循环肿瘤细胞技术进展PPT课件.ppt

循环肿瘤细胞 CirculatingTumorCell CTC 上海宝藤生物医药科技有限公司 上海张江转化医学研发中心 1869年AustMedJ Ashworth最早在转移性癌症患者血液中观察到 2005年NEnglJMed Cristofanilli证实治疗前CTC数目是转移性乳腺癌患者无进展生存期和总生存期的独立预测因子 循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞 循环肿瘤细胞 CTC能在哪些方面给我们思考和启示 如何获取CTC 获取CTC需要解决的技术问题 从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞将恶性肿瘤细胞与红细胞 白细胞 正常上皮细胞 造血干细胞等区分开来 每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞 而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个 红细胞有500亿个 三种技术 过滤法 ISET IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8 m孔径过滤膜 漏检体积较小的肿瘤细胞敏感性低 梯度密度法 肿瘤细胞和单核细胞密度小于1 077g mlCTC纯度低 混入较多白细胞肿瘤细胞会迁移至血浆层 而聚集后容易下沉聚蔗糖 泛影葡胺 Ficoll Hypaque 对细胞有毒性 免疫磁珠法 肿瘤细胞表面抗原EpCAM与包绕着磁珠的特异性单抗相结合CellSearch细胞保存方法长达96小时实验室室间差异小EpCAM的假阳性和假阴性 CellSearch 免疫磁珠 流式细胞分析 化学发光 CellSearch是全球第一也是唯一经FDA批准可用于临床的循环肿瘤细胞 CTC 产品 1983磁流体 CellSearch 免疫磁珠原理 如何鉴别出CTC CTC Anti EpCAM磁珠 Anti CK PE NucleusDAPI CK EpCAM 在CellSearch 检测中 CTC被设定为 EpCamCK 8 18和 或19DAPICD45 CellSave 储存管 CellSearch CTC检测试剂盒 CellSearch 自动化的CTC分离 富集和计数 磁巢Magnest CellTracks AnalyzerII 96小时稳定 2004年FDA批准 CTC质控试剂盒 磁力捕获 FIRSTANDONLY APPROVED CellSearch技术的可重复性和高敏感度 CellSearch系统是CTC检测目前唯一的自动化 标准化平台减少方法学及人工操作引起的结果差异实验结果的可重复性实验室间结果的可比性系统线性系数 R 0 990 线性范围0 1238系统最低检测限度 7 5ml外周血中的1个肿瘤细胞 乳腺癌中CTC的研究进展 转移性乳腺癌患者治疗前CTC水平是有效的预后预测因子 CTC计数小于5的患者无进展生存期 PFS 和总生存期 OS 均显著高于CTC计数大于等于5的患者 无进展生存期 总生存期 CTC在乳腺癌中对预后的预测 IF 53 484 NEnglJMed 2004Aug19 351 8 781 91 Circulatingtumorcells diseaseprogression andsurvivalinmetastaticbreastcancer JClinOncol 2005Mar1 23 7 1420 30 Circulatingtumorcells anovelprognosticfactorfornewlydiagnosedmetastaticbreastcancer CTC在治疗前后都是强烈而独立的预后因子 在基线位置检测CTC对于PFS和OS有较高预测意义 CTCsbeforeandaftertheinitiationoftherapywerestrong independentprognosticfactors DetectionofCTCsbeforeinitiationoffirst linetherapyinpatientswithMBCishighlypredictiveofPFSandOS 一线化疗前 即基线 一线化疗一个疗程后 即3 4周后 IF 18 970 ClinCancerRes 2006Jul15 12 14Pt1 4218 24 Circulatingtumorcellsateachfollow uptimepointduringtherapyofmetastaticbreastcancerpatientspredictprogression freeandoverallsurvival CTC在治疗的任何时段升高都预示乳腺癌病情进展 预后不良 DetectionofelevatedCTCsatanytimeduringtherapyisanaccurateindicationofsubsequentrapiddiseaseprogressionandmortalityforMBCpatients IF 7 338 CTCs与影像相比I 更早 更具重现性 与OS的相关性更强 RadiologicAssessmentat12weeks CTCAssessmentat4 5weeks CTCAssessmentat10 12weeks withintwoweeksofimaging CTCAssessmentat8weeks within4weeksofimaging ClinCancerRes 2006Nov1 12 21 6403 9 Circulatingtumorcellsversusimaging predictingoverallsurvivalinmetastaticbreastcancer IF 7 338 JClinOncol 2009Jul10 27 20 3303 11 Circulatingtumorcellsand 18F fluorodeoxyglucosepositronemissiontomography computedtomographyforoutcomepredictioninmetastaticbreastcancer 在转移性乳腺癌中 CTC检测达到5个或更多对于MBC的治疗监控优于FDG PET CT检查 当CTC计数低于5个时 FDG PET CT具有一定预后价值 DetectionoffiveormoreCTCsduringtherapeuticmonitoringcanaccuratelypredictprognosisinMBCbeyondmetabolicresponse FDG PET CTdeservesaroleinpatientswhohavefewerthanfiveCTCsatmidtherapy CTC与FDG PET CT对于乳腺癌治疗监控的对比 IF 18 970 AnnOncol 2010Jan 21 1 33 9 Epub2009Jul14 CirculatingtumorcellsandbonemetastasesasdetectedbyFDG PET CTinpatientswithmetastaticbreastcancer 无骨转移 只有骨转移 有多处器官转移 3 在多处累及患者中 CTC计数仍是预后的独立判断因子 1 CTC计数 21 96 有骨转移 且全部为多处骨转移 2 CTC计数越高 越与多处骨转移或多器官转移相关 IF 6 452 FISH分析 白细胞有两份CEP7 绿色 EGFR 红色 和MET 蓝色 CTC中 EGFR 红色 和MET 蓝色 基因扩增 BrJCancer 2010May11 102 10 1495 502 ImprovingtheyieldofcirculatingtumourcellsfacilitatesmolecularcharacterisationandrecognitionofdiscordantHER2amplificationinbreastcancer IF 4 831 HER2 使用FISH方法 HER2 CEP17 2 0 9 10转移灶为HER2 在原发肿瘤和CTC中 HER2基因扩增的差异 原发灶肿瘤 其转移灶为HER2 患者总数 CTC中HER2 的患者数量 CTC中HER2 的患者数量 不一致比率 2004NEnglJMedCTC升高 PFS和OS均降低 CTC是预后的独立预测因子 2005JClinOncolCTC在治疗前后都是预后的强烈而独立预测因子 2006ClinCancerResCTC在治疗的任何时段升高都预示乳腺癌病情进展 预后不良 2006ClinCancerResCTC计数对于乳腺癌病情状态判断要比当前的影像学方法更早且更具有可重复性 2008AnnOncol治疗中CTC的变化提示疾病对于治疗的反应 2009JClinOncolCTC检测达到5个或更多对于MBC的治疗监控优于FDG PET CT检查 2010AnnOncolCTC计数越高 越与多处骨转移或多器官转移相关 CTC在乳腺癌中的研究结果回顾 结直肠癌中CTC的研究进展 JClinOncol 2008Jul1 26 19 3213 21 Relationshipofcirculatingtumorcellstotumorresponse progression freesurvival andoverallsurvivalinpatientswithmetastaticcolorectalcancer 在影像学检查无进展患者中 1个月内检查CTC小于3的组别的生存期比大于等于3的组别更长 18 8个月vs7 1个月 P 0 0001 Amongnonprogressingpatients favorablecomparedwithunfavorableCTCswithin1monthofimagingwasassociatedwithlongersurvival 18 8v7 1months P 0 0001 IF 18 970 AnnOncol 2009Jul 20 7 1223 9 Epub2009Mar12 Prognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithmetastaticcolorectalcancer 总患者数量 N 430 特征 奥沙利铂 伊立替康 贝伐单抗 所有病人 一线治疗 二三线治疗 肝转移 65岁以上 65岁以下 基线CTC计数 7 5ml 3个 基线抽血后无进展生存期中位数 月 3个 3个 基线抽血后总体生存期中位数 月 3个 3个 不论病人的治疗方案和病人体质特性 基线CTC计数均是重要的预后因子 BaselineCTCcountisanimportantprognosticfactorwithinspecificsubgroupsdefinedbytreatmentorpatientcharacteristics IF 6 452 AnnOncol 2010May 21 5 1006 12 Epub2009Oct27 Circulatingtumourcellsearlypredictprogression freeandoverallsurvivalinadvancedcolorectalcancerpatientstreatedwithchemotherapyandtargetedagents 273名患者 治疗1 2周后检测CTC小于3个 CT影像显示疾病控制16名患者 治疗1 2周后检测CTC小于3个 CT影像显示疾病进展14名患者 治疗1 2周后检测CTC大于等于3个 CT影像显示疾病控制4名患者 治疗1 2周后检测CTC大于等于3个 CT影像显示疾病进展 对于进展期的结直肠接受化疗的病人 CTC计数在治疗前后均是PFS和OS的独立预测因子 并且对CT影像提供补充信息 TheCTCcountbeforeandduringtreatmentindependentlypredictsPFSandOSinACCpatientstreatedwithchemotherapyplustargetedagentsandprovidesadditionalinformationtoCTimaging IF 6 452 肺癌中CTC的研究进展 ClinCancerRes 2009Nov15 15 22 6980 6 Epub2009Nov3 Circulatingtumorcellasadiagnosticmarkerinprimarylungcancer 病人入组流程图 IF 7 338 CTC在区分良恶性肿瘤中作用局限 在30 6 的原发性肺癌患者和12 0 非恶性疾病患者中能检测到CTC CTC在肺癌患者中的计数显著高于非恶性疾病患者 但受试者操作特征 ROC 曲线分析显示CTC在区分良恶性肿瘤中作用局限 CTC在判断是否存在转移中有重要参考价值 对于怀疑肺癌患者 CTC计数在有远处转移的肺癌患者中有显著升高 对于原发性肺癌患者 CTC计数在有远处转移的肺癌患者中有显著升高 CTC升高对于判断远处转移的敏感性达71 特异性达83 CTC计数和血清CEA水平在不同切点的诊断价值 JClinOncol 2011Apr20 29 12 1556 63 Epub2011Mar21 Evaluationandprognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithnon small celllungcancer 所有非小细胞肺癌病人 所有 期非小细胞肺癌病人 IF 18 970 期患者 化疗前后CTC计数均大于等于5 预后不良 回顾CellSearch的研究 利用CellSearch技术研究预后的文献回顾 利用CellSearch技术比较CTC与影像学预后的文献回顾 FDA批准的临床应用 切点的意义 评估预后 根据肿瘤类型的不同 CellSearch对CTC的计数结果参考的切点 CUTOFF 也不同高于等于切点 预后不良低于切点 预后良好 CTC数量变化是预后改变的重要预测 任何时段 高于切点预后不良任何时段 低于切点预后良好 CellSearch在基线时检测的CTC CellSearch在每个疗程前检测的CTC CellSearch在基线时检测的CTC CellSearch在每个疗程前检测的CTC 结合CTC检测比单独的影像学检查预后更准确 乳腺癌