细菌的荚膜染色实验ppt课件.ppt

1 细菌的荚膜染色 2 实验目的与要求 继续学习微生物制片方法学习并掌握荚膜染色的基本原理和方法 3 某些细菌生长到一定阶段 在一定营养条件下可向细胞壁表面分泌一层松散透明 疏松 柔软 粘液状或胶质状的物质 即为荚膜 Capsule 荚膜的化学成分 主要是多糖 多肽 蛋白质 脂以及由它们组成的复合物 脂多糖 脂蛋白等 荚膜的功能 是细胞外碳源和能源性贮藏物质 能保护细胞免受干燥的影响 同时能增加某些病原菌的致病能力 抵御宿主吞噬细胞的吞噬 细菌荚膜与生产生活 葡聚糖 黄原胶的提取 龋齿 面包发粘 等 细菌的荚膜 4 染色原理与说明 荚膜的化学成分对染料结合力很弱 不容易着色 而且可溶于水 易在水洗时被除去 所以 一般采用衬托染色法 负染色法 使菌体和背景着色 而荚膜不着色 在菌体周围形成一透明圈 即荚膜 荚膜很薄 涂片不要用力过猛 不要滴加水 以防破坏其荚膜原形 荚膜富含水分 90 以上 制片时应自然干燥 不可加热固定 以避免荚膜受热失水收缩而变形 影响观察 5 材料 细菌培养物 胶质芽孢杆菌 或钾细菌 染色液与试剂 Tyler染色液 绘图墨水 必要时滤纸过滤后再用 复红染色液 黑素 6 葡萄糖水溶液 1 甲基紫水溶液 甲醇 20 CuSO4水溶液 香柏油 二甲苯器材 载玻片 盖玻片 接种环 擦镜纸 吸水纸 显微镜 废液缸 等 6 方法 负染色法湿墨水法干墨水法Tyler法 7 负染色法 制片 取洁净的载玻片一块 加蒸馏水一滴 取少量菌体放入水滴中混匀并涂布 干燥 将涂片放在空气中晾干 或用电吹风冷风吹干 染色 在涂面上加复红染色液染色2 3min 水洗 用水洗去复红染液 干燥 将染色片放空气中晾干 或用电吹风冷风吹干 涂黑素 在染色涂面左边加一小滴黑素 用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素 使黑素沿玻片边缘散开 然后向右拖展 使黑素在染色涂面上成为一薄层 并迅速风干 镜检 先低倍镜 再高倍镜观察 结果 背影灰色 菌体红色 荚膜无色透明 8 制菌液 加1滴墨水于洁净的载玻片上 挑少量菌体与其充分混合均匀 加盖玻片 放一清洁盖玻片于混合液上 然后在盖玻片上放一张滤纸 向下轻压 吸去多余的菌液 镜检 先用低倍镜 再用高倍镜观察 结果 背景灰色 菌体较暗 在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜 湿墨水法 9 制菌液 加1滴6 葡萄糖液于洁净载玻片一端 挑少量菌与其充分混合 再加1环墨水 充分混匀 制片 左手执载玻片 右手拿一边缘光滑的盖玻片 使其一边与菌液接触 菌液沿玻片接触处散开 然后以30度角 迅速而均匀地将菌液拉向玻片的一端 使菌液铺成一薄膜 干燥 空气中自然干燥 固定 用甲醇浸没涂片 固定1min 立即倾去甲醇 干燥 在酒精灯上方 用文火干燥 染色 用甲基紫染1 2min 水洗 用蒸馏水轻洗 自然干燥 镜检 先用低倍镜再高倍镜观察 结果 背景灰色 菌体紫色 荚膜呈一清晰透明圈 干墨水法 10 涂片 按常规法涂片 可多挑些菌体与水充分混合 并将粘稠的菌液尽量涂开 但涂布的面积不宜过大 干燥 在空气中自然干燥 染色 用Tyler染色液染5 7min 脱色 用20 CuSO4水溶液洗去结晶紫 脱色要适度 冲洗2遍 用吸水纸吸干 立即加1 2滴香柏油于涂片处 以防止CuSO4结晶的形成 镜检 先用低倍镜再用高倍镜观察 结果 背景蓝紫色 菌体紫色 荚膜无色或浅紫色 Tyler法 11 涂片方法 12 加盖玻片时不可有气泡 否则会影响观察 应用干墨水法时 涂片要放在火焰较高处并用文火干燥 不可使玻片发热 在采用Tyler法染色时 标本经染色后不可用水洗 必须用20 CuSO4冲洗 注意事项 13 作业思考题 绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态