致病菌的检验革兰氏阴性微需氧和厌氧菌 ppt课件.ppt

革兰氏阴性微需氧和厌氧菌 本属菌共包括8个属和1个科 1 弯曲杆菌属 2 水螺菌属 3 螺菌属 4 固氮螺菌属 5 海洋螺菌属 6 蛭弧菌属 7 吸血弧菌属 8 螺杆菌属 以及拟杆菌科 在医学检疫上有意义的是弯曲杆菌和螺杆菌属 1 第1节弯曲杆菌属Campylobacter 一类呈逗点状或S形的革兰氏阴性杆菌 广泛分布于动物界 其中有些可引起动物和人类腹泻 胃肠炎和肠道外感染 目前弯曲菌属有18个种 含亚种 对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌的胎儿亚种 前者引起人类急性腹泻 后者在免疫功能低下时可引起败血症 脑膜炎等 其次是胎儿弯曲菌和大肠弯曲菌等 1983年分离的幽门弯曲菌则与慢性胃炎和胃溃疡 十二指肠溃疡有关 兽医临床上常见的有五个种 含亚种 空肠弯曲杆菌 胎儿弯曲杆菌 胎儿亚种和性病亚种 小肠弯曲杆菌 幽门弯曲菌 其中以空肠弯杆菌最多见 胎儿亚种次之 2 弯曲杆菌属 一 形态与染色1 0 2 0 4 1 5 3 0 m G 呈弧形 S形或海鸥展翅状 不易着色 2 无芽孢 一端或两端各有一根鞭毛 运动活泼 形态似霍乱弧菌 3 从微需氧到厌氧 CO2有利于其生长 3 二培养特性 微需氧 最适生长环境 氧气5 二氧化碳10 氮气85 通常42 初分离空肠弯和大肠弯曲菌 其他菌株37 生长良好 营养要求高 普通培养基不生长 常用含头孢哌酮的选择性培养基 以抑制肠道正常菌群 含血的Skirrow培养基 头孢哌酮 万古霉素 两性霉素琼脂培养基 CVA 和不含血的碳 头孢哌酮 去氧胆酸盐 CCDA 碳基选择性培养基 CSM 和半固体动力培养基等常用于分离该属的细菌 4 三生化特性 氧化酶和触酶阳性 可还原硝酸盐 不分解 不发酵各种糖类 不分解尿素 5 四抵抗力 本属细菌抵抗力弱 对一般消毒剂敏感 但耐寒 在4 冰箱或水中可存活4周 本菌具有粘附定居和入侵上皮细胞的能力 通过产生的肠毒素 细胞毒素和内毒素等多种毒力因子致病 病变部位通常在空肠和回肠 也可蔓延至结肠 五毒力 6 六致病性 可引起人畜急性传染病 弯曲杆菌病 1 带菌者 动物和人类 经肠道或生殖道排出 2 感染 经口 污染的食物或水 经产道感染婴儿 3 临床症状 潜伏期1 10d 一般3 5d 1 肠炎 腹泻 腹痛 呕吐及发热等 初为水样 继而转为粘液便 少数呈脓血便 2 肠道外感染 可致菌血症 心内膜炎 脑脊髓膜炎 血栓性静脉炎 关节炎 肺脓肿和腹膜炎等 3 母畜感染 上呼吸道症状 肺炎 发热及菌血症 死胎或流产 新生畜败血症及脑脊髓膜炎 7 七微生物学检查 1 标本采集采集粪便及剩余食物 立即送检 或将标本接种于卡 布运送培养基中送检 对于高烧和脑膜炎者 于用药前抽取静脉血或脑脊液 注入布氏肉汤送检 8 2 细菌检验 1 显微镜检查 悬滴法动力检查 显微镜下观察有无螺旋状或投标样运动 脑脊液标本经离心沉淀后再制成悬滴标本检查 染色标本检查 取新鲜粪便或脑脊液离心沉淀物涂片 革兰氏染色 找革兰氏阴性 弯曲呈S状或螺旋状杆菌 鞭毛染色见一端或两端单根鞭毛 2 分离培养将标本直接接种于选择性培养基上 也可将标本过滤后培养 弯曲菌形成的菌落为灰色 扁平 表面湿润 圆形凸起 边缘不规则 常沿穿刺线蔓延生长 血平板不溶血 布氏肉汤中呈均匀混浊 9 3 细菌鉴定 弯曲菌属的鉴定较复杂 必须综合多种试验确定 通常氧化酶阳性 革兰染色阴性 弯曲呈S形或螺旋形 进一步鉴定试验 马尿酸盐水解试验 鉴别空肠弯曲菌空肠亚种和多氏亚种的重要试验 前者阳性 后者阴性 醋酸吲哚水解试验 空肠弯曲菌为阳性而胎儿弯曲菌为阴性 萘啶酸 头孢噻吩耐药试验 空肠弯曲菌和大肠弯曲菌对萘啶酸敏感 对头孢噻吩耐药 胎儿弯曲菌对萘啶酸耐药而对头孢噻吩敏感 近来出现了对萘啶酸耐药的空肠弯曲菌 应结合醋酸吲哚水解试验进行鉴定 10 八 治疗 弯曲菌感染大多呈轻症和自限性 一般不需特异性治疗 体外试验显示 头孢菌素和青霉素耐药 环丙沙星治疗弯曲菌感染对绝大多数弯曲菌非常有效 但近年出现了不少耐药菌株 空肠弯曲菌通常对红霉素敏感 耐药率小于5 而80 以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药 胎儿弯曲菌引起的全身感染可用红霉素 氨苄西林 氨基糖苷类和氯霉素治疗 11 第2节螺杆菌属Helicobacter 螺杆菌属 Hilicobacter 是一群氧化酶和触酶阳性 微需氧 37 生长 25 和42 均生长不良的革兰阴性弯曲菌 本属细菌最早根据形态染色 培养条件等归于弯曲菌属 1989年Goodwin根据其超微结构 酶活性 脂肪酸序列 生长特性等的不同 建议将其从弯曲菌属中划分出来而成立一个新的属Hilicobacter 螺杆菌属 本属中现已鉴定的有19个种 研究得最多 最常见的是幽门螺杆菌 H pylori Hp 12 幽门螺杆菌 一 形态与染色革兰氏阴性 无芽孢 呈螺旋状弯曲 杆状 尤其在胃粘膜环境中 幽门螺杆菌具典型螺旋形或弯曲形 但在陈旧培养物中菌体可呈圆球状 多数细菌具有位于菌体一端的多根带鞘鞭毛 运动活泼 13 二培养特性 微需氧 有氧及无氧环境均不生长 潮湿 37 5 10 O2 5 12 CO2生长良好 5 10 H2可刺激其生长 最适温度35 37 30和42 均生长不良 此点可与其他弯曲菌区别 生长pH5 5 8 5 普通培养基不生长 需补充血 血清 淀粉 活性炭等 常用心脑浸出液琼脂 布氏琼脂 哥伦比亚琼脂等 选择性培养基 改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉素 两性霉素和头孢磺啶 血平板 经3 5d形成小的半透明灰色菌落 有微弱的溶血环 革兰氏染色浅 14 三生化反应 生化反应不活泼 氧化酶和触酶阳性 不分解任何糖类 脲酶强阳性 可与本属其他细菌区别 也是检测HP的快速诊断方法之一 15 四抵抗力 对酸敏感 尿素可保护该菌 1 胆盐可抑制其生长 耐药性 对多粘菌素 三甲氧苄氨嘧啶 磺胺 万古霉素和萘啶酸天然耐药 在体外药敏试验中 该菌对不少抗生素敏感 但体内用药效果不佳 主要因为该菌寄生在粘液层下的胃上皮细胞表面 抗生素不能渗入胃粘膜深层 临床上治疗该菌的药物有阿莫西林 甲硝唑 克拉霉素 四环素 呋喃唑酮等 16 五致病因子与致病性 该菌有较强的鞭毛动力 对胃粘膜有较强粘附力 在接近中性的粘膜层定植 产生强活性尿素酶以分解尿素 在菌体周围形成保护性氨环境 以抵抗胃粘膜上皮细胞分泌的胃酸 该菌产生的蛋白酶能有效分解粘液蛋白 提供营养 幽门螺杆菌在胃内定植后 粘附于胃粘膜上皮细胞 通过胃肠激素刺激和细胞壁脂多糖中脂质A的致炎作用 产生多种酶 尿素酶 蛋白酶 过氧化氢酶 脂酶和磷脂酶等 以及细胞毒素 共同作用导致临床疾病的发生 主要引起消化性溃疡 十二指肠溃疡 胃溃疡 慢性活动性胃窦炎等 长期感染易发展为萎缩性胃炎 胃腺癌和胃粘膜淋巴组织淋巴瘤 17 六微生物学诊断 18 六微生物学诊断 1 标本采集采集胃和十二指肠粘膜新鲜标本 置2ml无菌生理盐水 运输途中不超过3h 4 不超过5h 流行病学调查时可取血清 2 显微镜检查 直接镜检 取胃 十二指肠粘膜活检标本作革兰染色 在油镜下查找细长弯曲或呈海鸥展翅状排列的菌体 组织学切片 可行Warthin Starry银染 改良Giemsa染色 甲苯胺蓝染色 石炭酸复红染色等 3 分离培养5 绵羊血的布氏琼脂或7 马血的心脑浸液分离 用改良的Skirrow琼脂 万古霉素和两性霉素各10mg L 甲氧苄啶5mg L 选择性培养 在含5 O2 10 CO2 85 N2的微需氧环境37 孵育3 5天 长出细小 灰白色 半透明 不溶血的菌落 19 4 快速检查 快速脲酶试验 取一小块新鲜活检标本置于含尿素的培养基 由于幽门螺杆菌产生大量的细胞外尿素酶 可分解尿素产大量氨 培养基pH升高 指示剂变色 可在5 30min内检测出幽门螺杆菌 该法简便实用 快速灵敏且较为准确 适合胃镜检查病人 核素标记试验 敏感性和特异性均很高 但操作稍繁琐 PC