异 从 图 1 可 看 出 4个 品种 2个 时 期 各个 点分 布较分散 说 明转 b t 基 因晋 棉 2 6号 晋 棉 4 4号 和 中棉 所 4 1与 非 转 基 因 晋 棉 7号 土 壤 微 生 物 p i f a差 异 明显 n u l 0 5 o 5 一 l o 一 l 0 8 6 4 2 0 2 4 1 j m4 4 06 2 9 2 j m4 4 1 0 0 8 3 j m26 0 6 2 9 4 j m2 6 1 0 08 5 j m7 0 62 9 6 j m7 1 0 08 7 cri 41 0 6 2 9 8 ccri 41 1 0 0 8 图 1 转 b t 基因棉花土壤 p l f a主成分分布图 fi g 1 pr i nc i pa l c o mpo n e nt a na l y s i s o f pfla c ompo s i t i on o f s o i l m i c r ob e i n t r a n s g e ni c bt c o t t o n 对 4 个 品种 2个取样 时期 的土壤微 生 物 p l f a百分数 聚类 分 析 结 果 表 明 以 7 o 4可 划 分 为 6个 系 统 图 2 i 类 6月 2 9日晋 棉 4 4号 和 1 0月 8 号 中棉所 4 1 i i 类 6 月 2 9日和 1 o月 8号 的晋棉 2 6号 i i i 类 l o月 8号 的 晋 棉 7号 i v 类 6月 2 9号 晋棉 7号 v类 6月 2 9日中棉 所 4 1 vi 类 1 0月 8号 的晋棉 4 4号 0 0 0 2 3 5 4 7 0 7 0 4 9 3 9 l1 7 4 圄 2 转 基 因棉 花土 壤微 生物 p l f a分 布 的 系统 聚类 分 析 fi g 2 s y s t e mi c c l u s t e r a na l y s i s o f pfla p a t t e r s o f s o i l mi c r obes i n bt c o t t o n 3 讨论 转 基因抗虫 棉 对土 壤 中微 生 物数 量 的影 响 主要是 b t 棉 的外 源基 因表 达产物 b t 杀虫 晶体蛋 白通过根 系分 泌 物 或 作 物残 茬 进 入 土壤 生 态 系 统 删 d o n e g a n等 研究 发现 美 国种植 的转 98988998 2o2o022o 6o6oo66o o1o1lool 4 h 6 6 4 删 m m 删 tj l t j t j t j j l j 5 o 6 棉 花学报 2 1卷 b t 基 因抗虫 棉 土 壤 微 生 物 的数 量 与 种 类 在 不 同 品种 中表现不 一 致 有 的 品种 与 常规 棉 花 差 异显 著 有 的不显著 wa t r u d等口 也 报道 转 b t 基 因 棉花提 高 了土壤细菌 和真 菌 的数 量 也有学 者认 为转 b t 基 因棉可能是由于遗传修饰后的植株 的 生理生化 特性 发生 了变 化 从 而对 土壤微 生物 产 生影 响 而不是 表达 产物 的直接影 响 1 我们 通 过 p f l a 分 析 转 b t 基 因 棉 花 增 加 了 p f l a 的种类 和含 量 改变 了土壤 微 生 物 群落 结构 主成分分 析 和聚类分 析表 明 转 基 因棉 花对 土壤微 生物有 明显 的影响 p f l a 分析法 可 作 为 转基 因植 物 对 土 壤微 生 物 生 态 安 全 评 价 的一 种 方法 参考文献 1 p e r l ak f j d e a t o n r w ar ms t r o n g t a e t a 1 i n s e c t r e s i s t a n t c o t t o n p l a n t s j b i o t e c h n o l o g y 19 9 0 8 9 39 94 2 2 汪若海 李秀 兰 我 国转 基因抗虫 棉应用 现状及 建议 j 生物技术通报 2 0 0 0 5 1 6 w ang ru o ha l li xi u l a n pr e s e n t s i t ua t i on a nd pr op o s a l s f o r t he a ppl i c a t i on of t r a ns g e ni c i ns ec t r e s i s t a n t c o t t o n i n c h i n a j b i o t e c h n o l o g y i n f o r ma t i o n 2 0 0 0 5 1 6 3 钱迎倩 马克平 经遗传 修饰生物 体 的研 究进 展及 其 释放后对环 境 的影响 j 生态 学报 1 9 9 8 1 8 1 l 一 9 qi an yi n g q i a n ma ke p i n g pr o g r e s s i n t h e s t u d i es on ge n e t i c a l l y mod i f i e d or ga n i s ms a nd t h e i mpa c t o f i t s r e l e a s e o n e n v i r o n me n t j ac t a e c o l o g i c a s i n i c a l 9 9 8 1 8 1 1 9 4 wo l f e nb ar g e r l l p h i f e r p r t h e e c o l o g i c a l r i s k s a n d b e n e f i t s o f g e n e t i c a l l y e n g i n e e r e d p l a n t s j s c i e nc e 2 00 0 29 0 2 08 8 2 0 93 5 an gl e j s r e l e a s e o f t r a n s g e n i c p l a n t s b i o d i v e r s i t y a n d p o p u l a t i o n c o n s i d e r a t i 0 n s j mo l e c o l 1 9 9 4 3 4 5 5 0 e 6 沈法富 于元杰 张学坤 等 转基 因抗 虫棉 的基因流 j 遗传学报 2 0 0 1 2 8 6 5 6 2 5 6 7 shen fa f u yu yu a n j i e z h a n g xu e k u n e t a 1 b t g e n e f l o w o f t r a n s g e n i c c o t t o n j ac t a ge n e t i c a s i n i c a 2 0 0 1 2 8 6 5 6 2 5 6 7 7 李汝 忠 沈法富 王宗文 等 转 b t 基 因抗虫棉抗虫性 遗传研究 j 棉花学报 2 0 0 1 1 3 5 2 6 8 2 7 2 li ru z ho n g she n fa f u w a ng zon g we n e t a 1 s t u d y o n t h e i n h e r i t a n c e o f b o l l wo r m r e s i s t a n c e i n t r a n s g e n i c b t c o t t o n j c o t t o n s c i e n c e 2 0 0 1 1 3 5 2 6 8 2 7 2 8 王留明 王家宝 沈法富 等 渍涝 与干旱对 不 同转 b t 基因抗虫棉 的影 响e j 棉 花 学报 2 0 0 1 1 3 2 8 7 9 o wang l i u rui n g w a n g j i a b a o s h e n fa f u e t a 1 i nf l ue n c e s of wa t e r l og gi ng a n d dr ou ght o n d i f f e r e n t t r a n s g e n i c b t c o t t o n c u l t i v a r s j c o t t o n s c i e n c e 2 0 0 1 1 3 2 8 7 9 0 9 丁志勇 许崇任 王戎 疆 转基因抗虫棉与常规棉几种 同工酶的 比较 j 生态学 报 2 0 0 1 2 1 2 3 3 2 3 3 6 di ng z h i y o n g xu c h o n g r e n w a n g ro n g j i a n g co mpa r i s o n of s e v e r a l i mp or t a nt i s oe nz y me s be t we e n b t c o t t o n a n d r e g u l a r c o t t o n j ac t a e c o l o g i c a s i n i c a 2 0 0 1 2 1 2 3 3 2 3 3 6 1 o 阎凤 鸣 许崇任 ma r i e b 等 转 b t 基 因棉挥发性气 味的化学成 分及其对棉铃虫 的电生 理活性 j 昆虫 学报 2 0 0 2 4 5 4 4 2 5 4 2 9 yan fe ng mi n g xu cho ng r e n m a r i e b e t a 1 vol a t i l e c omp os i t i on s o f t r a ns ge n i c bt c o t t on a n d t he i r e l e c t r o phy s i ol o gi c a l e f f e c t s on t he c o t t on bo l l wo r me j a c t a e n t o mo l o g i c a s i n i c a 2 0 0 2 4 5 4 4 25 42 9 1 1 d o ne g an k k p a l m c j f i e l a n d v j e t a 1 c h a n g e s i n l e v e l s s p e c i e s a nd dna f i ng e r p r i nt s of s o i l mi c r oo r ga ni s ms a s s o c i a t e d wi t h c ot t o n e x pr e s s i n g t he bac i l l u s t hu r i n gi e ns i s va r kur s t a ki e n do t o xi n j ap p l i e d s o i l e c o l o g y 1 9 9 5 2 1 1 1 1 2 4 1 2 1 wa tr ud l s s e i d l e r r j no n t a r g e t e c o l o g i c a l e f f e c t s of p l a n t mi c r obi a l a nd c he mi c a l i nt r od uc t i o n s t o t e r r e s t r i a l s y s t e mi c s o i l c h e mi s t r y a n d e c o s ys t e m he a l t h spe c i a l pub l i c a t i on 5 2 m a di s o n w i s c o n s i n s o i l s c i e n c e s o c i e t y o f ame r i c a 1 9 8 8 3 1 3 3 40 e 1 3 崔金杰 雒瑁瑜 李树红 等 转基因抗虫棉对 土壤 微 生物影 响的初 步研究 j 河北农业 大学学报 2 0 0 5 2 8 6 73 75 c ui j i n j i e lu o j u n y u l i s h u h o n g e t a 1 p r e l i mi n a r y s t u dy i n t he e f f e c t s o f t r a n s g e ni c c ot t on f i e l ds o n t h e s o i l mi c r o b e j j o u r n a l o f a g r i c u l t u r a l un i v e r s i t y o f he b e i 2 0 0 5 2 8 6 7 3 7 5 1 4 张金 国 刘翔 崔 金杰 等 转基 因 c r y l ac 抗虫 棉对土壤微 生 物 的影 响 j 中 国生 物 工 程 杂 志 2 0 0 6 2 6 5 7 8 8 0 zhang j i n g u o li u xi a n g cu i j i n j i e e t a 1 e f f e c t s o f t r a n s g e n i c cr y l ac c o t t o n o n s o i l mi c r o b e s j c h i n a b i o t e c h n o l o g y 2 0 0 6 2 6 5 7 8 8 0 1 5 沈法富 韩秀 兰 范术丽 转 b t 基因抗虫棉 根际微生 6 期 李永 山等 利用 p i f a方法研究转 b t 基 因棉花对土壤微生物群落结构变化的影响 5 0 7 物区系和细菌生 理群 多样 性的变化 j 生态 学报 2 00 4 2 4 3 43 2 43 7 shen fa f u ha n xi u l a n fa n shu l i ch a ng e s i n mi c r o b i a l f l o r a a n d b a c t e r i a l p h y s i o l o g i c a l g r o u p d i v e r s i t y i n r hi z os p he r e s o i l o f t r a ns g e ni c bt c ot t o n j ac t a e c o l o g i c a s i n i c a 2