DBS13002-2015 动物源性食品中多溴联苯醚的测定

DBS13/002-2015 0附件 2DBS13河 北 省 地 方 标 准DBS13/002-2015动物源性食品中多溴联苯醚的测定（征求意见稿）2016-xx-xx 发布                                  2016-xx-xx 实施河北省卫生和计划生育委员会  发布 1前 言本标准适用于畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中8种多溴联苯醚类化合物的测定。本标准由河北省卫生和计划生育委员会提出。本标准起草单位：河北省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：常凤启，刘印平，杨立新，秦振顺，云鹏，单海滨,王丽英，路杨，任贝贝。DBS13/002-2015 2食品安全地方标准动物源性食品中多溴联苯醚的测定1  范围本标准规定了畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）多溴联苯醚类化合物的检测方法。本标准适用于畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）多溴联苯醚类化合物（BDE28、BDE47、BDE99、BDE100、BDE153、BDE154、BDE183和BDE209）的测定。2  原理冻干后的试样加入内标溶液（十溴联苯醚BDE209的测定使用 13C标记的同位素内标，其他多溴联苯醚类化合物使用BDE-77做内标），经加速溶剂提取，酸化硅胶除脂、硅胶氧化铝复合层析柱净化后，使用气相色谱-质谱联用仪（负化学电离源）测定，内标法定量。 3  试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。整个分析过程应避免塑料类容器的使用，如枪头，塑料离心管等。3.1  试剂   3.1.1  正己烷（C 6H14）：色谱纯。3.1.2  二氯甲烷（CH 2Cl2）：色谱纯。3.1.3  壬烷（C 9H20）：色谱纯。3.1.4  硫酸（H 2SO4）：含量 95%98%，优级纯。3.1.5  色谱用硅胶（0.0630.100 mm 粒径）：将市售硅胶装入玻璃色谱柱中，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为硅胶体积的两倍。淋洗后，将硅胶转移到烧瓶中，以铝箔盖住瓶口置于马弗炉中 600 烘烤 6 小时，冷却后装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.6  无水硫酸钠（Na 2SO4）：农残纯。3.1.7  酸性氧化铝：色谱层析用碱性氧化铝，660 烘烤 6 h 后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.8  44%酸化硅胶：称取活化好的硅胶 100 g，逐滴加入 78.6 g 硫酸，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。 3.2  标准品3.2.1  PBDEs 混合标准溶液：M-1614-CSM，见附录中表 1。3.2.2  定量内标（IS）标准溶液，见附录中表 1。3.2.3  校正系列标准溶液，见附录中表 2。 34   仪器4.1  气相色谱-负化学电离/质谱联用仪（GC-NCI/MS）。4.2  色谱柱：VF-5ms（7 m0.25 mm0.1 m），或等效毛细管色谱柱。4.3  分析天平：感量为0.01 g 和0.1 mg 。4.4  真空冷冻干燥机（冷凝器的最低温度-50  ）。4.5  加速溶剂提取仪。4.6  氮气浓缩器。4.7  旋转蒸发仪。4.8  玻璃层析柱（柱长30 cm，柱内径1.8 cm）。4.9  涡漩混合器。4.10  玻璃仪器的准备：所有需重复使用的玻璃器皿应在使用后尽快认真清洗，清洗过程如下： a）用含碱性洗涤剂的清水清洗； b）依次用清水和去离子水冲洗； c）依次用丙酮、正己烷和二氯甲烷洗涤。 5  分析步骤5.1  试样制备取代表性可食部位的样品，其中均匀样品直接混合（如奶类），非均匀样品用组织匀浆机充分搅拌均匀（如鱼、肉类），取液态乳样品20 mL（鱼类、肉类2g）经冷冻干燥24h后，放入干燥器中保存。5.2  试样提取将冻干后的预处理试样0.5 g与10 g硅藻土混匀，加入定量内标溶液 13C-BDE209（500 g/L，2 L）和BDE-77（50 g/L，2 L）后，将样品和硅藻土的混合物装入萃取池中，萃取池顶部用适量硅藻土填满。提取溶剂为正己烷-二氯甲烷（ 1+1）100 mL。    提取条件为：压力为10 Mpa(1500 psi)；温度为120 ；加热时间5 min；稳定时间8 min；清洗体积占萃取池体积的60；吹扫时间为120 s；静态循环次数为 2次。 提取完成后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如分析结果以脂肪计则需要测定试样的脂肪含量。脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。测定脂肪量后，加入少量正己烷溶解瓶中残渣。 5.3  试样净化5.3.1  酸化硅胶净化将提取液转移至旋转蒸发瓶中，加入10 g酸化硅胶，于60 水浴加热振摇10 min，缓慢倾出上层溶液，浓缩至大约1 mL。5.3.2  复合硅胶柱净化 DBS13/002-2015 4净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依次填入2 g无水硫酸钠、6 g酸性氧化铝、5 g酸化硅胶、2 g活化硅胶、2 g无水硫酸钠。然后用50 mL正己烷预淋洗。将经过5.3.1净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5 mL正己烷冲洗茄形瓶3 次4 次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入100 mL二氯甲烷-正己烷（1+1）洗脱，洗脱液浓缩至约1 mL。5.3.3  试样溶液浓缩 将净化后的试样溶液转移至进样小管中，在氮气流下浓缩，用少量正己烷洗涤茄形瓶 3 次4 次，洗涤液也转移至进样内插管中，氮气浓缩至约 50 L，然后封盖待上机分析。 5.4  仪器测定5.4.1  气相色谱条件色谱柱：VF-5 ms（7 m0.25 mm0.1 m）。进样口温度：275 。色谱柱升温程序：120 保持 2 min，以 26 /min 速度升至 310，并保持 3 min。载气：高纯氦气（纯度>99.999%），柱流量：3 mL /min 。进样器模式：230 kPa 高压脉冲进样。进样量：不分流进样 1 L。5.4.2  质谱条件离子化方式：负化学电离（NCI ），甲烷为反应气。传输线温度：280 。离子源温度：220 。溶剂延迟时间：3 min。离子监测方式：选择离子监测（SIM），BDE-209 的监测碎片为 m/z 486，488， 13C-BDE-209 的监测碎片为 m/z 492，494，其他多溴联苯醚的监测碎片为 m/z79，81。5.4.3  标准曲线的测定分别将试样和系列标准注入气相色谱-质谱系统，记录 PBDEs 和内标的峰面积。计算 PBDEs（m/z 79）和 BDE77 内标(m/z 79)的峰面积比，并计算 BDE209(m/z 486) 和 13C-BDE209 内标(m/z 494)的峰面积比，以各系列标准溶液的进样量（ng）与对应的 PBDEs（m/z 79）和 BDE77 内标(m/z 79)的峰面积比，以及 BDE209(m/z 486) 和 13C-BDE209 内标(m/z 494) 的峰面积比分别绘制线性曲线。5.5  结果计算5.5.1  定性以相对保留时间和 PBDEs 相应监测离子的丰度比进行定性分析。要求所检测的 PBDEs 色谱峰信噪比(S/N)大于 3，PBDEs 相应监测离子的丰度比偏差不超过标准溶液中相应离子丰度比的 20%。5.5.2  定量采用内标法，以相对响应因子（RRF ）进行定量计算。系列标准溶液进样，各个浓度连续进样 3针，按公式（1）计算 RRF 值：RRF= （1）式中：RRF    目标化合物对内标的相对响应因子；An     目标化合物的峰面积；Cn     目标化合物的量 (ng)；As     内标的峰面积；CnAs 5Cs      内标的量(ng) 。在系列标准溶液中，各目标化合物的 RRF 值相对标准偏差（RSD）应小于 20%。按公式（2）计算样品中 PBDEs 的含量：Xn= （2）式中：Xn     目标化合物的含量（ ng/g或ng/mL）；                                                                                                                                                   Ms     样品中加入内标的量 （ng）；An     目标化合物的峰面积；As     定量内标的峰面积；m     取样量（g 或 mL）。计算结果保留三位有效数字。msnRFAMDBS13/002-2015 6附  录  A（规范性附录）3.03.54.04.55.05. 6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.00.51.01.52.02.53.0(x10,) TICTIC 91 2345678图1  多溴联苯醚混合标准溶液总离子流图（0.01 mg/L）(注: 1：BDE28,  2: BDE47, 3: BDE77(IS), 4: BDE100, 5: BDE99, 6: BDE154, 7: BDE153, 8: BDE183, 9:BDE209+13C-BDE209)表 1  多溴联苯醚及其定量内标标准溶液化合物 CAS# 溴原子数 浓度（mg/L） 纯度% （GC/MS）BDE28 41318-75-6 3 20 99.2BDE47 5436-43-1 4 20 98.0BDE99 60348-60-9 5 20 98.3BDE100 189084-64-8 5 20 100.0BDE153 68631-49-2 6 20 100.0BDE154 207122-15-4 6 20 97.0BDE183 207122-16-5 7 20 98.8BDE209 1163-19-5 10 200 98.3 7BDE77（IS） 93703-48-1 4 50 99.113C-BDE209（IS）1163-19-5 10 25 98表 2  多溴联苯醚校正系列标准溶液浓度 g/L化合物CS1 CS2 CS3 CS4 CS5BDE28 0.5 1.0 5.0 10 50BDE47 0.5 1.0 5.0 10 50BDE99 0.5 1.0 5.0 10 50BDE100 0.5 1.0 5.0 10 50BDE153 0.5 1.0 5.0 10 50BDE154 0.5 1.0 5.0 10 50BDE183 0.5 1.0 5.0 10 50BDE209 5.0 10 50 100 500BDE77（IS）5.0 5.0 5.0 5.0 5.013C-BDE209（IS）50 50 50 50 50表 3  多溴联苯醚的方法检出限和定量限化合物 检测限（ng/kg） 定量限（ng/kg）BDE28 2.0 6.0BDE47 2.5 7.0BDE99 6.5 20.0BDE100 3.0 7.0BDE153 5.0 14.5BDE154 4.0 9.0BDE183 3.0 6.0BDE209 8.0 22.0DBS13/002-2015 8食品安全地方标准 动物源性食品中多溴联苯醚的测定（征求意见稿）编制说明一、工作简况，包括任务来源与项目编号、标准主要起草单位、主要起草人、简要起草过程1.1 任务来源与项目编号根据河北省卫生计生委关于印发食品安全地方标准整合工作方案的通知，动物源性食品中多溴联苯醚（Poly  Brominated Diphenyl Ethers，PBDEs）的测定被列入 2015 年食品安全地方标准整合计划项目，项目编号为 DBS13/002-2015。标准起草单位：河北省疾病预防控制中心主要起草人： 常凤启，刘印平，杨立新其他起草人： 秦振顺，云鹏，单海滨，王丽英，路杨，任贝贝起草人负责标准技术资料查询、收集、整理、标准文本及编制说明的编辑、撰写，行业内征求意见，组织专家对标准预审，标准送审等。1.2 简要起草过程 标准任务下达后，河北省疾病预防控制中心针对制定“动物源性食品中多溴联苯醚的测定”地方标准确定了总体工作方案，并于 2015 年 9 月，成立了标准起草工作小组。起草工作组收集和查阅了相关标准及编制说明，在参考和借鉴国内、国际多溴联苯醚检测标准的基础上，编制了动物源性食品中多溴联苯醚的测定标准初稿。并由起草人撰写标准文本和编制说明。在 2015 年 11 月首次评审中，专家对标准文本及编制说明进行评审，起草单位根据专家意见进一步开展了方法学验证，对标准文本及编制说明进行了修改和完善，形成现在的新的“征求意见稿”。 二、与国内外有关法律法规和其他标准的关系多溴联苯醚作为一类 POPs, 目前在全世界主要的发达国家，其生产和使用已经被禁止。欧盟RoHS 指令规定自 2006 年 7 月起，欧洲市场上投入的电气、电子设备中不得含有包括 PBDEs 在内的 6 种有害物质。2009 年，五溴代和八溴代联苯醚已经进入斯德哥尔摩公约名单中，尽管十溴联苯醚还没有被列入公约，但是其多种途径下可以降解成低溴代产物的事实已经为许多实验室证实，其 9毒性及生物有害性也受到了国内外科学家的广泛关注。作为斯德哥尔摩公约缔约国，中国是目前世界上为数不多的仍然生产十溴联苯醚的国家之一。目前，我们国家十溴联苯醚的生产量占全球生产量的 80%以上。除此之外，电子垃圾的拆解是另外一个PBDEs 污染的重要源头。我国是世界上 70%电子垃圾的拆解地。广州贵屿、天津静海、河北秦皇岛等地均存在大量的小型洋电子垃圾拆解厂。在拆解过程中，PBDEs 可通过挥发、渗出等方式释放到外环境中，并随大气长时间迁移，造成大气、水体、土壤及生物圈的大范围污染。此外，由于 PBDEs 的强亲脂憎水性，大气、水体和土壤中痕量的 PBDEs 能在生物体内的脂肪和蛋白质中蓄积，可通过生物吸收并通过食物链逐级放大（生物放大作用），对高营养级的生物造成影响，并最终影响到人类健康。有文献显示我国静海、贵屿等地，无论环境、食物及人体生物样品中均发现了高于其他地区几倍，十几倍，甚至几十倍浓度的 PBDEs。流行病学调查显现，当地的甲状腺疾病、恶性肿瘤等流行趋势明显高于全国平均水平。作为发展中国家，我国多溴联苯醚的研究历史还不长，多食品介质中多溴联苯醚的污染状况还不是特别清晰。数据表明，PBDEs 在植物性食品中检出率较低，但在多种动物性食品介质中广泛存在。虽然平均浓度不高，但是由于其持久性和生物放大性的特点，加之河北省作为沿海省份及传统的重工业集中区，又毗连多处著名的洋垃圾拆解地，多溴联苯醚在我省环境及食品中的污染状况，以及由此引发的人群健康问题也不容忽视。EPA 规定十溴联苯醚可摄入剂量为 0.01 mg/kg/day，八溴联苯醚为 0.003 mg/kg/day，五溴联苯醚为 0.002 mg/kg/day。对于一般人群来说，饮食摄入是 PBDEs 进入人体的主要途径，世界卫生组织（WHO）认为每天 PBDEs 背景吸入量的 90%源于饮食摄入。文献研究表明，PBDEs 的最高浓度出现在鱼、肉和油等脂肪含量较高的食物中。而我国现有气相色谱-质谱法适用于测定电子电气产品中多溴联苯和多溴联苯醚的行业标准（SN/T 2005.2-2005），但没有动物性食品中多溴联苯醚的国家标准、行业标准及地方标准检测方法。美国 EPA 发布的 1614（Brominated diphenyl ethers in water soil，sediment and tissue by HRGC/HRMS）使用的是高分辨磁质谱，具有高质量分辨率、高灵敏度的优点，但其昂贵的价格和维护成本无法满足我国现阶段的监测需求。因此对于进一步了解此类污染物在我食品基质中的污染现状，尤其是评估其膳食暴露风险带来的巨大的困难。国外查到关于海产品、禽肉中多溴联苯醚的检测报道。萃取时多采用索式提取，液液萃取，快速溶剂萃取等，但考虑到索式提取溶剂消耗量大，萃取时间长，不适用于大批量样品的检测；液液萃取法的缺点是溶剂界面出容易发生乳化，需要大量溶剂，多步转移，重复性差。加速溶剂萃取全自动控制，再现性好，安全性高，已被美国 EPA 确认为标准方法。净化技术多采用系列固相萃取（SPE, 包括分散性固相萃取(D-SPE)和串联固相萃取柱），凝胶渗透色谱（ GPC）净化，硫酸净化，玻璃层析柱净化。考虑到固相萃取柱成本相对较高，GPC 虽然容量大，可去除大分子干扰物，但是溶剂消耗量也很大，玻璃层析柱成本相对较低，填充方便，更易推广。检测技术多采用 GC/MS（气相色谱-质谱），GC-MS/MS（气相色谱 -串接质谱），GC-ITMS-MS（气相色谱-离子阱- 质谱）。文献证实 GC/MS 能够满足痕量 PBDEs 检测要求，且维护和使用成本相对较低，易于普及。三、标准的制（修）定与起草原则DBS13/002-2015 103.1 标准编写规则（GB/T  20001-2001）。3.2 方法准确可靠。3.3 检出限应能够满足食品安全监测工作的需要。3.4 方法具有普遍适用性，易于推广使用。四、确定各项技术内容的依据标准中文名称为动物源性食品中多溴联苯醚的测定。在本标准中确定了检测方法：气相色谱质谱法，并规定了检测适用范围。4.1 标准的适用范围及原理本标准适用于畜禽类、乳类及水产等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）8 种多溴联苯醚类化合物的含量的测定。冻干后的试样加入内标溶液（BDE-209 的测定使用同位素内标，其他多溴代联苯醚类化合物使用 BDE-77 做内标），经加速溶剂提取，酸化硅胶除脂、硅胶氧化铝复合层析柱净化后，利用气相色谱-负化学源质谱法测定多溴联苯醚（ PBDEs）。测定包括 BDE-28、-47 、-99、-100、-153、-154 、-183 和-209 共 8 种 PBDEs 组分。采用选择离子监测（SIM）的质谱扫描模式进行分析，内标法定量。4.2 前处理过程优化4.2.1 加速溶剂提取条件的选择在加速溶剂提取中，溶剂的选择、温度、压力、静态时间、循环次数是影响萃取效果的主要参数。根据经验和文献，本实验使用以往索式提取使用的溶剂，即正己烷+二氯甲烷（1+1）。除提取溶剂外，温度的增加对提取过程的益处是全面的，而压力对绝大多数样品的提取回收率和效率是没有影响的。增加循环次数可以得到更好的萃取结果。通过大量已有的文献，PBDEs 在提取时常用的温度为 80 150 。本实验通过对比不同提取温度萃取效率，最终选用 120，见图 1。文献显示，萃取压力一般设定为 1500 psi，静态时间范围一般为 5 min10 min（本实验选用 8 min）。而且依据“少量多次”的原则，建议增加循环次数，减少静态时间。循环次数一般设定为 23 次。本实验基于节省溶剂的考虑，并通过实际萃取效果优化（鱼肉基质中加标水平 300 ng/kg dw），循环次数设定为 2 次，见表1。不 同 提 取 温 度 萃 取 效 率 比 较010203040506070809010080 90 100 110 120 130 140 150温 度  萃取效率%萃 取 效 率 11图 1 不同提取温度萃取效率比较（n=3）表 1 不同循环次数回收率比较化合物 循环次数 1 次时回收率 循环次数 2 次时回收率 循环次数 3 次时回收率BDE28 52.3 98.5 98.6BDE47 49.3 101 101BDE100 50.3 92.6 93.9BDE99 46.5 91.8 94.2BDE154 55.1 92.7 93.7BDE153 56.5 87.5 90.7BDE183 41.0 83.2 89.6BDE209 60.7 92.4 98.04.2.2 净化步骤动物性食品样品基体较为复杂，PBDEs 的含量又相对较低，因此对样品的前处理要求较为严格。当取样量为 50 mL 时，抽提液最初先经过 44%酸化硅胶层析柱净化，发现极易发生柱塞现象，后改为用 44%酸化硅胶水浴加热直接除脂，再通过硅胶氧化铝混合层析柱进一步净化。层析柱首先需要预洗，预洗时所用溶剂分别选用正己烷和混合溶剂正己烷-二氯甲烷（1+1），比较后发现单独用正己烷预洗层析柱时，效果好，回收率高，见图 2。使用混合溶剂时，酸化硅胶层常出现变色现象，洗脱效果稍差。图 2 预洗溶剂对萃取效率的影响（n=3）4.3 色谱参考条件的优化由于 BDE209 的热不稳定性造成的降解是导致其难以准确定量的原因，本研究着重对 BDE209 的色谱条件进行优化。4.3.1  内标物的选择和定性定量离子的确认020406080100120BDE28 BDE47 BDE100 BDE99 BDE154 BDE153 BDE183 BDE209化 合 物回收率% 正 己 烷 +二 氯 甲 烷正 己 烷DBS13/002-2015 12采用负化学电离方式时，除 BDE209 外的 PBDEs 产生的离子主要为溴离子，其他碎片离子的响应极低，因此监测离子为 m/z 79、81（见图 3）。由于目标物 BDE77 与目标 PBDEs 具有相似的理化性质并且能与目标 PBDEs 在色谱柱上完全分离，在实际样品中也不存在，因此将其作为BDE28、BDE47、BDE99、BDE100、BDE153、BDE154、BDE183 检测的内标（IS）。BDE209 具有热不稳定性，在样品前处理和仪器分析过程中可能发生降解而影响其准确定量。在使用负化学电离方式时，BDE209 产生的离子与其它 PBDEs 明显不同，主要监测到的碎片离子为C6Br5O-，即分子离子丢失一个五溴苯的碎片离子（见图 4）。13C-BDE209 和 BDE209 具有类似的理化性质，可以校正分析过程中 BDE209 的损失。因此 BDE209 的检测使用了同位素稀释技术，BDE209 监测离子为 m/z 486 和 488， 13C-BDE209 的监测离子为 m/z 492 和 494（见图 5）。在确定 BDE209 的定量离子时，由于 13C-BDE209 自身也会产生 m/z 488，而 BDE209 也会产生m/z 492，即 m/z 488 和 m/z 492 在 12C 和 13C 同时测定时有重叠（见图 6,7）, 因此 BDE209 的定量离子选为 m/z 486, 13C-BDE209 的定量离子为 m/z 494。100 200 300 400 500 6000.025.050.075.0100.0%78.85160.75 575.25336.60495.45332.55 416.85117.90 234.85 506.15图 3. BDE99 全扫质谱图250 500 750 10000.025.050.075.0100.0%486.4080.90408.55147.85 482.40 640.50563.50225.90 719.50330.90 950.5057.00 636.50 798.50图 4. BDE209 全扫质谱图 13250 500 750 10000.025.050.075.0100.0%494.4078.85414.50653.50733.25336.70 575.50160.70 814.10477.60246.70 909.1070.00图 5. 13C-BDE209 全扫质谱图487.5 490.0 492.50.025.050.075.0100.0%492.50 494.50488.50486.50图 6. 13C-BDE209 选择离子扫描质谱图487.5 490.0 492.50.025.050.075.0100.0%486.50 488.50492.50 494.50图 7. BDE209 选择离子扫描质谱图4.3.2 色谱柱的比较目前在 BDE209 分析中经常使用 15 m 长的 DB-5 或等效柱，膜厚通常为 0.1 m。尽管BDE209 在该柱上的降解情况有所好转，但对于母乳中较低含量的 BDE209，在能满足分离要求的情况下，应该尽可能用较短的色谱柱以减少其在柱上的停留时间。本研究使用了 7 m 的 VF-5ms 短柱进行DBS13/002-2015 14PBDEs 的分析。由图 8 及表 2 结果( 均采用高压进样)，可以发现， 7 m 色谱柱的使用，不仅降低了仪器检测限（LOD），而且相对于 15 m 的 VF-5ms 柱（图 8 下），BDE209 在 7 m 短柱上响应提高了近一倍，其它 PBDEs 的响应也提高了约 23 倍，同时各化合物也达到了分离要求。表 2 不同长度色谱柱上 LOD 及 10 ug/L PBDEs 标准溶液高压进样响应的比较（ n=3）PBDEs 7 m 色谱柱响应面积 7 m 色谱柱LOD（ pg/mL）15 m 色谱柱响应面积15 m 色谱柱LOD（ pg/mL）7 m/15 m 色谱柱响应面积比BDE28 268098 3.13 60068 6.79 4.46BDE47 206028 9.37 52690 12.6 3.91BDE100 176854 12.3 53383 10.3 3.31BDE99 169741 5.80 54285 8.78 3.13BDE154 160769 7.50 55502 8.29 2.89BDE153 149264 6.25 53631 11.2 2.78BDE183 102530 8.13 38604 19.1 2.66BDE209 503817 11.5 254717 17.4 1.983.03.54.04.55.05. 6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.00.51.01.52.02.53.0(x10,) TICTIC 91 23456783.04.05.06.07.08.09.010. 1.012.013.00.1.20.3.40.5.60.7.80.91.(x0,) TICTIC 912345678t / min图 8 PBDEs 混合标准溶液（10 ug/L）在 7 m（上图）和 15 m（下图）色谱柱上高压进样的 TIC 图(注 1: BDE28, 2: BDE47, 3: BDE77(IS), 4: BDE100, 5: BDE99, 6: BDE154, 7: BDE153, 8: BDE183, 9:BDE209)4.3.3 高压进样与普通进样的对比如果样品在衬管中的停留时间过长，BDE209 将会出现一定程度的降解，但如果在衬管中的停留时间太短，就有可能发生歧视。本试验采用高压进样以改善进样口的影响。所谓的“高压进样”即程序调控压力的办法，先采用较高的进口压力，以减少待测物在衬垫管中处于高温时的“停留”时间，IntensityIntensity 15在完成转移后，再恢复到分析的最佳柱压条件。实验中在进样口细节处设置高压 230 KPa 进样，高压进样的时间为 1.5 min。表 1 是在两种不同压力方式下，PBDEs 标准溶液（5 g/L）三次重复进样峰面积平均值比较。由图 9 及表 3 中结果可看出，BDE209 在高压下的响应提高了约 5 倍，而其它三溴七溴 PBDEs 影响不显著。表 3. 不同压力模式进样 PBDEs（5 g/L ）响应值比较（n=3 ）PBDEs 常压下平均响应面积 高压下平均响应面积 高压/常压下平均响应面积比值BDE28 51144 49723 0.972BDE47 48417 46503 0.960BDE100 51297 49989 0.975BDE99 49075 48841 0.995BDE154 50994 51403 1.01BDE153 46390 47666 1.03BDE183 33177 35202 1.06BDE209 46290 289899 6.263.03.54.04.55.05. 6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.0.51.0.52.0.53.0.5(x1,0) TICTIC 91 2345678t / min3.03.54.04.55.05. 6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.0.250.751.0.251.0.752.0(x10,) TICTIC 91 2345678t / min图 9. PBDEs 标准溶液（ 5 g/L）在普通压力（上图）和高压（下图）进样的 TIC 图(注 1: BDE28, 2: BDE47, 3: BDE77(IS), 4: BDE100, 5: BDE99, 6: BDE154, 7: BDE153, 8: BDE183, 9:BDE209+13C-BDE209)4.3.4 柱流量的选择为改善分离度和灵敏度，对载气流速进行了优化，在 1 mL/min4.5 mL/min 范围内改变载气流速。实验结果显示，随着流速的改变，各待测组分的分离度未发生明显变化，但 BDE209 的灵敏度变化显著。考虑到适当增加流速可提高仪器响应，但流速过高，会导致响应不稳定，兼顾检测灵敏度和稳定性，选择 3 mL/min 作为最终流速，具体比较见表 4表 6。表 4. 柱流量为 2 mL/min 时不同升温速率下 BDE209 的响应比较升温速率/min RT  /min 面积（各测定 3 次）/万24 9.893 12.63 10.89 8.58IntensityIntensityDBS13/002-2015 1625 9.616 13.34 14.53 13.1525.5 9.488 14.14 11.89 13.34结论 25 25.526表 5. 柱流量为 3 mL/min 时不同升温速率下 BDE209 的响应比较升温速率/min RT  /min 面积（各测定 3 次）/万25.5 9.283 19.12 19.46 14.2226 9. 161 22.78 21.33 24.5926.5 9.043 19.47 21.07 20.15结论 26 26.525.5表 6. 柱流量为 4 mL/min 时不同升温速率下 BDE209 的响应比较升温速率/min RT  /min面积（各测定 3 次）/万26.5 8.906 16.51 19.46 16.4527 8.798 13.19 20.86 11.5228 8.585 13.82 13.79 12.19结论 响应不稳定4.4 质谱条件的优化为改善灵敏度，三溴七溴联苯醚及 BDE209 分别以子离子 m/z 79 和 m/z 486 的响应强度作为观察指标，对进样口温度和离子源温度进行了优化，在 250 300 范围内改变进样口温度，在 180 240 范围内改变离子源温度。优化结果，进样口温度 275 ，离子源温度 220 。4.4.1 进样口温度的选择文献报道多溴联苯醚尤其是 BDE209 在高温下容易降解为低溴代联苯醚，因此实验对进样口的温度进行了优化。不 同 进 样 口 下 各 目 标 物 响 应 面 积050000100000150000200000250000BDE28BDE47BDE100 BDE99BDE154BDE153BDE183BDE209PBDEs响应面积进 样 口 275进 样 口 250进 样 口 300图 10. 不同进样口温度下各 PBDEs 响应面积比较 17通过图 10 可以明显看出，当进样口温度为 275 时，所有 8 种 PBDEs 组分响应均达到最好，因此本实验将进样口温度设置为 275 。4.4.2 离子源温度的选择不 同 源 温 下 各 目 标 物 响 应050000100000150000200000250000BDE-28 BDE47BDE100 BDE99BDE154BDE153BDE183BDE209PBDEs响应面积 源 温 220源 温 200源 温 180图 11. 不同离子源温度下各 PBDEs 响应面积比较通过图 11 可以明显看出，当离子源温度为 220 时，所有 8 种 PBDEs 组分响应均达到最好，因此本实验将离子源温度设置为 220 。4.5 线性实验及其范围以系列标准溶液进样，每个浓度点进样 3 次，分别记录三溴七溴 PBDEs（m/z 79）和内标 BDE-77（m/z  79）的峰面积以及 BDE209（m/z 486）和同位素内标 13C-BDE209（m/z 494）的峰面积，再分别以相应的峰面积比和对应的标准溶液中目标化合物的质量进行线性回归，计算线性方程。其中三溴七溴 PBDEs 的进样量为 0.5 pg50 pg（浓度范围是 0.5 g/L50 g/L，进样体积 1 L），BDE209 进样量为 5 pg500 pg。表 7. PBDEs 标准曲线系列浓度表浓度（mg/L）序号 化合物名称CS1 CS2 CS3 CS4 CS51 BDE-28 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.052 BDE-47 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.053 BDE-99 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.054 BDE-100 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.055 BDE-153 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.056 BDE-154 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.057 BDE-183 0.0005 0.001 0.005 0.01 0.058 BDE-209 0.005 0.01 0.05 0.1 0.5DBS13/002-2015 18表 8. 线性方程、相关系数和平均相对响应因子（RRF）化合物 线性方程 r2 RRFBDE28 y=0.41x + 0.013 0.9996 0.51BDE47 y=0.38x + 0.009 0.9995 0.47BDE100 y=0.39x0.004 0.9994 0.48BDE99 y=0.40x + 0.003 0.9994 0.46BDE154 y=0.39x0.003 0.9992 0.50BDE153 y=0.41x + 0.001 0.9993 0.47BDE183 y=0.29x + 0.006 0.9993 0.38BDE209 y=0.92x + 0.14 0.9997 1.20测定结果表明： 8 种 PBDEs 在给定的浓度范围内，均呈现良好的线性关系，相关系数为0.99920.9997；而且该范围覆盖了大多数食品中 PBDEs 的含量，完全满足分析的要求。4.6 回收率和精密度实验方法选择分别在冻干的鱼肉、鸡肉、牛奶空白中各添加三个浓度水平的 8 种 PBDEs 的混合标准溶液及内标，三溴七溴联苯醚添加水平分别为 30 ng/kg dw、60ng/kg dw，300 ng/kg dw，相应的十溴联苯醚添加水平分别为 0.30  g/kg dw、0.60  g/kg dw，3.0  g/kg dw。各加标水平进行 6 次平行测定，以回收率表示方法的准确度，以相对标准偏差（RSD）表示方法的精密度。添加后按照“分析步骤5”中所述进行处理，试验结果见表 911，色谱图见图 1214。由测定结果可见，在所有添加水平下，8 种多溴联苯醚的平均回收率结果较好。回收率范围在 70.8%108% 之间，RSD 范围在 3.09%16.1%之间。 由此表明方法的准确度和精密度良好，操作简单，成本相对较低，适于在基层实验室普及推广。5.05.6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.01.512.012.513.013.525050TIC TIC1234678 9(注: 1：BDE28,  2: BDE47, 3: BDE77(IS), 4: BDE100, 5: BDE99, 6: BDE154, 7: BDE153, 8: BDE183, 9:BDE209+13C-BDE209)图 12. 鱼肉基质中多溴联苯醚加标总离子流图（加标水平 300ng/kg 干重） 195.05.6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.01.512.012.513.013.550150250TIC TIC1 2345678 9(注: 1：BDE28,  2: BDE47, 3: BDE77(IS), 4: BDE100, 5: BDE99, 6: BDE154, 7: BDE153, 8: BDE183, 9:BDE209+13C-BDE209)图 13. 牛奶基质中多溴联苯醚加标总离子流图（加标水平 30 ng/kg 干重）5.05.6.06.57.07.58.08.59.09.510.10.51.01.512.012.513.013.525050TIC TIC1 2345678 9(注: 1：BDE28,  2: BDE47, 3: BDE77(IS), 4: BDE100, 5: BDE99, 6: BDE154, 7: BDE153, 8: BDE183, 9:BDE209+13C-BDE209)图 14. 鸡肉中多溴联苯醚加标总离子流图（加标水平 60 ng/kg 干重）表 9. 鱼肉中 PBDEs 加标回收试验加标水平 30 ng/kg dw 加标水平 60 ng/kg dw 加标水平 300 ng/kg dwPBDEs回收率% RSD%（n=6） 回收率% RSD%（n=6） 回收率% RSD%（n=6）BDE28 109.8 5.53 97.5 7.31 98.5 8.26BDE47 116.7 8.86 99.8 5.26 101 3.09BDE100 90.8 12.5 90.3 5.87 92.6 7.82BDE99 90.7 9.63 88.5 4.66 91.8 3.79BDE154 91.7 11.1 89.7 4.43 92.7 4.13BDE153 86.8 11.0 80.4 4.94 87.5 4.34BDE183 84.0 10.6 90.3 9.08 83.2 5.08BDE209 85.3 4.79 90.9 8.69 92.4 9.04表 10. 鸡肉中 PBDEs 加标回收试验加标水平 30 ng/kg dw 加标水平 60 ng/kg dw 加标水平 300 ng/kg dwPBDEs平均回收率% RSD%（n=6） 回收率% RSD%（n=6） 平均回收率% RSD%（n=6）BDE28 70.8 12.5 80.6 6.45 71.6 16.1BDE47 72.1 17.0 78.9 2.69 83.4 10.2BDE100 70.9 10.4 87.6 6.48 91.3 9.87BDE99 107 8.69 83.4 4.69 108 8.53BDE154 99.6 7.81 103 8.77 99.5 12.2BDE153 89.2 9.71 90.6 8.56 101 8.41DBS13/002-2015 20BDE183 92.4 15.6 94.3 9.05 98.5 9.91BDE209 109 7.06 89.9 8.56 106 7.28表 11. 牛奶中 PBDEs 加标回收试验加标水平 30 ng/kg dw 加标水平 60 ng/kg dw 加标水平 300 ng/kg dwPBDEs平均回收率% RSD%（n=6） 回收率% RSD%（n=6） 平均回收率% RSD%（n=6）BDE28 88.2 6.84 98.5 5.69 90.6 6.52BDE47 95.2 9.14 91.0 8.55 91.6 5.46BDE100 96.6 8.71 82.4 2.79 96.5 6.07BDE99 95.9 5.47 81.8 6.80 96.1 6.44BDE154 92.1 4.04 79.7 3.50 93.9 7.53BDE153 91.2 7.75 77.5 4.44 93.0 8.72BDE183 88.5 10.89 89.2 8.99 88.5 12.58BDE209  77.5 9.07 99.1 10.2 89.9 8.344.7 检出限和定量限方法的检出限和定量限是衡量方法灵敏度的指标，即在规定的实验条件下方法能够定性检出和定量测定的最小能力。本方法检测限根据对基质空白的测定确定噪声，以 3 倍噪声峰高对应的浓度为检测限，平行测定 4 次，取平均值，见计算公式（1）：MDLr=                      （1）式中： N：噪音峰高，MS：加入定量内标的量， H：定量内标的峰高，S：样品量（本试验中样品为 1 克植物油）同样，以 10 倍噪声峰高对应的浓度为定量限。实验过程如下：由于完全空白的样品基质无法获得，本研究使用植物油作为动物脂肪的替代基质（依据 EPA1614： Brominated diphenyl ethers in water soil，sediment and tissue by HRGC/HRMS. Section 7.6.4）。称取 1 g 植物油，加入 13C-BDE209 和 BDE-77 定量内标后进行方法检测限试验，按照实验部分 5 介绍的方法进行样品的提取、净化和上机分析。测定的结果见表 12。表 12. PBDEs 检出限和定量限测定结果化合物 检测限（ng/kg） 定量限（ ng/kg） RSD% (n=6)BDE28 2.0     6.0 14.0BDE47 2.5     7.0 14.5BDE100 6.5 20.0 11.5BDE99 3.0 7.0 9.0SRFHMNns3 21BDE154 5.0 14.5 10.0BDE153 4.0 9.0 9.5BDE183 3.0 6.0 15.0BDE209 8.0 22.0 7.04.8 标准参考物质验证使用所建立的方法分析具有参考值的参考物质，进行方法准确度的验证。分别取 0.5 g 干重的鱼肉参考物质（WMF01）和 20 mL（20.19 g）母乳参考物质，按分析流程 5 操作，试验结果见表 13、表14（以全重计）。每次实验进行 6 次，取平均值。从试验结果来看，8 种 PBDEs 的测得值均在参考值的 56%100%范围内。尤其关注的 BDE209 定量非常准确，测得值与参考值完全吻合。图 15、16 分别为鱼肉和母乳参考物质的 TIC 图。表 13. 鱼肉参考物质分析结果（ng/g dw）化合物 试验测得平均值（n= 6） 标准参考值BDE28 2.8100.199 3.1240.290BDE47 12